Fyrvägs olfactometeranalys: En metod för att bedöma odorant-cued svar i Drosophila

- En fyrvägs olfactometer är en sluten kammare med envägsportar i varje hörn, genom vilken den kan leverera upp till fyra lukter, vilket skapar kvadranter med distinkta luktprofiler.

Utsätt flugorna för ren luft och observera deras rörelser för att se till att inga luktämnen förorenar olfactometern och påverkar flugbeteendet.

Flugor tenderar att undvika kvadranter med repellent lukt medan de rör sig mot och bosätter sig i kvadranter med attraktiva lukter.

I följande protokoll kommer vi att använda en fyrkvadrant olfactometer med ett luftleveranssystem för att analysera flugbeteende som svar på etylpropionat, en repellent lukt och äppelcidervinäger, vilket är attraktivt.

- Minst fem minuter i förväg, slå på temperaturregulatorn och ställ in den på 25 grader Celsius. Anslut sedan luktkamrarna till arenan via ett plaströr. Kontrollera luftflödet i varje kvadrant på arenan med hjälp av en elektronisk flödesmätare.

- Flugor är mycket känsliga för luftflöde, och det är viktigt att luftflödet för varje kvadrant verifieras före varje experiment.

- Rengör nu arenan och glasplattorna med 70% etanol. Torka av alla delar två till tre gånger och låt dem helt lufttorka innan de fortsätter. Sedan klämmer glasplattorna till arenan. Sedan överför du flugorna till arenan utan anestesi. Med hjälp av gravitation, låt dem komma in genom hålet i en av glasplattorna och täck sedan hålet med ett cirkulärt nät.

Placera nu den fly-laddade arenan i den ljustäta kammaren. Sedan ansluter du de fyra styrluftströmmarna till varje arenahörna. Stäng dörren till kammaren och låt flugorna acklimatisera sig till den nya miljön i 10 till 15 minuter.

Efter acklimatiseringsperioden, kör ett 5 till 10 minuters kontrollexperiment där flugor utsätts för fyra kontrollluftströmmar.

- Det är viktigt att testa beteendet hos kontrollflugor för att bara rena luften.

- Kassera vid behov flugorna och rengör arenan igen. byt ut alla slangar. Fortsätt att upprepa kontrolltestet med nya kohorter tills djuren inte visar någon preferens för någon av de fyra kvadranterna. Anslut sedan testodorantkammaren till installationen med en trevägsventil, eller anslut slangen igen och kör ett testexperiment i 5 till 10 minuter.

Mellan testerna, kassera flugorna, rengör arenan och glasplattorna med 70% etanol och byt ut anslutningsrören.

- Om flera experiment körs samma dag, var ytterst försiktig för att säkerställa att ingen lukt finns kvar i systemet från en tidigare körning. Detta är normalt inte ett problem med låga koncentrationer av lukt eller med CO2. Men för högkoncentrerad stimuli kan upp till ett 24-timmars mellanrum mellan experimentkörningar behövas.