चार तरह से ओल्फैमीटर परख: ड्रोसोफिला में गंध-क्यूड प्रतिक्रियाओं का आकलन करने के लिए एक विधि

- चार तरह का ओल्फैमीटर प्रत्येक कोने में एक-तरफा बंदरगाहों के साथ एक बंद कक्ष है, जिसके माध्यम से यह चार गंधों तक वितरित कर सकता है, अलग गंध प्रोफाइल के साथ क्वाड्रंट बना सकता है। जागते मक्खियों को कक्ष में स्थानांतरित करके एक प्रयोग शुरू करें। संज्ञाहरण से बचें, क्योंकि यह प्रयोग के दौरान उनके व्यवहार को प्रभावित कर सकता है।

हवा को साफ करने के लिए मक्खियों को बेनकाब करें और यह सुनिश्चित करने के लिए उनके आंदोलनों का निरीक्षण करें कि कोई गंध ओल्फैमीटर को दूषित नहीं कर रहा है और फ्लाई व्यवहार को प्रभावित कर रहा है। फिर, परीक्षण गंध को अलग-अलग शीशियों में तैयार करें और उन्हें एक तरफा बंदरगाहों के माध्यम से मुख्य कक्ष से जोड़ें। मक्खियों को पूर्व-परिभाषित अवधि के लिए गंधों को बेनकाब करें, परीक्षण समाप्त होने के बाद उत्तेजना को हटा दें।

मक्खियां आकर्षक गंध के साथ क्वाड्रंट की ओर बढ़ते समय और बसने के दौरान प्रतिरोधी गंध के साथ क्वाड्रेंट से बचने के लिए होती हैं। समय के साथ उनकी स्थिति पर नज़र रखकर मक्खियों की गंध-कुद व्यवहार प्रतिक्रियाओं को मापें क्योंकि वे ओल्फैमीटर का पता लगाते हैं।

निम्नलिखित प्रोटोकॉल में, हम एथिल प्रोपियोनेट, एक प्रतिरोधी गंध, और ऐप्पल साइडर सिरका के जवाब में फ्लाई व्यवहार का विश्लेषण करने के लिए एक एयर डिलीवरी सिस्टम के साथ चार-क्वाड्रेंट ओल्फैक्टोमीटर का उपयोग करेंगे, जो आकर्षक है।

- कम से कम पांच मिनट पहले, तापमान नियंत्रक पर स्विच करें और इसे 25 डिग्री सेल्सियस तक सेट करें। इसके बाद, गंध कक्षों को प्लास्टिक ट्यूब के माध्यम से अखाड़े से जोड़ें। एक इलेक्ट्रॉनिक प्रवाह मीटर का उपयोग करके क्षेत्र के प्रत्येक चक्र में एयरफ्लो दर की जांच करें। सुनिश्चित करें कि नियंत्रण और गंध और वायु धाराएं दोनों 100 मिलीलीटर प्रति मिनट पर चल रही हैं।

- मक्खियां एयरफ्लो के प्रति बहुत संवेदनशील हैं, और यह महत्वपूर्ण है कि प्रत्येक चक्र के लिए एयरफ्लो प्रत्येक प्रयोग से पहले सत्यापित किया जाता है।

- अब, 70% इथेनॉल का उपयोग करके अखाड़े और कांच की प्लेटों को साफ करें। 70% इथेनॉल का उपयोग करके सभी हिस्सों को दो से तीन बार नीचे पोंछें और उन्हें आगे बढ़ने से पहले पूरी तरह से हवा-सूखी होने दें। इसके बाद, कांच की प्लेटों को अखाड़े में दबाएं। इसके बाद, मक्खियों को संज्ञाहरण के बिना अखाड़े में स्थानांतरित करें। गुरुत्वाकर्षण का उपयोग करके, उन्हें कांच की प्लेटों में से एक में छेद के माध्यम से प्रवेश करने दें, और फिर छेद को एक गोलाकार जाल से कवर करें।

अब, फ्लाई-लोडेड एरिना को हल्के-तंग कक्ष में रखें। इसके बाद, चारों नियंत्रण वाली वायु धाराओं को प्रत्येक अखाड़ा कोने से जोड़ें। कक्ष का दरवाजा बंद करें और मक्खियों को 10 से 15 मिनट के लिए नए वातावरण में अनुकूल होने दें।

अभिनंदन अवधि के बाद, 5 से 10 मिनट का नियंत्रण प्रयोग चलाएं जिसमें मक्खियों को चार नियंत्रण वायु धाराओं के संपर्क में लाया जाता है । अब तुरंत डेटा का विश्लेषण करना आवश्यक है । यदि मक्खियों को क्षेत्र में समान रूप से वितरित नहीं किया जाता है, तो अखाड़ा रीसेट किया जाना चाहिए ।

- नियंत्रण के व्यवहार का परीक्षण करना महत्वपूर्ण है जो सिर्फ स्वच्छ हवा के लिए उड़ता है। यह जल्दी से सत्यापित करेगा कि सभी पृष्ठभूमि की स्थिति सामान्य है। प्रकाश, तापमान असंतुलन, झुका हुआ अखाड़ा, या गंध संदूषण सभी समस्याओं का कारण बन सकता है।

- यदि आवश्यक हो, तो मक्खियों को त्यागें और अखाड़े को फिर से साफ करें। यदि किसी गंध संदूषण की आशंका है, सभी ट्यूबिंग को बदलें। 20 मिनट में जब तक जानवर चार क्वाड्रेंट में से किसी को भी वरीयता नहीं देते हैं, तब तक नियंत्रण परीक्षण को नए साथियों के साथ दोहराना जारी रखें । फिर, तीन तरह के वाल्व का उपयोग कर सेटअप के लिए परीक्षण गंध कक्ष कनेक्ट करें, या टयूबिंग को फिर से कनेक्ट करें और 5 से 10 मिनट के लिए एक परीक्षण प्रयोग चलाएं । अब प्रयोगात्मक रिकॉर्डिंग के लिए, तेजी से बंद करो और ट्रैकिंग कार्यक्रम हर 20 मिनट, या डेटा फ़ाइलों को पुनः आरंभ करने के लिए बहुत बड़ा हो जाएगा ।

परीक्षणों के बीच, मक्खियों को त्यागें, 70% इथेनॉल के साथ एरिना और ग्लास प्लेटों को साफ करें, और कनेक्टर ट्यूबों को बदलें। सूखी एयरफ्लो को लगातार सिस्टम को फ्लश करने के लिए रखें। दक्षता के लिए, दो एरेनास होना अच्छा है इसलिए रन के दौरान सफाई की जा सकती है।

- यदि एक ही दिन कई प्रयोग चलाए जाते हैं, तो यह सुनिश्चित करने के लिए अत्यधिक सावधानी का भुगतान करें कि पिछले रन से सिस्टम में कोई गंध नहीं बची है। यह आम तौर पर गंध की कम सांद्रता या CO2 के साथ समस्या नहीं है। लेकिन अत्यधिक केंद्रित उत्तेजनाओं के लिए, प्रयोग रन के बीच 24 घंटे के अंतर की आवश्यकता हो सकती है।