Name: İnsan Prostat Kanseri klinik öncesi Ortotopik murin modeli (Video) | JoVE Journal
Uploaded: 2016-08-29T14:00:00.000+00:00
Duration: 7 min 1 s
Description: Keşfedin insan prostat kanseri için ortotopik murin ksenogreft modeli kurma yöntemini. Bu teknik, tümör gelişimi ve metastazın moleküler olaylarını incelemek için önemli bir yaklaşım sunar.

ai_agent_IP

ai_agent

maintenance

instantTrialDurationMinutes

isBiopharma

enableNewMyJoveSectionDesign

educationFeatures

seoMetaApi

ai_copilot_institution_blacklist

ai_chat_institution_blacklist

freeAccessWindow

ssoRoleCapture

scheduledMaintenanceBanner

joveLabsFeatures

disable_autoplay_for_bots

extended_trial_duration

5 minutes

playerTrialDesktop

Makalenin hazırlanmasındaki desteği ve yardımı için Dr. Roger Erickson'a teşekkür ederiz. Bu çalışma, Ulusal Sağlık Enstitüleri Ulusal Kanser Enstitüsü tarafından RO1CA160079, RO1CA138642, UO1CA184966 ve VA tarafından finanse edilen 1P1 BX001604 numaralı program projesi aracılığıyla desteklenmiştir.

hayvanları ile ilgili tüm prosedürler için protokoller gözden geçirilmiş ve bir Kurumsal Hayvan Bakım ve Kullanım Komitesi (IACUC) tarafından onaylanmış olması gerekir. bakım ve laboratuar hayvanlarının kullanımı için resmen onaylanmış prosedürleri izleyin. Intra-prostatik enjeksiyon açık karın cerrahisi gerektiren ve hayvanların uygun cerrahi aseptik teknikler bütün prosedür sırasında kullanılan belirli bir ameliyathane ile bir patojen içermeyen ortamda muhafaza edilmelidir. İmplantasyon için Hücrelerin hazırlanması 1. NOT: Araştırma ihtiyacı dayanarak, herhangi bir prostat kanseri hücre hattı kullanılabilir. Hücre çizgileri kullanılarak üreticinin talimatlarına göre kültürlenir. <ol><li> kararlı biçimde ateşböceği lusiferaz genini ifade PC3M-Luc-C6 hücre hattı için, en az temel ortam (MEM) kültür hücreleri,% 10 cenin sığır serumu (FBS), 1 x esansiyel olmayan amino asitler ile takviye edilmiş, 1 x fleomisin, D1 ve 1 mM sodyum piruvat . bir kuluçka w hücreleri korumaki, 37 ° C de% 95 hava ve% 5 CO2 bulunan nemli bir atmosferde. PC3M-Luc-C6 hücreleri UCSF çekirdek tesisinden temin edilmiştir. </li><li> tripsinizasyon ile Hasat hücreleri. Fosfat tamponlu salin (PBS) ile bir kez kültür plakaları yıkayın. Hücreler müstakil yılına kadar 37 ° C&#39;de% 95 hava ve% 5 CO2 bulunan nemli bir atmosfere sahip bir kuluçka makinesi içinde, 10 cm tabak 2 mi% 0.05 tripsin ilave edin ve 3-5 dakika inkübe edilir. <ol><li> topaklanma önlemek için, vurma veya hücrelerin ayırmak için beklerken çanak sallayarak hücreleri ajitasyon yok. tam ortam 5 ml hücreleri toplamak ve 200 x g&#39;de 5 dakika boyunca aşağı doğru döndürün. Tripsin kaldırmak için PBS ile hücre pelet yıkayın. </li></ol></li><li> tripan mavisi dışlama deneyi ile canlı hücreleri numaralandırmak. % 0.4, 10 ul (ağ / hac), tripan mavisi solüsyonu ile PBS içinde hücre süspansiyonu 10 ul karıştırın. Bir hemositometre veya sayma kamara slayt içine karışımı yerleştirin ve mikroskop altında hemen hücreleri saymak ya da bir hücre cou odası slayt okumaknter. <ol><li> 10 ul medya 2.5 x 10 5 hücre ihtiva eden bir hücre süspansiyonu hazırlanır. 10 ul bazal membran benzeri hücre dışı matris ekstresi ile bir hücre süspansiyonu karıştırılır ve buz üzerinde hücreleri yerleştirin. Hücre süspansiyonuna luciferase ekleyin (1: 200 ul; hazır 30 mg / ml konsantrasyon) farelere enjekte edilmeden önce. NOT: Bu farklı deneysel gruplar arasında hücre enjeksiyonları tutarlılığını kontrol etmek için hayvanların hemen biyo-görüntüleme sağlar. hücre canlılığı ayrıldıktan sonra hızla azalır çünkü trypsinization sonra tercihen 30 dakika içinde, mümkün olduğunca çabuk hücreleri enjekte edilir. </li></ol></li></ol> Cerrahi Alan 2. Hazırlık <ol><li> asepsi teşvik derli toplu bir dezenfekte alanda ameliyat. </li><li> Ameliyat öncesi çamaşır suyu karışımı ile sayaç / laboratuvar tezgah dezenfekte edin. NOT: alkol kullanımı nedeniyle etkisini (15 dk) almak için gerekli uzun temas süresi cesareti olduğunu. </li><li> Steril örtüler kullanınemilebilir pedler ya da havlu temizleyin ve her seansta sonra bu malzemeleri değiştirin. Kullanmadan önce tüm aletleri sterilize. Tercih edilen yöntemler, bir hareketli buharlı otoklav içinde, bir cam boncuk sterilizatör etilen oksit gazı ya da hidrojen peroksit buharı sterilizasyon vardır. </li><li> cerrahi prosedürü gerçekleştirmek için bir aseptik temizlenmiş diseksiyon mikroskobu kullanın ya da deneyimli araştırmacılar mikroskop olmadan gerçekleştirebilirsiniz. </li></ol> Tümör Hücreleri 3. implantasyonu <ol><li> erkek 6-8 haftalık bağışıklığı baskılanmış Balb / c veya NOD / SCID fareleri kullanın. Not: Bu, tümör büyümesi ve metastaz yavaş kinetik sahip olma eğilimindedir küçük hayvanlar ve daha büyük hayvanlar üzerinde çalıştırmak için daha zordur. </li><li> Hayvan Tesisin talimatlarına göre ön ameliyat ağrısı ilaç enjekte edilir. Örneğin, 0.1 mg / kg vücut ağırlığı bir dozda intra-peritonal buprenorfin kullanılabilir. </li><li> oksijen ve wa% 1-3 izofluran ile bir izofluran odasına yerleştirerek hayvanların anestezisibu hayvanların tam olarak anestezi kadar. Bu noktada kas tonusu hiçbir ayak refleks olmadığından emin olun. genel anestezi sırasında kseroftalmiden nedeniyle körlüğü önlemek için uygun veteriner oftalmik merhem yağ kullanın. Not: pentobarbital sodyum için araştırmacının tercih edilen bir yöntem, örneğin tarafından hayvanların anestezisi gram vücut ağırlığı başına, 0.05 mg intra-peritonal ya Ketamin / Ksilazin çözeltisi tatbik edilir (konsantrasyon: 17.16 mg / ml) 65 mg / kg dozda vücut ağırlığı subkutan kullanılır. Izofluran inhalasyonu anestezisi tercih edilen bir yöntemdir. göz merhemi hafifçe kornea sürtünmemelidir uygulanmalıdır. </li><li> izofluran bölme hayvan çıkarın ve hayvan devam etmeden önce, tam anestezi altında olmasını sağlamak için oksijen,% 1-2 izofluran sürekli akışı ile bir burun konisi cihazının içine koyun. <ol><li> Tıraş tarafından farelerden alınan saç çıkarın veya prosedürü başlamadan önce saç kremleri kullanın. NOT: Ameliyat sırasında steril bir ısıtma yastığı üzerinde fare yerleştirmek için tercih olacaktır. </li></ol></li><li> Bir yatar pozisyonda fare yerleştirin. povidon-iyot çözeltisi,% 70 etanol bezlerden, ardından 10 ağırlık / ağırlık ile% alt karın temizleyin. </li><li> ince forseps bir çift, 2 mm prepusyal bezi üzerinde penis kılıf üzerinde yaklaşık 1-2 cm ve göğüs kafesinin alt bölümünün yaklaşık 2-3 cm deri bir alanı kaldırın. </li><li> Ilk olarak bir bisturi ile deri yoluyla ve daha sonra bir makas (Şekil 1), kas tabakası içinden uzunluğunda bir orta hat kesimi 1cm sağlayın. </li><li> vücut boşluğunda mesane bulun. Bu kesi (Şekil 1) altında doğrudan yer alan sarı-açık kahverengi küresel bir organdır. </li><li> ince forseps kavrama bir çift mesane ve penis kılıf doğru vücut boşluğundan dışarı aşağı sonra yukarı kaldırın. Bu beyaz saclike organların çift ve açıkça farklı olan iki seminal veziküller gösterecektir. </li><li> Birliktepamuklu çubukla her el, seminal veziküller, teker teker dışa ve vücut boşluğuna çekip çıkarın ve onları ortada mesane (Şekil 2) ile karın dış yüzeye yüzüstü yatıyordu. </li><li> İki dorsal prostat lobları açıkça görülebilir şekilde pamuklu çubuklarla kullanarak, yavaşça, penis kılıf doğru mesane boynunun yakın yerleştirilmesi noktasında seminal veziküller geri yatırın. Doku hasarı (Şekil 3) önlemek için ıslak pamuk bezlerden kullanın. </li><li> şırıngada yüklemeden önce bir mikropipet ile hücre süspansiyonu çalkalayın. </li><li> Bir pamuklu çubukla pozisyonda seminal vezikül yerleştirirken, mikroskop altında dorsal prostat lob (Şekil 4) içine şırınga iğne takın. Bir bül oluşumu tespit edilene kadar yavaş yavaş hücre süspansiyonu 20 ul enjekte edilir. Bir dışarı vurma bül enjeksiyonu doğru olduğunu gösterir. </li><li> ile enjeksiyon yerinde hafifçe iğne basın retracting ikenBirkaç saniye için bir pamuklu çubukla ve tutma sızıntısını önlemek için. </li><li> Dikkatle pamuklu seminal veziküller kaldırın ve mesane ardından tek geri vücut boşluğunda birine bunları takın. Bu yordamı gerçekleştirirken &#39;twirling&#39; iç organları kaçının. </li><li> vücut boşluğuna geri organları yerleştirdikten sonra, emilmeyen 4-0 naylon cerrahi sütür ile cilt kapatılması ardından emilebilir 4-0 kromik katgüt sütür ile kesintiye uğramış bir desen ilk kas tabakası dikin. deri de tamamen insizyon kapatmak için bir araya çekti ve cerrahi kelepçeler ile kapatılabilir. NOT: Fareler de dikişler ile birlikte tavsiye edilir çizilme ve dolayısıyla yara açılması yeniden doku yapıştırıcısı kullanımı yol açabilir onların yara, ısırma bir alışkanlığı var. Görüntü hayvanlar derhal deney grupları arasındaki eşit biyolüminesans yoğunluk var olduğundan emin olmak için. </li><li> kafesleri temizlemek ve ısınma lambası veya ısı altında tutmak için hayvanların dönmekped ing. tamamen anestezi kurtarmak ve sternum yatma korumak kadar sürekli hayvanları izleyin. </li></ol> Hayvanların 4. İzleme <ol><li> kurumsal protokollere göre, deney sonuna kadar düzenli olarak hayvanların izleyin. Cerrahi metal klips kullanıyorsanız, bir iki hafta sonra kaldırın. Deney süresi belirli bir araştırma ihtiyacı bağlıdır. NOT: Bu deney, sıçan prostatı implante kanser hücrelerinin başarılı bir kuruluş incelemek için 21 gün boyunca uygulanmıştır. </li><li> Hayvan Tesisin talimatlarına göre ağrı ilaç yönetmek. Gerektiğinde, örneğin 0.1 mg / kg vücut ağırlığı bir dozda intra-peritonal buprenorfin 6 saat ve daha fazla doz uygulandıktan sonra ikinci bir doz işlem sırasında her 8-12 saat kullanılır. </li><li> Hayvan ağırlığı, gıda tüketimi, ten rengi ve dokusu, aktivite ve idrar ve dışkılama sıklığı izleyin. hayvanların immed euthanizegeçirmeden% 15 daha büyük bir vücut ağırlığı önemli bir kayıp olup olmadığını. <ol><li> Ötenazi için, bilinç kaybı ve tam uyuşurucu meydana böylece CO2 yavaş yavaş odasına girmek için izin, oda ya da kafes hacmi / dakika 10-30% değiştirmesi için bir akış hızında bir un-kalabalık kafesin içine basınçlı bir tanktan CO 2 teslim ölümünden önce. </li><li> Solunum durması sonrasında, en az bir dakika süre ile CO2 akış korumak ve ölüm fiziksel yöntemin gerçekleştirilmesi öncesinde gerçekleştirilen, böylece yeterli bir süre için bölmeye hayvanlar bırakın. </li><li> Gerçekleştirin decapitation, servikal dislokasyon veya başka herhangi bir IACUC kimyasal hayvanları euthanizing sonra fiziksel yöntemi onayladı. NOT: Önemli ölçüde azaltılmış vücut ağırlığı genellikle uyuşuk durumunu gösterir. Tümör taşıyan hayvanlar, deneyin sonuna kadar, tümör varlığı dışında sağlıklı olmalıdır. Ötenazi Ötanazi AVMA Yönergeleri ile uyumlu olmalıdır ve liste olmalıonaylanmış IACUC protokolü, d. </li></ol></li></ol> Hayvanların 5. Non-invaziv Biyo-görüntüleme <ol><li> haftalık, kanser hücrelerinin, tümör büyümesi ve herhangi bir uzak metastaz kolonizasyonunu izlemek için non-invaziv bir görüntüleme tekniği kullanılarak hayvanları izleyin. NOT: vb GFP-görüntüleme, Lusiferaz görüntüleme, X-ışınları veya 3D mikro-bilgisayarlı tomografi (UCT) gibi görüntüleme yöntemleri spesifik araştırma dayalı kullanılabilir 12-15 gerekir. </li></ol>

<ol><li>Siegel, R. L., Miller, K. D., Jemal, A. <a target="_blank" href="http://www.ncbi.nlm.nih.gov/pubmed?term=((Cancer+statistics%2C+2015%5BTitle%5D)+AND+%22CA+Cancer+J+Clin%22%5BJournal%5D)">Cancer statistics, 2015.</a> CA Cancer J Clin. 65 (1), 5-29 (2015).</li>
<li>Andrieu, C., et al. <a target="_blank" href="http://www.ncbi.nlm.nih.gov/pubmed?term=((Heat+shock+protein+27+confers+resistance+to+androgen+ablation+and+chemotherapy+in+prostate+cancer+cells+through+eIF4E%5BTitle%5D)+AND+%22Oncogene%22%5BJournal%5D)">Heat shock protein 27 confers resistance to androgen ablation and chemotherapy in prostate cancer cells through eIF4E.</a> Oncogene. 29 (13), 1883-1896 (2010).</li>
<li>Fusi, A., et al. <a target="_blank" href="http://www.ncbi.nlm.nih.gov/pubmed?term=((Treatment+options+in+hormone-refractory+metastatic+prostate+carcinoma%5BTitle%5D)+AND+%22Tumori%22%5BJournal%5D)">Treatment options in hormone-refractory metastatic prostate carcinoma.</a> Tumori. 90 (6), 535-546 (2004).</li>
<li>Hughes, C., Murphy, A., Martin, C., Sheils, O., O'Leary, J. <a target="_blank" href="http://www.ncbi.nlm.nih.gov/pubmed?term=((Molecular+pathology+of+prostate+cancer%5BTitle%5D)+AND+%22J+Clin+Pathol%22%5BJournal%5D)">Molecular pathology of prostate cancer.</a> J Clin Pathol. 58 (7), 673-684 (2005).</li>
<li>Pavese, J., Ogden, I. M., Bergan, R. C. <a target="_blank" href="http://www.ncbi.nlm.nih.gov/pubmed?term=((An+orthotopic+murine+model+of+human+prostate+cancer+metastasis%5BTitle%5D)+AND+%22J+Vis+Exp%22%5BJournal%5D)">An orthotopic murine model of human prostate cancer metastasis.</a> J Vis Exp. (79), e50873(2013).</li>
<li>Pettaway, C. A., et al. <a target="_blank" href="http://www.ncbi.nlm.nih.gov/pubmed?term=((Selection+of+highly+metastatic+variants+of+different+human+prostatic+carcinomas+using+orthotopic+implantation+in+nude+mice%5BTitle%5D)+AND+%22Clin+Cancer+Res%22%5BJournal%5D)">Selection of highly metastatic variants of different human prostatic carcinomas using orthotopic implantation in nude mice.</a> Clin Cancer Res. 2 (9), 1627-1636 (1996).</li>
<li>Rembrink, K., Romijn, J. C., van der Kwast, T. H., Rubben, H., Schroder, F. H. <a target="_blank" href="http://www.ncbi.nlm.nih.gov/pubmed?term=((Orthotopic+implantation+of+human+prostate+cancer+cell+lines%3A+a+clinically+relevant+animal+model+for+metastatic+prostate+cancer%5BTitle%5D)+AND+%22Prostate%22%5BJournal%5D)">Orthotopic implantation of human prostate cancer cell lines: a clinically relevant animal model for metastatic prostate cancer.</a> Prostate. 31 (3), 168-174 (1997).</li>
<li>Kim, S. J., et al. <a target="_blank" href="http://www.ncbi.nlm.nih.gov/pubmed?term=((Blockade+of+epidermal+growth+factor+receptor+signaling+in+tumor+cells+and+tumor-associated+endothelial+cells+for+therapy+of+androgen-independent+human+prostate+cancer+growing+in+the+bone+of+nude+mice%5BTitle%5D)+AND+%22Clin+Cancer+Res%22%5BJournal%5D)">Blockade of epidermal growth factor receptor signaling in tumor cells and tumor-associated endothelial cells for therapy of androgen-independent human prostate cancer growing in the bone of nude mice.</a> Clin Cancer Res. 9 (3), 1200-1210 (2003).</li>
<li>Kim, S. J., et al. <a target="_blank" href="http://www.ncbi.nlm.nih.gov/pubmed?term=((Targeting+platelet-derived+growth+factor+receptor+on+endothelial+cells+of+multidrug-resistant+prostate+cancer%5BTitle%5D)+AND+%22J+Natl+Cancer+Inst%22%5BJournal%5D)">Targeting platelet-derived growth factor receptor on endothelial cells of multidrug-resistant prostate cancer.</a> J Natl Cancer Inst. 98 (11), 783-793 (2006).</li>
<li>Park, S. I., et al. <a target="_blank" href="http://www.ncbi.nlm.nih.gov/pubmed?term=((Targeting+SRC+family+kinases+inhibits+growth+and+lymph+node+metastases+of+prostate+cancer+in+an+orthotopic+nude+mouse+model%5BTitle%5D)+AND+%22Cancer+Res%22%5BJournal%5D)">Targeting SRC family kinases inhibits growth and lymph node metastases of prostate cancer in an orthotopic nude mouse model.</a> Cancer Res. 68 (9), 3323-3333 (2008).</li>
<li>Zhang, J., et al. <a target="_blank" href="http://www.ncbi.nlm.nih.gov/pubmed?term=((AFAP-110+is+overexpressed+in+prostate+cancer+and+contributes+to+tumorigenic+growth+by+regulating+focal+contacts%5BTitle%5D)+AND+%22J+Clin+Invest%22%5BJournal%5D)">AFAP-110 is overexpressed in prostate cancer and contributes to tumorigenic growth by regulating focal contacts.</a> J Clin Invest. 117 (10), 2962-2973 (2007).</li>
<li>Park, S. I., Kim, S. J., McCauley, L. K., Gallick, G. E. <a target="_blank" href="http://www.ncbi.nlm.nih.gov/pubmed?term=((Pre-clinical+mouse+models+of+human+prostate+cancer+and+their+utility+in+drug+discovery%5BTitle%5D)+AND+%22Curr+Protoc+Pharmacol%22%5BJournal%5D)">Pre-clinical mouse models of human prostate cancer and their utility in drug discovery.</a> Curr Protoc Pharmacol. Chapter 14, Unit 14.15(2010).</li>
<li>Johnson, L. C., et al. <a target="_blank" href="http://www.ncbi.nlm.nih.gov/pubmed?term=((Longitudinal+live+animal+micro-CT+allows+for+quantitative+analysis+of+tumor-induced+bone+destruction%5BTitle%5D)+AND+%22Bone%22%5BJournal%5D)">Longitudinal live animal micro-CT allows for quantitative analysis of tumor-induced bone destruction.</a> Bone. 48 (1), 141-151 (2011).</li>
<li>Steinbauer, M., et al. <a target="_blank" href="http://www.ncbi.nlm.nih.gov/pubmed?term=((GFP-transfected+tumor+cells+are+useful+in+examining+early+metastasis+in+vivo%2C+but+immune+reaction+precludes+long-term+tumor+development+studies+in+immunocompetent+mice%5BTitle%5D)+AND+%22Clin+Exp+Metastasis%22%5BJournal%5D)">GFP-transfected tumor cells are useful in examining early metastasis in vivo, but immune reaction precludes long-term tumor development studies in immunocompetent mice.</a> Clin Exp Metastasis. 20 (2), 135-141 (2003).</li>
<li>Yang, M., et al. <a target="_blank" href="http://www.ncbi.nlm.nih.gov/pubmed?term=((A+fluorescent+orthotopic+bone+metastasis+model+of+human+prostate+cancer%5BTitle%5D)+AND+%22Cancer+Res%22%5BJournal%5D)">A fluorescent orthotopic bone metastasis model of human prostate cancer.</a> Cancer Res. 59 (4), 781-786 (1999).</li>
<li>Stephenson, R. A., et al. <a target="_blank" href="http://www.ncbi.nlm.nih.gov/pubmed?term=((Metastatic+model+for+human+prostate+cancer+using+orthotopic+implantation+in+nude+mice%5BTitle%5D)+AND+%22J+Natl+Cancer+Inst%22%5BJournal%5D)">Metastatic model for human prostate cancer using orthotopic implantation in nude mice.</a> J Natl Cancer Inst. 84 (12), 951-957 (1992).</li>
<li>Hoffman, R. M. <a target="_blank" href="http://www.ncbi.nlm.nih.gov/pubmed?term=((Orthotopic+metastatic+mouse+models+for+anticancer+drug+discovery+and+evaluation%3A+a+bridge+to+the+clinic%5BTitle%5D)+AND+%22Invest+New+Drugs%22%5BJournal%5D)">Orthotopic metastatic mouse models for anticancer drug discovery and evaluation: a bridge to the clinic.</a> Invest New Drugs. 17 (4), 343-359 (1999).</li>
<li>Wang, X., An, Z., Geller, J., Hoffman, R. M. <a target="_blank" href="http://www.ncbi.nlm.nih.gov/pubmed?term=((High-malignancy+orthotopic+nude+mouse+model+of+human+prostate+cancer+LNCaP%5BTitle%5D)+AND+%22Prostate%22%5BJournal%5D)">High-malignancy orthotopic nude mouse model of human prostate cancer LNCaP.</a> Prostate. 39 (3), 182-186 (1999).</li>
<li>An, Z., Wang, X., Geller, J., Moossa, A. R., Hoffman, R. M. <a target="_blank" href="http://www.ncbi.nlm.nih.gov/pubmed?term=((Surgical+orthotopic+implantation+allows+high+lung+and+lymph+node+metastatic+expression+of+human+prostate+carcinoma+cell+line+PC-3+in+nude+mice%5BTitle%5D)+AND+%22Prostate%22%5BJournal%5D)">Surgical orthotopic implantation allows high lung and lymph node metastatic expression of human prostate carcinoma cell line PC-3 in nude mice.</a> Prostate. 34 (3), 169-174 (1998).</li>
<li>Kim, S. J., et al. <a target="_blank" href="http://www.ncbi.nlm.nih.gov/pubmed?term=((Reduced+c-Met+expression+by+an+adenovirus+expressing+a+c-Met+ribozyme+inhibits+tumorigenic+growth+and+lymph+node+metastases+of+PC3-LN4+prostate+tumor+cells+in+an+orthotopic+nude+mouse+model%5BTitle%5D)+AND+%22Clin+Cancer+Res%22%5BJournal%5D)">Reduced c-Met expression by an adenovirus expressing a c-Met ribozyme inhibits tumorigenic growth and lymph node metastases of PC3-LN4 prostate tumor cells in an orthotopic nude mouse model.</a> Clin Cancer Res. 9 (14), 5161-5170 (2003).</li>
</ol>

Yazarlar hiçbir rakip mali çıkarları olduğunu beyan ederim.

Bu el yazması bir insan ortotopik prostat kanseri ksenograft fare modeli oluşturmak için ayrıntılı bir yordam açıklanır. Bu model, bağışıklık yetersizliği olan farelerde dorsal prostat loblar, insan prostat kanseri hücre kuşağı PC3M-Luc-C6 doğrudan implantasyonu ile kurulmuştur. Tümörler deney boyunca gelişmeye bırakılmıştır. Tümör büyüme deney sırasında bir non-invaziv biyoparlaklık görüntüleme sistemi ile haftalık izlendi. Ksenograft tümör modelleri oluşturulmasında en önemli faktör, tümör...

Prostat kanseri sonraki akciğer ve bronşların (% 28) 1 kanseri, ABD&#39;de erkekler arasında kanser ölümlerinin (% 9) ikinci en yaygın nedenidir. Son verilere göre, 220, 800 yeni teşhis prostat kanseri vakası ve 27 540 ölüm 2015 1 oluşacak tahmin edilmektedir. Ilerlemiş metastatik hastalık olduğunu iken, erken evre prostat kanseri beş yıllık sağkalım oranı göreceli&gt;% 99 sadece% 28 1. metastatik hastalığın tedavisi için önemli bir zorluk, özellikle prostat kanseri için sık ortaya çıktığı yerdir kemik için, diğer organlara metastaz için, bu hastalığın eğilimini altında yatan moleküler mekanizmaların anlaşılması eksikliğidir. Bu nedenle, gelişmiş metastatik hastalık 2,3 ilerleme karşı etkili tedavi rejimleri geliştirmek için bu prostat tümörlerinin moleküler makyaj incelemek için açık bir ihtiyaç vardır. Prostat sergi HIG tümörleriilerlemesi için iyi tanımlanmış bir yolun olmadan h biyolojik heterojenlik. Metastaz sıklıkla tümör invazivlik 4 önceden hiçbir göstergesi ile meydana gelir. Bu klinik heterojenite prostat kanserinin moleküler çeşitlilik atfedilir. Bu ölümcül tümörlerin moleküler makyaj anlamak bu hastalık için daha iyi teşhis ve tedavi stratejilerinin tasarımı anahtarıdır. Sonuç olarak, prostat kanseri araştırması şu anda anlaşılması ve metastaz engelleyen odaklanmıştır. Preklinik in vivo fare modelleri ilerlemiş metastatik hastalık prostat kanseri ilerlemesinde moleküler mekanizmalarını anlamak için çeşitli seçenekler sunuyoruz. Buna ek olarak, bu modeller, bu hastalığa karşı yeni tedavi stratejileri klinik öncesi değerlendirmeleri için önemlidir. En yaygın olarak kullanılan hayvan modelleri, transjenik fare modelleri, kuyruk damarından, intra-kalp implantasyonu ve insan ortotopik fare modelleri bulunmaktadır. Transgenik çalışmalar zaman consumi vardırng ve insanların bu farelerde prostat kanseri gelişme korelasyon değişkenliğini 11 göstermiştir. Spontan metastatik fare modellerinde, hücreler dolaşıma doğrudan enjekte edilir ve onlar hızlı gerçekleştirme süresi olsa, bunlar primer tümör veya metastatik kaskad 5 ilk adımlarını incelemek için kullanılamaz. Ortotopik ksenograft modelleri kemik metastatik lezyonlar, prostat kanseri metastaz ortak sitesi geliştirme sınırlama var. Bununla birlikte, insan ortotopik prostat kanseri ksenograft fare modeli iyi karakterize ve yaygın primer tümör gelişimi, tümör ve organ mikroçevresinin, terapötik müdahale 6 metastatik hastalık ve deneysel ilaçların kullanımı başlangıç ​​aşamasında arasındaki çapraz konuşma moleküler olayları incelemek için kullanılır , 7,8-11.

<table><tbody><tr><td>PC3 prostat kanseri hücre hattı&nbsp;</td><td>ATCC</td><td>CRL-1435</td><td></td></tr><tr><td>Minimum Temel Orta (MEM)&nbsp;</td><td>GIBCO, Yaşam Teknolojisi</td><td>11095-080</td><td></td></tr><tr><td>PBS</td><td>GIBCO, Yaşam Teknolojisi</td><td>10010-023</td><td></td></tr><tr><td>FBS</td><td>GIBCO, Yaşam Teknolojisi</td><td>10437-028</td><td></td></tr><tr><td>Zeocin</td><td>Invitrogen, Yaşam Teknolojisi</td><td>R250-01</td><td></td></tr><tr><td>Tripsin ve nbsp;</td><td>GIBCO, Yaşam Teknolojisi</td><td>25300-54</td><td></td></tr><tr><td>IVIS&nbsp;</td><td>Ksenojen Kaliper</td><td></td><td></td></tr><tr><td>İnsülin Şırıngaları (300 & mikro; l, 28.5 g)</td> <td>Becton Dickinson</td><td>309300</td><td></td></tr><tr><td>Fareler</td><td>Charles River Laboratories, Inc</td><td></td><td></td></tr><tr><td>Alkollü Çubuklar</td><td>MEDEquip Deposu</td><td>326895 BD</td><td></td></tr><tr><td>PVP İyot Hazırlama Pedi</td><td>MEDEquip Deposu</td><td>C12400PDI</td><td></td></tr><tr><td>Cerrahi CatGut Kromik Sütür</td><td>Demetech</td><td>CC224017F0P</td><td></td></tr><tr><td>Matrigel</td><td>Corning</td><td>354248</td><td></td></tr></tbody></table>

İnsan prostat kanseri klinik öncesi ortotopik murin modeli

Pre-clinical Orthotopic Murine Model of Human Prostate Cancer

Prostat kanserinin çok yönlü biyolojisini incelemek için, klinik öncesi in vivo modeller, bu hastalıkla ilgili kritik biyolojik bilgileri ortaya çıkarmak için bir dizi seçenek sunar. İnsan ortotopik prostat kanseri ksenogreft fare modeli, genetik ve moleküler olarak değiştirilmiş tümör hücreleri, organ mikro çevreleri arasındaki spesifik etkileşimleri anlamak ve terapötik rejimlerin etkinliğini değerlendirmek için yararlı bir alternatif yaklaşım sağlar. Bu, primer tümör gelişiminin moleküler olaylarını incelemek için tasarlanmış iyi karakterize edilmiş bir modeldir ve emboli ve tümör hücrelerinin dolaşıma girmesinden önceki metastatik kaskaddaki erken olayları özetler. Böylece, metastatik hastalığın başlangıç aşamasının altında yatan moleküler mekanizmaların aydınlatılmasına izin verir. Ek olarak, bu model klinik öneme sahip ilaç hedeflerini açıklayabilir ve prostat kanserinin ilerlemesini incelemek için değerli bir araçtır. Bu yazıda, bir insan ortotopik prostat kanseri ksenogreft fare modeli oluşturmak için ayrıntılı bir prosedür açıklanmaktadır.

Prostatik lobuna PC3M-Luc-C6 hücrelerinin ortotopik implantasyonu takiben fareler haftada deney sırasında (- B Şekil 5A) üzerinden hücrelerin kolonizasyonunun ve tümör büyümesini izlemek için canlı bir hayvan biyolüminesans görüntüleme sistemi kullanılarak görüntülendi. bioluminescent sinyal Niceleme PC3M-Luc-C6 hücreleri başarıyla prostat lobları kolonize olduğunu göstermiştir. Artan biyolüminesans deneyi (Şekil 5B) boyunca artan primer...

Prostat kanseri, Amerika Birleşik Devletleri'nde kansere bağlı ölümlerin en sık ikinci nedenidir. Ortotopik bir kanser modeli, prostat kanserinin biyolojisini anlamak ve terapötik rejimlerin etkinliğini değerlendirmek için yararlı bir yaklaşım sağlar. Bu protokol, ortotopik bir prostat kanseri fare modeli oluşturmak için gerekli ayrıntılı adımları açıklar.

İnsan Prostat Kanseri klinik öncesi Ortotopik murin modeli

To study the multifaceted biology of prostate cancer, pre-clinical in vivo models offer a range of options to uncover critical biological information ...

Bu prosedürün genel amacı, metastatik kaskadın erken evrelerinde primer tümör gelişiminin moleküler olaylarını incelemek için kullanışlı bir yaklaşım sunan bir fare ortotopik prostat kanseri xenograft modeli oluşturmaktır. Bu model, büyüyen tümörün mikro çevresinde genetik ve moleküler olarak değişmiş tümör hücreleri arasındaki spastik etkileşimlere ilişkin temel soruların yanıtlanmasına yardımcı olabilir. Ayrıca, insan prostat kanserine karşı yeni terapötik yaklaşımların preklinik değerlendirmesine de katkı sağlayabilir.Bu tekniğin spontan metastatik modellere göre temel avantajı, primer tümör gelişimindeki moleküler olayların incelenmesini ve ayrıca tümör hücrelerinin dolaşıma girişi ve embolizasyonu öncesindeki başlangıç metastaz aşamasının yeniden oluşturulmasını desteklemesidir. Prostat kanserinin ortotopik modeli, prostat kanseri hücrelerinin farklı organlara nasıl metastaz yaptığını anlamak için kullanılan en iyi preklinik modellerden biridir. Prostat kanseri hastalarının çoğu metastaz nedeniyle hayatını kaybettiğinden, bu model metastazın moleküler mekanizmalarını araştırmak için oldukça önemlidir.Bu modeli kullanarak, metastatik yolaklara özgü nöral bileşikler aracılığıyla

pre-clinical-orthotopic-murine-model-of-human-prostate-cancer

Research

JoVE Journal

Medicine

Tıp

Kateterizasyon, yerel koterizasyon ve yanık sitelerine karsinom hücreleri sonraki yapışma ile minimal invaziv bir moda dişi farelerde mesane tümörleri kurulur.

Murin Mesane Kanseri bir Ortotopik Model

Bu videoda, prostat kanseri hücrelerinin bir fare modeline intra-prostat enjeksiyonu uygulama prosedürünü gösteriyoruz. Ortotopik murin modelleri, non-invaziv ve klinik olarak ilgili bir ortamda hastalığın kökenini ve tedavi tedavilerine yanıtı incelemek için kullanılabilir.

Kanser Hücrelerinin İntraprostat Enjeksiyonu: Ortotopik Prostat Kanseri Fare Modeli Oluşturmak için Kanser Hücreleri Verme Tekniği

Fare prostat kanseri modelinde tümör stroma içinde pıhtılaşmış plazma proteinlerine özel bir MRT-kontrast maddesi hedefleyen küçük peptid ile MR kanser moleküler görüntüleme göstermek için.

Küçük Moleküler CLT1 Peptide Hedefli Kontrast Agent ile Prostat Kanseri MR Moleküler Görüntüleme

Insan prostat kanser ortotopik bir model akciğer tümör hücreleri ve farklı metastaz oluşumu dolaşan tümör boyutu ölçümü sağlar. Hücreler birincil organı kaçmak gerekir gibi, kan dolaşımına girerek, ve bir ikincil site içine implant, bu modeli etkin insanlarda senaryo tartışıldı.

İnsan Prostat Kanser metastaz Ortotopik fare modeli

Bu makale, dolaşımdaki tümör hücrelerinden (CTC'ler) prostat kanseri hastasından türetilen ksenogreftler (PDX'ler) oluşturmak için kullanılan bir yöntemi detaylandırmaktadır. CTC'lerden PDX modellerinin oluşturulması, prostat kanserini incelemek için alternatif bir deneysel model sağlar; En sık teşhis edilen tümör ve erkeklerde kanserden sık görülen bir ölüm nedenidir.

Prostat Kanseri Hasta Üretimi Tümör Hücreleri Sirkülasyon gelen Xenograftlarında Modeller Türetilmiş

Bu el yazması laboratuvar fare prostat mikro diseksiyon ve cerrahi kastrasyon için protokolleri açıklar. Biz de bu protokoller tarafından üretilen temsilcisi sonuçları tasvir. Son olarak, biz avantaj ve bu protokollerin kullanımını tartışmak.

Mürin Prostat Mikro-diseksiyon ve Cerrahi Kastrasyon

Bu protokol, dişi C57BL / 6J fareler, tümör büyümesi izlenmesinde sıçangil ortotopik mesane tümörlerinin üretimini tarif eder.

Bir Fare Ortotopik Mesane Tümör Modeli ve Tümör Tespit Sistemi

Bu iletişim kuralı, prostat kanseri hücreleri, sonraki kastrasyon içi Prostatik enjeksiyon göstermek için hedeftir. Orthotopic önceden klinik androjen bağlı ve kısırlaştırma dayanıklı prostat kanseri hastalığı klinik tümör microenvironment ve immün bir ana bilgisayar bağlamında incelemek için kritik modellerdir.

Kollarındaki ve floresan Orthotopic Syngeneic fare modeli androjen bağlı ve kısırlaştırma dayanıklı prostat kanseri

Bu iletişim kuralı virüs teslim edilmek üzere fare prostat yeni kurulan bir yöntem açıklanır. CRISPR/Cas9 teknolojisi, gen overexpression veya Cre recombinase teslim kullanarak, teknik gen ifadesinin orthotopic değişiklik sağlar ve prostat kanseri için bir roman fare modeli uygular.

Virüs gen değiştirme için fare prostat CRISPR kılavuzları teslimini

Genetik fareler prostat kanseri mekanizmaları araştıran için yararlı modellerdir. Burada bir fare ürogenital sistemden prostat loblar incelemek, Histoloji üzerinde göre ayırt etmek ve yalıtmak ve pulcuklarının aşağı akım analizleri için olarak birincil Prostat hücreleri vitro kültür için bir iletişim kuralı mevcut.

Kimlik, histolojik karakterizasyonu ve için fare Vitro 3D küresel kültür modelleri prostat lob diseksiyonu

Burada, kemik metastazı lezyonları olan bir fare modeli oluşturmak için insan prostat kanseri hücrelerinin intrakardiyak enjeksiyonu için bir protokol sunuyoruz.

Kemik Metastazı Ksenograft Fare Modeli Oluşturmak için İnsan Prostat Kanseri Hücrelerinin İntrakardiyak Enjeksiyonu

Keşfedin insan prostat kanseri için ortotopik murin ksenogreft modeli kurma yöntemini. Bu teknik, tümör gelişimi ve metastazın moleküler olaylarını incelemek için önemli bir yaklaşım sunar.

İnsan Prostat Kanseri klinik öncesi Ortotopik murin modeli

Daha fazla video keşfet