Encyclopedia of Experiments: Biology
A subscription to JoVE is required to view this content. Sign in or start your free trial.
Transcript
Please note that all translations are automatically generated.
- Samla upp upp till 150 hermafroditmaskar i önskat utvecklingsstadium i ett rör som innehåller M9-buffert.
Visa röret under ett dissekerande mikroskop när du tar bort supernatanten för att förhindra förlust av prov.
Lokalisera maskens huvud och svalget, eller foregut, som innehåller två glödlampaformade strukturer.
När nagelbandet har störts pressas de två gonadarmarna eller skjuts ut ur kroppen på grund av maskens inre tryck.
I det här exemplet kommer vi att dissekera gonads från vuxna maskar för immunofluorescensanalys.
- Plocka 100 till 150 maskar i önskat utvecklingsstadium och samla dem i ett 1,5-milliliter mikrocentrifugrör som innehåller 100 mikroliter M9-buffert. Fyll sedan mikrocentrifugröret med ytterligare 900 mikroliter M9-buffert och centrifugera det vid 1 000 gånger g i 1 minut vid rumstemperatur.
Under ett dissekerande mikroskop, ta försiktigt bort 900 mikroliter av M9-bufferten. Sedan upprepa tvätten ytterligare två gånger för att ta bort de flesta av de bifogade bakterierna.
Överför sedan maskarna i 100 mikroliter M9-buffert till en platt bottenglasklocka.
Placera varje nål under och över varje mask under ett dissekerande mikroskop och gör ett fint snitt på varje mask nära den andra faryngala glödlampan med en saxliknande rörelse.
- Det är mycket viktigt att dissekeringen av djuren i skålen slutförs på under fem minuter.
- Om en extruderad gonad inte är synlig, hoppa bara över det djuret.
