Name: Beurteilung der Gefäßfunktion bei Patienten mit chronischer Nierenerkrankung (Video) | JoVE Journal
Uploaded: 2014-06-16T14:00:00.000+00:00
Duration: 8 min 50 s
Description: Erfahren Sie die Bewertung der Gefäßfunktion bei Patienten mit chronischer Nierenerkrankung durch Ultraschall und Pulswellenanalyse. Diese Methode ermöglicht die Charakterisierung der endothelialen Funktion und arteriellen Steifigkeit.

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Die Autoren danken Nina Bispham für ihre technische Unterstützung. Diese Arbeit wurde von der American Heart Association (12POST11920023) und den NIH (K23DK088833, K23DK087859) unterstützt.

Dieses Protokoll folgt den Richtlinien des Colorado Mehrere Institutional Review Board (COMIRB). 1. Vorbereitung für Testing Session <ol><li> Die Teilnehmer sollten diese Einschränkungen für genaueste Messungen folgen: 12 Stunden schnell aus der Nahrung und Koffein, 12-Stunden-Zurückhaltung von der Übung, 12 h Zurückhaltung von Rauchen, sofern zutreffend,&gt; 4 Halbwertszeit von Zurückhaltung Medikamente, wenn möglich (nicht durchführbar sein, in ein Bevölkerung, wie CKD-Patienten) und Frauen vor der Menopause sollten in 1-7 Tagen des Menstruationszyklus, um hormonelle Einflüsse zu minimieren getestet werden. </li><li> Planen 500 ml der Spaltpuffer durch Zugabe von 2 ml 0,5 M Ethylendiamintetraessigsäure (EDTA), 0,05 g Heparin (180 USP Einheiten / mg) und 2,5 g Rinderserumalbumin zu 476,8 ml phosphatgepufferter Salzlösung (PBS) bei pH-Wert von 7,4. Dies kann bei 4 ° C mehrere Monate gelagert werden. </li><li> Schalten Sie Ultraschall, Computer-und der Nicht-invasive hämodynamischeWorkstation (NIHem; arterielle Steifheit Ausrüstung). Schließen Sie die Kabel Ausgabe des Ultraschall an den Computer R-Wellen-Trigger-Box. </li></ol> 2. Erhebung und Verarbeitung von Vascular Endothelial Cells <ol><li> Eine ausgebildete Krankenschwester oder Arzt führt die Sammlung (Schritte von 2,2 bis 2,5, 2.7) und ein Forscher sammelt und verarbeitet die Drähte (Schritte 2.6, 2,8 bis 2,19) </li><li> Bereiten Sie die Ellen Website mit einem Antiseptikum, gelten ein Tourniquet, suchen Vene und kanülieren mit einer 18 G-Katheter. Legen Sie ein heplock Adapter auf dem Ende des IV. </li><li> Setzen Sie auf sterile Handschuhe und legte sterile fenestrierten drapiert über die Website. </li><li> Platz 2 J-Drähte an den Vorhängen. Ziehen Sie den Bogen des &quot;J&quot;, die &quot;J&quot;-Form aus beiden Drähte abwickeln. </li><li> Die Kappe des heplock und Futtermittel J-Draht in die Vene ca. 8 cm. Hin und her schieben mehrmals, bevor Sie den Draht. Vermeiden Brutto Blut auf dem Draht. </li><li> Verwenden Sie Drahtschneider, um die Drähte schnippeln, so dass sie in einem Anfall50 ml konischen Röhrchen mit ~ 30 ml Spaltpuffer </li><li> Wiederholen Sie Schritt 2,5 für die zweite Leitung. </li><li> Wiederholen Sie Schritt 2.6 für die zweite Leitung. Zurück Rohr Nasslabor. </li><li> Schließe die Drähte mit einer Zange und halten Sie die Drähte im Inneren der Röhre, aber vor der Lösung. Für 10 Minuten, mit einem motorisierten Pipettierers immer wieder sammeln die Dissoziation Puffer aus der 50 ml konischen Röhrchen und lassen es so läuft es über die gesamte Länge der Leitungen zu spülen und die Drähte vibrieren, dann schütteln Sie überschüssige Flüssigkeit aus Drähten in die Röhre. </li><li> Zentrifuge für 7 min bei 400 × g und 4 ° C. </li><li> Bereiten Sie die Formaldehydlösung in Folie abgedeckt Rohr durch die Kombination von 100 ml Formaldehyd-Lösung + 900 ml PBS. </li><li> Langsam entfernen Rohr aus der Zentrifuge, schalten Sie die Vakuumpumpe, legen Sie eine Pipettenspitze am Ende der Saugschlauch und lassen ~ 400 ml in der Röhre, Staubsaugen den Rest, ohne das Pellet zu stören. </li><li> Mit Folie abdecken und Pipette 1 ml Formaldehyd-Lösung indas Rohr, um die Probe zu beheben. Resuspendieren Sie nicht. Inkubation für 10 min bei Raumtemperatur. </li><li> Bereiten 8 gleitet durch Markierung mit Thema und Studienbesuch Informationen und zeichnen ein Oval auf jeder Folie mit einem Pap-Stift. </li><li> 15 ml PBS resuspendieren und zentrifugieren Sie für 5 min bei 400 × g und 4 ° C. </li><li> Wiederholen Sie Schritt 2.15, fügen Sie 12 ml PBS resuspendieren und zentrifugieren für 6 min bei 400 x g und 4 ° C </li><li> Langsam entfernen Rohr aus der Zentrifuge, schalten Sie die Vakuumpumpe, legen Sie eine Pipettenspitze am Ende der Saugschlauch und lassen ~ 2 ml in der Röhre, Staubsaugen den Rest, ohne das Pellet zu stören. </li><li> Resuspendieren und Pipette gleichmäßig auf die acht Rutschen in den Bereichen oval. </li><li> Platz in Brutschrank bei 37 ° C für 5 Stunden und dann bei -80 ° C zu lagern, bis zur Analyse bereit (Proben wird gut für viele Jahre sein). </li></ol> 3. Beurteilung der MKS-BA und aPWV <ol><li> Haben Forschungsthema Veränderung in Einweg-Shorts und haben him / sie liegen in Rückenlage in einem ruhigen, schwach, klimatisierte Zimmer. </li><li> Legen Sie die entsprechende Anzahl von EKG für die spezifische Ultraschall und arterielle Steifheit Gerät (dieses Verfahren wird das nicht-invasive hämodynamische Workstation [NIHem], um die arterielle Steifigkeit, die vier Elektroden erfordert messen) und Blutdruckmanschette am Thema. </li><li> Nach 20 Minuten beginnen Blutdruckwerte. Führen Sie mindestens 3, und wiederholen, bis Messungen sind innerhalb von 5 mmHg, Ruhe-2 min zwischen jeder Lesung. </li><li> Beginnen Tonometrie durch Palpation der A. brachialis Puls und Platzierung der Tonometer zu brachial Wellenformen Aufnahme mit dem Software-Programm. </li><li> Wiederholen Sie für die radialen, Femur-und Halsschlagadern. </li><li> Messen Sie den Abstand zu jedem dieser Standorte aus der supersternal Kerbe mit einem Maßband (brachial, Radial-und Halsschlagader) und benutzerdefinierte Herrscher / Sattel (Femur). </li><li> Berechnen Karotis-Arm-, Karotis-Radial-, und Halsschlag-Oberschenkel-(aPWV) mit dem Software-Programm. </li><li> OrtUnterarm Blutdruckmanschette nur distal des Olecranon und Rekord mindestens 10 Herzzyklen der Grundlinie A. brachialis Ultraschallbilder und Blutströmungsmessung, mit einem Gefäß Software eingestellt auslösen Modus. Ein mechanischer Arm verwendet werden, um die Ultraschallsonde zu stabilisieren, falls gewünscht. </li><li> Pumpen Unterarm Blutdruckmanschette auf 250 mmHg und beginnen Timer. Weisen Sie die Teilnehmer, ganz still zu bleiben. </li><li> Starten Sie die Aufnahme Geschwindigkeiten mit einer Gefäß Software Satz auszulösen, wenn der Timer-Modus liest 04.45. Trigger lassen Sie die Manschette um 5:00 und ändern Sie den Ultraschall zur B-Modus (Durchmesser) Bilder aufnehmen, wenn die Uhr liest 05.10. </li><li> Aufnahme fortsetzen, bis die Uhr liest 07.00. </li><li> Nehmen Sie mindestens 10 Herzzyklen der Grundlinie A. brachialis Ultraschallbilder mit einer Gefäß Software eingestellt auslösen Modus. </li><li> Nehmen Thema Blutdruck. Wenn systolischer Blutdruck&gt; 100 mmHg, legen 0,4 mg Nitroglycerin sublingual unter dem Thema &amp;# 39, die Zunge und beginnen Timer, es sei denn, der Patient hat einen weiteren Kontraindikation. </li><li> Starten Sie die Aufnahme B-Modus (Durchmesser-Bilder), wenn die Uhr liest 03.00 Uhr mit der Gefäß Software eingestellt auslösen Modus. </li><li> Beenden Sie die Aufnahme, wenn die Uhr liest 08.00. </li><li> Überwachung der Blutdruck, bis sie zum Ausgangswert zurück </li></ol> 4. Vorbereitung menschlichen Nabelschnurvenenendothelzellen (HUVEC) Steuer Slides <ol><li> Wachsen HUVECs um den Durchgang 5-6 und ~ 80% Konfluenz. </li><li> Trypsinieren mit 3 ml Trypsin oder was auch immer notwendig ist, für die Schüssel / Kolben. </li><li> Trypsin zu neutralisieren, mit einem gleichen Volumen an Trypsin-Neutralisationslösung. </li><li> Zentrifuge bei 200 g für ca. 5 Min. und entfernen Trypsin und Neutralisationslösung von Vakuum. </li><li> Resuspendieren in ~ 10 ml PBS zu waschen. </li><li> Zentrifugieren bei 200 × g ~ 5 min. PBS entfernen. </li><li> PBS entfernen und zu beheben 1800 ul PBS + 200 ul Formaldehyd. </li><li> Resuspendieren in PBS (~ 10 ml). </li><li> Zentrifugieren bei 200 × g ~5 min. Entfernen PBS resuspendieren in einem geeigneten Volumen auf ~ 200 ul pro Folie hinzufügen. </li><li> Shop Objektträger bei -80 ° C bis zur Analyse bereit (Proben wird gut für viele Jahre sein). </li></ol> 5. Färbung von Vascular Endothelial Cells <ol><li> Nehmen Sie Dias von -80 ° C Gefrierschrank und warten 5 Minuten bei Raumtemperatur (dieses Verfahren für eine Charge von 10 Objektträger, auch ein Steuerschieber HUVEC). </li><li> Überschüssiges Wasser mit einer heiklen Aufgabe wischen (nicht berühren Zentrum von Rutschbahn). </li><li> Re-Hydrat die Folien durch Zugabe verändert PBS zu jeder Folie und lassen Sie sie für 10 min. </li><li> Während die Folien stehen, bereiten Sie 5% Esel-Serum und anderen Lösungen. <ol><li> Bereiten Sie 5% Esel-Serum durch Zugabe von 300 ul der Esel-Serum zu 5.700 ul veränderten PBS (bis zu einem pH-Wert von 7,4) für bis zu 10 Objektträger (erhöhen diesen Betrag für mehr). </li><li> Verdünnen Sie die primären Antikörper von Interesse in 1000 ul von 5% Serum. Zum Beispiel Nitrotyrosin und NADPHOxidase (1:300 und 1:1500) könnte als Marker für oxidativen Stress verwendet werden. </li><li> Bereiten sekundären AF568 durch Verdünnen 5 ul der AF568 zu 1.500 μll von 5% Serum. </li><li> Vorbereitung VE durch Verdünnen von 2 ul VE Cadherin Cadherin bis 1000 &amp;mgr; l 5% Serum. </li><li> Vorbereitung AF488 durch Verdünnen von 5 &amp;mgr; l VE-Cadherin zu 1000 &amp;mgr; l 5% Serum. </li><li> Halten AF568, AF488 VE Cadherin und unter Folie durch den gesamten Prozess und legen Sie dann auf Rocker in 4 ° C Kühlschrank während der Vorbereitung Rutschen. </li></ol></li><li> Nach 10 min Rehydrierung, trockenen Objektträger mit einer heiklen Aufgabe zu wischen. </li><li> Plus 5% Eselserum für 60 min und legen ein Stück Plastik Paraffinfilm über dem eingekreisten Bereich um eine vollständige Abdeckung der chemischen gewährleisten. </li><li> Entsorgen Sie die Plastikfolie Paraffin-und Trockenrutschen mit einer heiklen Aufgabe zu wischen. Nicht waschen. In primären Antikörper für 60 min und legen ein Stück Plastik Paraffinfilm über den eingekreisten Bereich zu gewährleisten,vollständige Abdeckung der chemischen. </li><li> Entsorgen Sie die Plastikparaffinfilm gründlich mit veränderten PBS aus Spritzflasche und genießen in Folie Spalten für 5 min. Während die Schieber Einweichen, verschieben Sie sie in einen dunklen Raum. Arbeiten in der Dunkelheit für alle weiteren Schritte. </li><li> Chemische Präparate mit Kimwipes, fügen AF568 (sekundärer Antikörper) für 45 Minuten und setzen Sie ein Stück Plastik Paraffinfilm über den eingekreisten Bereich um eine vollständige Abdeckung der chemischen gewährleisten. Cover von Licht. </li><li> Entsorgen Sie die Plastikparaffinfilm in der biohazard Abfallbehälter. Spülen Sie mit veränderten PBS aus Spritzflasche, und dann in Spalten einweichen für 5 min. </li><li> Chemische Präparate mit Kimwipes, dann fügen VE Cadherin 60 min und legen ein Stück Plastik Paraffinfilm über den eingekreisten Bereich um eine vollständige Abdeckung der chemischen gewährleisten. Cover von Licht. </li><li> Entsorgen Sie die Plastikparaffinfilm in der biohazard Abfallbehälter. Spülen Sie mit veränderten PBS aus Spritzflasche, und dann in Spalten einweichen für 5 min. </li><li> Chemische Präparate miteine heikle Aufgabe zu wischen, fügen AF488 für 30 min und legen ein Stück Plastik Paraffinfilm über den eingekreisten Bereich um eine vollständige Abdeckung der chemischen gewährleisten. Cover von Licht. </li><li> Entsorgen Sie die Plastikparaffinfilm in der biohazard Abfallbehälter. Spülen Sie mit veränderten PBS aus Spritzflasche, und dann in Spalten einweichen für 5 min. </li><li> Trocken-Folien mit einer heiklen Aufgabe wischen und lassen Folien für 20 Minuten trocknen. Cover von Licht. </li><li> Einen Tropfen nur fluoroshield Montagemedium mit 4 &#39;, 6-Diamidino-2-phenylindol Hydrochlorid (DAPI) zu jeder Folie abdecken und jeweils mit einem Deckglas. </li><li> Objektträger in 4 ° C Kühlschrank mit Folie abgedeckt. Imaging muss innerhalb von 48 Stunden abgeschlossen sein. </li></ol> 6. Imaging und Analyse der Vascular Endothelial Cells <ol><li> Bereiten Mikroskop zur Abbildung Bunt Endothelzellen nach Vorgaben des speziellen Mikroskop. Eine einzelne geblendet Techniker sollte eine bestimmte Protein für eine Fledermaus zu analysierench von Zellen. </li><li> Dias scannen systematisch. Identifizieren Endothelzellen durch positive Färbung für VE-Cadherin und bestätigen Kernintegrität durch positive Färbung für DAPI. </li><li> Bild 30 Zellen pro Objektträger für die spätere Analyse. Wiederholen Sie für jede Folie in der gefärbten Partie, einschließlich der HUVEC. </li><li> Analysieren der Intensität der Färbung für den primären Antikörper von Interesse unter Verwendung eines qualitativen Software. </li><li> Um die mögliche Verwechslung Wirkung Intensitätsunterschiede zwischen verschiedenen Färbung Färbungs Sitzungen Bericht Werte als Verhältnis der Proteinexpression in den gesammelten Endothelzellen auf die gleiche Protein-Expression in HUVEC minimieren. </li></ol>

Die Autoren erklären, dass sie keine finanziellen Interessen konkurrieren.

Beziehen präzise Ergebnisse für die MKS-BA und aPWV erfordert den Erwerb qualitativ hochwertige Ultraschallbilder und Druckwellenformen auf. Zentral ist dabei angemessene und kontinuierliche Schulung und Nutzung der einzelnen Verfahren durch den Bediener 44. Darüber hinaus ist es wichtig, so viele externe Variablen, die die Ergebnisse wie möglich durch die Standardisierung der Testsitzung (z. B. vor 12 Stunden fasten, klimatisierten Raum, etc.) 44,45 beeinflussen steuer...

Chronische Nierenerkrankungen (CKD) ist eine große öffentliche Gesundheit betreffen, die epidemische Ausmaße erreicht hat, beeinflussen ~ 11,5% der Bevölkerung allein in den Vereinigten Staaten ein. Das Risiko eines kardiovaskulären Todes oder eines kardiovaskulären Ereignisses bei Patienten mit CKD im Vergleich mit der allgemeinen Bevölkerung 4.2 deutlich erhöht. Obwohl Patienten mit CKD zeigen eine hohe Prävalenz von traditionellen kardiovaskulären Risikofaktoren, das nur erklärt, einen Teil ihrer erhöhten Inzidenz von kardiovaskulären Erkrankungen (CVD) 5. Vaskuläre Dysfunktion ist eine wichtige nicht-traditionellen kardiovaskulären Risikofaktor immer mehr die Anerkennung auf dem Gebiet der Nephrologie 6-9. Während viele Veränderungen mit der Entwicklung der arteriellen Dysfunktion beitragen, unter denen der größte Sorge sind die Entwicklung des vaskulären endothelialen Dysfunktion, am häufigsten als beeinträchtigt Endothel-abhängige Dilatation (EDD) bewertet und Versteifung des large elastische Arterien 10. Es gibt verschiedene Techniken, um EDD und großen elastischen Arteriensteifigkeit zu bewerten, aber die am häufigsten verwendet werden, sind Oberarmarterie flussvermittelte Dilatation MKS-BA und Aorten-Pulswellengeschwindigkeit (aPWV) sind. Eine andere häufig verwendete Technik, um beurteilen EDD ist die Messung Unterarmblutfluss Reaktion auf pharmakologische Wirkstoffe wie Acetylcholin mit Venenverschlussplethysmographie 11,12. Diese Methode erfordert jedoch Katheterisierung der Arteria brachialis, die mehr invasiv als MKS-BA ist und kann bei Patienten mit CKD kontraindiziert sein. Eine alternative Technik, um arterielle Steifheit zu bewerten ist, um die lokale arterielle Compliance (die Inverse der Steifigkeit) der Halsschlagader zu messen, obwohl dies nicht so weit verbreitet verwendet werden oder mit der klinischen Endpunkte aPWV 13 validiert. Patienten mit CKD zeigen sowohl eingeschränkter MKS BA 14-16 und erhöhte Aorten-Pulswellengeschwindigkeit aPWV 13,17,18, auch vor der Dialyse benötigen. Wichtig ist aus klinischer Sicht sind diese beiden nicht-invasive Maßnahmen der vaskulären Dysfunktion unabhängige Prädiktoren für zukünftige kardiovaskuläre Ereignisse und Mortalität sowohl bei Patienten mit CKD 19-21, sowie in anderen Populationen 22-26. Diese Techniken lassen sich Studium verschiedener Populationen in Gefahr, CVD, einschließlich Patienten mit CKD angewendet werden. Die genauen Mechanismen, durch die arterielle Dysfunktion entwickelt sich in CKD sind unvollständig verstanden; jedoch reduziert Stickstoffmonoxid (NO) Bioverfügbarkeit eine kritische Faktor 27-30 und ein gemeinsamer Mechanismus sowohl beeinträchtigt EDD und erhöhten arteriellen Steifigkeit 10,31. In CKD wird oxidativen Stress erhöht und trägt zur Reduzierung der NO-Bioverfügbarkeit 32-34. Oxidativer Stress gilt als mäßiger Bioverfügbarkeit von reaktiven Sauerstoffspezies (ROS), bezogen auf die antioxidative Schutz definiert. Physiologische Stimuli, inc.Luding entzündlichen Signalisierung fördern Oxidationsenzymsysteme ROS zu produzieren, einschließlich Superoxid-Anion (O 2 ● -) (z. B. die Oxidationsmittel-Enzym NADPH-Oxidase.) 35. Produktion von Superoxid führt schließlich zur Bioverfügbarkeit von Stickstoffmonoxid (NO) reduziert. Beeinträchtigte NO Bioverfügbarkeit kann wiederum dazu beitragen, die Entwicklung der CKD, wie endotheliale Dysfunktion ist ein unabhängiger Prädiktor des einfallenden CKD 36. Dies steht im Einklang mit Tier-Daten, die auf eNOS-Hemmung induziert Hypertonie (systemischen und glomerulären), glomeruläre Ischämie, Glomerulosklerose und Tubulointerstitielle 37 Verletzungen. Tatsächlich reduziert NO Bioverfügbarkeit notwendig erscheint für die Entwicklung und Progression von experimenteller Nierenerkrankung, die menschliche Krankheit imitiert, was auf eine wichtige Rolle für die endotheliale Dysfunktion in der menschlichen CKD 38,39. Marker der vaskulären oxidativen Stress in v beurteilenascular Endothelzellen aus menschlichen Versuchspersonen gesammelt, unter Verwendung einer Technik, die ursprünglich von Colombo et al. 40 entwickelt und modifiziert Dichtungen et al 41-43. Mit 2 sterile J-Leitungen werden die Zellen aus der Antekubitalvene gesammelt, zurückgewonnen, fixiert und später positiv als Endothelzellen identifiziert und für die Expression von Proteinen von Interesse unter Verwendung von Immunfluoreszenz analysiert. Wir bieten hier eine Diskussion dieser Methodik, die zu einer) Maßnahme MKS-BA verwendet werden kann; b) messen aPWV; c) messen vaskulären endothelialen Zellprotein Expression von Markern für oxidativen Stress. Der Schwerpunkt liegt auf Patienten mit CKD, chronischer Dialyse erfordert.

<table><tbody><tr><td>J-wire</td><td>St. Jude</td><td>404584</td><td>2 pro Kollektion</td></tr><tr><td>Einweg-Shorts (MediShorts)</td><td>Quick Medical</td><td>4507</td><td></td></tr><tr><td>Nicht-invasive hämodynamische Workstation (NIHem)</td><td>Cardiovascualr Engineering</td><td>N/A</td><td>Inklusive benutzerdefiniertem Lineal.&nbsp; Ein alternatives System ist der Sphygmocor</td></tr><tr><td>Ultrasound</td><td>G.E.</td><td>Modell: Vivid7 Dimension</td><td>Wir verwenden einen G.E., aber es gibt viele Firmen und Modelle</td></tr><tr><td>Gefäßsoftware (Vascular Imager)&nbsp;</td><td>Medizinische Bildgebung Anwendungen</td><td>N / A</td><td></td></tr><tr><td>R-Wave-Trigger-Box</td><td>Medizinische Bildgebung - N</td><td>/ A</td><td>maßgeschneidertes</td></tr><tr><td>Rapid Cuff Inflation System</td><td>Hokanson</td><td>Modell: Hokanson E20</td><td></td></tr><tr><td>Unterarm-Blutdruckmanschette</td><td>Hokanson</td><td>N / A</td><td>benutzerdefinierte Manschette mit 6,5 x 34 cm Blase</td></tr><tr><td>HUVECs</td><td>Invitrogren</td><td>C-015-5C</td><td></td></tr><tr><td>Eselsserum</td><td>Jackson</td><td>017-000-121</td><td></td></tr><tr><td>Pap</td><td>Pen Research Products International</td><td>195505</td><td></td></tr><tr><td>VE Cadherin</td><td>Abcam</td><td>ab33168</td><td></td></tr><tr><td>AF568</td><td>Life Technologies</td><td>A11011</td><td>abhängig von den Spezifikationen von microscpe&nbsp;</td></tr><tr><td>AF488</td><td>Life Technologies</td><td>A11034</td><td>abhängig von den Spezifikationen von microscpe&nbsp;</td></tr><tr><td>Nitrotyrosin-Antikörper</td><td>Abcam</td><td>ab7048</td><td></td></tr><tr><td>NADPH-Oxidase-Antikörper</td><td>Upstate</td><td>07-001</td><td></td></tr><tr><td>DAPI&nbsp;</td><td>Vector</td><td>H-1200</td><td></td></tr><tr><td>Zartes Arbeitstuch (Kimwipe)&nbsp;</td><td>Fisher Scientific</td><td>06-666-A</td><td></td></tr><tr><td>Paraffinfolie aus Kunststoff (Parafilm)</td><td>Fisher Scientific</td><td>13-374-10</td><td></td></tr><tr><td>Konfokales Mikroskop&nbsp;</td><td>Olympus</td><td>Modell: FV1000 FCS/RICS</td>, <td>es gibt viele Optionen&nbsp;</td></tr></tbody></table>

beurteilung der gefäßfunktion bei patienten mit chronischer nierenerkrankung

Assessment of Vascular Function in Patients With Chronic Kidney Disease

Patienten mit chronischer Nierenerkrankung (CKD) haben deutlich erhöhtes Risiko für Herz-Kreislauf-Erkrankungen (CVD) im Vergleich zu der allgemeinen Bevölkerung, und das ist nur teilweise durch CVD traditionellen Risikofaktoren erläutert. Vaskuläre Dysfunktion ist ein wichtiger nicht-traditionellen Risikofaktor, gekennzeichnet durch den vaskulären endothelialen Dysfunktion (am häufigsten als beeinträchtigte Endothel-abhängige Dilatation [EDD] beurteilt) und Versteifung der großen elastischen Arterien. Während verschiedene Techniken existieren, um EDD und großen elastischen Arteriensteifheit, beurteilen die am häufigsten verwendet werden, sind Oberarmarterie flussvermittelte Dilatation (FMD BA) und Aorten-Pulswellengeschwindigkeit (aPWV) sind. Beide nicht-invasive Maßnahmen der vaskulären Dysfunktion sind unabhängige Prädiktoren für zukünftige kardiovaskuläre Ereignisse bei Patienten mit und ohne Nierenerkrankung. Patienten mit CKD zeigen sowohl eingeschränkter MKS-BA und erhöhte aPWV. Während die genauen Mechanismen, durch die vaskuläre Dysfunktion Entlops in CKD sind unvollständig verstanden, erhöhten oxidativen Stress und eine anschließende Reduzierung der Stickoxid (NO) Bioverfügbarkeit wichtigen Beitrag. Zelluläre Veränderungen im oxidativen Stress kann durch das Sammeln von vaskulären Endothelzellen aus der Antekubitalvene und Mess Protein-Expression von Markern für oxidativen Stress mittels Immunfluoreszenz beurteilt werden. Wir bieten hier eine Diskussion dieser Methoden zur Bekämpfung der MKS BA, aPWV und vaskuläre Endothelzellen Protein-Expression zu messen.

FMD BA wird als die Spitzendurchmesseränderung der Arteria brachialis folgenden reaktiven Hyperämie quantifiziert. Somit wird der Durchmesser in Ruhe auf den Durchmesser nach dem Ende des 5-Minuten Blutdruckmanschette Verschlusszeit (Fig. 1) verglichen. Panel A zeigt eine repräsentative Ultraschallbild der Arteria brachialis, und Panel B zeigt eine Grafik der R-Welle gated Änderung im Durchmesser von Manschettenmitteilung zu 2 Minuten nach, als mit kommerziell erhältlichen Software erhalten. ...

Der Grad der vaskulären Dysfunktion beitragen und physiologischen Mechanismen können bei Patienten mit chronischer Nierenerkrankung durch Messen brachialis flussabhängigen Dilatation Aortapulswellengeschwindigkeit und vaskuläre Endothelzellen-Protein-Expression zu beurteilen.

Beurteilung der Gefäßfunktion bei Patienten mit chronischer Nierenerkrankung

Patients with chronic kidney disease (CKD) have significantly increased risk of cardiovascular disease (CVD) compared to the general population, and this ...

Das übergeordnete Ziel des folgenden Experiments besteht darin, die Gefäßfunktion bei Patienten mit chronischer Nierenerkrankung zu beurteilen. Dazu werden zunächst vaskuläre endotheliale Zellen von Patienten gewonnen. Anschließend wird die aortale Pulswellengeschwindigkeit zur Messung der Steifheit großer elastischer Arterien bestimmt. Danach wird die flussvermittelte Dilatation der Arteria brachialis gemessen, um die vaskuläre endotheliale Funktion zu bewerten.Letztlich können Ergebnisse erzielt werden, die die Funktion des vaskulären Endothels charakterisieren. Diese Methode kann helfen, zentrale Fragen im vaskulären Forschungsbereich zu beantworten, beispielsweise, was auf zellulärer Ebene mit der Expression verschiedener Proteine geschieht. In der Regel haben Personen, die mit dieser Methode noch nicht vertraut sind, Schwierigkeiten, da umfangreiche Übung und Schulung erforderlich sind, um die Ultraschallbildgebung zu beherrschen.Die Durchführung des Verfahrens wird Lonnie Perino, eine wissenschaftliche Mitarbeiterin aus meinem Labor, demonstrieren. Zunächst bereiten Sie die Einstichstelle mit einem topischen Antiseptikum vor. Anschließend legen Sie sterile Fensterlaken über d

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Forschung

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