Name: Ecto和实验室大鼠和小鼠体内寄生虫的诊断 (视频) | JoVE Journal
Uploaded: 2011-09-06T12:00:00.000+00:00
Duration: 8 min 3 s
Description: 学习实验室大鼠和小鼠体内外寄生虫的诊断方法，包括皮毛检查、粪便浮选技术和肠道内容物分析。掌握这些技术有助于确保实验动物群体的健康状态和研究数据的可靠性。

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1. 内寄生虫检查（表1）
1. 肛周胶带试验（另见第5节；这些操作通常同时进行）
<ol>
	<li>从分配器中取一段透明、无磨砂的玻璃纸胶带。胶带长度应足够仅用手持一端操作而不触碰中间部分（约5厘米）。可一次性分配多段胶带，将其粘贴在洁净工作台边缘，按需取用。</li>
	<li>将小鼠从笼中取出，抓住其尾巴，放置于笼盖上。若动物健康状况有要求，应在超净工作台或生物安全柜内进行此操作。</li>
	<li>通过尾巴固定小鼠，使其后肢离开笼面。用拇指和食指夹住胶带一端，将胶带中间部分用力按压在小鼠会阴部，包括肛周区域，反复数次。若观察到毛发粘附于胶带上，则视为检测成功。</li>
	<li>将小鼠放回笼中。</li>
	<li>在已标记的洁净载玻片上滴一滴矿物油，将胶带贴于载玻片上，再滴加一滴矿物油，盖上盖玻片。</li>
	<li>使用光学显微镜的10x和40x物镜观察玻片。肛周胶带法最适用于检测Syphacia eggs，但有时也可发现其他寄生虫卵。</li>
</ol>
2. 粪便漂浮法
<ol>
	<li>准备漂浮液、平底小瓶（药片瓶或粪便漂浮装置，如Ovatector）、培养皿、盖玻片、载玻片以及搅拌棒/涂布棒。漂浮液（如Fecasol）的比重应为1.20–1.30，可由多种钠盐、糖类、硫酸锌配制而成，或直接购买商品化产品。（表2）</li>
	<li>从笼具中或动物新鲜排泄物中采集2–5粒粪便颗粒至漂浮容器内。若粪便过于干燥（由于存放时间较长或排泄动物种类所致），可加入500 μl的0.9%生理盐水湿润粪便，有助于后续操作。</li>
	<li>将小瓶置于培养皿中，以防止溶解的粪便溢出污染操作台面。加入少量漂浮液，充分研磨并搅拌，确保无大块残留物。继续添加漂浮液，直至液面高出瓶口形成弯月面。</li>
	<li>将盖玻片轻置于弯月面上，室温孵育15分钟。寄生虫卵及部分原虫卵囊将上浮至液面并附着于盖玻片底部。</li>
	<li>孵育结束后，小心提起并翻转盖玻片，将其放置于洁净的玻璃载玻片上。</li>
	<li>使用光学显微镜的10x和40x物镜观察玻片样本。</li>
	<li>尽管该方法技术要求低且操作简便，但通常不推荐用于小鼠或大鼠。一般而言，该技术更适用于排粪量较大的动物。</li>
</ol>
3. 粪便浓缩与离心
<ol>
	<li>准备浮聚液、离心管、盖玻片、载玻片、涂抹/搅拌棒和管帽。浮聚液的比重应为1.18–1.30，可由多种钠盐、糖、硫酸锌配制而成，或直接购买商品化产品。（表2）</li>
	<li>从笼具中或动物新鲜排泄物中收集2–10粒粪便样本至收集管中。若粪便过于干燥（可能由于存放时间较长或排泄动物种类所致），可加入500 μl 0.9%生理盐水或所用浮聚液润湿样本，有助于后续处理。</li>
	<li>将样本与适量浮聚液混合于玻璃离心管中。可使用涡旋振荡器进行机械混匀。若使用涡旋振荡器，应在管口加盖密封帽，以防止溢出和交叉污染。常规操作中，样本通常使用比重为1.18的硫酸锌溶液制备，但也可根据需要使用其他溶液（在单独的制备管中）进行补充或替代。</li>
	<li>向每支离心管中补充浮聚液，使液面略高于管口形成微凸的弯月面。将塑料盖玻片覆盖于管口，确保其与管口边缘完全接触。将离心管放入离心机中。</li>
	<li>以约616–760 RCF离心10分钟。若在离心过程中盖玻片脱落或破损，可更换新的盖玻片，并轻轻倾斜离心管使弯月面接触新盖玻片，无需再次离心。</li>
	<li>将盖玻片从离心管上取下，转移至已标记的洁净玻璃载玻片上。若同一粪便样本使用了多种离心浮聚液进行检测，可将两个盖玻片置于同一张载玻片上。</li>
	<li>用碘液对载玻片染色，以便更清晰地识别包囊。</li>
	<li>使用光学显微镜的10×和40×物镜观察载玻片样本。</li>
</ol>
4. 肠道寄生虫和原虫的直接检查
<ol>
	<li>将已安乐死的小鼠或大鼠尸体置于清洁的解剖板或类似工作台面上，保持仰卧位。</li>
	<li>使用镊子在生殖区域提起腹壁，用剪刀小心地从生殖区域沿腹中线剪开腹壁至肋骨基部，切开皮肤和肌肉，暴露肠道。从十二指肠（即起始于胃出口的肠段）开始，至降结肠（即终止于肛门、通常含有成形粪便的肠段）为止，将肠道整体取出。</li>
	<li>将取出的肠道置于一个100 ml的培养皿中。取安乐死动物的盲肠和十二指肠部分组织，放置于解剖板上，沿肠段长轴纵向剪开各肠段，以暴露黏膜面。</li>
	<li>用剪刀将剩余的肠道剪成小段。向培养皿中加入适量自来水，水量以刚好浸没所收集的组织为宜。</li>
	<li>将样品混合物置于实验室烘箱或培养箱中，在35–40°C条件下孵育至少10分钟，以释放并暴露管腔内的线虫。在孵育过程中，同步进行以下步骤。</li>
	<li>在一张已标记的载玻片上，并排滴加两滴0.9%生理盐水，用于分别制备两个肠段（十二指肠和盲肠）的样品。</li>
	<li>对接种环或等效工具进行加热灭菌，随后冷却备用。</li>
	<li>刮取十二指肠黏膜，并将刮取物置于载玻片左侧（靠近磨砂边缘的一侧）。</li>
	<li>刮取盲肠黏膜，并将刮取物置于载玻片右侧。</li>
	<li>在刮取物上加盖盖玻片，先使用相差显微镜的40x物镜进行观察；根据需要调整放大倍数以进行鉴定。若发现寄生虫，应依据其形态特征进行鉴别。</li>
	<li>此时，培养皿中的内容物已可进行检查。在解剖显微镜下检查培养皿内容物，必要时使用探针或棉签轻轻移动组织，确保全面观察。若存在蛲虫，其表现为细小、白色、毛发状的蠕虫；若存在绦虫，则表现为分节、扁平的蠕虫（体型大于线状的蛲虫）。</li>
	<li>若发现或怀疑存在蠕虫，使用小型镊子小心收集虫体标本。</li>
	<li>将标本置于已标记的洁净载玻片上，滴加一滴石蜡油或矿物油，加盖盖玻片。在光学显微镜下使用10x和40x物镜观察标本。</li>
</ol>
2. 体外寄生虫检查（表3）
5. 体外寄生虫检查（胶带法采集体毛）
<ol>
	<li>从分配器中取一段透明（非磨砂）的玻璃纸胶带。胶带长度应足够用手持握一端而不触碰中间部分（约5 cm）。可一次性取出多段胶带，将其粘贴在洁净工作台边缘，按需取用。</li>
	<li>从笼中提起小鼠或大鼠，将其放置于笼盖上，并用尾部固定。若动物健康状况有要求，此操作应在层流柜或生物安全柜内进行。</li>
	<li>固定小鼠或大鼠。使用止血钳夹住毛发，轻轻拔取小鼠肩胛区、腹侧颈区、腋窝区、腹股沟区及背部臀区的毛发，并将毛发置于胶带上。若毛发牢固粘附于胶带，则视为检测成功。完成后将小鼠或大鼠放回笼中。</li>
	<li>在已标记的洁净载玻片上滴加一滴矿物油；将粘有毛发的胶带贴于其上，再滴加另一滴矿物油，最后盖上盖玻片。</li>
	<li>使用光学显微镜的10x和40x物镜观察该玻片。</li>
	<li>该方法最适合检测如Radfordia、Myobia和Myocoptes等毛囊螨。</li>
</ol>
6. 皮肤刮片
<ol>
	<li>准备以下材料：待检测动物、矿物油、载玻片、盖玻片、手术刀和剪刀。若需对活体动物进行检测，应在操作前将其麻醉。</li>
	<li>采集尾基部附近背部及头部颞区的样本。也可根据需要刮取皮肤病变部位和/或其他部位。</li>
	<li>使用手术刀片逆着毛发生长方向用力刮取皮肤，以刮除表皮。刮取前修剪局部被毛可减少载玻片上的视觉干扰（过多毛发），从而提高筛查的敏感性。</li>
	<li>在载玻片上滴加一滴矿物油。将附有样本的刀片在载玻片表面擦拭，使样本转移至油滴中。必要时可添加更多矿物油，最后加盖盖玻片。</li>
	<li>在光学显微镜下使用10x和40x物镜观察载玻片。</li>
	<li>皮肤刮片通常用于检测Demodex（毛囊蠕形螨）及皮肤癣菌等真菌。</li>
</ol>
7. 毛被的直接检查
<ol>
	<li>将已安乐死的小鼠或大鼠放置在解剖显微镜的载物台上。</li>
	<li>使用棉签或类似工具拨开毛发，于约10倍放大下检查毛被的毛发，观察毛干基部。</li>
	<li>检查颅部区域，包括两眼之间、耳廓之间、肩胛骨之间、下颌下方，以及腹股沟和腋窝区域。也可对整个尸体进行全面检查。</li>
	<li>使用小型镊子收集所见的任何外寄生虫或可疑物质。外寄生虫常表现为类似头皮屑的物质，或在毛干基部及皮肤表面呈现黄色蜡样积聚物。</li>
	<li>将标本置于洁净的玻璃载片上，滴加一滴石蜡油或矿物油，盖上盖玻片。在光学显微镜下使用10倍和40倍物镜检查该玻片。</li>
</ol>
3. 代表性结果：
参见附带文件，其中鉴定了以下寄生虫：（注意：这些方法可检测粪便或皮肤及毛发上存在的任何虫卵、蠕虫或包囊；以下仅列出其中一部分）
内寄生虫：
<table border="0">
	<tbody>
		<tr>
			<td>Syphacia muris（卵、蠕虫）</td>
			<td>Chilomastix bettencourti</td>
		</tr>
		<tr>
			<td>Syphacia obvelata（卵、蠕虫）</td>
			<td>Hexamastix muris</td>
		</tr>
		<tr>
			<td>Aspiculuris tetraptera（卵、蠕虫）</td>
			<td>Retortamonas sp.</td>
		</tr>
		<tr>
			<td>Rodentolepis nana（卵、蠕虫）</td>
			<td>Giardia spp.</td>
		</tr>
		<tr>
			<td>Tritrichomonas muris</td>
			<td>Spironucleus muris</td>
		</tr>
		<tr>
			<td>Entamoeba muris</td>
			<td>&nbsp;</td>
		</tr>
	</tbody>
</table>		
体外寄生虫：
<table border="0">
	<tbody>
		<tr>
			<td>Myocoptes musculinis</td>
			<td>Radfordia affinis</td>
		</tr>
		<tr>
			<td>Myocoptes musculinis</td>
			<td>Radforida ensifera</td>
		</tr>
		<tr>
			<td>Myobia musculi</td>
			<td>&nbsp;</td>
		</tr>
	</tbody>
</table>
<table border="1">
	<tbody>
		<tr>
			<td>&nbsp;</td>
			<td>胶带试验</td>
			<td>粪便漂浮法</td>
			<td>粪便常规检查（FCC）</td>
			<td>直接镜检1</td>
			<td>PCR</td>
		</tr>
		<tr>
			<td>原虫</td>
			<td>--</td>
			<td>+</td>
			<td>++</td>
			<td>+++</td>
			<td>+++/NA2</td>
		</tr>
		<tr>
			<td>多细胞寄生虫（Metazoa）</td>
			<td>&nbsp;</td>
			<td>&nbsp;</td>
			<td>&nbsp;</td>
			<td>&nbsp;</td>
			<td>&nbsp;</td>
		</tr>
		<tr>
			<td>蛲虫</td>
			<td>+/-3</td>
			<td>+/-4</td>
			<td>+4</td>
			<td>+++</td>
			<td>+++</td>
		</tr>
		<tr>
			<td>绦虫5</td>
			<td>--</td>
			<td>+</td>
			<td>++</td>
			<td>+++</td>
			<td>NA</td>
		</tr>
		<tr>
			<td>其他线虫5</td>
			<td>--</td>
			<td>+</td>
			<td>+++</td>
			<td>+++</td>
			<td>NA</td>
		</tr>
	</tbody>
</table>
1. 本方法需要对动物实施安乐死。 
2. 目前尚无适用于所有原生动物的PCR检测方法。 
3. 本方法最适合用于检测Syphacia spp. 
4. 本方法更可能检测到Aspiculuris，而较难检测到Syphacia。 
5. 除蛲虫外，绦虫和线虫在现代实验小鼠和大鼠中极为罕见。
表1. 内寄生虫类别及相应的检测方法。某些方法需要对动物实施安乐死。NA 表示目前尚无适用于这些寄生虫的检测方法。+ 表示该方法适用于检测相应寄生虫，– 表示不推荐使用该方法检测该寄生虫。
<table border="1">
	<tbody>
		<tr>
			<td>溶液</td>
			<td>比重</td>
			<td>每升 H2O 所含成分</td>
		</tr>
		<tr>
			<td>氯化钠</td>
			<td>1.20</td>
			<td>311 g 氯化钠</td>
		</tr>
		<tr>
			<td>硝酸钠</td>
			<td>1.20</td>
			<td>338 g 硝酸钠</td>
		</tr>
		<tr>
			<td>硝酸钠</td>
			<td>1.30</td>
			<td>616 g 硝酸钠</td>
		</tr>
		<tr>
			<td>蔗糖</td>
			<td>1.20</td>
			<td>1170 g 蔗糖1</td>
		</tr>
		<tr>
			<td>希瑟氏蔗糖溶液</td>
			<td>1.27–1.30</td>
			<td>1563 g 蔗糖1</td>
		</tr>
		<tr>
			<td>硫酸锌</td>
			<td>1.18</td>
			<td>493 g 硫酸锌</td>
		</tr>
	</tbody>
</table>
1. 这些溶液需要冷藏，或加入 9 ml 苯酚作为防腐剂。
表2. 粪便漂浮液（引自 Smith 等）
<table border="1">
	<tbody>
		<tr>
			<td>&nbsp;</td>
			<td>拔毛（胶带检测）</td>
			<td>皮肤刮片1</td>
			<td>直接镜检1</td>
			<td>PCR</td>
		</tr>
		<tr>
			<td>虱子</td>
			<td>--</td>
			<td>--</td>
			<td>++</td>
			<td>NA</td>
		</tr>
		<tr>
			<td>螨虫</td>
			<td>+</td>
			<td>+</td>
			<td>+++</td>
			<td>+++/NA3</td>
		</tr>
		<tr>
			<td>跳蚤4</td>
			<td>--</td>
			<td>--</td>
			<td>+</td>
			<td>NA</td>
		</tr>
		<tr>
			<td>蜱虫4</td>
			<td>--</td>
			<td>--</td>
			<td>++</td>
			<td>NA</td>
		</tr>
	</tbody>
</table>
1. 若对活体动物实施本方法，需要进行麻醉。 
2. 本方法需要对动物实施安乐死。 
3. 目前尚无适用于所有螨类物种的PCR检测方法。 
4. 跳蚤和蜱虫在现代实验动物设施中极为罕见。
表3. 体外寄生虫的类别及相应的检测方法。某些方法需要对动物实施安乐死，而其他方法则需要对活体动物进行麻醉才能操作。NA 表示目前尚无适用于这些寄生虫的检测方法。+ 表示该方法适用于检测相应寄生虫，– 表示不推荐使用该方法检测该寄生虫。

<ol><li>Baker, D. G. Chapter 23. <a target="_blank" href="http://scholar.google.com/scholar?hl=en&safe=off&q=author%3aBaker%2C+DG+%22The+Mouse+in+Biomedical+Research%3A+Diseases%22">The Mouse in Biomedical Research: Diseases</a>. Fox, J. Diseases Vol. 2, Academic Press. (2007).</li>
<li>Baker, D. G. Chapter 11. <a target="_blank" href="http://scholar.google.com/scholar?hl=en&safe=off&q=author%3aBaker%2C+DG+%22Flynn%27s+Parasites+of+Laboratory+Animals%22">Flynn's Parasites of Laboratory Animals</a>. Baker, D. G. , Blackwell. 303-398 (2007).</li>
<li>Owen, D. G. <a target="_blank" href="http://scholar.google.com/scholar?hl=en&safe=off&q=author%3aOwen%2C+DG+%22Parasites+of+Laboratory+Animals%22">Parasites of Laboratory Animals</a>. 12, Royal Society of Medicine. (1992).</li>
<li>Pritchett, K. R. Chapter 22. <a target="_blank" href="http://scholar.google.com/scholar?hl=en&safe=off&q=author%3aPritchett%2C+KR+%22The+Mouse+in+Biomedical+Research%3A+Diseases%22">The Mouse in Biomedical Research: Diseases</a>. Fox, J. Diseases Vol. 2, Academic Press. (2007).</li>
<li>Smith, P. H., Wiles, S. E., Malone, J. B., Monahan, C. M. Chapter 1. <a target="_blank" href="http://scholar.google.com/scholar?hl=en&safe=off&q=author%3aSmith%2C+PH+%22Flynn%27s+Parasites+of+Laboratory+Animals%22">Flynn's Parasites of Laboratory Animals</a>. Baker, D. G. , Blackwell. 1-13 (2007).</li>
<li>Wasson, K. Chapter 21. <a target="_blank" href="http://scholar.google.com/scholar?hl=en&safe=off&q=author%3aWasson%2C+K+%22The+Mouse+in+Biomedical+Research%3A+Diseases%22">The Mouse in Biomedical Research: Diseases</a>. Fox, J. Vol. 2, Academic Press. 517-550 (2007).</li>
</ol>

所有作者均为 Charles River 的员工，该公司是诊断试剂盒和试剂的供应商，包括上文所述的试剂盒。

在实验室工作时，安全应始终是首要考虑的问题。在接触动物时，务必穿戴适当的防护装备，并在操作前后使用消毒剂清洁工作台面。这些方法主要用于检测所检查部位的实验动物寄生虫，即能够检出外来或极为罕见的寄生虫，以及更常见的蛲虫和毛螨。尽管这些方法也可适用于其他物种，但野生啮齿类动物可能在肝脏、皮下组织和脑等部位携带额外的寄生虫，而上述方法并未评估这些部位。

<table><tbody><tr><td>切板</td><td>Thermo Fisher Scientific, Inc.</td><td>Cat #36114</td><td></td></tr><tr><td>小剪刀</td><td>Roboz Surgical Instruments Co.</td><td>RS-5910, G204</td><td>23mm 刀片，3.5&amp;#8221; 长度，直刃</td></tr><tr><td>中号剪刀</td><td>Roboz Surgical Instruments Co.</td><td>RS-6808, G207</td><td>5&amp;#8221;</td></tr><tr><td>弯头镊子</td><td>Roboz Surgical Instruments Co.</td><td>RS-8254 (M1/21004)</td><td>4.5&amp;#8221;，带齿，轻微弯曲</td></tr><tr><td>显微解剖镊</td><td>Roboz Surgical Instruments Co.</td><td>RS-5238</td><td>Hudson-(EWALD)</td></tr><tr><td>组织镊</td><td>Roboz Surgical Instruments Co.</td><td>RS-8160</td><td>鼠齿状</td></tr><tr><td>金属探针</td><td>VWR international</td><td>Cat#25778-000</td><td></td></tr><tr><td>止血钳</td><td>Vantage</td><td>V97-48</td><td></td></tr><tr><td>涂布棒</td><td>Puritan</td><td>6 英寸涂布棒，货号#807</td><td></td></tr><tr><td>解剖显微镜</td><td>Olympus Corporation</td><td>SZ51, Schott, ACE1</td><td></td></tr><tr><td>培养皿</td><td>VWR international</td><td>100 mm，货号#3401PDNL</td><td></td></tr><tr><td>盖玻片</td><td>VWR international</td><td>显微盖玻片，货号#48366-067</td><td></td></tr><tr><td>载玻片</td><td>VWR international</td><td>VistaVision 显微载玻片，货号#16004-368</td><td></td></tr><tr><td>接种环</td><td>VWR international</td><td>Cat#50815-040</td><td></td></tr><tr><td>光学显微镜</td><td>Olympus Corporation</td><td>型号#BX41TF</td><td></td></tr><tr><td>实验室烘箱</td><td>Quincy Lab Inc.</td><td>Model 10 Lab Oven</td><td></td></tr><tr><td>离心机</td><td>Beckman Coulter Inc.</td><td>Allegra X-12R</td><td></td></tr><tr><td>涡旋振荡器</td><td>VWR international</td><td>Mini-Vortexer</td><td></td></tr><tr><td>试管</td><td>Kimble Chase</td><td>15 ml 一次性离心管，货号#73790-15</td><td></td></tr><tr><td>盖玻片</td><td>VWR international</td><td>塑料显微盖玻片，22 mm，货号#48376-049</td><td></td></tr><tr><td>白色瓶盖</td><td>VWR international</td><td>Cat#60869-089</td><td></td></tr><tr><td>碘</td><td>Rowley biochemical institute</td><td>Cat#SO-364</td><td></td></tr><tr><td>硫酸锌</td><td>Sigma-Aldrich</td><td>Cat#1000917519, Z4750-500G</td><td></td></tr><tr><td>蔗糖</td><td>Mallinckrodt Baker Inc.</td><td>Cat#8360-06</td><td></td></tr><tr><td>苯酚</td><td>EMD Millipore</td><td>Cat#PX0510-1</td><td></td></tr><tr><td>透明胶带</td><td>Staples</td><td>透明胶带，货号#504712</td><td></td></tr><tr><td>矿物油</td><td>Mallinckrodt Baker Inc.</td><td>Cat#6358</td><td></td></tr></tbody></table>

实验室大鼠和小鼠体外及体内寄生虫的诊断

Diagnosis of Ecto- and Endoparasites in Laboratory Rats and Mice

内寄生虫和外寄生虫在实验动物设施中仍然是一个重要的问题，许多研究机构的啮齿类动物都存在一定程度的寄生虫感染。在开始对动物进行寄生虫检查之前，应考虑两个问题：第一，所收集的信息将用于何种目的；第二，哪种检测方法最为合适。了解动物是否感染寄生虫可能是设施可以接受的情况，但通常还需要对动物进行治疗，并进一步评估治疗效果。可通过多种技术在活体动物或经安乐死处理的动物中检测寄生虫。传统上，诊断敏感性最高的检测方法需要以牺牲动物为代价，但如今PCR技术已实现对多种寄生虫的高灵敏度检测。本文展示了在小鼠和大鼠中检测内寄生虫和外寄生虫的操作流程。相同的操作流程也适用于其他啮齿类动物，尽管所发现的寄生虫种类可能不同。

本文介绍了用于检测大鼠和小鼠体内或体外寄生虫感染的各种筛查方法。将演示多种诊断检测技术，包括适用于活体动物的检测方法以及动物安乐死后使用的检测方法。文中将包含有助于识别大鼠和小鼠寄生虫的图片。

内部和外部寄生虫在实验啮齿类动物设施中仍然是一个重大问题，许多研究机构的设施中都存在一定程度的寄生虫感染……

本实验的总体目标是确定实验室大鼠或小鼠体内是否存在寄生虫。可通过多种方法实现这一目标，包括对毛发和皮肤的检查、粪便检查以及肠道内容物检查。通过定期检测这些样本，最终可获得有关动物群体整体健康状况的重要信息。这些方法的可视化演示至关重要，因为如果操作不彻底或不仔细，就可能漏检寄生虫感染。通常，刚接触这些方法的人会遇到困难，因为即使技术操作正确，也可能出现寄生虫误判的情况。我们将演示的方法有助于在采集毛发和肛周样本之前，回答有关研究中所用大鼠和小鼠健康状况的关键问题。为每只动物准备至少两张载玻片，每张滴加矿物油。将目标小鼠从笼中取出，放置于倒置的笼盖内侧。抓住小鼠的尾巴。将一段五厘米长的透明胶带紧密贴附于小鼠的会阴部及肛周区域。若操作成功，胶带上应粘有毛发。继续固定动物，并用镊子夹住其毛发。从肩胛区、腹侧颈部区域、腋窝区、腹股沟区以及背侧臀部区域轻轻拔取毛发样本。将这些样本置于一段5厘米长的透明胶带上。采集每个样本后，将胶带粘性面向下贴在载玻片上。待所有样本采集完毕，在每个样本上再覆盖一滴矿物油，并加盖盖玻片。检查肛周玻片时，除粪小杆线虫（si facia）外，几乎不会发现其他寄生虫的虫卵。进行粪便检查时，从每只动物或笼子中采集2至5粒粪便样本。如果样本过于干燥，可用500微升0.9%生理盐水润湿。将样本置于10毫升药瓶或粪便漂浮装置中。将收集管放入培养皿中，并加入高密度浮选液至管体积的四分之一。然后将粪便捣碎并搅拌入管中的溶液，直至无大块残留。继续添加浮选液，直至液面高出管口形成弯月面。然后将盖玻片置于弯月面之上，室温孵育15分钟。孵育期间，寄生虫、虫卵、蛋白酶体和Oasis结构会上升并附着于盖玻片，随后将盖玻片转移至载玻片上以进行进一步观察。该检测可在简单的药瓶中完成。若无法获取粪便样本，可先收集每只动物两到十个粪便颗粒；若样本已干燥，需在500 µL、0.9%生理盐水中重新水化。取一个15 mL玻璃离心管，加入足够量的高密度浮选液，使液面达到管体积的四分之一，然后混入样本。用塑料卡扣盖密封玻璃管，涡旋振荡混合物15至30秒，直至形成均匀的悬液。现在，向每个样品管中加入更多的浮选液，以形成轻微的正弯月面。将塑料盖玻片覆盖在每个管口，并确保其与管口完全接触。为了获得最佳密封效果，先用棉签清洁管子。随后离心，将管子和盖玻片离心10分钟。如果有盖玻片丢失或破损，应更换新的盖玻片，并轻轻倾斜管子，使弯月面接触新盖玻片。然后移除所有盖玻片，并将其放置在已标记的洁净玻璃载玻片上。碘染色有助于识别麻醉或安乐死动物身上的包囊。修剪尾基部、头部颞区或任何皮肤病变部位及其他需刮取部位周围的背侧毛发，用手术刀片逆着毛发生长方向对皮肤进行深部刮取。这会腐蚀表皮。将刀片擦拭至已滴加矿物油的标记载玻片上。如有需要，可再添加一滴油。在将样本盖上盖玻片之前，将已处死的动物置于洁净的解剖板上，用镊子在生殖区域提起腹壁。然后用剪刀小心地从生殖区域沿腹中线剪开至肋骨基部，去除皮肤和肌肉以暴露肠道。随后，取一部分盲肠和十二指肠放入培养皿盖内。沿肠段纵向切开。为暴露黏膜，取两滴0.9%生理盐水置于一张已标记的载玻片上。然后使用灭菌的接种环刮取黏膜和十二指肠组织，并将刮取物放入生理盐水滴中。重复该过程，将样本从盲肠转移至另一液滴中。移除剩余的肠道，从十二指肠开始，一直至降结肠。将肠道转移至100毫升培养皿的底部。使用剪刀将肠道剪成较小的片段。向培养皿中加入足够的自来水，使收集的组织刚好被浸没。将样品混合物在35至40摄氏度下孵育至少10分钟。在此期间，随着肠道组织样品的消化，腔内头盔结构将被释放并暴露出来。使用相差显微镜检查十二指肠和SQL样品中的寄生虫。完成整个肠道样本的孵育后，在解剖显微镜下检查培养皿中的内容物。使用探针进行彻底检查。蛲虫会呈现为细小的白色毛发状蠕虫。绦虫呈分节的扁形虫形态。用小镊子收集任何虫体或可疑物质，并将其置于载玻片上。如需在光学显微镜下进一步检查，将已处死的小鼠或大鼠直接放置在解剖显微镜的载物台上，在10倍物镜下使用涂药棒拨开毛发，观察毛干根部。体外寄生虫可能看起来像头皮屑，或在毛干基部或皮肤表面直接出现黄色蜡样堆积物。至少应在头颅区域、腹股沟区域和腋下区域检查体外寄生虫。使用小镊子，仔细检查眼睛与硬币之间、硬币之间、肩胛骨之间以及下颌下方的区域。将可能的外寄生虫及其他可疑物质转移至载玻片上。使用矿物油封片以进行鉴定。这些步骤可检测出多种常见寄生虫。以下是一些示例。这些是从会阴带样本中发现的蛲虫卵。在粪便离心制备物中发现一个粪塞含有鼠嗜皮螨。这些是疥螨卵。在对肠黏膜进行直接检查时，可能会观察到三线蛔虫。对软化肠道的检查可发现这些成虫蛲虫。一旦掌握，完成一次全面的寄生虫检查可在一小时之内完成。观看本视频后，您应能够充分了解如何在大鼠和小鼠中进行各类寄生虫检查。请务必注意，其中一些寄生虫可传播给人类。始终遵守基本的实验室安全规则。

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