Journal
/
Biology
/
Affinity Utfällning av aktiva Rho-GEFs Använda en GST-märkt Mutant Rho Protein (GST-RhoA (G17A)) från epitelceller Lysaten
JoVE Journal
Biology
This content is Free Access.
JoVE Journal Biology
Affinity Precipitation of Active Rho-GEFs Using a GST-tagged Mutant Rho Protein (GST-RhoA(G17A)) from Epithelial Cell Lysates
Please note that all translations are automatically generated. Click here for the English version.

Affinity Utfällning av aktiva Rho-GEFs Använda en GST-märkt Mutant Rho Protein (GST-RhoA (G17A)) från epitelceller Lysaten

DOI:
10.3791/3932-v

•

11:28 min

•

March 31, 2012

•

, , , ,
1Keenan Research Centre, Li Ka Shing Knowledge Institute,St. Michael’s Hospital , 2Department of Surgery,University of Toronto, 3Department of Cell and Developmental Biology,University of North Carolina at Chapel Hill

Chapters

  • 00:05Title
  • 01:46Transformation of E. coli with the pGEX-RhoA(G17A) Construct
  • 02:55Preparation of GST-RhoA(G17A) Beads
  • 07:50GEF Pulldown Assay with Nucleotide-free RhoA(G17A) Beads
  • 10:11Representative Pull Down Results
  • 11:03Conclusion

Summary

Automatic Translation

Automatic Translation

Den metod som presenteras här beskriver en analys för att följa aktivering av RhoA specifika GDP / GTP Exchange Faktorer (GEFs) i odlade celler genom att använda en mutant RhoA GST-fusionsprotein som har hög affinitet för aktiverade GEFs. GEFs fälls ut från cellysat, påvisades med Western blotting och kvantifieras genom densitometri.

Tags

Affinity PrecipitationRho-GEFsGST-tagged Mutant Rho ProteinCytoskeleton RegulationCellular ProcessesGTPasesGuanine-nucleotide Exchange FactorPathway-specific RegulationRegulatory NetworksActive Pool Of GEFsAffinity Precipitation AssayBurridge Lab

Article

Embed

ADD TO PLAYLIST

Usage Statistics

Related Videos

Isolering av labil Multi-proteinkomplex av In vivo Kontrollerad Cellular tvärbindning och Immuno-magnetiska affinitetskromatografi

Bimolecular Fluorescens komplement (BiFC) analys av protein-protein interaktion i lök celler med Helios Gene Gun

Blå Native polyakrylamidgelelektrofores (BN-PAGE) för analys av Multiproteinkomplex från Cellular Lysates

Lipid Blås-medierad affinitetskromatografi med magnetkamera Aktivt cellsortering (LIMACS): en ny metod för att analysera protein-lipid Interaktion

Kromatografiska Rening av högaktiv Jäst Ribosomer

Ortogonal proteinrening underlättas av en liten Bispecific Affinity Tagg

Identifiering av Protein Samverkande Partners Använda Tandem Affinity Purification

En vätskefas affinitetsinfångning Analys med användning av magnetiska pärlor för att studera protein-proteininteraktion: polioviruset-Nanobody Exempel

Ett protokoll för Fag Display och Affinity val med rekombinanta protein Beten

Transgena Gnagare analys för att kvantifiera Man Germ Cell Mutant Frekvens

Read Article