Name: Rato de isolamento de células Adrenal Cromafim (Vídeo) | JoVE Journal
Uploaded: 2007-01-05T00:00:00.000+00:00
Duration: 18 min 30 s
Description: Aprenda o isolamento de células cromafins da medula adrenal em ratos para estudos de acoplamento excitação-secreção. Este método fornece um sistema in vitro confiável para investigar processos neuroendócrinos.

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Abreviaturas: ACCs - Células Adrenal Cromafim, E. Soln - solução enzimática, E. DMEM - Modified Dulbecco Enriquecido Eagle Medium <ol><li> Preparação <ol><li> Adicionar papaína a quantidade desejada de E. Soln (40 unidades papaína / 1ml E. Soln.). </li><li> Ativar papaína com carbogênio por cerca de 15 minutos em gelo. Buffer de Locke oxigenar sobre gelo também. </li></ol></li><li> Dissecação <ol><li> Use 10/08 rato semana. </li><li> Antes de remover a digestão oxigenado tampão de Locke e colocar no gelo. </li><li> Consulte o vídeo para procedimento de dissecção. </li><li> Uma vez retirado, glândulas lugar em oxigenado tampão de Locke. </li></ol></li><li> Preparação de Gland <ol><li> Retire a gordura da glândula. </li><li> Faixa de córtex da glândula. </li></ol></li><li> A digestão enzimática <ol><li> Filtro estéril oxigenado papaína. </li><li> Fazer quatro piscinas de papaína oxigenada em uma placa de Petri. <ol><li> 3 piscinas deve ser de cerca 100uls. </li><li> Uma das piscinas deve ser de cerca 400uls. </li></ol></li><li> Lavar medulas através piscinas <ol><li> 1 através da 3 piscinas 100ul. </li><li> Em seguida, através da piscina 400ul </li><li> Pippette 300ul E. Soln e medula peças de piscina 400ul em tubo de microcentrífuga. </li><li> Qrap parafilme em microcentrífuga tubo e colocar em 37 ° C banho-maria por 20min. </li><li> Lembre-se de continuar a oxigenar restantes E. Soln contendo papaína. </li><li> Após 20 minutos estéril filtro mais E. Soln. </li><li> Substituir as antigas E. medulas banho Soln com o recém-filtrada E. Soln. </li></ol></li></ol></li><li> Triturações <ol><li> Aspirar e descartar E. Soln. </li><li> Lavar medulas em 1ml E. DMEM. </li><li> Aspirar e descartar E. DMEM. </li><li> Adicionar 300ul E. DMEM e triturar 20X com 1ml ponta. </li><li> Cortar ponta 200ul com lâmina de barbear estéril. </li><li> Triturar 5-10X com ponta 200ul corte. </li><li> Descartar E. DMEM medulas peças de banho. Medium irá conter detritos. </li><li> Adicionar 300uls fresco E. DMEM para medulas peças. </li><li> Triturar com a ponta 200ul 20x </li><li> Pippette E. DMEM para microcentrífuga pedaços de tubo withough medulas. Médio conterá ACCs livres. </li><li> Adicionar 300uls fresco E. DMEM para medulas peças. </li><li> Triturar medulas com uma agulha de seringa 23,5 calibre 20x. </li><li> Combine E. DMEM de ambas as triturações. Peças medulas não deve estar presente e deve agora ter uma aparência featherlike. </li></ol></li><li> Galvanização <ol><li> Microcentrífuga E. DMEM de as duas últimas etapas de trituração por 2,5 minutos a 3.7g s. </li><li> Ressuspender sedimento em 50uls-200 E. DMEM, dependendo experimentos subseqüentes. </li><li> Placa de 10 30uls em uma lamela de vidro. </li><li> Esperar 15 minutos para que as células aderem. </li><li> Adicionar 750uls de E. DMEM. </li></ol></li></ol>

Os autores não têm nada a declarar.

rato de isolamento de células adrenal cromafim

Mouse Adrenal Chromaffin Cell Isolation

Adrenal medular cromafins sistemas de cultura de células são extremamente úteis para o estudo da secreção de excitação de acoplamento em uma configuração em vitro. Este protocolo ilustra o método utilizado para dissecar as supra-renais e, em seguida, isolar a região medular, removendo o córtex adrenal. A digestão da medula em células cromafins único é então demonstrada.

Rato de isolamento de células Adrenal Cromafim

Os sistemas de cultura de células cromafins da medula adrenal são extremamente úteis para o estudo do acoplamento excitação-secreção em ambiente in vitro. Este ...

Observação: Este vídeo não

Research

JoVE Journal

Biology

Biologia

Este vídeo demonstra um protocolo livre de enzimas para isolar macrófagos do gânglio da raiz dorsal (DRG) de camundongos usando uma técnica de dissociação mecânica. Após a homogeneização do tecido DRG recém-coletado, anticorpos contra os receptores de superfície celular nos macrófagos são usados para marcar as células fluorescentemente, seguido pela realização de citometria de fluxo para confirmar a presença de macrófagos na amostra.

Isolamento de macrófagos do gânglio da raiz dorsal de camundongos usando dissociação mecânica

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Uma técnica para isolar mastócitos primários de uma cavidade peritoneal murina

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Imagem Plasma Membrane Deformações Com pTIRFM

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Métodos de medidas de capacitância ligado por células em Rato Adrenal Cromafim celular

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O efeito do estresse osmótico em vesículas secretoras e exocitose de monitoramento

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Cultura primária de células Adrenocortical rato e ensaios das funções reguladora

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Microscopia Confocal para medir três modos de dinâmica de poros de fusão em células adrenal chromaffin

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Estabelecimento de Culturas Primárias Enriquecidas em Zona a partir do córtex adrenal do camundongo

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Rato de isolamento de células Adrenal Cromafim

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