Name: Sivrisinek Yetiştirme Protokolü (A. gambiae) (Video) | JoVE Journal
Uploaded: 2007-07-04T01:00:00.000+00:00
Duration: 13 min 3 s
Description: Öğrenin Anopheles gambiae sivrisineklerinin laboratuvar ortamında yetiştirilme yöntemlerini. Bu teknik, sıcaklık ve nem kontrolü ile tüm yaşam evrelerini kapsar ve sıtma vektörü araştırmaları için temel oluşturur.

ai_agent_IP

ai_agent

maintenance

instantTrialDurationMinutes

isBiopharma

enableNewMyJoveSectionDesign

educationFeatures

seoMetaApi

ai_copilot_institution_blacklist

ai_chat_institution_blacklist

freeAccessWindow

ssoRoleCapture

scheduledMaintenanceBanner

joveLabsFeatures

disable_autoplay_for_bots

extended_trial_duration

5 minutes

playerTrialDesktop

Sivrisinek gıda: <ol><li> Gıda A: balık yemi (Aquaricare). Küçük bir tutam eklenmesi gerekiyor. </li><li> Gıda B: CAT gıda (Purina) topraklanmalıdır. Küçük bir tutam eklenmesi gerekiyor. </li><li> Gıda C: kedi maması (Purina). Iki tablet eklenmesi gerekiyor. </li></ol> Kan: Hayvan veya insan kanı arka sivrisinekler için kullanılabilir. Taze kan bir şırınga ile toplanır ve her 10 ml kan CPD (antikoagülan) 1 ml içeren steril 15 ml Falcon tüp koymak, sonra hafifçe karıştırılır ve oda sıcaklığında 5 dakika boyunca 2000 rpm&#39;de santrifüj. Diğer kan hücrelerinin (örneğin WBC) oluşur buffy coat kaldırmak için özen Süpernatant atılır. RBC pelet sonra pipetleme RPMI medyum eşit hacmi askıya daha bu orta üç kere yıkanır. Son yıkamadan sonra, pelet eritrositlerde RPMI orta eşit hacmi yeniden süspanse ve 4 saklanan ° C (8-10 gün süreyle muhafaza edilebilir). RBC (RPMI) beslemeden önce, hücreleri aşağı pelet santrifüj (5 dakika için 2000 rpm), ve dolu RBC% 40 hematokrit elde etmek için serum (O + insan serum) yeniden bekletildi. Kan ° C her zaman beslenme için 37 tutulmalıdır. 1. GÜN: <ol><li> 3-5 gün eski yetişkin dişi sivrisinekler yumurtalarını bırakmak için kan beslenir. </li><li> Kan beslenmesi için, yapay bir zar (parafilm) besleme yöntemi aşağıdaki gibi kullanılır: <ol><li> Kırmızı kan hücreleri (kan hazırlanması için yukarıya bakın) ~% 40 hematokrit (RBC% 40 ve% 60 serum dolu) elde etmek için ısı ile inaktive edilmiş serum karıştırılır. Bu cam besleyici eklenir. </li><li> Besleyici, sıcak (37 ° C) su-ceket bağlı ve membran yüzeyine sivrisinek erişime izin vermek için kafes yerleştirilir. </li><li> Sivrisinekler ~ 30 dakika boyunca beslemek için izin verilir. </li></ol></li></ol> 3. GÜN: <ol><li> Kanı ile beslenirler iki gün sonra dişiler yumurtalarını olacaktır. Konik bir şekil sarılmış küçük bir filtre kağıdı, filtre kağıdı nemli alır emin, distile su içeren küçük bir behere konur. Beher, sivrisinekler yumurtalarını bırakmak için için bir gecede kafes içinde tutulur. </li></ol> 4. GÜN: <ol><li> Sivrisinek yumurta içeren filtre kağıdı ~ 300 ml distile su ile plastik bir tepsiye yerleştirilir. Bir tutam gıda tepsiye eklenir ve bir sonraki gün boyunca larva yumurtadan yumurta izin verilir. </li></ol> 5 - 8 GÜN: <ol><li> Büyüyen larvalar her gün iki tablet gıda C ile beslenen, ve yoğunluğu ve nüfus açısından izlenmelidir. Sekizinci gün (5 gün yaşlı larva), larva nüfus, her tepsi yiyecek gıda C, A ve iki tablet bir tutam, 1 tepsi ~ 10 tepsileri seyreltilir. (~ 30 dakika) </li></ol> 9 - 12 GÜN: <ol><li> Larvaları, 12. gün (9 gün yaşlı larva) gıda C. her gün beslenir, su, taze su ile değiştirildi ve gıda (gıda ve gıda C iki tablet bir tutam) eklenir. Pupa, bu aşamada gelişen başlar. Tepsiler yetişkinlerin kaçmasını önlemek için ağları ile kaplıdır. (~ 8-10 dakika) </li></ol> GÜN 13 - 15: Pupa sonraki 2 - 3 gün yetişkin için ortaya çıkmasına izin verilir. Gıda larva / pupa yetişkin kaçmasını önlemek için dikkatle net kaldırarak her gün verilir. GÜN 16: <ol><li> Vakum bağlı bir aspiratör ile yetişkin bir kafes içine toplanır. Kafesi,% 10 sakaroz (otoklava) ve alt kafes taşıma sırasında oluşabilecek herhangi bir potansiyel şeker dökülen emmek için bir kağıt havlu astar ile ıslatılmış bir pamuk fitil ile küçük bir 100 ml şişe oluşur. (~ 30-40 dak.) </li></ol> GÜN 17 ​​- 21: <ol><li> Yetişkin (erkekler hem de kadınlar), daha sonra sonraki döngü yeniden başlamak için kan ile beslenen önce% 10 sakaroz beslenen, 4-5 gün boyunca insectary oda saklanır. Aynı sivrisinekler yumurtalarını bırakmak için bir kereden fazla kullanılabilir. </li><li> Deneyler veya yetiştirme için gerekli değildir sivrisinek kafes koyarak dondurucuda öldürülen olabilir. Kullanılan tepsiler ve kafesler tekrar kullanılmadan önce temizlenmeli ve kuru olması gerekir. </li></ol> NOT: sivrisinek yetiştirme yönteminde bazı farklılıklar olabilir ve farklı laboratuvarlar farklı teknikler olabilir.

<ol><li>Bangs, M. J., Soelarto, T., Barodji,, Wicaksana, B. P., Boewono, D. T. <a target="_blank" href="http://www.ncbi.nlm.nih.gov/pubmed?term=((Colonization+of+Anopheles+maculatus+from+Central+Java%2C+Indonesia%5BTitle%5D)+AND+%22J+Am+Mosq+Control+Assoc%22%5BJournal%5D)">Colonization of Anopheles maculatus from Central Java, Indonesia.</a> J Am Mosq Control Assoc. 18, 359-363 (2002).</li>
<li>Beier, M. S., Beier, J. C., Merdan, A. A., el Sawaf, B. M., Kadder, M. A. <a target="_blank" href="http://www.ncbi.nlm.nih.gov/pubmed?term=((Laboratory+rearing+techniques+and+adult+life+table+parameters+for+Anopheles+sergentii+from+Egypt%5BTitle%5D)+AND+%22J+Am+Mosq+Control+Assoc%22%5BJournal%5D)">Laboratory rearing techniques and adult life table parameters for Anopheles sergentii from Egypt.</a> J Am Mosq Control Assoc. 266, 266-270 (1987).</li>
<li>Benedict, M. Q. <a target="_blank" href="http://scholar.google.com/scholar?hl=en&safe=off&q=author%3aBenedict%2C+MQ+%22Care+and+maintenance+of+anopheline+mosquitoes%2C+The+molecular+biology+of+disease+vectors%3A+A+methods+manual%22">Care and maintenance of anopheline mosquitoes, The molecular biology of disease vectors: A methods manual</a>. Crampton, J. M., Beard, C. B., Louis, C. , Champman & Hall. London. 3-12 (1997).</li>
<li>Casanges, A. H., Mcgovran, E. R., Chiles, J. V. <a target="_blank" href="http://www.ncbi.nlm.nih.gov/pubmed?term=((Rearing+of+Anopheles+quadrimaculatus+Say+and+Aedes+aegypti+%28L.%29+in+the+laboratory%5BTitle%5D)+AND+%22Mosq+News%22%5BJournal%5D)">Rearing of Anopheles quadrimaculatus Say and Aedes aegypti (L.) in the laboratory.</a> Mosq News. 9, 112-117 (1949).</li>
<li>Merritt, R. W., Dadd, R. H., Walker, E. D. <a target="_blank" href="http://www.ncbi.nlm.nih.gov/pubmed?term=((Feeding+behavior%2C+natural+food+and+nutritional+relation+ships+of+larval+mosquitoes%5BTitle%5D)+AND+%22Annual+Rev.+Entomol%22%5BJournal%5D)">Feeding behavior, natural food and nutritional relation ships of larval mosquitoes.</a> Annual Rev. Entomol. 37, 349-376 (1992).</li>
<li>Nasirian, H., Ladonni, H. <a target="_blank" href="http://www.ncbi.nlm.nih.gov/pubmed?term=((Artificial+bloodfeeding+of+Anopheles+stephensi+on+a+membrane+apparatus+with+human+whole+blood%5BTitle%5D)+AND+%22J+Am+Mosq+Control+Assoc%22%5BJournal%5D)">Artificial bloodfeeding of Anopheles stephensi on a membrane apparatus with human whole blood.</a> J Am Mosq Control Assoc. 22, 54-56 (2006).</li>
<li>Ng'habi, K. R., John, B., Nkwengulila, G., Knols, B. G., Killeen, G. F., Ferguson, H. M. <a target="_blank" href="http://www.ncbi.nlm.nih.gov/pubmed?term=((Effect+of+larval+crowding+on+mating+competitiveness+of+Anopheles+gambiae+mosquitoes%5BTitle%5D)+AND+%22Malar+J%22%5BJournal%5D)">Effect of larval crowding on mating competitiveness of Anopheles gambiae mosquitoes.</a> Malar J. 30 (4), 49(2005).</li>
<li>Stobart, R. H. <a target="_blank" href="http://www.ncbi.nlm.nih.gov/pubmed?term=((Factors+affecting+the+control+of+body+volume+in+the+larvae+of+the+mosquitoes+Aedes+aegypti+and+Aedes+detritus%5BTitle%5D)+AND+%22Edw.+J.+Exp.+Boil%22%5BJournal%5D)">Factors affecting the control of body volume in the larvae of the mosquitoes Aedes aegypti and Aedes detritus.</a> Edw. J. Exp. Boil. 54, 67-82 (1971).</li>
</ol>

<table><tbody><tr><td>Yem A</td><td></td><td>Aquaricare</td><td></td><td>Öğütülmüş balık yemi. Küçük bir tutam eklenmelidir.</td></tr><tr><td>Yem B</td><td></td><td>Purina</td><td></td><td>Öğütülmüş kedi maması. Küçük bir tutam eklenmelidir.</td></tr><tr><td>Yem C</td><td></td><td>Purina</td><td></td><td>Kedi maması. İki tablet eklenmelidir</td></tr><tr><td>RBC</td><td></td><td></td><td></td><td>hazırlanmış kırmızı kan hücreleri: insan serumunda %40 hematokrit</td></tr><tr><td>RPMI</td><td>Besiyeri</td><td></td><td></td><td></td></tr><tr><td>CPD</td><td></td><td></td><td></td><td>antikoagülan</td></tr><tr><td>serum</td><td></td><td></td><td></td><td>O+ insan serumu</td></tr><tr><td>Sivrisinek besleyici</td><td></td><td></td><td></td><td></td></tr><tr><td>parafilm</td><td></td><td></td><td></td><td></td></tr><tr><td>Anopheles gambiae</td><td></td><td></td><td></td><td>sivrisinekler</td></tr><tr><td>%10 sükroz</td><td></td><td></td><td></td><td>sivrisinek besini</td></tr><tr><td>böcek evi</td><td></td><td></td><td></td><td></td></tr></tbody></table>

sivrisinek yetiştirme protokolü (a. gambiae)

Protocol for Mosquito Rearing (A. gambiae)

Bu protokol insectary sivrisinek yetiştirme açıklamaktadır. Insectary odalar 28 korunur ° C ve 12 saat ~% 80 nem,. gece / gündüz döngüsü. Bu işlem için, sivrisinek kafes,% 10 steril sakaroz çözeltisini, kağıt havlu, beher, Vatmanlar filtre kağıdı, cam besleyiciler, insan kan ve serum, su banyosu, parafilm, distile su, temiz bir plastik tepsiler, sivrisinek gıda (tarif gerekir aşağıda), yetişkin toplamak için tepsiler, vakum, ve bir toplama haznesinin kapağı net sivrisinek.

Bu video, laboratuarda arka Anofel gambiae kullanılan genel teknikler gösterilmektedir. Kan besleme yetişkin için pupa larva organizmanın yaşam döngüsünün tüm aşamalarında laboratuar sivrisinek bakımı için yöntemleri gösterilmektedir.

Sivrisinek Yetiştirme Protokolü (A. gambiae)

Bu protokol, insektaryumda sivrisinek yetiştirmeyi açıklamaktadır. İnsektaryum odaları, 12 saatlik gündüz/gece döngüsü ile 28°C sıcaklıkta ve ~%80 nemde tutulmaktadır...

Benim adım Shish ve Johns Hopkins Halk Sağlığı Okulu'nda Dr. George OU'nun laboratuvarında doktora sonrası araştırmacıyım. Moleküler Mikrobiyoloji ve İmmünoloji Bölümü'nde, phis Gambi sivrisineklerinin nasıl yetiştirileceğini göstereceğim. Laboratuvarda, bunları genellikle 27 °C sıcaklıkta ve %80 nemde tutulan böcek odasında muhafaza ediyoruz.Böcek odası, doğal koşulları taklit edebilmemiz için 12 saatlik bir gündüz-gece döngüsünde tutulmaktadır. Burası, burada bulunan temel bir tesis olan ve bu böceklerin yetiştirildiği böcek odasıdır. Gördüğünüz gibi, burada sivrisineklerin yumurta, larvaların farklı evreleri ve pupa gibi tüm farklı aşamalarının bulunduğu çeşitli tepsiler bulunmaktadır.Bu tepsilerde, yaklaşık 11 veya 12 günlük larvalar bulunmaktadır; yetişkin sivrisinekleri topladığımız ve %10'luk sükroz çözeltisi ile beslediğimiz yer ise bu kafestir. Sivrisinek yetiştirmeye başlamak için, sivrisinekleri kanla beslememiz gerekir çünkü yumurta bırakabilmek için kanın proteinine ihtiyaç duyarlar. Dolayısıyla birinci gün, yetişkinlerin bir kafese toplandığı ve %10'luk sükroz ile beslendiği gündür.Birinci gün sivrisineklerin kanla beslenmesi gerekir; bu nedenle yapay membran kanla be

Research

JoVE Journal

Biology

Biyoloji

Sıtma için potansiyel bir gen refrakter olarak tespit edildikten sonra, bu sivrisinek içinde Plasmodium enfeksiyonları önlemede rolü için değerlendirilmesi gerekmektedir. Bu protokol, sivrisinek Plasmodium enfeksiyonların ölçüde test nasıl göstermektedir. Gametocyte kültür, membran beslenmesi sivrisinek insan kanı hazırlamak ve sivrisinek midgut viral titreleri assaying teknikler gösterilmiştir.

Sivrisinekler ve Enfeksiyon Fenotip belirlenmesi Plasmodium falciparum Enfeksiyonlar Protokol

Ters genetik yaklaşımlar sivrisinek vektör patojenler için hangi genlerin altta ya direncini belirlemek için son derece yararlı olduğu kanıtlanmıştır. Bu video protokolü Dimopoulos laboratuar tarafından dsRNA Anofel gambiae sivrisinekler, sıtma paraziti limanın içine enjekte etmek için kullanılan bir yöntem gösteriyor. Enjeksiyon kurulum ve toraks içine enjekte dsRNA manipüle tekniği gösterilmiştir.

Yetişkin Sivrisinekler (A. gambiae) RNAi Tahliller için protokol

Kemirgen sıtma parazitleri Genetik haçlar sivrisineklerin genetik olarak iki farklı parazitler besleyerek yapılmaktadır. Rekombinant döl sivrisinek enfekte farelerde ısırık izin sonra fare kandan klonlanmış. Bu video genetik haçlar üretmek nasıl...

Kemirgen Sıtma Parazitler Genetik Haç üretimi için protokol

RNA-Seq analizleri, model olmayan organizmalarda adaptif özelliklerin moleküler temellerini belirlemek için giderek daha önemli hale geliyor. Burada, diyapoz ve diyapoz olmayan Aedes albopictus sivrisinekleri arasında diferansiyel olarak ifade edilen genleri tanımlamak için bir protokol, sivrisinek yetiştiriciliğinden RNA dizilimine ve RNA-Seq verilerinin biyoinformatik analizlerine kadar açıklanmaktadır.

Asya Tiger Sivrisinek içinde Photoperiodic Diapause RNA-seq Analizler Deneysel ve Biyoinformatik Protokolü, Aedes albopictus

Boncuklarla aşılama yoluyla, tarif edilen teknik, hemolenf dolaşım sisteminde sivrisinek melanizasyon yanıtının uyarılmasını sağlar. Boncukları kaplayan melanin miktarı, immün yanıtın bir ölçüsü olarak diseksiyondan sonra ölçülebilir.

aşılanması<em&gt; Anofel gambiae</emMelanization Bağışıklık Tepkisi tetikleyebilecek ve Tedbir Boncuk&gt; ile Sivrisinekler

Wolbachia ile enfekte aedes aegypti sivrisinek arboviruses iletimini bastırmak için doğal nüfus serbest edilmektedir. Biz laboratuvar adaptasyon ve seçimi en aza indirmek önlemler alarak deneyler ve alan açıklaması, arka Ae. aegypti laboratuvarda Wolbachia enfeksiyonları ile yöntemleri açıklanmaktadır.

Aedes aegypti sivrisinek enfekte Wolbachia ile bakımını yapma

bipartit GAL4-UAS sistemi, Anopheles gambiae'de fonksiyonel genetik analize izin veren kontrollü bir mekansal şekilde gen ekspresyonunun değiştirilmesi için çok yönlü bir araçtır. Bu sistemi kullanmak için açıklanan prosedürler yarı standart bir klonlama stratejisi, floresan protein belirteçleri ve embriyo fiksasyonu için pupaların cinsiyetlenmesi ve taranmasıdır.

Anopheles gambiae'de Fonksiyonel Genetik için GAL4-UAS Sistemini Kullanma

Protokol, φC31 sistemini kullanarak Anopheles sıtma sivrisineklerinin genomunda bölgeye yönelik değişikliklerin nasıl eldeılacağını açıklar. Açıklanan değişiklikler, attP taşıyan yerleştirme hatlarının genomunda transgenik kasetlerin hem entegrasyonunu hem de değişimini içerir.

Sıtma Anopheles Vektörlerinde SiteYe Yönelik φC31 Aracılı Entegrasyon ve Kaset Değişimi

Steril böcek tekniği (SIT), kimyasal kontrollere dirençli olabilecek spesifik, tıbbi açıdan önemli sivrisinek popülasyonlarını kontrol etmek için kullanılır. Burada, Aedes aegypti sivrisineğini hedef alan operasyonel bir SIT programında salınmak üzere steril erkek sivrisineklerin kitlesel olarak yetiştirilmesi ve hazırlanması yöntemini açıklıyoruz.

Işınlanmış ve İşaretlenmiş Erkek Aedes aegypti Sivrisineklerinin Operasyonel Steril Böcek Tekniği Programında Salınıma Hazırlanması

Mikroenjeksiyon teknikleri, sivrisineklerin genomlarına eksojen genleri sokmak için gereklidir. Bu protokol, James laboratuvarı tarafından DNA yapılarını dönüştürülmüş sivrisinekler üretmek için Anopheles gambiae embriyolarına mikroenjeze etmek için kullanılan bir yöntemi açıklar.

Anopheles gambiae Embriyoları için Mikroenjeksiyon Yöntemi

Öğrenin Anopheles gambiae sivrisineklerinin laboratuvar ortamında yetiştirilme yöntemlerini. Bu teknik, sıcaklık ve nem kontrolü ile tüm yaşam evrelerini kapsar ve sıtma vektörü araştırmaları için temel oluşturur.

Sivrisinek Yetiştirme Protokolü (A. gambiae)

Daha fazla video keşfet