ज़ेब्राफ़िश ब्रेन विच्छेदन: मछली न्यूरोबायोलॉजी की एक तकनीक

- एक विच्छेदन बिस्तर पर एक इच्छामृत्यु मछली रखें और गिलों के स्तर पर मछली को काटना करने के लिए एक सर्जिकल ब्लेड का उपयोग करें। सिर को वेंट्रल साइड का सामना करना पड़ रहा है और जब तक आप ऑप्टिक चियाम नहीं देखते हैं, ऑप्टिक नसों से बनी संरचना है जो मस्तिष्क को आंखों से जोड़ता है, तब तक मुलायम ऊतकों को हटा दें।

ऑप्टिक नसों को काटें और आंखों को हटा दें अब, पृष्ठीय पक्ष के साथ मछली को उन्मुख करें और मस्तिष्क को अलग करने के लिए खोपड़ी के हिस्सों को हटा दें। ऊतक के निरंतर पीएच बनाए रखने के लिए मस्तिष्क को एक विच्छेदन माध्यम वाले पेट्री डिश में स्थानांतरित करें। मस्तिष्क के हिस्सों का निरीक्षण करें।

घ्राण बल्ब घ्राण अंगों से जुड़े पूर्वकाल के अंत में संरचनाओं की एक जोड़ी होती है जो गंध संकेतों का पता लगाती है। टेलेंसेफेलन में स्मृति से संबंधित क्षेत्र शामिल होते हैं। हैबरुला टेलेंसेफेलन से मस्तिष्क के अन्य हिस्सों तक जानकारी रिले करता है।

ऑप्टिक टेक्टम एक संवेदी सूचना प्रसंस्करण केंद्र है। सेरिबैलम दैहिक मोटर फ़ंक्शन और बैलेंस में भूमिका निभाता है। और मेडुला रीढ़ की हड्डी से मस्तिष्क तक जानकारी रिले करता है। निम्नलिखित प्रोटोकॉल में, हम मस्तिष्क को वयस्क जेब्राफिश से अलग करेंगे ताकि विभिन्न क्षेत्रों से तंत्रिका स्टेम कोशिकाओं को एकत्र किया जा सके।

शुरू करने के लिए, जेल पैक के साथ एक पेट्री डिश भरकर एक विच्छेदन बिस्तर तैयार करें। फिर डिश को इसके संबंधित ढक्कन से ढककर शून्य से 20 डिग्री सेल्सियस पर इनक्यूबेट करें। एक बार जेल जम जाने के बाद, फ्रीजर से पकवान निकालें और उसके ढक्कन के ऊपर फिल्टर पेपर का एक साफ वर्ग रखें। प्लास्टिक फिल्म के साथ कागज और पकवान दोनों को लपेटने के लिए आगे बढ़ें ।

इसके बाद, सभी सूक्ष्म विच्छेदन उपकरणों को 70% इथेनॉल के साथ इलाज करें। इन निष्फल उपकरणों को विच्छेदन माइक्रोस्कोप के बगल में रखें और ऑप्टिकल फाइबर रोशनी के साथ माइक्रोस्कोप के नीचे पूर्ण विच्छेदन बिस्तर की स्थिति रखें। तुरंत विच्छेदन बिस्तर के शीर्ष पर पहले से तैयार सिर का नमूना रखें और इसे उन्मुख करें ताकि इसका पृष्ठीय पक्ष नीचे का सामना कर रहा हो।

इसके बाद सिर के पीछे से मुंह तक मुलायम टिश्यू के जरिए देशांतर कट बनाने के लिए कैंची का इस्तेमाल करें। बाद में, खोपड़ी के आधार को संदंश के साथ बेनकाब करें और बगल के सभी ऊतकों को हटा दें। इसके बाद, सिर के पीछे से शुरू होने वाली खोपड़ी की पार्श्व दीवारों में से एक को काटें और मस्तिष्क के टेक्टम क्षेत्र की ओर बढ़ें। इस प्रक्रिया को कॉन्ट्रालेटर साइड के लिए दोहराएं। ऑप्टिक तंत्रिका को काटने के लिए आगे बढ़ें । और फिर टेटमेक्टक्टम के स्तर पर खोपड़ी के दो पार्श्व अधिकांश पक्षों को हटा दें

अंत में, सिर वेंट्रल साइड को ऊपर की ओर घुमाएं। और संदंश के साथ, मस्तिष्क को बेनकाब करने के लिए खोपड़ी के सबसे एपिकल हिस्से को छील दें। बाद में, मस्तिष्क और खोपड़ी के किसी भी शेष हिस्सों को विच्छेदन माध्यम से एक डिश में स्थानांतरित करें जो पेनिसिलिन स्ट्रेप्टोमाइसिन के साथ पूरक डीएमएम एफ 12 से बना है। माइक्रोस्कोप के नीचे माइक्रोनाइफ के प्लास्टिक हैंडल के साथ, मस्तिष्क के ऊतकों को साफ करें, किसी भी तंत्रिका संरचनाओं को नुकसान न पहुंचाएं। पूरे मस्तिष्क व्युत्पन्न न्यूरोस्फेर को उत्पन्न करने के लिए दो जेब्रा ब्रेनफिश तक का उपयोग करें।