Name: 의 간질 발작의 돌연변이에 대한 Neurocircuit의 Assays Drosophila /em (동영상) | JoVE Journal
Uploaded: 2009-04-15T00:00:00.000+00:00
Duration: 9 min 11 s
Description: 학습하세요 Drosophila에서 고주파 전기 자극을 이용한 간질 유발 방법을. 거대 섬유계를 통해 신경 흥분성 메커니즘을 연구하고 전기생리학적 기록 기술을 습득하세요.

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이 작품은 NIH 연구 부여, 간질 재단 교부금 및 맥나이트 재단 교부금 Drosophila 과일 파리에서 MT 실험에 UC 버클리 동물 사용위원회 명시된 지침과 규정에 따라 수행되었다 지원했다.

표본 준비 : 실험이 있기 전날 밤에, 원하는 유전자형의 남성 파리 anesthetized과 부드러운 나일론 플러그와 유리병에 넣습니다. 커튼 볼도 작동합니다. anesthetization 다음, 발작 임계값이 변경되어 밤 이상적이다하지만 이상, 파리가 가장 최소한 6 시간 동안 남아 있습니다 있도록. 실험 당일, 파리 한쪽에 치과 왁스의 레이어와 유리 슬라이드에 한 번에 하나씩 장착하고 있습니다. 하나의 비행은 진공 라인에 연결된 23 게이지 바늘 (자르는 날카로운 팁 포함)를 사용하여 머리에 의해 포착됩니다. 비행은 다음 왁스로 다리와 날개를 추진하여 슬라이드에있는 왁스에 부착된입니다. 파리가 고정되면 왁스는 목에까지 밀고 있으며, 눈이 완전히 머리를 고정합니다. 전기 생리학 : 지금 장착하고 출발 준비를 전기 생리학에 배치됩니다 파리는 설정. 전기 생리학 세트 최대 micromanipulators 세 세트, 부착이 날카롭게 텅스텐 전극 하나 각각 구성되어 있습니다. 전압은 자극 전극에 부착된 격리 장치에 연결된 자극기에 의해 제공됩니다. 기록 전극은 차례로 디지털 스토리지 오실로 스코프에 첨부되어 사전에 A에 연결되어 있습니다. 그것이 필수 아니지만, 그것은 응답 청취 만들 수 있도록 오실로 스코프에 매여 있고 스피커를 가지고 유용합니다. 접지 전극은 비행의 복부에 삽입됩니다. 기록 전극은 비행의 흉부에 도설 세로 근육의 하나에 삽입됩니다. 자극 전극은 머리에 삽입됩니다. 각각의 눈쪽으로 하나. 각 펄스 사이 이초과 연속 펄스 간격 : 자극기는 다음과 같은 설정을 시작해야한다. 맥박이 지연이 없어야합니다. 펄스 폭 0.2ms해야합니다. 오실로 스코프는 저장 기능이 설정되어 있고 다음 설정을해야 : 시간 ​​/ DIV는 1ms/DIV로 설정해야합니다. 볼트 / DIV는 0.1V/DIV 50 MV / DIV 중 하나에 설정되어야합니다. 거대한 섬유 임계값은 단일 펄스를 제공하고 답변을 얻을하는 데 필요한 최소 전압을 지적 의해 결정됩니다. 이 전압이 주위에 일반적으로 V. 거대한 섬유 임계값이 결정되면, 파리를 pulsing 중지하고 오실로 스코프의 설정을 변경 : 0.2 S / DIV 자극기의 설정을 변경해야합니다 : 펄스 간격은 단일로 설정해야합니다. 기차가 켜져 3 초로 설정해야합니다. 파형 매개 변수는 다음과 같습니다 300 MS에 대한 200Hz에서 0.5 MS 펄스. 전압은 원하는 설정 및 비행의 뇌에 전달 펄스의 고주파 기차로 변경됩니다. 발작이 유발되지 않은 경우 오실로 스코프 추적 기차 후 평평한 라인을 표시합니다. 설정이 신속하게 다시 시작하는 설정으로 설정하는 경우, 하나의 펄스가 거대한 섬유 시스템에 응답을 발생합니다. 발작이 유발되는 경우, 오실로 스코프 기차 후 발작과 같은 활동을 표시합니다. 설정이 빠르게 원래 설정으로 전환하는 경우, 하나의 펄스가 거대한 섬유 시스템에 응답을 활성화 실패합니다. 파리 활동과 같은 발작이 유발되지 않을 수있는 고주파 자극 wavetrain 후 불응기 있습니다. 더 발작이 발생하지 않으면 파리가 약 7 분 동안 내화물입니다. 발작이 유발되는 경우, 파리 약 17분의 불응기 있습니다. 임계값 결정하거나 때까지 거대한 섬유 반응보고 너무 약해 될 때까지 임계값을 결정하면, 추가 고주파 자극은 같은 날 (내화물 기간 동안 적절한 시간 후)에 전달할 수 있습니다. 실험이 완료되면, 즉시이 전기 생리학에서 제거 설정, 왁스에서 출시하고, 처분이다.

<ol><li>Kuebler, D., Tanouye, M. A. <a target="_blank" href="http://www.ncbi.nlm.nih.gov/pubmed?term=((Modifications+of+seizure+susceptibility+in+Drosophila%5BTitle%5D)+AND+%22J+Neurophysiol%22%5BJournal%5D)">Modifications of seizure susceptibility in Drosophila.</a> J Neurophysiol. 83, 998-1009 (2000).</li>
<li>Kuebler, D., Zhang, H., Ren, X., Tanouye, M. A. <a target="_blank" href="http://www.ncbi.nlm.nih.gov/pubmed?term=((Genetic+suppression+of+seizure+susceptibility+in+Drosophila%5BTitle%5D)+AND+%22J+Neurophysiol%22%5BJournal%5D)">Genetic suppression of seizure susceptibility in Drosophila.</a> J Neurophysiol. 86, 1211-1225 (2001).</li>
<li>Song, J., Tanouye, M. A. <a target="_blank" href="http://www.ncbi.nlm.nih.gov/pubmed?term=((Seizure+suppression+by+shakB2%2C+a+gap+junction+mutation+in+Drosophila%5BTitle%5D)+AND+%22J+Neurophysiol%22%5BJournal%5D)">Seizure suppression by shakB2, a gap junction mutation in Drosophila.</a> J Neurophysiol. 95, 627-635 (2006).</li>
</ol>

이 비디오는 개별 Drosophila의 비행의 발작 임계값을 결정하는 기본 단계를 보여주었다. 대신 디지털 오실로 스코프를 사용, 컴퓨터 디지타이저도 사용할 수 있습니다. 이 기술은 파리의 발작 직전에 약물이나 유전자 변경의 효과를 결정하는 데 유용합니다.

<table><tbody><tr><td>디지털 오실로스코프</td><td>Hitachi</td><td>VC-6523</td><td></td></tr><tr><td>자극기</td><td>Cornerstone</td><td>S-900</td><td></td></tr><tr><td>프리앰프</td><td>World Precision Instruments, Inc.</td><td>Electro 705</td><td></td></tr><tr><td>마이크로매니퓰레이터</td><td>Narishige International</td><td>다양함</td><td></td></tr></tbody></table>

의 간질 발작의 돌연변이에 대한 neurocircuit의 assays drosophila</em

Neurocircuit Assays for Seizures in Epilepsy Mutants of Drosophila

Drosophila melanogaster은 활동과 같은 발작을 공부를위한 유용한 도구입니다. 발작이 물리적 충격이나 전기 자극을 통해 유도하거나 수있는 돌연변이의 다양한 발작 활동과 행동의 다양한 측면의 연구에 사용할 수 있습니다. 있을만큼 충분히 높은 전압에서 자극하면 야생 형을 포함한 모든 비행은, 압수와 같은 활동을 받아야합니다. 활동과 같은 발작 모든 - 또는 - 아무것도 응답하고 각각의 유전자형은 특정 발작 한계가 있습니다. 비행의 특정 유전자형의 발작 임계값은 약물 치료 또는 유전자 억제 또는 개선을 통해 변경할 수 있습니다. 임계값은 쉽게 전기 생리학에 의해 측정됩니다. 활동 같은 발작은 뇌에 직접 전달 및 흉부에있는 등 지느러미 근육 길이 (DLMs)를 통해 기록된 고주파 전기 자극을 통해 유도하실 수 있습니다. DLMs은 거대한 섬유 시스템의 일부에 의해 innervated 있습니다. 저전압, 고주파 자극과 함께 시작하고, 이후 작은 단위로 전압을 높여, 하나의 비행에 대한 발작 임계값을 측정할 수 있습니다.

고주파 전기 자극 압수와 같은 활동을 사용하는 것은에서 유도된 수 있습니다<em&gt; Drosophila</em&gt;. 이 활동은 쉽게 거대한 섬유 시스템에서 기록됩니다.

의 간질 발작의 돌연변이에 대한 Neurocircuit의 Assays Drosophila</em

초파리(*Drosophila melanogaster*)는 발작 유사 활성을 연구하는 데 유용한 도구입니다. 물리적 자극 또는...을 통해 발작을 유도할 수 있는 다양한 돌연변이체들이 있으며...

이 신경회로 분석을 시작하려면 초파리를 치과용 왁스에 고정합니다. 슬라이드 위에서 네 개의 전극을 초파리에 삽입합니다. 접지 전극 하나는 복부에, 기록 전극 하나는 흉부의 등쪽 종방향 비행근에, 그리고 자극 전극 두 개는 머리에 삽입합니다.거대 섬유 임계값(giant fiber threshold)을 찾아내고 가시적인 반응을 확인함으로써 전극 배치를 확인합니다. 초파리에 원하는 전압의 고주파 웨이브 트레인을 전달하며, 발작이 일어나지 않으면 오실로스코프의 트레이스는 평탄하게 나타납니다. 발작이 일어나는 경우, 트레이스는 고주파 자극에 대한 반응으로 제어되지 않는 활동을 보여줍니다.안녕하세요, 저는 캘리포니아 대학교 버클리 캠퍼스 환경과학 정책 및 관리학과의 교수 마크 토이(Mark Toay)입니다. 오늘은 초파리에서 전기생리학적 발작을 분석하는 절차를 보여드리겠습니다. 저희 연구실에서는 이 절차를 통해 초파리 돌연변이체의 발작을 연구하고, 이러한 돌연변이체의 발작 역치를 결정합니다.이제 시작해 보겠습니다. 실험 전날 밤, 필요한 유전자형의 수컷 초파리를 이산화탄소로 마취시킨 후, 부드러운 나일론 플러그나 솜 뭉치로 밀봉된 신선한 먹이가 든 바이알에 넣습니다. 이산화탄소 마취 후에는 발작 임계값이 변하므로, 초파리를 최소 6시간 동안 그대로 두는 것이 좋으며 하룻밤 동안 두는 것이 가장 이상적입니다.실험 당일, 초파리를 한 마리씩 한쪽에 치과용 왁스가 도포된 유리 슬라이드 위에 고정합니다. 초파리는 마취 없이 진공 라인에 연결된 뭉툭한 23 gauge 바늘을 사용하여 머리 부분을 집어 들어 조작합니다. 그다음 다리와 날개를 치과용 왁스 속으로 눌러 넣어 슬라이드에 고정합니다.초파리가 고정되면, 머리를 완전히 고정하기 위해 목과 눈 주변으로 왁스를 밀어 넣습니다. 이제 초파리의 장착이 완료되어 전기생리학 실험을 수행할 준비가 되었습니다. 전기생리학 장치는 3세트의 마이크로 매니퓰레이터로 구성되며, 각 매니퓰레이터에는 끝을 날카롭게 가공한 텅스텐 전극이 1~2개씩 부착되어 있습니다.텅스텐 전극은 별도의 식염수 처리 없이 그대로 사용합니다. 전압은 자극 전극에 연결된 절연 유닛과 연결된 자극기로 공급됩니다. 기록 전극은 프리앰프에 연결되며, 프리앰프는 다시 디지털 저장 오실로스코프에 연결됩니다.필수 사항은 아니지만, 오실로스코프에 스피커를 연결하여 반응을 소리로 들을 수 있게 하면 유용합니다. 이제 고정된 파리를 현미경

neurocircuit-assays-for-seizures-in-epilepsy-mutants-of-drosophila

Research

연구

JoVE Journal

Biology

생물학

에 Electrophysiological 녹음 Drosophila 엠브료

, 전위의 기능을 측정하는 학습을위한 행동 assays, 및 메모리...

에 시금 운동력이있는 사람, 학습, 및 메모리 적자 Drosophila</emNeurodegeneration의> 모델

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