Name: Topo Modello ortotopico di cancro colorettale (Video) | JoVE Journal
Uploaded: 2007-12-04T04:21:00.000+00:00
Duration: 8 min 43 s
Description: Impara a stabilire un modello ortotopico di cancro colorettale nel topo per studiare la progressione tumorale e testare nuove terapie. Questo metodo offre risultati più rilevanti rispetto ai modelli sottocutanei tradizionali.

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Dipartimento di Chirurgia, Università di California, San Francisco Raymond Shaheen, MD

I. Preparazione cellulare <ol><li> Le cellule tumorali del colon-retto sono cresciuti in coltura e raccolta quando subconfluent. </li><li> Una sospensione singola cella viene preparato in tampone fosfato e tenuta in ghiaccio. </li></ol> II. Preparazione del tumore <ol><li> Un mouse con un precostituito tumore del colon-retto per via sottocutanea è eutanasia. </li><li> Il tumore sottocutaneo viene rimosso utilizzando una tecnica sterile e diviso in 2-3 pezzi millimetri </li><li> I pezzi del tumore sono tenuti in tampone fosfato salino sul ghiaccio. </li></ol> III. Preparazione del mouse Nota: Nel nostro laboratorio usiamo per via inalatoria isoflurano per anestetizzare il mouse, in alternativa, si può usare anestetici iniettabili per ottenere lo stesso effetto <ol><li> La profondità di anestesia viene valutata usando un pizzico piedi. Non ci dovrebbero essere ritirarsi reflex con un pizzico punta. </li><li> Gli antibiotici può essere somministrato a questo punto. </li><li> Il mouse anestetizzato, che in precedenza era rasata, sia posizionata correttamente. </li><li> L&#39;addome viene preparato con una soluzione di Betadine. </li><li> Dell&#39;addome e del sito chirurgico sono drappeggiati in modo sterile. </li></ol> IV. Laparotomia <ol><li> Un piccolo nick è realizzata in pelle </li><li> La muscolatura della parete addominale è colto ed elevato </li><li> La cavità addominale è entrato e una singola lama delle forbici è usato per spingere l&#39;intra-addominale contenuti via </li><li> L&#39;incisione è estesa a 2-3 cm </li></ol> L&#39;esposizione V. del cieco <ol><li> Il cieco con il suo sacchetto finale cieco è identificato e esteriorizzato </li><li> Il cieco è isolato dal resto del mouse utilizzando un pre-taglio, garza sterile </li><li> Salina calda viene utilizzata per mantenere umido il cieco </li></ol> VI. L&#39;iniezione di cellule nella parete del cieco <ol><li> A 27 G o un ago sottile viene usato per iniettare un volume di 50 ml di cellule nella parete del cieco </li><li> L&#39;ago viene rimosso </li><li> Il sito di iniezione è controllato per garantire l&#39;assenza di perdite </li><li> Il cieco è tornato alla cavità addominale </li></ol> VII. Il trapianto di Tumore sulla Cieco Nota: oltre a iniettare le cellule nel muro del cieco, un approccio alternativo consiste nel trapianto di tumore sul cieco <ol><li> Una figura di 8 punti è posizionato sul cieco utilizzando 6-0 o 7-0 sutura dimensioni </li><li> La parete del cieco è leggermente danneggiato </li><li> Poi, il pezzo tumorale è posizionata </li><li> Il punto è legato </li><li> Il cieco è tornato alla cavità addominale </li></ol> VIII. Chiusura del mouse parete addominale e di recupero <ol><li> La parete addominale del mouse è chiuso con tre punti di sutura interrotta utilizzando 3-0 o 4-0 sutura dimensioni </li><li> In alternativa, si può usare un punto semplice esecuzione </li><li> Post-operatorio analgesici e un bolo fluido può essere data a questo punto </li><li> Il mouse è permesso di recuperare l&#39;anestesia. </li></ol> Nota: con anestetici inalatori questo richiede in genere 30 secondi IX. Risultati - tumore primitivo e metastasi epatiche <img src="/files/ftp_upload/old/484_2008_2_11_8/A.png" alt="" /><img src="/files/ftp_upload/old/484_2008_2_11_9/B.png" alt="" /><img src="/files/ftp_upload/old/484_2008_2_11_10/C.png" alt="" /> Tumore primario - mostrato in situ (A) e con evidenza di neovascolarizzazione (B); alla colorazione H &amp; E, i tumori localmente invasivi (C) <img src="/files/ftp_upload/old/484_2008_2_11_11/D.png" alt="" /> Metastasi al fegato - mostrato ex vivo (D)

<ol><li>Heijstek, M. W., Kraneburg, O., Rinkes Borel, I. H. <a target="_blank" href="http://www.ncbi.nlm.nih.gov/pubmed?term=((Mouse+models+of+colorectal+cancer+and+liver+metastases%5BTitle%5D)+AND+%22Dig+Surg%22%5BJournal%5D)">Mouse models of colorectal cancer and liver metastases.</a> Dig Surg. 22, 16-25 (2005).</li>
<li>Kobaek-Larsen, M., Thorup, I., Diederichsen, A., Fenger, C., Hoitinga, M. R. <a target="_blank" href="http://www.ncbi.nlm.nih.gov/pubmed?term=((Review+of+colorectal+cancer+and+its+metastases+in+rodent+models%3A+comparative+aspects+with+those+in+humans%5BTitle%5D)+AND+%22Comp+Med%22%5BJournal%5D)">Review of colorectal cancer and its metastases in rodent models: comparative aspects with those in humans.</a> Comp Med. 50, 16-26 (2000).</li>
<li>Wilmanns, C., Fan, D., O'Brian, C. A., Bucana, C. D., Fidler, I. J. <a target="_blank" href="http://www.ncbi.nlm.nih.gov/pubmed?term=((Orthotopic+and+ectopic+organ+environments+differentially+influence+the+sensitivity+of+murine+colon+carcinoma+cells+to+doxorubicin+and+5-fluorouracil%5BTitle%5D)+AND+%22Int+J+Cancer%22%5BJournal%5D)">Orthotopic and ectopic organ environments differentially influence the sensitivity of murine colon carcinoma cells to doxorubicin and 5-fluorouracil.</a> Int J Cancer. 52, 98-104 (1992).</li>
<li>Kashtan, H., Rabau, M., Mullen, J. B., Wong, A. H. C., Roder, J. C., Shiptz, B., Stern, H. S., Gallinger, S. <a target="_blank" href="http://www.ncbi.nlm.nih.gov/pubmed?term=((Intra-rectal+injection+of+tumor+cells%3A+a+novel+animal+model+of+rectal+cancer%5BTitle%5D)+AND+%22Surg+Oncol%22%5BJournal%5D)">Intra-rectal injection of tumor cells: a novel animal model of rectal cancer.</a> Surg Oncol. 1, 251-256 (1992).</li>
</ol>

Anche se il mouse modelli di tumore sottocutaneo sono facili da stabilire e controllare, è chiaro che questo modello non può replicare il sito originale anatomica del tumore colorettale. A causa della differenza di microambiente, le cellule del cancro colorettale in crescita sotto la pelle hanno dimostrato di cambiare il loro fenotipo e quasi sempre non riescono a progredire e metastasi 1,2. In realtà, la risposta del tumore alla terapia può variare notevolmente a seconda che le cellule tumorali sono impiantate in un ectopica (so...

<table><tbody><tr><td>Mezzi e componenti per colture cellulari</td><td></td><td></td><td>variano a seconda della linea cellulare utilizzata</td></tr><tr><td>Soluzione salina tamponata al fosfato</td><td>BioWhittaker</td><td>17-512F</td><td>disponibile anche presso numerosi altri fornitori</td></tr><tr><td>Provette da centrifuga da 15 mL, in polipropilene</td><td>Corning</td><td>430790</td><td></td></tr><tr><td>Piastre a 6 pozzetti con coperchio</td><td>BD Biosciences</td><td>353046</td><td></td></tr><tr><td>Pinze da iridectomia, dritte, con punte seghettate</td><td>World Precision Instruments, Inc.</td><td>15914</td><td>è consigliabile avere un paio di questi strumenti</td></tr><tr><td>Forbici da dissezione da iridectomia, dritte, affilate</td><td>World Precision Instruments, Inc.</td><td>14393</td><td></td></tr><tr><td>Pinza per ago chirurgico (standard)</td><td>World Precision Instruments, Inc.</td><td>14109</td><td></td></tr><tr><td>Pinza per ago chirurgico (Castroviejo)</td><td>World Precision Instruments, Inc.</td><td>14137</td><td></td></tr><tr><td>Cidex Plus</td><td>World Precision Instruments, Inc.</td><td>7364</td><td>gli strumenti devono essere sterilizzati periodicamente in autoclave, ma possono anche essere disinfettati immergendoli in Cidex</td></tr><tr><td>Filetto di sutura 6-0 o 7-0</td><td></td><td></td><td>per il cieco; cortesia del Dipartimento di Chirurgia, UCSF</td></tr><tr><td>Filetto di sutura 3-0 o 4-0</td><td></td><td></td><td>per la parete addominale; cortesia del Dipartimento di Chirurgia, UCSF</td></tr><tr><td>Macchina per anestesia / Isoflurano</td><td>J.A. Baulch and Associates</td><td>3206</td><td>disponibile anche presso numerosi altri fornitori</td></tr><tr><td>Piastra riscaldante monouso, 6&quot; x 6&quot;</td><td>Prism Technologies</td><td>20419</td><td></td></tr><tr><td>Nastro adesivo arancione, 13 mm x 13 m</td><td>Fisher Scientific</td><td>15901F</td><td>per immobilizzare il topo anestetizzato</td></tr><tr><td>Tagliacapelli Pro-Cord/Cordless</td><td>Oster Professional Products</td><td>78997-010</td><td>per rasare il pelo del topo</td></tr><tr><td>Betadine</td><td>Fisher Scientific</td><td>19-027132</td><td>può essere acquistato anche in qualsiasi negozio di materiale medico</td></tr><tr><td>Garze 2 x 2, 3 strati</td><td>Johnson &amp;amp; Johnson</td><td>7635</td><td>possono essere acquistate anche in qualsiasi negozio di materiale medico</td></tr><tr><td>Campo sterile, barriera, 16&quot; x 29&quot;</td><td>Johnson &amp;amp; Johnson</td><td>0905</td><td>può essere acquistato anche in qualsiasi negozio di materiale medico</td></tr><tr><td>Applicatori con estremità in cotone, 6&quot;</td><td>Fisher Scientific</td><td>14-960-3Q</td><td>possono essere acquistati anche in qualsiasi negozio di materiale medico</td></tr><tr><td>Siringa da 10 cc, con ago Luer lock</td><td>BD Biosciences</td><td>309604</td><td></td></tr><tr><td>Siringa da 1 cc, tubercolinica, con ago slip tip</td><td>BD Biosciences</td><td>309602</td><td></td></tr><tr><td>Ago da 27 1/2 G</td><td>BD Biosciences</td><td>305109</td><td></td></tr><tr><td>Ago da 30 G</td><td>BD Biosciences</td><td>305106</td><td></td></tr></tbody></table>

topo modello ortotopico di cancro colorettale

Orthotopic Mouse Model of Colorectal Cancer

Il tradizionale modello di tumore sottocutaneo è proprio l&#39;ideale per lo studio del cancro del colon-retto. Ortotopico modelli murini di cancro del colon-retto, che presentano le cellule tumorali in crescita nella loro posizione naturale, replicare malattia umana con l&#39;alta fedeltà. Due tecniche possono essere usate per stabilire questo modello. Entrambe le tecniche sono simili e richiedono l&#39;anestesia del mouse e laparotomia per l&#39;esposizione del cieco. Una tecnica prevede l&#39;iniezione di una sospensione di cellule di cancro del colon-retto nella parete del cieco. Le cellule cancerose vengono prima crescere in coltura, raccolto quando subconfluent e pronta come una sospensione di cellule singole. Una piccola quantità di cellule viene iniettato lentamente per evitare perdite. L&#39;altra tecnica prevede il trapianto di un pezzo di tumore sottocutaneo sul cieco. Un mouse con un precostituito tumore del colon-retto per via sottocutanea è eutanasia e il tumore è stato rimosso con tecnica sterile. Il pezzo tumore è diviso in piccoli pezzi per il trapianto di un altro mouse. Prima del trapianto, la parete del cieco è leggermente danneggiato per facilitare l&#39;infiltrazione delle cellule tumorali. Il tempo per lo sviluppo di tumori primari e delle metastasi epatiche varia a seconda della tecnica, linea cellulare, e le specie utilizzate il mouse. Questo modello murino ortotopico è utile per studiare la naturale progressione del tumore del colon-retto e test nuovi agenti terapeutici contro il cancro del colon-retto.

Due tecniche possono essere usate per stabilire questo modello: l&#39;iniezione di una sospensione di cellule tumorali nella parete del cieco o il trapianto di un pezzo di tumore sottocutaneo sul cieco. Questo modello è utile per studiare la naturale progressione del tumore del colon-retto e test nuovi agenti terapeutici contro il cancro del colon-retto.

Topo Modello ortotopico di cancro colorettale

Il tradizionale modello tumorale sottocutaneo risulta poco ideale per lo studio del cancro colorettale. I modelli murini ortotopici di cancro colorettale, caratterizzati da...

Ciao, mi chiamo William Sang. Sono del laboratorio del Dott. Edgar Engelman del Dipartimento di Anatomia Patologica della Stanford University. Sono anche un specializzando in chirurgia presso l'Università della California di San Francisco.Oggi vi mostrerò come stabilire un modello murino ortotopico di cancro del colon-retto. Questo modello è utile per studiare la progressione naturale del cancro del colon-retto e per testare nuovi agenti terapeutici contro questa neoplasia. Questo approccio si differenzia dal tradizionale modello di tumore sottocutaneo.Il modello tumorale sottocutaneo è meno che ideale poiché le cellule tumorali che crescono sotto la pelle presentano spesso un fenotipo alterato e non progrediscono né metastatizzano con frequenza. Di fatto, la risposta del tumore alla terapia può variare notevolmente a seconda che le cellule tumorali siano impiantate in una sede sottocutanea o in una sede ortotopica. Per stabilire un modello murino ortotopico di cancro del colon-retto si possono utilizzare due tecniche.Una tecnica prevede l'iniezione di una sospensione di cellule tumorali del cancro del colon-retto nella parete SQL. L'altra tecnica consiste nel trapianto di un framm

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Questo video descrive il protocollo per la generazione di un modello murino di cancro colorettale xenotrapianto ortotopico derivato da paziente per studiare la progressione delle cellule tumorali del colon-retto in topi diabetici/immunodeficienza combinata grave (NOD/SCID) non obesi. Questo modello murino aiuta a comprendere la crescita del tumore primario e il modello di metastasi.

Generazione di un modello murino PDOX del cancro del colon-retto: studio della progressione del cancro del colon-retto in un modello murino

Questo video descrive la tecnica di generazione di organoidi CRC trasdotti da particelle lentivirali GFP per consentire l'imaging fluorescente. Questi organoidi marcati con GFP, quando inseriti in modelli animali, aiutano a studiare l'invasione e le metastasi tumorali.

Etichettatura delle cellule organoidi di organoidi CRC: un metodo per generare cellule organoidi di cancro colorettale trasdotte da lentivirus GFP

Questo video descrive il protocollo per stabilire un modello murino di metastasi spontanee di xenotrapianti derivati da pazienti con cancro del colon-retto o PDX. Questi modelli di xenotrapianto imitano parzialmente le caratteristiche dei carcinomi umani e comprendono gli aspetti critici delle neoplasie maligne umane, tra cui l'invasione e le metastasi.

Modelli murini di metastasi spontanee: una piattaforma per studiare il potenziale metastatico delle cellule di cancro colorettale iniettate ortotopicamente

Il video descrive la tecnica per l'iniezione intracecale di cellule cancerose per sviluppare un modello murino ortotopico con tumori altamente uniformi. Pertanto, il modello murino ortotopico consente una simulazione realistica delle metastasi, fornendo uno strumento prezioso per studiare i cambiamenti fenotipici durante la crescita e la disseminazione del tumore.

Iniezione intracecale di cellule tumorali: una tecnica per fornire cellule tumorali per stabilire un modello murino di cancro colorettale ortotopico

L'obiettivo di questo protocollo è applicare la risonanza magnetica con contrasto dinamico (DCE-MRI) per xenotrapianti di tumore pancreatico ortotopico nei topi. La DCE-MRI è un metodo non invasivo per analizzare la microvascolarizzazione in un tessuto bersaglio ed è utile per valutare la risposta vascolare in un tumore a seguito di una nuova terapia.

Contrasto dinamico migliorato risonanza magnetica di un modello ortotopico cancro del pancreas mouse

La capacità dei cloni metastatici di colonizzare siti distanti dipende dalla loro capacità di proliferazione e/o dalla loro capacità di sopravvivere nel microambiente ospite senza una proliferazione significativa. Qui, presentiamo un modello animale che consente la visualizzazione quantitativa di entrambi i tipi di colonizzazione del fegato da parte di cloni metastatici.

Avanzato modello animale di colorettale Metastasi nel fegato: tecniche di imaging e di proprietà di metastatici cloni

Descriviamo la creazione di tumori colorettali ortotopici attraverso l'iniezione di cellule tumorali o organoidi nel cecum dei topi e il successivo isolamento di cellule tumorali circolanti (CTC) da questo modello.

Isolamento delle cellule tumorali circolanti in un modello di topo ortotopico del tumore del colon-retto

Viene presentato un protocollo per la creazione di un modello di topi geneticamente modificato del cancro del colon-retto mediante infezione adenocarica segmentale e la sua sorveglianza mediante colonscopia ad alta risoluzione.

Un modello di mouse geneticamente modificato del cancro colorettale sporadico

Questo protocollo descrive la generazione di modelli di xenotrapianto ortotopico derivati dal paziente infondendo inmodo vesicalmente cellule carcinoma a cellule urotemaliali o cellule di cancro colorettale intra-rettale in diabete/grave non obesi immunodeficienza (NOD/SCID) per la crescita primaria del tumore e metastasi spontanee sotto l'influenza delle cellule stromali del linfonodo, che imitano la progressione delle malattie metastatiche umane.

Modelli di Xenotrapianto ortotopico derivati dal paziente per carcinoma a cellule uroteliali umane e crescita del tumore del tumore colorettale e metastasi spontanea

Questo protocollo descrive l'impianto ortotopico di cellule tumorali derivate dal paziente nella parete cieca di topi immunodeficienti. Il modello ricapitola la malattia metastatica del carcinoma colorettale avanzato e consente la valutazione di nuovi farmaci terapeutici in uno scenario clinicamente rilevante di metastasi polmonari ed epatiche.

L'impianto ortotopico di cellule tumorali derivate dal paziente nei topi ricapitola il cancro colorettale avanzato

Questo studio si concentra sull'induzione sottocutanea in vivo di cellule tumorali colorettali luminescenti in un modello murino e sulla successiva misurazione della luminescenza utilizzando un sistema di imaging. La procedura mira a stabilire un modello di crescita tumorale riproducibile per il monitoraggio in tempo reale e la valutazione terapeutica.

Iniezione sottocutanea di cellule tumorali del colon-retto umano in topi nudi atimici per valutare l'efficacia antitumorale

Impara a stabilire un modello ortotopico di cancro colorettale nel topo per studiare la progressione tumorale e testare nuove terapie. Questo metodo offre risultati più rilevanti rispetto ai modelli sottocutanei tradizionali.

Topo Modello ortotopico di cancro colorettale

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