Name: תרבות עצבית עכבר מקדימים לתאי גזע (וידאו) | JoVE Journal
Uploaded: 2007-02-25T00:00:00.000+00:00
Duration: 27 min 44 s
Description: למדו שיטה לבידוד תאי גזע עצביים מקליפת המוח של עכברים עובריים. הטכניקה כוללת ניתוח רקמה, עיכול אנזימטי ותרבית על למינין לחקר התפתחות המוח.

ai_agent_IP

ai_agent

maintenance

instantTrialDurationMinutes

isBiopharma

enableNewMyJoveSectionDesign

educationFeatures

seoMetaApi

ai_copilot_institution_blacklist

ai_chat_institution_blacklist

freeAccessWindow

ssoRoleCapture

scheduledMaintenanceBanner

joveLabsFeatures

disable_autoplay_for_bots

extended_trial_duration

5 minutes

playerTrialDesktop

<ol style=";text-align:right;direction:rtl"><li style=";text-align:right;direction:rtl"> מבשרי עכבר עצביים (NPCs) בודדו מקליפת E12.5 העובר. </li><li style=";text-align:right;direction:rtl"> שכבות העור mesenchymal הוסרו שלפוחית ​​telencephalic גזור. </li><li style=";text-align:right;direction:rtl"> שלפוחית ​​הודגרו ב טריפסין 0.05% עם EDTA 0.02% ו 0.2% ב BSA HBSS במשך 20 דקות בטמפרטורה 37 ° C. </li><li style=";text-align:right;direction:rtl"> Trypsinization נעצר על ידי נפח שווה של 1 מעכב מ&quot;ג / מ&quot;ל ​​סויה טריפסין (Sigma # T6522) ב HBSS. </li><li style=";text-align:right;direction:rtl"> רקמות מעכל היו מנותקים באמצעות מספר סבבי טחינה דקה עם אש מלוטש pipettes פסטר. </li><li style=";text-align:right;direction:rtl"> תאים נשטפו פעם עם BSA 0.2% ב HBSS ו מצופה ב 50,000 תאים / מ&quot;ל ​​על laminin מצופה coverslips בתקשורת עם 20 ng / ml EGF, 10 ng / ml FGF2 (R &amp; D מערכות או Peprotech), ו 2 UG / הפרין מ&quot;ל ( סיגמא). </li></ol>

<ol><li>Currle, D., Cheng, X., Hsu, C., Monuki, E. <a target="_blank" href="http://www.ncbi.nlm.nih.gov/pubmed?term=((Direct+and+indirect+roles+of+CNS+dorsal+midline+cells+in+choroid+plexus+epithelial+formation%5BTitle%5D)+AND+%22Development%22%5BJournal%5D)">Direct and indirect roles of CNS dorsal midline cells in choroid plexus epithelial formation.</a> Development. 132 (15), 3549-3559 (2005).</li>
<li>Flanagan, L., Rebaza, L., Derzic, S., Schwartz, P., Monuki, E. <a target="_blank" href="http://www.ncbi.nlm.nih.gov/pubmed?term=((Regulation+of+human+neural+precursor+cells+by+laminin+and+integrins%5BTitle%5D)+AND+%22J+Neurosci+Res%22%5BJournal%5D)">Regulation of human neural precursor cells by laminin and integrins.</a> J Neurosci Res. 83, 845-856 (2006).</li>
</ol>

התקדמות גדולה להבנת התפתחות מערכת העצבים המרכזית ו ביולוגיה של התא גזע כבר מתאפשרת על ידי היכולת שלנו הקציר, לבודד תרבות עובריים לתאי גזע עצביים. וידאו זה מדגים את דיסקציה של קליפת המוח E12.5 העכבר ואת disaggregation culturing עתידיים של עובריים לתאי גזע עצביים. רבים שיטות אחרות דומות אחרות להיות מועסק בהצלחה על ידי חוקרים אחרים.

<table><tbody><tr><td>מספרי איריס ישרים</td><td>כלי</td><td>Fine Science Tools</td><td>14060-11</td><td></td></tr><tr><td>מספריים בינוניים</td><td>כלי</td><td>Fine Science Tools</td><td>15024-10</td><td></td></tr><tr><td>מיקרו-מספריים</td><td>כלי</td><td>Fine Science Tools</td><td>15002-08</td><td></td></tr><tr><td>פינצטה כפופה</td><td>כלי</td><td>Fine Science Tools</td><td>11251-35</td><td></td></tr></tbody></table>

תרבות עצבית עכבר מקדימים לתאי גזע

Culture of Mouse Neural Stem Cell Precursors

ראשי עצביים תא תרבויות גזע שימושי לחקר המנגנונים של מערכת העצבים המרכזית פיתוח. המחקר בתאי גזע תגדיל את הבנתנו את מערכת העצבים עשויה לאפשר לנו לפתח טיפולים למחלות מוח ופציעות כיום חשוכת מרפא. בנוסף, בתאי גזע אמור לשמש למחקר בתאי גזע שמטרתו מחקר מפורט של מנגנוני התמיינות transdifferentiation עצביים ואת אותות גנטיים וסביבתיים התמחות ישיר של תאים לתוך תאים מסוגים מסוימים. וידאו זה מדגים טכניקה המשמשת disaggregate תאים עובריים forebrain 12.5 יום העכבר הגבי. ההליך לנתיחה כולל קצירת E12.5 עוברי עכברים מן הרחם, הסרת &quot;עור&quot; עם מלקחיים לנתח בסדר ולבסוף לבודד חתיכות של קליפת המוח. בעקבות לנתיחה, הרקמה מתעכל והוא ניתק מכנית. התאים ניתק resuspended הם מתורבתים אז &quot;תא גזע&quot; התקשורת מעדיפה צמיחה של בתאי גזע עצביים.

וידאו זה מתאר את שיטת לבידוד של neuroprecursors מהקורטקס המתפתח של עכברים עובריים. ההליך להסרת עוברים מן הרחם, לנתח את רקמת קליפת המוח, ולעכל את קליפת המוח מבודד מוצג.

תרביות ראשוניות של תאי גזע עצביים הן שימושיות לחקר המנגנונים העומדים בבסיס התפתחות מערכת העצבים המרכזית. מחקר תאי גזע יגביר...

זהו השלב הראשון בבידוד, בפירוק ובגידול של תאי אב עצביים. ראשית, אצפה פלטה של 24 בארות. היא אינה מטופלת לתרבית רקמה.אני אצפה את המצע בלמינין כדי שהתאים יידבקו. תחילה אצפה אותו בתערובת של מים ו-poly-D-lysine. אוסיף כ-450 µL לכל באר.אז אני פשוט אעשה זאת, כך שציפיתי מחצית מהפלטה, את שתי השורות הללו כאן, בתמיסת poly D lysine. ואני אדגיר למשך חמש דקות בטמפרטורת החדר, ממש כאן במנדף. כך שזה עבר דגירה במשך חמש דקות.אני פשוט אסיר את תמיסת ה-PDL באמצעות ואקום. פעולת ואקום של המעבדה. כעת אשטוף שוב את הבארות במים, כ-450 microliters.באמת אין זמן דגירה עבור שטיפת המים. אני פשוט אגש לשאיבת המים. כעת אוסיף את תמיסת הלמינציה.המנמינאט הומס במצע EM EM בריכוז של 2 µg/mL. לכן, אני אוסיף 450 µL של תמיסת המנמינאט לכל באער; נכון לעכשיו אני מצפה פלסטיק, אך ניתן להשתמש גם בלוחיות כיסוי מצופות בתוך הבאערים הללו.אדגיר את התאים בטמפרטורה של 37 °C בתוך אינקובטור לתרביות רקמה למשך ארבע שעות לפחות. לרשותי שתי פינצטות עדינות המכופפות בזווית של 45 מעלות. כמו כן, יש לי מספריים עדינים המכופפים גם הם בזווית של 45 מעלות.פינצטות קהות עבור הניתוח הראשוני של הרחם ומספריים גדולים לחיתוך בנקבה. בסדר, זוהי נקבה CD1 רגילה. היא בהריון עם עוברים ביום עוברי 12 וחצי.כבר ביצעתי לה הקרבה באמצעות חנק ב-CO2 ופריקה צווארית. כעת אסיר את

culture-of-mouse-neural-stem-cell-precursors

Research

JoVE Journal

Biology

ביולוגיה

כאן אנחנו מראים השיטה שלנו לבודד אפידרמיס עכבר לתאי גזע עצביים לפסגה (EPI-NCSC). טכניקה מערבת מיקרו לנתח זקיקי השערה, בידוד בליטה ו placeing אותו בתרבית רקמה. EPI-NCSC להתחיל להגר explants בליטה על גבי תשתית בתוך 3-4 ימים.

עכבר עוריות עצבית קרסט לתאי גזע (EPI-NCSC) תרבויות

זה פרוטוקול וידאו מדגים את היישום של assay neurosphere לבידוד והרחבת בתאי גזע עצביים מן יואילו הוד מעלתם ganglionic היום עובריים 14-עכבר המוח.

הקמת עכבר עובריים גזע עצביים תרבית תאים באמצעות Assay Neurosphere

הבידוד של הרכס העצבי העובר מן הצינור העצבי מאפשרת את...

בידוד והתרבות של תאים עצביים לפסגה מהצינור עובריים עצבית Murine

סרטון זה מדגים פרוטוקול מפורט לבידוד דפנות החדר הצידי ממוחו של עכבר בוגר וביצוע דיסוציאציה אנזימטית של רקמות להשגת תאים בודדים. תאים אלה נתונים לאחר מכן לתנאי תרבית ספציפיים המשפרים באופן סלקטיבי את התפשטות תאי גזע עצביים ומקדמים את התמיינותם לתרביות משותפות של אוליגודנדרוציטים ואסטרוציטים.

השגת תרבית אוליגודנדרוציטים ואסטרוציטים מעורבת מתאי גזע עצביים של עכברים בוגרים

סרטון זה מדגים שיטה ליצירת תאי אב עצביים (NPCs) במבחנה מתאי גזע עובריים של עכברים (mESCs). mESCs מתורבתים בתרחיף ליצירת גופים עובריים (EBs), אשר מונחים לאחר מכן להתמיין NPCs באמצעות טיפול בחומצה רטינואית בתרבית דבקה.

טכניקה ליצירת תאי אב עצביים מתאי גזע עובריים של עכברים

כאן אנו מתארים פרוטוקול מפורט לדור בו זמני של תרביות תאים עצביות מבשר, כמו גם monolayers או neurospheres חסיד, מאזור subventricular וgyrus משוננת של עכברים בוגרים בודדים.

עכבר אחד, שתי תרבויות: בידוד והתרבות של תאי גזע עצביים למבוגרים משני האזורים העצביים של עכברים בודדים

פרוטוקול זה מתאר בפירוט את השיטה ליצירת אבות עצביים מתאי גזע עובריים בשיטה חד-שכבתית נטולת סרום. ניתן להשתמש באבות אלה כדי לגזור סוגי תאים עצביים בוגרים או לחקור את תהליך המפרט העצבי והם ניתנים לקנה מידה של פורמט מרובה בארות עבור סינון מורכב.

בידול עצבי של תאי עכבר גזע עובריים בסרום ללא חד שכבתי תרבות

הקמת מערכות תרבית להרחבת תאי גזע עצביים בוגרים (aNSCs) מאפשרת בדיקה ויישום של תאי גזע עצביים בוגרים לטיפול. האזור התת-קלוסלי (SCZ) הוכר לאחרונה כאזור חדש ליצירת נוירובלסטים בעכברים בוגרים. כאן מתוארות שיטות לבידוד, הרחבה ובידול של SCZ-aNSCs.

בידוד והתרבות של תאי גזע בוגרים עצביים מאזור העכבר Subcallosal

כאן, אנחנו מציגים בטכניקה המיקרוכירורגית הרומן על בידודו של תאי גזע עצביים מ E13 העכבר עובר ganglionic קדושתו.

בידוד והתרבות של תאי גזע עצביים עובריים בעכבר

אנו מתארים את ההליך של הבחנה במבחנה של תאי גזע עובריים עכבר לתאים עצביים באמצעות שיטת טיפה תלויה. יתר על כן, אנו מבצעים ניתוח פנוטיפי מקיף באמצעות RT-qPCR, אימונופלואורסצנטיות, RNA-seq, וציטומטריית זרימה.

בידול ואפיון של אבות עצביים ונוירונים מתאי גזע עובריים של עכבר

למדו שיטה לבידוד תאי גזע עצביים מקליפת המוח של עכברים עובריים. הטכניקה כוללת ניתוח רקמה, עיכול אנזימטי ותרבית על למינין לחקר התפתחות המוח.

תרבות עצבית עכבר מקדימים לתאי גזע

גלה סרטונים נוספים