Encyclopedia of Experiments: Biology
A subscription to JoVE is required to view this content.
Transcript
Please note that all translations are automatically generated.
- Börja med att överföra unga vuxna maskar till en ny agarosaplatta på en bild.
Epidermis av en vuxen mask är en tunn enskiktad struktur bestående av multikärnad synytia som är resultatet av cellfusionshändelser.
Linda sedan epidermis apical yta med en laser. Cytoplasma från de skadade cellerna kan läcka ut och visas som en bubbla på sårplatsen.
Laser bestrålning har en fördel jämfört med andra tekniker, såsom nålsår, eftersom det orsakar lokaliserade störningar av nagelbands- och epidermalcellerna, utan att skada inre vävnader.
- För att exakt så nematoderna använder detta protokoll en femtosekonlaser fäst vid snurrande diskkonokalmikroskop.
- Börja med att samla 10 unga vuxna på en agarplatta. Förlama dem i en två mikroliterdroppe på 12 millimolar levamisole lösning.
- Det är viktigt att ett djur är helt förlamat.
- Se till att femtosekonlasereffekten är inställd på 140 milliwatt, mätt före målet, och laserrepetitionshastigheten är 80 megahertz. Lokalisera nu maskarna under ett snurrande diskkonfokalt mikroskop.
Med fokus på epidermalcellens apical yta, lys lasern i två 200 millisekunder pulser separerade med 20 millisekunder. Detta bör vara tillräckligt för att såra epidermis. Vänta ett ögonblick och observera den lokala störningen av cytoplasma, som kommer att visas som bubblande. Om en fluorescerande markör finns, kan lokaliserad blekning observeras.
