Name: Edificio de la jerarquía como indicador de Salud y Bienestar en ratones de laboratorio (Video) | JoVE Journal
Uploaded: 2013-12-24T14:15:00.000+00:00
Duration: 6 min 12 s
Description: Aprende a evaluar el bienestar en ratones de laboratorio mediante el análisis de la construcción de nidos. Este método utiliza una escala estandarizada para detectar dolor postoperatorio y mejorar la salud animal.

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La investigación presentada aquí fue apoyada por la Escuela de Medicina Veterinaria Charles River y Tufts Cummings. Los autores están muy agradecidos a Megan Rock y Miranda Gallo por su trabajo con las pruebas de tinte.

Ambos protocolos siguientes son más precisos cuando los animales están alojados en jaulas de fondo sólido con material de cama.
1. Puntuación de nido6
<ol>
	<li>Pesa entre 8 y 10 g de material de anidación.
	<ol>
		<li>Se recomienda el material de anidación de papel arrugado (como Enviro-Dri) como sustrato para el marcado de nidos, ya que la mayoría de los ratones construyen mejores nidos con este sustrato6, pero se pueden usar otros materiales9.</li>
	</ol>
	</li>
	<li>Identifique la(s) jaula(s) que se va a puntuar.
	<ol>
		<li>Los animales deben ser alojados en jaulas de fondo sólido para un rendimiento óptimo en esta prueba.</li>
	</ol>
	</li>
	<li>Coloque el material de anidación de papel en la jaula.
	<ol>
		<li>El material de anidación se puede proporcionar en cualquier momento conveniente para el investigador o el personal de cuidado de animales</li>
	</ol>
	</li>
	<li>Regrese al día siguiente a las 7-9 horas después de que se enciendan las luces para puntuar. 
	Nota: Este es el mejor momento para puntuar los nidos, ya que los ratones deben estar inactivos10, los nidos deben tener la puntuación más alta11 y las habitaciones de los animales son tranquilas. Si los animales están activos, pueden pisotear el nido, alterando la puntuación. La variación en la construcción del nido ocurrirá dependiendo de la cantidad de tiempo que se les dé a los ratones para construir, por lo que es importante anotar el mismo día y hora después de que se proporcione el nuevo material.</li>
	<li>Utilice el protocolo de puntuación de nidos de Hess et al.6 para anotar cada nido (Figura 1).
	<ol>
		<li>Primero determine si el material ha sido manipulado por los ratones. Esto incluye ser procesado o movido alrededor de la jaula.
		<ol>
			<li>Si el material está intacto, todo el nido recibe una puntuación de 0;</li>
		</ol>
		</li>
		<li>A continuación, determine si la mayor parte del material de anidación se ha recogido en un sitio de anidación central.
		<ol>
			<li>Sin sitio de anidación: Si no está claro dónde se encuentra el sitio de anidación, la jaula recibe una puntuación de 1 (es decir, el material está esparcido por toda la jaula);</li>
			<li>Sitio de anidación: Si hay un sitio de anidación centralizado, considere el nido como si fuera un cuadrado. A cada uno de los 4 lados del cuadrado se le puede dar una puntuación separada de 2 a 5. A continuación, se promedian las 4 puntuaciones para la puntuación del nido de jaula.
			<ol>
				<li>2 = el nido es plano sin paredes poco profundas;</li>
				<li>3 = una forma ligeramente ahuecada en la que la pared del nido es inferior a la mitad de la altura de una cúpula que cubriría a un ratón;</li>
				<li>4 = una pared que tiene 1/2 de la altura de una cúpula;</li>
				<li>5 = paredes que son más altas que 1/2 de la altura de una cúpula, que pueden o no encerrar completamente el nido.</li>
			</ol>
			</li>
		</ol>
		</li>
	</ol>
	</li>
</ol>
Nota: Alternativamente, la puntuación puede ocurrir 3-4 días después de la provisión de nuevo material, cuando a menudo se alcanzan las puntuaciones máximas (datos no publicados).
2. Hora de integrarse en Nest Test12
Nota: Esta prueba será más precisa si el animal tiene un material de anidación de papel de fibra larga y ha construido un nido con una puntuación de al menos 2 (ver arriba).
<ol start="6">
	<li>Tome un cuadrado de 2 pulgadas de material de anidación de algodón (como un Nestlet) y córtelo en cuartos, lo que da como resultado 4-1 en cuadrados de prueba.</li>
	<li>Pruebe con animales dentro de las primeras 3 horas después de que se enciendan las luces del vivero.
	<ol>
		<li>Esta ventana de prueba aprovecha el aumento de los comportamientos de construcción de nidos antes de la inactividad diurna11.</li>
	</ol>
	</li>
	<li>Abra la tapa de la jaula y coloque 1 cuadrado de prueba en el lado opuesto de la jaula desde el sitio principal del nido.
	<ol>
		<li>Coloque el cuadrado de prueba donde se pueda ver desde fuera de la jaula.</li>
		<li>El material de prueba debe colocarse en el mismo lugar cada vez que se realice la prueba.</li>
	</ol>
	</li>
	<li>Regrese a la jaula después de 10 minutos.</li>
</ol>
Nota: Si falta la escuadra de prueba de su ubicación original, la jaula es TINT positiva. Si la escuadra de prueba permanece en la ubicación original, la jaula es negativa para TINT y es posible que se necesiten observaciones adicionales para determinar si los ratones requieren atención veterinaria.

<ol><li>Baumans, V. <a target="_blank" href="http://www.ncbi.nlm.nih.gov/pubmed?term=((Science-based+assessment+of+animal+welfare%3A+laboratory+animals%5BTitle%5D)+AND+%22Revue+Scientifique+Et+Technique-Office+International+Des+Epizooties%22%5BJournal%5D)">Science-based assessment of animal welfare: laboratory animals.</a> Revue Scientifique Et Technique-Office International Des Epizooties. 24, 503-513 (2005).</li>
<li>Langford, D. J., et al. <a target="_blank" href="http://www.ncbi.nlm.nih.gov/pubmed?term=((Coding+of+facial+expressions+of+pain+in+the+laboratory+mouse%5BTitle%5D)+AND+%22Nat.+Methods%22%5BJournal%5D)">Coding of facial expressions of pain in the laboratory mouse.</a> Nat. Methods. 7, 447-452 (2010).</li>
<li>Aubert, A. <a target="_blank" href="http://www.ncbi.nlm.nih.gov/pubmed?term=((Sickness+and+behaviour+in+animals%3A+a+motivational+perspective%5BTitle%5D)+AND+%22Neurosci.+Biobehav.+Rev%22%5BJournal%5D)">Sickness and behaviour in animals: a motivational perspective.</a> Neurosci. Biobehav. Rev. 23, 1029-1036 (1999).</li>
<li>Latham, N., Mason, G. <a target="_blank" href="http://www.ncbi.nlm.nih.gov/pubmed?term=((From+house+mouse+to+mouse+house%3A+The+behavioural+biology+of+free-living+Mus+musculus+and+its+implications+in+the+laboratory%5BTitle%5D)+AND+%22Appl.+Anim.+Behav.+Sci%22%5BJournal%5D)">From house mouse to mouse house: The behavioural biology of free-living Mus musculus and its implications in the laboratory.</a> Appl. Anim. Behav. Sci. 86, 261-289 (2004).</li>
<li>Brown, R. Z. <a target="_blank" href="http://www.ncbi.nlm.nih.gov/pubmed?term=((Social+behavior%2C+reproduction%2C+and+population+changes+in+the+house+mouse+%28Mus+musculus+L%29%5BTitle%5D)+AND+%22Ecol.+Monogr%22%5BJournal%5D)">Social behavior, reproduction, and population changes in the house mouse (Mus musculus L).</a> Ecol. Monogr. 23, 217-240 (1953).</li>
<li>Hess, S. E., et al. <a target="_blank" href="http://www.ncbi.nlm.nih.gov/pubmed?term=((Home+improvement%3A+C57BL%2F6J+mice+given+more+naturalistic+nesting+materials+make+better+nests%5BTitle%5D)+AND+%22J.+Am.+Assoc.+Lab.+Anim.+Sci%22%5BJournal%5D)">Home improvement: C57BL/6J mice given more naturalistic nesting materials make better nests.</a> J. Am. Assoc. Lab. Anim. Sci. 47, 25-31 (2008).</li>
<li>Gaskill, B. N., et al. <a target="_blank" href="http://www.ncbi.nlm.nih.gov/pubmed?term=((Heat+or+insulation%3A+Behavioral+titration+of+mouse+preference+for+warmth+or+access+to+a+nest%5BTitle%5D)+AND+%22PLoS+ONE%22%5BJournal%5D)">Heat or insulation: Behavioral titration of mouse preference for warmth or access to a nest.</a> PLoS ONE. 7, (2012).</li>
<li>Roper, T. J. <a target="_blank" href="http://www.ncbi.nlm.nih.gov/pubmed?term=((Nesting+material+as+a+reinforcer+for+female+mice%5BTitle%5D)+AND+%22Anim.+Behav%22%5BJournal%5D)">Nesting material as a reinforcer for female mice.</a> Anim. Behav. 21, 733-740 (1973).</li>
<li>Gaskill, B. N., Garner, J. P., Pritchett-Corning, K. R. <a target="_blank" href="http://www.ncbi.nlm.nih.gov/pubmed?term=((Energy+reallocation+to+breeding+performance+through+improved+behavioral+thermoregulation%5BTitle%5D)+AND+%22J.+Am.+Assoc.+Lab.+Anim.+Sci%22%5BJournal%5D)">Energy reallocation to breeding performance through improved behavioral thermoregulation.</a> J. Am. Assoc. Lab. Anim. Sci. 50, 771 (2011).</li>
<li>Gaskill, B. N., et al. <a target="_blank" href="http://www.ncbi.nlm.nih.gov/pubmed?term=((Impact+of+nesting+material+on+mouse+body+temperature+and+physiology%5BTitle%5D)+AND+%22Physiol.+Behav%22%5BJournal%5D)">Impact of nesting material on mouse body temperature and physiology.</a> Physiol. Behav. 110, 87-95 (2013).</li>
<li>Jirkof, P., et al. <a target="_blank" href="http://www.ncbi.nlm.nih.gov/pubmed?term=((Assessment+of+postsurgical+distress+and+pain+in+laboratory+mice+by+nest+complexity+scoring%5BTitle%5D)+AND+%22Lab+Anim%22%5BJournal%5D)">Assessment of postsurgical distress and pain in laboratory mice by nest complexity scoring.</a> Lab Anim. , (2013).</li>
<li>Rock, M. L., et al. <a target="_blank" href="http://www.ncbi.nlm.nih.gov/pubmed?term=((Time-to-Integrate+to+Nest+Test+as+an+indicator+of+wellbeing+in+laboratory+mice%5BTitle%5D)+AND+%22J.+Am.+Assoc.+Lab.+Anim.+Sci%22%5BJournal%5D)">Time-to-Integrate to Nest Test as an indicator of wellbeing in laboratory mice.</a> J. Am. Assoc. Lab. Anim. Sci. 53, 1-5 (2014).</li>
<li>Gaskill, B. N., Lucas, J. R., Pajor, E. A., Garner, J. P. <a target="_blank" href="http://www.ncbi.nlm.nih.gov/pubmed?term=((Working+with+what+you%27ve+got%3A+Changes+in+thermal+preference+and+behavior+in+mice+with+or+without+nesting+material%5BTitle%5D)+AND+%22J.+Therm.+Biol%22%5BJournal%5D)">Working with what you've got: Changes in thermal preference and behavior in mice with or without nesting material.</a> J. Therm. Biol. 36, 1193-1199 (2011).</li>
<li>Aubert, A., Goodall, G., Dantzer, R., Gheusi, G. <a target="_blank" href="http://www.ncbi.nlm.nih.gov/pubmed?term=((Differential+effects+of+lipopolysaccharide+on+pup+retrieving+and+nest+building+in+lactating+mice%5BTitle%5D)+AND+%22Brain+Behav.+Immun%22%5BJournal%5D)">Differential effects of lipopolysaccharide on pup retrieving and nest building in lactating mice.</a> Brain Behav. Immun. 11, 107-118 (1997).</li>
<li>Arras, M., Rettich, A., Cinelli, P., Kasermann, H. P., Burki, K. <a target="_blank" href="http://www.ncbi.nlm.nih.gov/pubmed?term=((Assessment+of+post-laparotomy+pain+in+laboratory+mice+by+telemetric+recording+of+heart+rate+and+heart+rate+variability%5BTitle%5D)+AND+%22BMC+Vet.+Res%22%5BJournal%5D)">Assessment of post-laparotomy pain in laboratory mice by telemetric recording of heart rate and heart rate variability.</a> BMC Vet. Res. 3, (2007).</li>
<li>Leach, M. C., et al. <a target="_blank" href="http://www.ncbi.nlm.nih.gov/pubmed?term=((Behavioural+effects+of+ovariohysterectomy+and+oral+administration+of+meloxicam+in+laboratory+housed+rabbits%5BTitle%5D)+AND+%22Res.+Vet.+Sci%22%5BJournal%5D)">Behavioural effects of ovariohysterectomy and oral administration of meloxicam in laboratory housed rabbits.</a> Res. Vet. Sci. 87, 336-347 (2009).</li>
<li>Matsumiya, L. C., et al. <a target="_blank" href="http://www.ncbi.nlm.nih.gov/pubmed?term=((Using+the+mouse+grimace+scale+to+reevaluate+the+efficacy+of+postoperative+analgesics+in+laboratory+mice%5BTitle%5D)+AND+%22J.+Am.+Assoc.+Lab.+Anim.+Sci%22%5BJournal%5D)">Using the mouse grimace scale to reevaluate the efficacy of postoperative analgesics in laboratory mice.</a> J. Am. Assoc. Lab. Anim. Sci. 51, 42-49 (2012).</li>
<li>Bult, A., Lynch, C. B. <a target="_blank" href="http://www.ncbi.nlm.nih.gov/pubmed?term=((Nesting+and+fitness%3A+Lifetime+reproductive+success+in+house+mice+bidirectionally+selected+for+thermoregulatory+nest-building+behavior%5BTitle%5D)+AND+%22Behav.+Genet%22%5BJournal%5D)">Nesting and fitness: Lifetime reproductive success in house mice bidirectionally selected for thermoregulatory nest-building behavior.</a> Behav. Genet. 27, 231-240 (1997).</li>
<li>Berry, R. J. <a target="_blank" href="http://www.ncbi.nlm.nih.gov/pubmed?term=((The+natural+history+of+the+house+mouse%5BTitle%5D)+AND+%22Field+Stud%22%5BJournal%5D)">The natural history of the house mouse.</a> Field Stud. 3, 219-262 (1970).</li>
<li>Gaskill, B. N., Winnicker, C., Garner, J. P., Pritchett-Corning, K. R. <a target="_blank" href="http://www.ncbi.nlm.nih.gov/pubmed?term=((The+naked+truth%3A+breeding+performance+in+outbred+and+inbred+strains+of+nude+mice+with+and+without+nesting+material%5BTitle%5D)+AND+%22Appl.+Anim.+Behav.+Sci%22%5BJournal%5D)">The naked truth: breeding performance in outbred and inbred strains of nude mice with and without nesting material.</a> Appl. Anim. Behav. Sci. 143, 110-116 (2013).</li>
<li>Lee, C. T., Wong, P. T. P. <a target="_blank" href="http://www.ncbi.nlm.nih.gov/pubmed?term=((Temperature+effect+and+strain+differences+in+the+nest-building+behavior+of+inbred+mice%5BTitle%5D)+AND+%22Psychon.+Sci%22%5BJournal%5D)">Temperature effect and strain differences in the nest-building behavior of inbred mice.</a> Psychon. Sci. 20, 9 (1970).</li>
<li>Lee, C. T. <a target="_blank" href="http://www.ncbi.nlm.nih.gov/pubmed?term=((Development+of+nest-building+behavior+in+inbred+mice%5BTitle%5D)+AND+%22J.+Gen.+Psychol%22%5BJournal%5D)">Development of nest-building behavior in inbred mice.</a> J. Gen. Psychol. 87, 13 (1972).</li>
<li>Van Oortmerssen, G. A. <a target="_blank" href="http://www.ncbi.nlm.nih.gov/pubmed?term=((Biological+significance+genetics+and+evolutionary+origin+of+variability+in+beahvior+within+and+between+inbred+strains+of+mice+Mus+musculus+a+behavior+genetic+study%5BTitle%5D)+AND+%22Behaviour%22%5BJournal%5D)">Biological significance genetics and evolutionary origin of variability in beahvior within and between inbred strains of mice Mus musculus a behavior genetic study.</a> Behaviour. 38, 1-92 (1971).</li>
<li>Schneider, J. E., Lynch, C. B. <a target="_blank" href="http://www.ncbi.nlm.nih.gov/pubmed?term=((Investigation+of+a+common+physiological+mechanism+underlying+progesterone-induced+and+maternal+nesting+in+mice%2C+Mus+musculus%5BTitle%5D)+AND+%22J.+Comp.+Psychol%22%5BJournal%5D)">Investigation of a common physiological mechanism underlying progesterone-induced and maternal nesting in mice, Mus musculus.</a> J. Comp. Psychol. 98, 165-176 (1984).</li>
<li>Lisk, R. D., Pretlow, R. A., Friedman, S. M. <a target="_blank" href="http://www.ncbi.nlm.nih.gov/pubmed?term=((Hormonal+stimulation+necessary+for+elicitation+of+maternal+nest-building+in+mouse+%28Mus+musculus%29%5BTitle%5D)+AND+%22Anim.+Behav%22%5BJournal%5D)">Hormonal stimulation necessary for elicitation of maternal nest-building in mouse (Mus musculus).</a> Anim. Behav. 17, 730-737 (1969).</li>
</ol>

Brianna N. Gaskill y Kathleen R. Pritchett-Corning son empleadas de Charles River Laboratories que crían la cepa de ratón utilizada en este artículo.

Con base en estos resultados, la construcción del nido se altera según el grado de estrés térmico, la cantidad de agresión presente dentro de la jaula, cuando los animales experimentan un malestar general y el comportamiento de recolección no se observa en ratones posquirúrgicos y potencialmente dolorosos. Dado que todos y cada uno de estos factores reducirán el bienestar de un ratón, creemos que la construcción de nidos se puede utilizar para identificar jaulas o animales donde se deben realizar intervenciones para mejorar su bienestar general. Creemos que la puntuación de nidos puede ser un método mejor utilizado con fines científicos porque la escala es más refinada y puede detectar diferencias más pequeñas que el binario TINT. Sin embargo, creemos que el TINT es una herramienta más práctica que se aplica mejor durante la cría diaria o la identificación postquirúrgica de animales dolorosos.
A diferencia de las especies depredadoras sociales, donde las muestras de enfermedades o lesiones pueden ser beneficiosas, mostrar señales de debilidad en las especies de presa puede ser la diferencia entre la supervivencia o la muerte. Se ha observado que los conejos, por ejemplo, responden al dolor o la angustia permaneciendo inmóviles, especialmente en presencia de un humano, lo que hace que los indicadores conductuales de angustia parezcan inútiles16. Los comportamientos de dolor continuos en ratones también son difíciles de identificar y usar para cuantificar el dolor17. Esto es especialmente difícil en especies de laboratorio nocturnas donde, a simple vista, los ratones angustiados e inactivos pueden confundirse fácilmente con los dormidos.
Los recursos, como los alimentos o los materiales que permiten la construcción de nidos, están fuertemente ligados a la supervivencia y la aptitud de los ratones salvajes5,18,19. En los estudios, el material de anidación es un recurso que los ratones de laboratorio están fuertemente motivados para obtener7,8. Se ha demostrado que Enviro-Dri es un enriquecimiento etológicamente relevante para ratones que les permite aliviar el estrés térmico mediante la construcción de nidos más aislantes7,10,13. La larga longitud de la fibra, que requiere poco o ningún procesamiento, permite que incluso los constructores de nidos pobres construyan mejores nidos6,7. Este material también es adecuado para ratones desnudos20, que a menudo son susceptibles a lesiones oculares. Si bien Enviro-Dri es superior para la construcción de nidos, otros materiales (es decir, Nestlets) funcionan mejor para el TINT. La presencia o ausencia del cuadrado de prueba del área designada es menos subjetiva que intentar determinar si se eliminó una parte de las tiras Enviro-Dri.
Tanto la puntuación del nido como el TINT se pueden utilizar fácilmente en animales alojados individualmente, sin embargo, pueden surgir problemas si 1 animal del grupo puede estar experimentando dolor o angustia. Los datos presentados en este manuscrito ilustran que el estrés térmico y la agresión de la jaula se pueden identificar en ratones alojados en grupos. Actualmente se están investigando más trabajos que analizan la cohesión social y las interacciones entre animales sanos y no saludables. Por lo tanto, advertimos utilizar estos métodos en animales alojados en grupo para detectar enfermedades o dolor en un subconjunto del grupo.
La variación en la construcción y recolección de material entre tipos de ratones de laboratorio está bien documentada7,21-23 y debe considerarse antes de usar esta técnica para todos los tipos de ratones. Específicamente, los ratones C3H no recolectan ni construyen nidos tan complejos como otras cepas endogámicas21,22. Por lo tanto, se deben observar la conformación normal del nido y los resultados de TINT en ratones no manipulados antes de utilizar esta técnica en cualquier cepa o stock. Es posible que diferentes tipos de jaulas puedan influir en el resultado de la construcción. Por ejemplo, el aumento de la pérdida de calor por convección experimentada en jaulas ventiladas individualmente puede aumentar las puntuaciones generales del nido debido al estrés térmico adicional.
La utilidad del examen del comportamiento de anidación solo ha comenzado a explorarse. La literatura indica que los nidos cambian debido al estado hormonal de la madre24,25 y, por lo tanto, también podría ser una herramienta para identificar a las hembras periparturientas sin molestarlas. Aunque aún no se ha probado directamente, los investigadores que estudian modelos de enfermedades humanas también podrían usar la evaluación del comportamiento de anidación como un punto final humano o para identificar el inicio de la enfermedad, aliviando en última instancia el sufrimiento general. La alteración en esta secuencia de comportamiento esencial y compleja también podría ser una tarea más válida, orientada al ratón, para modelos de trastornos de salud mental o incluso pruebas de drogas.

La medición del bienestar animal es una evaluación difícil y a menudo subjetiva. Cuando se utilizan animales con fines científicos, existe la obligación de proporcionar el mejor cuidado posible y minimizar las molestias1. Se necesitan métodos objetivos específicos de cada especie para medir el bienestar general con fines científicos y ganaderos. Los métodos actuales de evaluación del bienestar en ratones de laboratorio consumen mucho tiempo, requieren equipos costosos o deben analizarse posteriormente para determinar si se ha producido una alteración2-3. Estas técnicas son útiles en un entorno científico, pero difíciles de incorporar en la cría diaria. Un método simple orientado a ratones que pueda identificar rápida y fácilmente a los ratones con dolor o angustia sería un paso hacia la identificación inmediata y el alivio de esos factores estresantes.
Los nidos son utilizados por los ratones salvajes para protegerse de los depredadores, retirarse de las duras condiciones ambientales y proteger a las crías4. Por lo tanto, los comportamientos asociados con la construcción de nidos están altamente relacionados con la supervivencia de los ratones salvajes5. Los ratones de laboratorio, a pesar de haber sido retirados de las condiciones silvestres durante muchas generaciones, están muy motivados para construir un nido cuando se les proporcionan los materiales adecuados. Cualquier cambio en estos comportamientos altamente motivados, o en el nido en sí, debe indicar una alteración sustancial en el medio ambiente o en los propios animales.
El objetivo de este método es explotar los comportamientos de anidación altamente motivados en el ratón de laboratorio para identificar rápidamente el dolor, la enfermedad u otros factores estresantes que pueden afectar o reducir el bienestar general del animal. Esta técnica de evaluación binaria del lado de la jaula es ventajosa sobre otros métodos existentes porque se necesita poco entrenamiento, los materiales de prueba se encuentran en la colonia de ratones promedio y la prueba se puede completar con poca o ninguna manipulación de los animales. Además, el suministro frecuente de material de anidación fresco o diferente puede proporcionar una interacción positiva entre los ratones y los cuidadores, ya que se ha descubierto que el material de anidación es gratificante para los ratones.

<table><tbody><tr><td>Enviro-Dri</td><td>Shepherd Papeles especiales</td><td></td><td>Material de anidación de papel arrugado </td></tr><tr><td>Nestlet</td><td>Ancare</td><td></td><td>Material de anidación de algodón comprimido</td></tr></tbody></table>

edificio de la jerarquía como indicador de salud y bienestar en ratones de laboratorio

Nest Building as an Indicator of Health and Welfare in Laboratory Mice

La minimización y el alivio del sufrimiento tiene implicaciones morales y científicas. Con el fin de mitigar esta experiencia negativa, uno debe ser capaz de identificar cuándo un animal está realmente en peligro. El dolor, la enfermedad o la angustia no se pueden manejar si no se reconocen. La evaluación del dolor o la enfermedad suele implicar la medición de indicadores fisiológicos y conductuales que son invasivos o no son adecuados para la evaluación a gran escala. La observación del comportamiento de anidación se muestra prometedora como base de una herramienta de evaluación apropiada para la especie en la jaula para reconocer la angustia en ratones. Aquí demostramos la utilidad del comportamiento de construcción de nidos en ratones de laboratorio como un indicador etológicamente relevante del bienestar. Los métodos presentados se pueden utilizar con éxito para identificar factores de estrés térmico, jaulas agresivas, enfermedades y dolor. La observación del comportamiento de construcción de nidos en colonias de ratones proporciona un refinamiento a la evaluación de la salud y el bienestar en el día a día.

Temperatura:
Los nidos construidos por grupos de 3 ratones C57BL/6 se puntuaron en jaulas mantenidas a tres temperaturas ambientales diferentes (20, 25 o 30 °C; Figura 213) tras 24 horas. A medida que aumenta la temperatura, la puntuación del nido disminuye. Las paredes del nido se vuelven más bajas y los nidos se hacen más abiertos, lo que permite una mayor pérdida de calor.
Agregresión:
Grupos de ratones macho con un alto nivel de interacciones agresivas que resultan en heridas pueden identificarse por la forma del nido. En un experimento de 5 semanas, se encontró que el puntaje del nido correlacionaba negativamente con el número promedio de ratones macho C57BL/6 heridos en una jaula (F1,26 = 13.5; P=0.0011; Figura 3). La subcepa específica de ratones C57BL/6 no explicó significativamente los datos de heridas (F2,26 = 2.69; P = 0.086). Las jaulas con nidos de mayor puntuación tuvieron menos ratones heridos que aquellas con nidos de menor puntuación, independientemente de la subcepa.
Enfermedad:
Se ha encontrado que los ratones que experimentan un malestar general realizan poca o ninguna construcción de nidos cuando se les obliga a construir uno14.
Dolor:
Se ha observado que la conformación del nido se altera tras una intervención quirúrgica dolorosa11,15. El número de animales con un aumento negativo del TINT aumenta aproximadamente un 60 % después de una cirugía dolorosa12, pero los ratones regresaron a niveles basales positivos de TINT tres días después de la operación (Figura 4).
<img alt="Diagrama de clasificación de cúpulas de toba; sección transversal de formación geológica etiquetada desde plana hasta cúpula completa." fo:content-width="6in" fo:src="/files/ftp_upload/51012/51012fig1highres.jpg" src="/files/ftp_upload/51012/51012fig1.jpg" width="500px" data-altupdatedat="1787630408000" data-alt="Figure 1"> 
Figura 1. Diagrama de puntuación de nidos. Un nido, con cavidad interna, que muestra diferentes alturas de paredes para la puntuación6. La figura se reproduce con autorización del Journal of the American Association of Laboratory Animal Science. <a href="https://www.jove.com/files/ftp_upload/51012/51012fig1highres.jpg" target="_blank">Haga clic aquí para ver la imagen ampliada</a>.
<img alt="Gráfico de barras que compara las puntuaciones del nido a 20°C, 25°C y 30°C; temperatura ambiente versus puntuación." fo:content-width="6in" fo:src="/files/ftp_upload/51012/51012fig2highres.jpg" src="/files/ftp_upload/51012/51012fig2.jpg" width="500px" data-altupdatedat="1787630408000" data-alt="Figure 2"> 
Figura 2. Efecto de la temperatura sobre la puntuación del nido. Puntuación media del nido de ratones confinados a una temperatura ambiente de 20, 25 o 30 °C13. La línea diagonal indica un contraste lineal significativo. La figura se reproduce con permiso de Elsevier. <a href="https://www.jove.com/files/ftp_upload/51012/51012fig2highres.jpg" target="_blank">Haga clic aquí para ver la imagen en tamaño mayor</a>.
<img alt="Gráfico de dispersión del promedio de ratones heridos frente al puntaje del nido con línea de regresión; resultados del estudio conductual." fo:content-width="6in" fo:src="/files/ftp_upload/51012/51012fig3highres.jpg" src="/files/ftp_upload/51012/51012fig3.jpg" width="500px" data-altupdatedat="1787630408000" data-alt="Figure 3"> 
Figura 3. El efecto de la agresión sobre los puntajes del nido. Este gráfico muestra la correlación entre el puntaje promedio del nido de una jaula con 5 ratones macho y el número de esos machos que presentaron heridas. Esto se evaluó en 3 substrains diferentes de ratones C57BL6. <a href="https://www.jove.com/files/ftp_upload/51012/51012fig3highres.jpg" target="_blank">Haga clic aquí para ver la imagen en tamaño mayor</a>.
<img alt="Gráfico de análisis de probabilidad que muestra el TINT (%) tras la cirugía de lesión carotídea a lo largo de los días, datos estadísticos." fo:content-width="6in" fo:src="/files/ftp_upload/51012/51012fig4highres.jpg" src="/files/ftp_upload/51012/51012fig4.jpg" width="500px" data-altupdatedat="1787630408000" data-alt="Figure 4"> 
Figura 4. El efecto del dolor sobre el TINT. Se representan la media y el error estándar (SE) de un TINT negativo antes y después de dos cirugías12. La figura se reproduce con autorización del Journal of the American Association of Laboratory Animal Science. <a href="https://www.jove.com/files/ftp_upload/51012/51012fig4highres.jpg" target="_blank">Haga clic aquí para ver la imagen en tamaño mayor</a>.

Demostramos la utilidad del comportamiento de construcción de nidos en ratones de laboratorio como indicador de bienestar. El marcado de nidos es una técnica sensible que se ve alterada por la temperatura, la enfermedad y la agresión. El tiempo de integración en la prueba del nido (TINT) es una evaluación simple en la jaula que puede detectar el dolor postoperatorio.

Edificio de la jerarquía como indicador de Salud y Bienestar en ratones de laboratorio

The minimization and alleviation of  suffering has moral and scientific implications. In order to mitigate this  negative experience one must be able to ...

El objetivo general del siguiente experimento es observar el efecto de un tratamiento experimental sobre el comportamiento de construcción de nidos en ratones. Esto se logra proporcionando a los ratones material para anidar, con el fin de asegurar que tengan un sustrato para exhibir dicho comportamiento. Como segundo paso, se permite a los animales interactuar con el material, lo que puede resultar en la construcción de un nido.A continuación, se puntúa el nido para evaluar su calidad y complejidad. Se obtienen resultados que muestran el efecto de diversas intervenciones basadas en la calidad y complejidad del nido. La ventaja principal de esta técnica frente a los métodos existentes, como la simple observación, es que las pruebas aprovechan comportamientos naturales altamente motivados en ratones, que se pueden observar fácilmente al costado de la jaula cuando los animales están inactivos.Aunque este método puede proporcionar información sobre aspectos básicos del comportamiento del ratón, potencialmente podría aplicarse a otros sistemas, como la evaluación del bienestar del ratón o los trastornos causados por enfermedades infecciosas o neurológicas. En general, las personas nuevas en este método tendrán dificultades porque intentar puntuar un nido sin una plantilla producirá datos variables. Para comenzar, pese de ocho a diez gramos de material para nido.Se recomienda papel arrugado para obtener los mejores resultados en la construcción del nido, pero se pueden utilizar otros materiales. A continuación, identifique las jaulas que se evaluarán en un momento conveniente. Para el investigador o el personal de cuidado animal, coloque el material de nido de papel dentro de la jaula.El material puede colocarse encima o mezclarse con el lecho para examinar un repertorio conductual más amplio. Al día siguiente, siete a nueve horas después de encender las luces, evalúe los nidos en un momento en que los ratones estarán menos activos. Utilizando las pautas de calificación de nidos, califique cada nido en una escala de cero a cinco.Primero, determine si el material ha sido manipulado por los ratones. Esto incluye si ha sido procesado o movido dentro de la jaula. Si el material no ha sido tocado, todo el nido recibe una puntuación de cero.A continuación, determine si la mayor parte del material de anidación se ha reunido en un sitio central de nido. Si no hay un sitio de nido claro y el material ha sido manipulado, la jaula recibe una puntuación de uno. Si está presente un sitio de nido centralizado, considere el nido como si fuera un cuadrado.Cada uno de los cuatro lados del cuadrado puede recibir una puntuación separada que va de dos a cinco. Las cuatro puntuaciones se promedian para obtener la puntuación del nido en la jaula. Un nido recibe una puntuación de dos cuando está plano y no tiene paredes poco profundas.Si el nido tiene una forma ligeramente cóncava donde la pared tiene menos de la mitad de la altura de una cúpula, se le asigna un tres. Se otorga una puntuación de cuatro. Cuando la pared tiene la mitad de la altura de la cúpula, las paredes que son más altas que la mitad de la altura de una cúpula, que pueden o no encerrar completamente el nido, reciben una puntuación de cinco.Alternativamente, la puntuación puede realizarse entre tres y cuatro días después de proporcionar el material nuevo. Cuando frecuentemente se alcanzan las puntuaciones máximas en el tiempo para integrarse en la prueba del nido o tint, corte un cuadrado de dos pulgadas de material de nido de algodón en cuartos. Para obtener cuatro cuadrados de prueba de una pulgada.Someta a los animales a la prueba dentro de las primeras tres horas del ciclo de luz para aprovechar el aumento de los comportamientos de construcción de nidos antes de la inactividad diurna. Cuando esté listo, abra la tapa de la jaula y coloque un cuadrado de prueba en el lado opuesto de la jaula respecto al sitio principal del nido. El material de prueba debe colocarse en el mismo lugar cada vez que se realice la prueba.Coloque el cuadrado de prueba en un lugar donde pueda verse desde el exterior de la jaula. Regrese a la jaula después de 10 minutos para hacer observaciones. Si el cuadrado de prueba falta en su ubicación original, la jaula da positivo.Si el cuadrado de prueba permanece en la ubicación original, puede ser necesario el negativo de estaño de la jaula y observaciones adicionales para determinar si los ratones requieren atención veterinaria. En este ejemplo, la construcción de nidos se evaluó en jaulas mantenidas a tres temperaturas ambientales diferentes; a medida que aumentaba la temperatura, la puntuación del nido disminuía, y la forma del nido puede identificar grupos de ratones macho con un alto nivel de agresión, lo que puede provocar heridas. En un experimento de cinco semanas, se encontró que la puntuación del nido correlacionaba negativamente con el número promedio de ratones macho C57BL/6 heridos.Estos datos muestran que un procedimiento quirúrgico doloroso puede alterar el comportamiento de construcción de nidos. El número de animales con un tono negativo aumentó aproximadamente un 60 % tras una cirugía dolorosa, aunque los ratones regresan a niveles basales positivos tres días después de la operación. Al intentar este procedimiento, es importante recordar que, aunque se ha demostrado que el método de puntuación tiene una alta fiabilidad inter e intravalorador, la variabilidad en la puntuación puede afectar sus resultados.Por lo tanto, asegúrese de entrenar y evaluar adecuadamente la variabilidad de sus puntuaciones antes de comenzar su experimento, siguiendo el procedimiento. Se pueden realizar otros métodos, como la observación directa o pruebas conductuales, para responder preguntas adicionales sobre la salud y el bienestar o las deficiencias conductuales de los ratones. Después de ver este video, debería tener una buena comprensión de cómo dividir un nido en cuadrantes, cómo puntuar un nido y cómo administrar la prueba de tiempo para integrarse al nido.

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Research

Investigación

JoVE Journal

Behavior

Comportamiento

Madrigueras, nidos y el acaparamiento son las actividades típicas de la especie que los ratones que fácilmente realizan en el laboratorio. En este artículo se describe cómo se pueden sencilla ya buen precio evaluado. Estos protocolos son extremadamente sensibles a la cepa de ratón, las lesiones cerebrales y las enfermedades. Por otra parte, constituyen el "enriquecimiento ambiental" para los ratones, e incorporan el "refinamiento" aspecto de la "3 erres" 18.

La evaluación de madriguera, la construcción del nido, y el acaparamiento en ratones

Monitoreo prolongado y exhaustivo de los ratones en un ambiente en el hogar jaula proporciona una comprensión más profunda de la conducta aberrante en modelos murinos de enfermedades cerebrales. Este artículo describe la estación del Comportamiento Integrado (InBest) como componente clave del análisis del comportamiento contemporáneo.

Comportamiento Fenotipificación de modelos murinos de enfermedades con la Estación Integrada Comportamiento (InBest)

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