Förberedelse av Drosophila Heart: En teknik för att studera hjärtfysiologi i vuxenflugan

- Annorlunda än hos ryggradsdjur är Drosophila-hjärtat en del av ett öppet cirkulationssystem.

I insekter fungerar hemolymfen som både blod och interstitiell vätska, som transporterar näringsämnen, signalmolekyler och immunceller.

I en experimentell hjärtpreparat efterliknar den konstgjorda hemolymfen fysiologiska förhållanden för att bevara vävnadsfunktionen. Även om naturlig hemolymf inte är ansvarig för gasutbyte, måste den konstgjorda hemolymfen vara väl syresatt för att ersätta bristen på ett funktionellt trakealsystem.

- Innan vi börjar förbereder vi först en konstgjord hemolymflösning. Denna lösning innehåller sackaros och trehalos, som bör läggas till den konstgjorda hemolymfen från kylda lagerlösningar strax före användning för att förhindra bakteriell förorening.

Dra sedan flera fina kapillärer med en vanlig pipettdragare, som kommer att behövas för avlägsnande av fettkroppar i farten.

När allt har förberetts måste vuxna flugor bedövas. Detta kan göras med kort exponering för att flyga tupplur i två till fem minuter, men var försiktig så att flugorna inte lämnas i flugan längre än fem minuter. Kortvarig exponering för kyla kan också användas för att bedöva flugor, men koldioxid rekommenderas inte eftersom det har långvariga effekter på hjärtfrekvens och rytmicitet.

Därefter placeras de bedövade flugorna, dorsala sidan ner, i en Petri-skål belagd med ett tunt lager petroleumgel. Den hydrofoba nagelbandet i vingarna och kroppen ska återgå till gelé, men flugan kan flyttas vid behov.

Huvudet, ventrala nervsladden och benen avlägsnas med ett enda snitt. När det är klippt undersänks preparatet sedan i den syresatt konstgjorda hemolymflösningen.

För in saxens blad i den lilla öppningen i bukspetsen och skär nagelbandet i sidled. Detta frigör ena kanten av ventral nagelband.

Tarmen och andra bukorgan kan vanligtvis avlägsnas som en enda massa med hjälp av juvelerare tång och mild tugging. Att ta bort de inre organen avslöjar det bultande hjärtröret, som fortfarande är fastsatt på dorsal nagelbandet av små alarymuskler och är omgivet av fettkroppar. De dragna kapillärerna sätts in i plast, 1/16-tums slangar fästa vid en vakuumkälla. Sugkraften är proportionell mot spetsdiameter, så pipetter med spetsar större än 40 mikron i diameter bör inte användas.

När det har ställts in används detta sugsystem för att suga av överflödigt fett från runt hjärtröret. Det kan också användas för att ta bort luftbubblor som ackumuleras runt nagelbandet och eventuellt skräp.

Vid behov kan nagelbandet och det fästa hjärtat flyttas genom att försiktigt lyfta nagelbandet ur petroleumgelen och försiktigt tämja det tillbaka ner, återigen undvika all kontakt med hjärtvävnaden. Vid denna tidpunkt bör lösningen som badar preparatet ersättas med färsk, konstgjord hemolymf. Detta preparat bör tillåtas jämvikta i 20 till 30 minuter med syresättning före eventuella manipuleringar. användas för elektrofysiologisk registrering eller för histologiska manipuleringar.