Name: MEFS I Matrigel: MEFS Durum Pasajlanması hESC (Video) | JoVE Journal
Uploaded: 2008-06-04T23:27:00.000+00:00
Duration: 6 min 29 s
Description: Öğrenin, fare embriyonik fibroblast besleyici hücreleri ve Matrigel kullanarak insan embriyonik kök hücrelerini çoğaltma ve çok yönlülüklerini koruma yöntemlerini. Bu teknik rejeneratif tıp araştırmaları için temel oluşturur.

ai_agent_IP

ai_agent

maintenance

instantTrialDurationMinutes

isBiopharma

enableNewMyJoveSectionDesign

educationFeatures

seoMetaApi

ai_copilot_institution_blacklist

ai_chat_institution_blacklist

freeAccessWindow

ssoRoleCapture

scheduledMaintenanceBanner

joveLabsFeatures

disable_autoplay_for_bots

extended_trial_duration

5 minutes

Teitell laboratuar İnsan embriyonik kök hücre çalışmaları California Rejeneratif Tıp Enstitüsü (CIRM) tohum hibe RS1-00313 tarafından desteklenmektedir. Geniş, UCLA, özellikle Dr. Amander Clark, Dr Jerome Zack ve verdikleri destek için çalışmalarımız UCLA Broad Enstitüsü Kök Hücre Çekirdek Tesis üyeleri Rejeneratif Tıp ve Kök Hücre Araştırma Merkezi üyelerine teşekkür ederiz.

Yarma insan embriyonik kök hücreleri (hESC) fare embriyonik fibroblastlar (MEFS) kaplanmıştır. Genellikle konfluent hESC plaka özel hESC hattı bağlı, 1:10 1:6 bölünmüş olabilir. Split plaka bölme 5-7 gün sonra tekrar konfluent olacak. <ol><li> Bölme iki gün önce,% 0,1 jelatin çözüm kullanarak plakaları jelatinleştirmeye. 6 plaka için, bir gecede 37 ° C,% 5 CO 2 doku kültürü inkübatör her iyi ve inkübe plaka içine 2ml ekleyin. </li><li> Levha MEFS gün jelatinize 6-kuyucuğu bölünmesi üzerine hESC planı önce. (NOT: MEFS 3 gün önceki gerekirse birçok kaplama olması. ~ 3 gün sonra, MEFS düz ve yayılması-dışı fazla ve MEFS. HESC yanı sıra taze sürdürmek değil. Haline..) G-ışınlanmış veya mitomisin bir flakon atın C 37 ° C su banyosunda 2 dakika için sıvı azot ve çözülme, 5-6 x 10 6 hücre içeren, CF1 MEFS tedavi. 50ml şahin tüp sıcak MEF Kültür Medya ile bir kez hücreleri yıkayın ve sıcak MEF Kültür Medya nihai hacmi tekrar süspansiyon haline getirin. 5-6 x 10 6 hücre, bu yeterli plaka, iki ya da üç 6 kuyucuğu . </li><li> MEFS yıkanmış olmasına rağmen, galveniz plakaları kuyulardan tüm çözüm kaldırmak ve de ortalama MEF Kültür Medya 2.5 ml. </li><li> Her iyi bir son hacim olarak 3ml ulaşmak için de her MEF süspansiyon 0,5 ml ekleyin. MEFS inkübatör yerleşmek için bir gecede eşit dağınık ve yer plakaları emin olun. </li><li> HESC bölme gününde, 1mg/ml az &lt;2 hafta eski steril kollajenaz IV çözüm taze hazırlamak veya kullanmayın. HESC kuyulardan bölmek istediğiniz tüm medya çıkarın 2ml ortalama sıcak 1 × PBS, pH 7.4 ile bir kez yıkayın ve kollajenaz IV çözümü 1ml ekleyin. 37 ° C&#39;de 5-10 dakika inkübe edin. Kuluçka 6-iyi hESC plaka alın ve her bir kuyunun ES medya (bFGF olmadan) 1ml ekleyin. 1 ml pipet ile, her bir kuyu çözümü kullanarak medya emmek ve plaka kök hücreler kapalı darbe. Bu her bir kuyu için yaklaşık 5 ila 10 tekrar alacaktır. Sonra, askıya hESC 50ml şahin tüp içine aktarın. Bölünmüş olan bütün kuyuları için bunu yapın ve bir 50ml şahin tüp birleştirmek. Pelet 5 dakika boyunca 200 gr oda sıcaklığında hESC ve bFGF eksik ES medya ile bir kez yıkayın. </li><li> HESC yıkanmış edilirken, MEF plakaları almak kuyulardan tüm medyayı çıkartın ve bir kez yıkayın steril, ılık 1 × PBS, pH 7.4 ES medya 2.5 ml (şimdi 10 ng / ml bFGF ile desteklenmiş) başına eklemek iyi. </li><li> 10 ng bFGF ile desteklenmiş ES medya uygun bir hacim pelet hESC, tekrar (NOT:. HESC yeniden süspanse zaman, kabaca tekdüze koloni boyutu ve şekli olmalıdır tabanda hacmi bölme oranı bağlıdır) pipet hESC süspansiyon yukarı ve aşağı koloniler daha küçük ve daha düzgün yapmak için birkaç kez dikkatlice ama o kadar çok tek hücre ya da çok küçük koloniler üretilir. Her iyi bir son hacim olarak 3 ml ulaşmak için MEF plakaları hESC süspansiyon de ortalama 0,5 ml ekleyin. Görme hESC gecede yerleşmek için inkübatör plakaları yerleştirerek önce eşit olarak dağıtılmış olduğu emin olmak için kontrol edin. Kaplama sonra, genellikle karakteristik şekil ve sınır görünümünü almaya sömürgeler için bir kaç gün sürecektir. </li></ol>

<ol><li>Thomson, J. amesA., Itskovitz-Eldor, J. oseph, Shapiro, S. anderS., Waknitz, M. ichelleA., Swiergiel, J. enniferJ., Marshall, V. ivienneS., Jones, J. effreyM. <a target="_blank" href="http://www.ncbi.nlm.nih.gov/pubmed?term=((Embryonic+Stem+Cell+Lines+Derived+from+Human+Blastocysts%5BTitle%5D)+AND+%22Science+%22%5BJournal%5D)">Embryonic Stem Cell Lines Derived from Human Blastocysts.</a> Science . 282, 1145-1147 (1998).</li>
<li>Xu, C. hunhui, Inokuma, M. argaretS., Denham, J. errod, Golds, K. athaleen, Kundu, P. ratima, Gold, J. osephD., Carpenter, M. elissaK. <a target="_blank" href="http://www.ncbi.nlm.nih.gov/pubmed?term=((Feeder-free+growth+of+undifferentiated+human+embryonic+stem+cells%5BTitle%5D)+AND+%22Nature+Biotechnology+%22%5BJournal%5D)">Feeder-free growth of undifferentiated human embryonic stem cells.</a> Nature Biotechnology . 19, 971-974 (2001).</li>
</ol>

Bu video fare embriyonik fibroblast (MEF) besleyici hücreler insan embriyonik kök hücreleri (hESC) nasıl büyümeye göstermektedir. Kaplama öncesi son adım, hESC yeniden süspanse, kabaca tekdüze koloni boyutu ve şekli olmalıdır. HESC süspansiyon dikkatlice pipet ve bir kaç kez koloniler daha küçük ve daha düzgün yapmak için, ama o kadar çok tek hücre ya da çok küçük koloniler gibi Eki-hESC pluripotency belirteçleri, generated.Immunofluorescence boyama ve mikroskobu veya flow sitometri 4 ve SSEA-4, kültür sırasında farklılaşmamış bir devlet hE...

<table><tbody><tr><td>Knockout Serum Replacer (KSR)</td><td>Reaktif</td><td>GIBCO, by Life Technologies</td><td>10828-028</td><td></td></tr><tr><td>DMEM/F12</td><td>Reaktif</td><td>GIBCO, by Life Technologies</td><td>11330-057</td><td></td></tr><tr><td> Esansiyel Olmayan Amino Asitler</td><td>Reaktif</td><td>GIBCO, by Life Technologies</td><td>11140-050</td><td></td></tr><tr><td>GlutaMax </td><td>Reaktif</td><td>GIBCO, by Life Technologies</td><td>35050-061</td><td></td></tr><tr><td>DMEM</td><td>Reaktif</td><td>GIBCO, by Life Technologies</td><td>11995-065</td><td></td></tr><tr><td>FBS</td><td>Reaktif</td><td>Clontech Laboratories</td><td>631107</td><td></td></tr><tr><td>L-glutamin</td><td>Reaktif</td><td>GIBCO, by Life Technologies</td><td>25030-081</td><td></td></tr><tr><td>BME</td><td>Reaktif</td><td>Fisher Scientific</td><td>BP176-100</td><td></td></tr><tr><td>bFGF</td><td>Reaktif</td><td>R&amp;amp;D Systems</td><td>233-FB-025</td><td></td></tr><tr><td>Kollajenaz IV</td><td>Reaktif</td><td>GIBCO, by Life Technologies</td><td>17104-019</td><td></td></tr><tr><td>Dispaz</td><td>Reaktif</td><td>Stem Cell Technologies</td><td>17105-041</td><td></td></tr><tr><td>Penisilin / Streptomisin </td><td>Reaktif</td><td>GIBCO, by Life Technologies</td><td>15140-122</td><td></td></tr><tr><td>Jelatin</td><td>Reaktif</td><td>Chemicon International</td><td>ES-006-B</td><td></td></tr><tr><td>Matrigel</td><td>Reaktif</td><td>BD Biosciences</td><td>354277</td><td></td></tr><tr><td>Oct-4 antikoru</td><td>Reaktif</td><td>Santa Cruz Biotechnology, Inc.</td><td>SC-9081</td><td></td></tr><tr><td>anti-h/mSSEA-4 Phyc&amp;#8211;rythrin Konjuge Fare IgG3</td><td>Reaktif</td><td>R&amp;amp;D Systems</td><td>FAB1435P</td><td></td></tr><tr><td>FITC-konjuge antitavşan IgG</td><td>Reaktif</td><td>Jackson ImmunoResearch</td><td>715-095-152</td><td></td></tr></tbody></table>

mefs i matrigel: mefs durum pasajlanması hesc

From MEFs to Matrigel I: Passaging hESCs in the Presence of MEFs

Bu video fare embriyonik fibroblast (MEF) besleyici hücreler insan embriyonik kök hücreleri (hESC) nasıl büyümeye göstermektedir.

Bu video fare embriyonik fibroblast (MEF) besleyici hücreler insan embriyonik kök hücreleri (hESC) nasıl büyümeye göstermektedir. Part 1 3.

MEFS I Matrigel: MEFS Durum Pasajlanması hESC

Bu video, insan embriyonik kök hücrelerinin (hESC), fare embriyonik fibroblast (MEF) besleyici hücreleri üzerinde nasıl büyütüleceğini göstermektedir.

Rejeneratif tıptaki önemli potansiyelleri nedeniyle, insan embriyonik kök hücrelerinin biyolojisine ve manipülasyonuna giderek daha fazla dikkat çekilmektedir. Bu videoda, fare embriyonik fibroblast besleyici hücrelerini kullanarak ve matrigel üzerinde besleyici içermeyen koşullarda, insan embriyonik kök hücrelerinin pluripotent durumda nasıl büyütülüp sürdürüleceğini gösteriyoruz. Merhaba, ben University of California Los Angeles Patoloji ve Laboratuvar Tıbbı Bölümü'nden laboratuvar mikro sorumlusu Jinjiang.Bugün size, insan embriyonik kök hücrelerinin fare embriyonik fibroblast besleyici hücreler üzerinde ve Matrigel üzerinde besleyici hücreden bağımsız koşullarda kültüre edilmesi prosedürünü göstereceğiz. Bu prosedür; fare embriyonik fibroblast hücrelerinin hazırlanmasını, Matrigel üzerinde büyüme için Matrigel koşullu besiyerinin oluşturulmasını, Matrigel plakalarının hazırlanmasını ve insan embriyonik kök hücrelerinin zaman içinde beslenmesi ve büyütülmesi için pasajların hazırlanmasını içermektedir. Öyleyse başlayalım.Kültür prosedürüne başlamak için, insan embriyo benzeri kök hücreler; fare embriyonik fibroblastları veya MEK'ler üzerine ekilir; MEK üzerine ekilmiş insan embr

from-mefs-to-matrigel-i-passaging-hescs-in-the-presence-of-mefs

Research

JoVE Journal

Biology

Biyoloji

Bu video laboratuarımızda rutin tripsin tonlar insan embriyonik kök hücre hatları geçişleri nasıl göstermektedir.

Tripsin ile Pasajlanması tonlar İnsan Embriyonik Kök Hücre hatları

Bu video, besleyici, hücre koşullarda ve ne kadar besleyici sürekli geçit hESC hücre koşulları, insan embriyonik kök hücreleri (hESC) büyümesini nasıl koruyacağınızı gösteriyor. HESC, Onay pluripotency immünofloresan mikroskobu ile besleyici, hücre koşullarda yetiştirilen da gösterilmiştir. 3 Bölüm...

MEFS Matrigel 2 Matrigel üzerine MEFS Yarma hESC:

Matrigel MEFS Matrigel 3: Matrigel üzerine gelen Pasajlanması hESC

Belirli hücrelerin içine hESC Yönetmen farklılaşma, rejeneratif tıp alanında büyük ilgi yarattı. Biz belirlemek için bir özlü, adım-adım...

Teratom Oluşumu İnsan Embriyonik Kök Hücre Kader Haritalama

Bu makale, insan embriyonik kök hücre popülasyonlarının insan hepatik endoderm üretimi üzerinde durulacaktır.

İnsan Embriyonik Kök Hücre Popülasyonlar Hepatosit gibi Hücreleri Sağlam Nesil

Fare embriyonik fibroblast (MEFS) kalitesi, CF-1 gibi farenin sağ suşu tarafından dikte edilir. Bu elde edilen Pluripotency destekleyici MEFS ve klimalı ortam (CM) işbirliği içinde kendini yenileyen ve pluripotency korumak için aktivin / Düğüm ve FGF yolları için gerekli aktivin A, Gremlin ve Tgfβ1 optimal konsantrasyonu içermelidir.

Kültürleme İnsan Embriyonik ve Bağlı Pluripotent Kök Hücrelerinin için uygundur Fare embriyonik fibroblast hücreleri hazırlanması

Geçiş kültürlere besleyici-özgür koşullarda devam eden çabalarına rağmen, insan embriyonik kök hücreleri (hESC) ve türetme ve kültürü fare embriyonik besleyiciler (MEFS) ile işbirliği kültürler büyük oranda bağımlı kalır. Burada, biz hızla öncesi deneylere hESC kültürlerden besleyiciler kaldırmak için yeni bir metodoloji göstermektedir.

Yüksek Yoğunluklu İnsan Embriyonik Kök Hücre Kültürleri gelen Rapid Fibroblast Kaldırma

Burada, biz insana biyolojik özelliklerini özetlemek permisif kültür koşulları altında kasılma myofibers (myospheres) üç boyutlu kümeler oluştururlar iskelet kası atalarıdır, homojen bir nüfusa üreten doğru insan embriyonik kök hücreleri (hESC) epigenetik yeniden programlama dayalı bir protokol açıklar iskelet kasları.

Epigenetik yeniden programlanması ile hESC itibaren Myospheres Üretimi

Muhabir hücre çizgileri, görselleştirmek etiket ve heterojen popülasyonlar ilgi hücreleri izole etmek için bir araç sunmaktadır. Bununla birlikte, hedef gen, insan embriyonik kök hücreleri alışılmış homolog rekombinasyon kullanılarak son derece verimsizdir. Bu yazıda, çinko-parmak nukleaz gelişmiş homolog rekombinasyon kullanarak EGFP ile CNS Ortabeyin özel transkripsiyon faktörü PITX3 odağı hedefleme açıklar.

İnsan Embriyonik Kök Hücreleri Hedefleme Çinko parmak Nükleazlar Geliştirilmiş Gen

Burada, kemik morfojenik protein 4 ve Aktivin/Nodal yolların inhibitörlerini kullanarak insan pluripotent kök hücrelerinden verimli bir şekilde insan trofoblastik hücreleri üretmek için bir protokol sunuyoruz. Bu yöntem, insan pluripotent kök hücrelerinin verimli bir şekilde farklılaşması için uygundur ve genetik manipülasyon için büyük miktarlarda hücre üretebilir.

Insan pluripotent İn Vitro Farklılaşma Trofoblastik Hücreleri içine Kök Hücreler

Besleyici hücrelerde kültürlenen insan embriyonik kök hücrelerinin (hESC'ler) ve insan kaynaklı pluripotent kök hücrelerin (hiPSC'ler) enzimatik veya mekanik geçişiyle ilişkili sınırlamalardan kaçınmak için, EDTA aracılı yapışma bozukluğu kullanılarak insan sünnet derisi fibroblastlarının besleyici hücre tabakasında tutulan hESC veya hiPSC kolonilerinin toplanması için hızlı, etkili, uygun maliyetli, yüksek verimli bir yöntem oluşturduk.

İnsan pluripotent kök hücrelerinin besleyici hücreler üzerinde etilendiamintetraasetik asit aracılı yapışma ile hızlı, uygun maliyetli, enzimsiz geçişi

Öğrenin, fare embriyonik fibroblast besleyici hücreleri ve Matrigel kullanarak insan embriyonik kök hücrelerini çoğaltma ve çok yönlülüklerini koruma yöntemlerini. Bu teknik rejeneratif tıp araştırmaları için temel oluşturur.

MEFS I Matrigel: MEFS Durum Pasajlanması hESC

Daha fazla video keşfet