Encyclopedia of Experiments: Biology
A subscription to JoVE is required to view this content. Sign in or start your free trial.
Transcript
Please note that all translations are automatically generated.
- בצינור המכיל חיץ M9, לאסוף עד 150 תולעי הרמפרודיט בשלב הרצוי של התפתחות.
הצג את הצינור תחת מיקרוסקופ מנתח בעת הסרת supernatant כדי למנוע אובדן מדגם.
אתר את ראש התולעת ואת הלוע, או foregut, אשר מכיל שני מבנים בצורת הנורה. השתמשו בשני מחטים כדי לחתוך דרך התולעת מאחורי הלוע.
ברגע שהציפורניים משובשות, שתי זרועות הגונד מובלטות או נדחפות מהגוף עקב הלחץ הפנימי של התולעת.
בדוגמה זו, ננתח גונדים מתולעים בוגרות לניתוח כשל חיסוני.
- בחר 100 עד 150 תולעים בשלב ההתפתחותי הרצוי ולאסוף אותם בצינור microcentrifuge 1.5 מיליליטר המכיל 100 microliters של חיץ M9. לאחר מכן, למלא את הצינור microcentrifuge עם 900 microliters יותר של חיץ M9 וצנטריפוגה אותו ב 1,000 פעמים g במשך 1 דקה בטמפרטורת החדר.
תחת מיקרוסקופ מנתח, להסיר בעדינות 900 microliters של מאגר M9. לאחר מכן, לחזור על לשטוף פעמיים נוספות כדי להסיר את רוב החיידקים המצורפים.
לאחר מכן, באמצעות קצה micropipette 200 מיקרוליטר עם שעמום מורחב, להעביר את התולעים ב 100 microliters של חיץ M9 לצלחת שעון זכוכית תחתונה שטוחה. לאחר מכן, להוסיף 1 עד 3 microliters של 0.1 levamisole טוחנת למנה מערבולת אותו בעדינות.
תחת מיקרוסקופ מנתח, למקם כל מחט מתחת ומעל כל תולעת ולעשות חתך דק על כל תולעת ליד הנורה הלוע השני באמצעות מספריים כמו תנועה.
- חשוב מאוד שהניתוח של בעלי החיים בצלחת יושלם תוך פחות מחמש דקות.
- במקרה גונד מובלט אינו גלוי, פשוט לדלג על החיה הזאת.
