Name: Submucosa 및 성인 마우스의 Lamina Propria 장의 Glial 세포의 고립 (동영상) | JoVE Journal
Uploaded: 2018-08-15T13:00:00.000+00:00
Duration: 7 min 53 s
Description: 배우세요 성인 마우스 장 점막하층과 고유층에서 장신경교세포를 비효소적 방법으로 분리하는 기술입니다. 이 방법은 신경과학 연구에서 세포 기능 분석을 위한 고도로 농축된 배양을 제공합니다.

ai_agent_IP

ai_agent

maintenance

instantTrialDurationMinutes

isBiopharma

enableNewMyJoveSectionDesign

educationFeatures

seoMetaApi

ai_copilot_institution_blacklist

ai_chat_institution_blacklist

freeAccessWindow

ssoRoleCapture

scheduledMaintenanceBanner

joveLabsFeatures

disable_autoplay_for_bots

extended_trial_duration

5 minutes

저자는 인정 (JLM)에 R37 DK045729, R01 AR060837 (HX)를 미시간 위장 연구 센터 분자 코어 P30 DK034933의 대학에서 지원 하고자 합니다.

설명 하는 모든 동물 실험 동물의 관리 및 사용에 미시간 대학 위원회에 의해 승인 되었다.
1. 멸 균 폴 리-D-리 (PDL)와 Laminin 솔루션의 준비
<ol><li>셀 격리 전에 적어도 1 일 폴 리-D-리 (PDL)와 laminin 코팅 접시를 준비 합니다. 참고: 6-잘, 12-잘 접시 실험 목표에 따라 준비 되었다. 일반적으로 12-잘 접시 서쪽 오 점;를 사용 하 여 정량 분석을 위해 사용 했다 반면, 6 잘 플레이트 immunohistochemistry 위해 압력가 마로 소독 (살 균) coverslips를 사용 했다. 24-잘 접시 EGCs 캘리포니아2 + 에 대 한 문화를 사용한 영상 유출.</li>
	<li>재고 솔루션 DNase 무료 고 공기 HEPA 필터와 후드를 조직 문화에서 RNase 무료 물 초순 조직 문화 등급을 희석.</li>
	<li>
살 균 유리 coverslips
	<ol>
<li>소독 집게와는 coverslip를 누른 coverslips 15 분 조직 문화 후드에 증발 하 고 6 잘 플레이트에 장소를 허용 에탄올에 대 한 100% 에탄올의 비 커에 담가.</li>
		<li>또는 개별적으로 2mm 두께 압 종이 플라스틱 용기 그리고 압력솥에 여러 coverslips를 배치 합니다.</li>
	</ol>
</li>
</ol>2. 코팅 판
참고: 메 마른 조직 문화 층 류 두건 아래이 단계를 수행 합니다.
<ol><li>1 mg/mL PDL 재고를 해 동 하 고 최종 농도 100 µ g/mL를 무 균, 조직 문화 학년 물 1시 10분 희석. 6 잘 플레이트, 12-잘 접시의 한 잘 커버를 1 mL 및 24-잘 접시에서 한 잘 0.5 mL 코트 잘 당 2 mL를 사용 합니다. -20 ° c.에 12 mL aliquots에 나머지 희석된 PDL를 저장</li>
	<li>적어도 1 시간에 대 한 웰 스 코트 PDL 허용 후 살 균 피 펫으로 PDL을 제거 합니다. 공기 접시 조직 문화 층 류 두건 아래 완전히 건조 허용 합니다. 참고: 제거한 후 살 균 피 펫으로 PDL 솔루션, 그것은 수 두 번 사용 1 주일 이내 더 0.22 μ m 필터를 통과 하 고 4 ° c.에 저장 후</li>
	<li>Laminin 재고 젤 형성을 피하기 위해 얼음에 녹여 참고: Undiluted laminin이 된다 8 ° c.의 위 예 열 때 고체</li>
	<li>Laminin 주식 (0.5 mg/mL) 1: 50으로 살 균 Dulbecco 인산 염 버퍼 염 분 (DPBS) 10 µ g/mL의 최종 농도를 희석. -20 ° c.에 12 mL aliquots에 희석된 laminin를 저장</li>
	<li>포함 하는 웰 스에 희석된 laminin 건조 PDL 추가 합니다. 6 잘 표면 및 12-잘 접시의 바닥을 커버 0.5 mL을 1 mL을 사용 합니다. Coverslips, 400 µ L 희석된 laminin의 표면 범위를 달성 하기 위해 coverslips를 추가 합니다.</li>
	<li>접시 같은 날 (빠른 코팅) 사용 하는 경우 2 시간, 37 ° C에서 코팅된 접시를 품 어. 아니라면, 번호판, 플라스틱 포장으로 밀봉 하 고 하룻밤 4 ° C (느린 코팅)에서 저장 합니다. 참고: 씰링은 건조 및 오염 방지 하기 위해 중요 합니다.</li>
	<li>신중 하 게 표면 긁힘 방지를 피펫으로 laminin 솔루션을 제거 합니다. 부드럽게 세척 살 균 DPBS와 세 번 웰 스.</li>
	<li>각 완전 한 폐해 성장 미디어 고 37 ° C에서 번호판 EGC 정지를 추가할 준비가 될 때까지 유지 추가 합니다. 참고: 폴 리 D lysine과 laminin 코팅 접시 4 ° c.에 3 일 동안 저장 될 수 있다 코트 판 몇 일 앞두고 4 ° C에서 저장, 세척 살 균 DPBS와 번호판 세 번. 최종 세척 후 각 잘 하 메 마른 DPBS 2 mL를 추가 합니다. Parafilm와 4 ° c.에 게 접시를 봉인 그것은 laminin를 건조 하지 않습니다 보장 하기 위해 필수적 이다.</li>
</ol>3입니다. 격리 솔루션의 준비
<ol><li>EDTA/HEPES/DPBS 분리 솔루션을 준비 합니다. 솔루션의 500 ml (칼슘, 마그네슘) 없이 메 마른 DPBS 10 mM HEPES 및 5 mM EDTA의 최종 솔루션을 사용 합니다. DPBS의 490 ml 1 M HEPES 버퍼의 5 mL 및 0.5 M EDTA 재고 솔루션의 5 mL를 추가 합니다. 사용 될 때까지 4 ° C에서 저장 합니다.</li>
	<li>표 1에 나열 된 시 약을 사용 하 여 glial 세포 물의 resuspension 미디어를 준비 합니다.</li>
	<li>표 2에 나열 된 시 약을 사용 하 여 폐해 성장 미디어를 준비 합니다. 참고: 폐해 성장 미디어 GDNF를 포함 하는 4 ° c.에 1 주 동안 저장 될 수 있다</li>
</ol>4입니다. 장 세그먼트의 제거
참고: 마우스 isoflurane 드롭 메서드는 중요 한 장기의 제거에 의해 식품 및 euthanization 이전 물이 허용 되었다. C57BL/6 쥐 나이의 8 주 이상 사용 되었다. 두 남녀는 준비에 눈에 띄는 차이 없이 사용 되었다.
<ol><li>Isoflurane의 과다와 함께 마우스를 안락사 하 고 배치 해 트레이에 부정사. 사지를 고정 하 고 70% 에탄올과 복 부를 소독. 집게와 피부 천막 한 다음가 위로 복 부를 엽니다.</li>
	<li>간 들어올리고 원심 위/pylorus 식별 합니다. 7cm 근 내장의 제거. 수 소장을 찢 어 하지 않도록 주의 하십시오.</li>
	<li>
mesentery를 멀리 자르는 동안는 pylorus 집게로 잡으십시오.
	<ol>
<li>긁어 멀리 부착 췌는 시저의 뒤를 가진 무뚝뚝한 해 부를 사용 합니다.</li>
		<li>캘리포니아2 + 또는 Mg2 + (그림 1A) 없이 얼음 처럼 차가운 DPBS로 장 세그먼트를 놓습니다. 참고: 다른 세그먼트의 창 자 또는 결 장 또한 제거할 수 있습니다 동일한 기술을 사용 하 여.</li>
	</ol>
</li>
	<li>사용 5 또는 10 mL 주사기를 얼음으로 지저분한 내용을 플러시 무뚝뚝한 끝 20 G 바늘에 연결 된 차가운 DPBS (그림 1B).</li>
	<li>3 cm 세그먼트 처음 스미스 그 외 여러분 에 의해 설명 된 기술을 사용 하 여 경도 근육을 제거 하 내장을 나눕니다 12 Sundaresan 그 외 여러분 에서 수정 하 고 10. 참고: 최대 2 개의 마우스에서 장 세그먼트 HEPES/EDTA/DPBS 격리 솔루션의 30 mL 당 사용 됩니다.</li>
	<li>면 끝에서 나무 막대기를 별도로 약 4 cm를 끊다. DPBS (그림 1C)에 나무 막대기를 담근 다.</li>
	<li>부드럽게 젖은 스틱 (그림 2A-C)에 장 세그먼트 중 하나이 구 요.</li>
	<li>부착 mesentery 아직도 바늘 코 집게 (그림 2D)를 사용 하 여 연결을 제거 합니다.</li>
	<li>
깨끗 한 면도날을 사용 하 여 또는 두 세로 닉스는 mesentery가 내장 따라 있도록 메스 연결 (그림 2E).
	<ol>
<li>젖은 DPBS 면 끝. 경도 근육/myenteric 총 (LMMP)를 풀고 근육을 따라 경도 침수 면 팁을 문질러. 그런 다음 이동 면 팁을 가로로 LMMP 제거 하는 동안 멀리 장 세그먼트의 길이 따라 원형 근육에서 LMMP를 애타게.</li>
		<li>중간 및 네 번째 손가락 (그림 2F) 세그먼트를 안정화 하면서 엄지손가락과 집게손가락 사이 막대기의 끝을 잡으십시오. 완료 되 면는 LMMP 장 세그먼트에서 쉽게 껍질 것입니다.</li>
	</ol>
</li>
	<li>삭제는 LMMP 장 튜브에서 제거 하 고 myenteric 총에서 EGCs를 수확 하지 않으면 면봉에 연결 된 원하는.</li>
	<li>나무 막대기에서 제거 하는 경도 장 세그먼트 오픈 혹 평에 면도날을 사용 합니다.</li>
	<li>얼음에 DPBS 박탈된 장 조직 (주로 점 막과 submucosa 플러스 원형 근육)을 저장 합니다. 모든 장 세그먼트 준비가 될 때까지 단계 4.4-4.11을 반복 합니다.</li>
</ol>5입니다. 상피 점 막의 제거
<ol><li>좋은 위 창 자 ~0.5 cm의 작은 조각으로 잘라.</li>
	<li>장소 살 균 50 mL 원뿔 원심 분리기 튜브 30 mL의 얼음 처럼 차가운 EDTA/HEPES/DPBS 솔루션을 포함 하는 조직.</li>
	<li>10 분 ~ 60 분 당 젖 힌 채에 4 ° C에서 포함 하는 조직 솔루션을 바위.</li>
	<li>미리 한 번 위아래로 EDTA/HEPES/DPBS 버퍼를 pipetting으로 5 mL 플라스틱 피 펫을 축 축 하 게 하 고 다음 조직 플라스틱 버퍼 정지 (분쇄) 위아래로 20 번을 미리 moistened 피 펫을 사용 하 여 상피 점 막 꺼내 려.</li>
	<li>100 µ m 나일론 셀 스 트레이너를 통해 혼합물을 붓는 하 여 EDTA 외피에서 조직을 수집 합니다. 폐기는 혼 탁 한 점액 가득한 자형 (그림 3).</li>
	<li>얼음의 30 mL를 포함 하는 새로운 50 mL 원뿔 원심 분리기 튜브에는 스 트레이너에서 유지 조직 장소 차가운 EDTA/HEPES/DPBS 바늘 코 집게를 사용 하 여.</li>
	<li>락을 10 분 ~ 60 젖 힌 채를 추가 상피 점 막에서 분 당에서 4 ° C에서 조직 하 여 EDTA/HEPES/DPBS 외피를 두 번 반복 합니다.</li>
	<li>미리 해당 버퍼와 함께 5 mL 피 펫을 축 축 하 게 하 고 점 막 세포를 꺼내 려 20 번 위아래로 조직 정지 플라스틱. 참고: 조직 상피의 제거 이다 피펫으로 내부에 집착 하는 경향이 됩니다.</li>
	<li>100 µ m 나일론 셀 스 트레이너를 통해 혼합물을 붓는 의해 두 번째 부 화 후 조직을 수집 하 고 삭제를 통해 흐름. 두 번째 흐름 통해 첫 번째 (그림 3) 보다 눈에 띄게 덜 혼 탁 한 이어야 한다.</li>
	<li>반복 때까지 솔루션은 거의 10 분 EDTA 외피 취소 (조직의 양과 분쇄의 효과 따라 약 3-4 외피) (그림 3).</li>
</ol>6. 고 Lamina Propria Submucosa에서 장의 Glial 세포의 수집
<ol><li>15 mL 원뿔 원심 분리기 관 상용 셀 복구 솔루션 및 4 ° c.에 25-30 분 동안 바위의 5 mL를 포함 하는 조직 나일론 여과기에서 전송</li>
	<li>
Lamina propria에서 장의 glial 세포 분열을 부드럽게 10 x triturate
	<ol>
<li>깨끗 한 50 mL 튜브에서 filtrate 수집 및 40 µ m 필터를 통해 필터링 합니다.</li>
		<li>조직 DPBS의 1 mL와 함께 나일론 필터에 린스.</li>
		<li>조직의 삭제 하 고 전송 ~ 5-6 깨끗 한 15 mL 원뿔 원심 분리기 튜브에 여과 액의 mL.</li>
		<li>2000 x g 4 ° c.에서 5 분 동안 스윙 양동이 원심 분리기에서 여과 액을 스핀</li>
	</ol>
</li>
	<li>다시 일시 중단 glial 세포 포함 된 펠 릿 1 mL 이상 물의 resuspension 버퍼에에서 부드럽게 500 µ L 피 펫 팁 위쪽 및 아래쪽 펠 릿 pipetting으로. 거품을 소개 하지 마십시오. 참고: 우물과 번호판의 수에 대 한 필요에 따라 물의 resuspension 볼륨을 조정 합니다. 예를 들어 1.2 mL 한 6-잘 접시; 2.4 mL 두 6 잘 플레이트; 2.4 mL 1 12-잘 접시입니다.</li>
	<li>폐해 성장 매체를 포함 하는 12-잘 코팅 PDL laminin 번호판에 대 한 6-잘 또는 100 µ L의 각 음에 세포 현 탁 액의 200 µ L 플라스틱.</li>
	<li>접시에 셀을 추가 하 고 준수 하는 셀의 최대 수 있도록 37 ° C 배양 기에서 배치 후 요리를 방해 하지 마십시오. 참고: 셀의 건강 준비 6-8 h 이내 첨부 것입니다 하지만 부드럽게 비 부착 한 세포와 함께 미디어를 pipetting으로 미디어를 변경 하기 전에 적어도 24 시간 기다립니다.</li>
	<li>3-4 일 후에 그들은 문화 (그림 4)에 배치 된 실험에 대 한 셀을 사용 합니다. 특정 단백질 마커 (표 3)에 대 한 관심의 항 체를 사용 하 여 immunofluorescent 분석을 수행 합니다. 예를 들어, GFAP, S100b 및 Sox10 p75NTR 여기 사용 되었다. E cadherin 또는 알파 부드러운 근육 말라 항 체는 다른 세포 유형에서 오염 정도 평가 하기 위해 사용 되었다.</li>
</ol>7. immunofluorescent 얼룩
<ol><li>문화에서 미디어를 발음 하 고 PBS로 두번 씻어.</li>
	<li>4 %paraformaldehyde 실 온에서 20 분에 대 한 문화를 수정.</li>
	<li>정착 액을 제거 하 고 PBS로 3 회를 씻어.</li>
	<li>0.2%를 포함 하는 PBS를 가진 세포를 permeabilize 실 온에서 트라이 톤 X-100.</li>
	<li>반대로 닭 IgY, 반대로 토끼 또는 실 온에서 2 h에 대 한 반대로 마우스 IgG의 구성 차단 솔루션 permeabilized 셀을 품 어.</li>
	<li>
셀 주 항 체 하룻밤, 예를 들어, GFAP (1:1, 000)을 품 어.
	<ol>
<li>3 회 PBS로 세포를 씻어. 만약 colocalization 수행 단계 7.7로 이동 합니다.</li>
	</ol>
</li>
	<li>실내 온도에 적어도 2 시간에 대 한 기본 항 체의 다음 세트를 품 어 하지만 선호 4 ° c.에서 하룻밤 토끼 반-S100 1:1000 희석 또는 마우스 안티-p75NTR의 1: 500 희석 사용 합니다. 참고: 모든 항 체는 PBS에 희석.</li>
	<li>3 회 1 차 항 체를 제거 하는 PBS 가진 세포를 씻어. 그런 다음 적절 한 붙일 태그 2 차 항 체 (표 3) 실 온에서 2 h와 함께 씻어 서 세포를 품 어.</li>
	<li>2 차 항 체를 제거 하는 PBS로 3 번 씻어.</li>
	<li>DAPI와 설치 미디어의 1-2 방울을 사용 하 여 슬라이드에 coverslips를 탑재 하 고 형광 현미경으로 세포를 봅니다.</li>
</ol>8. Cytometry
<ol><li>한번 DPBS 셀을 rinsing 하 여 cytometry에 대 한 부착 glial 세포를 제거 하 고 제조 업체의 프로토콜 당 0.25% trypsin EDTA를 추가. 완전 한 glial 세포 성장 매체에 셀을 수집 하 여 3 분 종료 소화에 대 한 37 ° C에서 트립 신-EDTA 용액에 세포를 품 어.</li>
	<li>5 분에 대 한 400 x g 에서 centrifuging 여 세포를 수집 하 고 다시 PBS에 셀을 일시 중단.</li>
	<li>10 분 동안 4 %paraformaldehyde 셀을 수정 하 고 permeabilize 0.2% 트라이 톤 X-100 PBS에 단계 7.4에 설명 된 대로.</li>
	<li>1 %BSA 20 분, 예를 들어, 당나귀 안티 닭 IgY (IgG) (H + L) (1:1, 000) 또는 당나귀 안티 염소 IgG (H + L) (1:1, 000)에 대 한 조직의 특정 면역 글로불린을 포함 하는 PBS를 가진 세포를 차단 합니다.</li>
	<li>셀 주 항 체 GFAP (1:2, 000), 품 어 E-cadherin (1:400), α-부드러운 근육 걸 (1: 500), 또는 Pgp9.5 (1: 500) 4 ° c.에서 하룻밤</li>
	<li>
PBS 가진 항 체를 씻어.
	<ol>
<li>붙일 태그가 이차 항 체 30 분 동안 실 온에서 incubated와 항 원-항 체 복합물을 품 어.</li>
		<li>이차 항 체와 incubated 셀의 별도 약 수를 사용 하 여 isotype 컨트롤 역할을. 셀의 두 인구 씻어 고 cytometry 이전 PBS에 resuspended.</li>
		<li>라이브 셀에 게이팅 하 여 교류 cytometer 세포의 2 개의 인구를 분석.</li>
	</ol>
</li>
</ol>9.는 hGFAP에서 마우스 조직 준비-Cre:tdTomato 쥐
참고: Lox-정지-Lox-tdTomato cDNA로 사 로커 스22,23 (잭슨 실험실, #007914)에서 표현 하 고 생 형광 Cre recombinase (hGFAP-Cre)를 표현 하는 마우스를 사육 하는 때를 생성 합니다. 현장에서 분석 언된 조직 단면도 생성 하 여 수행 됩니다.
<ol><li>1 시간에 대 한 4 %paraformaldehyde 장 조직 수정 하 고 하룻밤 PBS에서 1 M 자당에서 탈수.</li>
	<li>상업적으로 최적의 절단 조직 (10 월) 복합 구성 10% 폴 리 비닐 알콜의 구입에서 조직 포함 및 4.2% 폴 리 에틸렌 글리콜, 및 다음 액체 질소에서 동결.</li>
	<li>5 µ m cryosections를 준비 하 고 DAPI 미디어를 장착 한 antifade를 사용 하 여 탑재.</li>
	<li>hGFAP에서 EGCs cytometry에 대 한 준비-Cre:tdTomato+ 마우스 4.1-6.5 단계에 설명 된 대로.</li>
	<li>3 일 후에 단계 8.1에서 문화 접시에서 셀 trypsinize 하 고 4 %paraformaldehyde 10 분 수정.</li>
	<li>세포는 hGFAP에서 분리 하는 세포와 병렬로 Cre 부정 쥐에서 분리 분석-교류 cytometer에 Cre:tdTomato+ 쥐. 참고: 빌 게이츠는 죽은 세포와 파편을 피하기 위해 건설 되었다.</li>
</ol>10. 캘리포니아2 + 영상 유출
<ol><li>3 µ M와 24-잘 접시에 도금 EGCs를 품 어 Fluo-4-오전 30 분 동안 37 ° C에서.</li>
	<li>이미지 회전 디스크 confocal 현미경 및 480의 여기 파장을 사용 하 여 상업적으로 구입한 Tyrode의 솔루션에서 Ca2 + 신호 CCK 또는 gastrin 펩 티 드를 추가한 후 (F480) nm. 이미지 분석이 알려졌다 Sundaresan 외. 10 .</li>
</ol>

<ol><li>Grubisic, V., Gulbransen, B. D. <a target="_blank" href="http://www.ncbi.nlm.nih.gov/pubmed?term=((Enteric+glia%3A+the+most+alimentary+of+all+glia%5BTitle%5D)+AND+%22Journal+of+Physiology%22%5BJournal%5D)">Enteric glia: the most alimentary of all glia.</a> Journal of Physiology. 595 (2), 557-570 (2017).</li>
<li>Gulbransen, B. D., Sharkey, K. A. <a target="_blank" href="http://www.ncbi.nlm.nih.gov/pubmed?term=((Novel+functional+roles+for+enteric+glia+in+the+gastrointestinal+tract%5BTitle%5D)+AND+%22Nature+Reviews+Gastroenterology+%26+Hepatology%22%5BJournal%5D)">Novel functional roles for enteric glia in the gastrointestinal tract.</a> Nature Reviews Gastroenterology & Hepatology. 9 (11), 625-632 (2012).</li>
<li>Rao, M., et al. <a target="_blank" href="http://www.ncbi.nlm.nih.gov/pubmed?term=((Enteric+Glia+Regulate+Gastrointestinal+Motility+but+Are+Not+Required+for+Maintenance+of+the+Epithelium+in+Mice%5BTitle%5D)+AND+%22Gastroenterology%22%5BJournal%5D)">Enteric Glia Regulate Gastrointestinal Motility but Are Not Required for Maintenance of the Epithelium in Mice.</a> Gastroenterology. 153 (4), 1068-1081 (2017).</li>
<li>Rao, M., et al. <a target="_blank" href="http://www.ncbi.nlm.nih.gov/pubmed?term=((Enteric+glia+express+proteolipid+protein+1+and+are+a+transcriptionally+unique+population+of+glia+in+the+mammalian+nervous+system%5BTitle%5D)+AND+%22Glia%22%5BJournal%5D)">Enteric glia express proteolipid protein 1 and are a transcriptionally unique population of glia in the mammalian nervous system.</a> Glia. , (2015).</li>
<li>McClain, J., et al. <a target="_blank" href="http://www.ncbi.nlm.nih.gov/pubmed?term=((Ca2%2B+responses+in+enteric+glia+are+mediated+by+connexin-43+hemichannels+and+modulate+colonic+transit+in+mice%5BTitle%5D)+AND+%22Gastroenterology%22%5BJournal%5D)">Ca2+ responses in enteric glia are mediated by connexin-43 hemichannels and modulate colonic transit in mice.</a> Gastroenterology. 146 (2), 497-507 (2014).</li>
<li>Cunha Franceschi, R., et al. <a target="_blank" href="http://www.ncbi.nlm.nih.gov/pubmed?term=((Enteric+glial+reactivity+to+systemic+LPS+administration+Changes+in+GFAP+and+S100B+protein%5BTitle%5D)+AND+%22Neuroscience+Research%22%5BJournal%5D)">Enteric glial reactivity to systemic LPS administration Changes in GFAP and S100B protein.</a> Neuroscience Research. 119, 15-23 (2017).</li>
<li>Kabouridis, P. S., et al. <a target="_blank" href="http://www.ncbi.nlm.nih.gov/pubmed?term=((Microbiota+controls+the+homeostasis+of+glial+cells+in+the+gut+lamina+propria%5BTitle%5D)+AND+%22Neuron%22%5BJournal%5D)">Microbiota controls the homeostasis of glial cells in the gut lamina propria.</a> Neuron. 85 (2), 289-295 (2015).</li>
<li>Yu, Y. B., Li, Y. Q. <a target="_blank" href="http://www.ncbi.nlm.nih.gov/pubmed?term=((Enteric+glial+cells+and+their+role+in+the+intestinal+epithelial+barrier%5BTitle%5D)+AND+%22World+Journal+of+Gastroenterology%22%5BJournal%5D)">Enteric glial cells and their role in the intestinal epithelial barrier.</a> World Journal of Gastroenterology. 20 (32), 11273-11280 (2014).</li>
<li>Clairembault, T., et al. <a target="_blank" href="http://www.ncbi.nlm.nih.gov/pubmed?term=((Enteric+GFAP+expression+and+phosphorylation+in+Parkinson%27s+disease%5BTitle%5D)+AND+%22Journal+of+Neurochemistry%22%5BJournal%5D)">Enteric GFAP expression and phosphorylation in Parkinson's disease.</a> Journal of Neurochemistry. 130 (6), 805-815 (2014).</li>
<li>Sundaresan, S., et al. <a target="_blank" href="http://www.ncbi.nlm.nih.gov/pubmed?term=((Gastrin+Induces+Nuclear+Export+and+Proteasome+Degradation+of+Menin+in+Enteric+Glial+Cells%5BTitle%5D)+AND+%22Gastroenterology%22%5BJournal%5D)">Gastrin Induces Nuclear Export and Proteasome Degradation of Menin in Enteric Glial Cells.</a> Gastroenterology. 153, 1555-1567 (2017).</li>
<li>Gulbransen, B. D. <a target="_blank" href="http://www.ncbi.nlm.nih.gov/pubmed?term=((Enteric+Glia%3A+The+Origin+of+Duodenal+Gastrinomas%3F%5BTitle%5D)+AND+%22Gastroenterology%22%5BJournal%5D)">Enteric Glia: The Origin of Duodenal Gastrinomas?</a> Gastroenterology. , (2017).</li>
<li>Smith, T. H., Ngwainmbi, J., Grider, J. R., Dewey, W. L., Akbarali, H. I. <a target="_blank" href="http://www.ncbi.nlm.nih.gov/pubmed?term=((An+in+vitro+preparation+of+isolated+enteric+neurons+and+glia+from+the+myenteric+plexus+of+the+adult+mouse%5BTitle%5D)+AND+%22Journal+of+Visualized+Experiments%22%5BJournal%5D)">An in vitro preparation of isolated enteric neurons and glia from the myenteric plexus of the adult mouse.</a> Journal of Visualized Experiments. (78), (2013).</li>
<li>Fried, D. E., Gulbransen, B. D. <a target="_blank" href="http://www.ncbi.nlm.nih.gov/pubmed?term=((In+situ+Ca2%2B+imaging+of+the+enteric+nervous+system%5BTitle%5D)+AND+%22Journal+of+Visualized+Experiments%22%5BJournal%5D)">In situ Ca2+ imaging of the enteric nervous system.</a> Journal of Visualized Experiments. (95), (2015).</li>
<li>Bernstein, C. N., Vidrich, A. <a target="_blank" href="http://www.ncbi.nlm.nih.gov/pubmed?term=((Isolation%2C+identification%2C+and+culture+of+normal+mouse+colonic+glia%5BTitle%5D)+AND+%22Glia%22%5BJournal%5D)">Isolation, identification, and culture of normal mouse colonic glia.</a> Glia. 12 (2), 108-116 (1994).</li>
<li>Jaeger, C. B. <a target="_blank" href="http://www.ncbi.nlm.nih.gov/pubmed?term=((Isolation+of+enteric+ganglia+from+the+myenteric+plexus+of+adult+rats%5BTitle%5D)+AND+%22Journal+of+Neural+Transplantation+%26+Plasticity%22%5BJournal%5D)">Isolation of enteric ganglia from the myenteric plexus of adult rats.</a> Journal of Neural Transplantation & Plasticity. 5 (4), 223-232 (1995).</li>
<li>Almond, S., Lindley, R. M., Kenny, S. E., Connell, M. G., Edgar, D. H. <a target="_blank" href="http://www.ncbi.nlm.nih.gov/pubmed?term=((Characterisation+and+transplantation+of+enteric+nervous+system+progenitor+cells%5BTitle%5D)+AND+%22Gut%22%5BJournal%5D)">Characterisation and transplantation of enteric nervous system progenitor cells.</a> Gut. 56 (4), 489-496 (2007).</li>
<li>Ruhl, A., Trotter, J., Stremmel, W. <a target="_blank" href="http://www.ncbi.nlm.nih.gov/pubmed?term=((Isolation+of+enteric+glia+and+establishment+of+transformed+enteroglial+cell+lines+from+the+myenteric+plexus+of+adult+rat%5BTitle%5D)+AND+%22Neurogastroenterology+%26+Motility%22%5BJournal%5D)">Isolation of enteric glia and establishment of transformed enteroglial cell lines from the myenteric plexus of adult rat.</a> Neurogastroenterology & Motility. 13 (1), 95-106 (2001).</li>
<li>Boyen, G. B., et al. <a target="_blank" href="http://www.ncbi.nlm.nih.gov/pubmed?term=((Distribution+of+enteric+glia+and+GDNF+during+gut+inflammation%5BTitle%5D)+AND+%22BMC+Gastroenterology%22%5BJournal%5D)">Distribution of enteric glia and GDNF during gut inflammation.</a> BMC Gastroenterology. 11, 3(2011).</li>
<li>Rosenbaum, C., et al. <a target="_blank" href="http://www.ncbi.nlm.nih.gov/pubmed?term=((Activation+of+Myenteric+Glia+during+Acute+Inflammation+In+Vitro+and+In+Vivo%5BTitle%5D)+AND+%22Public+Library+of+Science+One%22%5BJournal%5D)">Activation of Myenteric Glia during Acute Inflammation In Vitro and In Vivo.</a> Public Library of Science One. 11 (3), e0151335(2016).</li>
<li>Zhuo, L., et al. <a target="_blank" href="http://www.ncbi.nlm.nih.gov/pubmed?term=((hGFAP-cre+transgenic+mice+for+manipulation+of+glial+and+neuronal+function+in+vivo%5BTitle%5D)+AND+%22Genesis%22%5BJournal%5D)">hGFAP-cre transgenic mice for manipulation of glial and neuronal function in vivo.</a> Genesis. 31 (2), 85-94 (2001).</li>
<li>Boesmans, W., Lasrado, R., Vanden Berghe, P., Pachnis, V. <a target="_blank" href="http://www.ncbi.nlm.nih.gov/pubmed?term=((Heterogeneity+and+phenotypic+plasticity+of+glial+cells+in+the+mammalian+enteric+nervous+system%5BTitle%5D)+AND+%22Glia%22%5BJournal%5D)">Heterogeneity and phenotypic plasticity of glial cells in the mammalian enteric nervous system.</a> Glia. 63 (2), 229-241 (2015).</li>
<li>Shaner, N. C., et al. <a target="_blank" href="http://www.ncbi.nlm.nih.gov/pubmed?term=((Improved+monomeric+red%2C+orange+and+yellow+fluorescent+proteins+derived+from+Discosoma+sp.+red+fluorescent+protein%5BTitle%5D)+AND+%22Nature+Biotechnology%22%5BJournal%5D)">Improved monomeric red, orange and yellow fluorescent proteins derived from Discosoma sp. red fluorescent protein.</a> Nature Biotechnology. 22 (12), 1567-1572 (2004).</li>
<li>Madisen, L., et al. <a target="_blank" href="http://www.ncbi.nlm.nih.gov/pubmed?term=((A+robust+and+high-throughput+Cre+reporting+and+characterization+system+for+the+whole+mouse+brain%5BTitle%5D)+AND+%22Nature+Neuroscience%22%5BJournal%5D)">A robust and high-throughput Cre reporting and characterization system for the whole mouse brain.</a> Nature Neuroscience. 13 (1), 133-140 (2010).</li>
<li>Kabouridis, P. S., et al. <a target="_blank" href="http://www.ncbi.nlm.nih.gov/pubmed?term=((The+gut+microbiota+keeps+enteric+glial+cells+on+the+move%3B+prospective+roles+of+the+gut+epithelium+and+immune+system%5BTitle%5D)+AND+%22Gut+Microbes%22%5BJournal%5D)">The gut microbiota keeps enteric glial cells on the move; prospective roles of the gut epithelium and immune system.</a> Gut Microbes. 6 (6), 398-403 (2015).</li>
<li>Pomeranz, H. D., Sherman, D. L., Smalheiser, N. R., Tennyson, V. M., Gershon, M. D. <a target="_blank" href="http://www.ncbi.nlm.nih.gov/pubmed?term=((Expression+of+a+neurally+related+laminin+binding+protein+by+neural+crest-derived+cells+that+colonize+the+gut%3A+relationship+to+the+formation+of+enteric+ganglia%5BTitle%5D)+AND+%22The+Journal+of+Comparative+Neurology%22%5BJournal%5D)">Expression of a neurally related laminin binding protein by neural crest-derived cells that colonize the gut: relationship to the formation of enteric ganglia.</a> The Journal of Comparative Neurology. 313 (4), 625-642 (1991).</li>
</ol>

저자는 공개 없다.

EGCs 직감 항상성에 중요 한 역할 그리고 분리 하 고 그들 에 체 외연구 필수적 이다. 이 프로토콜에서 성인 마우스 내장의 lamina propria에서 EGCs를 격리 하기 위한 간단한 방법 장 폐해 기능을 공부 도입 되었다.
면봉으로 부착 mesentery와 LMMP를 제거 경도 원형 근육 사이 있는 간 myenteric 명과의 일부를 제거, 버퍼 submucosal 표면에의 접근성 증가 하 고 많은 큰 모세 혈관을 제거 하는 것은 . 후자는 최종 문화를 오염 혈액 세포의 수를 줄입니다. EDTA 외피의 시리즈 스트립 거리 노출 lamina propria 및 submucosal 명과 수 있는 연약한 chelating 솔루션에 노출 후 상피 점 막. 동요 동요, vortexing 또는 분쇄 (pipetting 위아래로 반복) 하 여 신중 하 게 수행 하 고 셀에 과도 한 손상을 피하기 위해 초과 해야 합니다. 부착, 가능한 glial 세포의 더 일관 된 수익...

장의 glial 세포 (EGCs)의 기능에 대 한 관심 용기 무결성 및 항상성1,2에 그들의 인식된 역할 때문에 꾸준히 증가 했다. 또한, EGCs GI로3,4의 길이 따라 위치에 따라 다릅니다. EGCs glial 세포 파생 된 neurotrophic 요인 (GDNF) 등 다양 한 영양 요인 해제, 운동1,5 를 직감 하 고 미생물 부산물6,7에 응답을. 연구는 EGC 인구는 이기종 및 그들의 기능 여부 submucosal 또는 myenteric 총1,7내 따라 나타내 었 다. 예를 들어 내는 submucosa EGCs 꽉 접속점8에 기여 한다. 차동 GFAP 표현과 EGCs 인 산화가 장애9의 본질적인 표현 형에 그들의 가능한 연결을 제안 하는 파 킨 슨 병에 연결 되었습니다. 최근, 인접 장 submucosa에서 EGCs의 고립 된 문화에 있는 핵 단백질 menin의 손실을 했다 호르몬 gastrin10의 식을 유도 하기에 충분 한 관찰 되었다. 결과적으로, 그것은 EGCs 십이지 장 gastrinomas, 신경 내 분 비 종양10의 종류의 수 있습니다 제안 했다. 샨 다, 이러한 예 절연된 EGCs neuropathic 질환 및 암11의 기능과 동작의 관련성 밑줄.
필드에 도전 중 하나 또는 모두 EGC 인구에서 생체 외에서연구를 격리 하는 방법 남아 있습니다. 혈통 추적 실험 submucosa 및 lamina propria EGCs myenteric 총7에 조상 세포에서 발생 설명 했다. 여러 게시 된 격리 프로토콜 myenteric EGCs12,13,14,15,,1617의 문화를 생성 하는 사용할 수는 있지만 18,19, 아무도 특히 submucosal/lamina propria EGC 인구의 격리 대상. EGC 격리에 대 한 기존 프로토콜은 특별히 기계적 분리의 조합 또는 효소 분리, 점 막 세포 층을 결국 삭제와 함께 부드러운 근육의 기정을 사용 합니다.
이 원고의 목표 비 효소 lamina propria 생체 외에서 연구에서 기본 EGCs를 분리 하는 단계를 설명 하는 것입니다. 특별히 그는 submucosa에서 myenteric EGCs 구별 없는 마커 때문 평활 근에서 상피 점 막의 공간 분리 submucosal EGCs을 악용 했다. 또한, EDTA chelation 비 효소 분리와 결합 하 여 EGCs 관련된 인터 myenteric EGCs 함께 삭제 되었다 부드러운 근육 달리 submucosa 격리 했다. Submucosa의 lamina propria EGCs 더 분리 glial 세포 친화적인 기판, 예를 들어, 폴 리-D-리 신과 laminin에 세포 배양에 의해 발생 했습니다.

<table><tbody><tr><td>Poly-D 라이신(1mg/mL 재고)</td><td>Sigma</td><td>A-003-E</td><td>희석 1:10</td></tr><tr><td>라미닌(0.5mg/mL 원료)</td><td>Sigma</td><td>L4544</td><td>10 &micro로 희석; ICE</td></tr><tr><td>EDTA(0.5M)</td>에서 g/mL <td>Lonza</td><td>51201</td> DPBS <td></td></tr><tr><td>HEPES(1M)</td><td></td>에서 <td>1:100 희석 36216004 DPBS 세포 회수 용액에서 1:100 희석</td><td></td></tr><tr><td></td><td>Corning</td><td></td> 354253 <td></td></tr><tr><td>Dulbecco의 인산염 완충 식염수(DPBS)</td><td>HyClone</td><td>SH30028.02</td><td></td></tr><tr><td>DMEM/F-12</td><td>Thermo Fisher Scientific</td><td>11320033</td><td></td></tr><tr><td>페니실린-스트렙토마이신(100x)</td><td>Life Technologies</td><td>15140-122</td><td></td></tr><tr><td>겐타마이신(50mg/mL 재고)</td><td>Life Technologies</td><td>15750060</td><td></td></tr><tr><td>GDNF(10 &마이크로; G 재고)</td><td>Sigma</td><td>SRP3200</td><td></td></tr><tr><td>L-Glutamine (200 mM 재고)</td><td>Life Technologies</td><td>25030-081</td><td></td></tr><tr><td>Chicken anti-GFAP</td><td>Thermo Fisher Scientific</td><td>PA1-10004</td><td></td></tr><tr><td>염소 anti-a-Smooth Muscle Actin&nbsp;</td><td>Abcam</td><td>ab112022</td><td></td></tr><tr><td>마우스 안티-Pgp9.5&nbsp;</td><td>Novus Biologicals</td><td>NB600-1160</td><td></td></tr><tr><td>염소 안티-E-cadherin&nbsp;</td><td>R& D 시스템</td><td>AF748</td><td></td></tr><tr><td>토끼 S100&nbsp;</td><td>Abcam</td><td>ab34686</td><td></td></tr><tr><td>마우스 p75 NTR&nbsp;</td><td>Millipore</td><td>MAB5592</td><td></td></tr><tr><td>Alexa Fluor 488 염소 안티 닭 IgY</td><td>Invitrogen</td><td>A-11039</td><td></td></tr><tr><td>Alexa Fluor 488 당나귀 안티 염소 IgG</td><td>Invitrogen</td><td>A-11055</td><td></td></tr><tr><td>Alexa Fluor 568 염소 안티 마우스 IgG</td><td>Invitrogen</td><td>A-11004</td><td></td></tr><tr><td>Alexa Fluor 594 당나귀 안티 토끼</td><td>IgG Invitrogen</td><td>R-37119</td><td></td></tr><tr><td>Prolong Gold antifade DAPI Thermo</td><td>Fisher Scientific</td><td>P36931</td><td></td></tr><tr><td>Fungizone (Amphotericin B) 250 &micro를 함유한 시약; g/mL</td><td>Life Technologies</td><td>15290-018</td><td></td></tr><tr><td>L-Fura-2-AM</td><td>Invitrogen</td><td>F-14201</td><td></td></tr><tr><td>CCK 펩타이드</td><td>Anaspec, Fremont, CA</td><td>AS-20741</td><td></td></tr><tr><td>Gastrin 펩타이드 (Gastrin-17)</td><td>Abbiotec, Bloomington, IN</td><td>350188</td><td></td></tr><tr><td>나일론 메쉬 셀 스트레이너 (100 &micro; m)</td> <td>Fisher Scientific</td><td>22363549</td><td></td></tr><tr><td>나일론 메쉬 셀 스트레이너 (40 &micro; m)</td> <td>Fisher Scientific</td><td>22363547</td><td></td></tr><tr><td>일회용 혈청 학적 피펫 5mL</td><td>Fisher Scientific</td><td>13-678-11D</td><td></td></tr><tr><td>0.25 % 트립신 -EDTA (1x)</td> <td>생명 기술</td><td>25200-056</td><td></td></tr></tbody></table>

submucosa 및 성인 마우스의 lamina propria 장의 glial 세포의 고립

Isolation of Enteric Glial Cells from the Submucosa and Lamina Propria of the Adult Mouse

신경 세포 및 평활 근 벽, submucosa 및 lamina propria 상주 장 glial 세포 (EGCs) 장 신 경계 (ENS)에 의하여 이루어져 있다. EGCs 다양 한 영양 요인의 출시를 통해 직감 항상성에서 중요 한 역할을 하 고 상피 방 벽의 무결성을. 기본 장 폐해 문화의 대부분 연구 사용 세포 효소 분리 후 myenteric 총에서 분리. 여기, 격리 하 고 장 submucosa 및 lamina propria EGCs 문화 비 효소 방법 설명 되어 있습니다. 경도 근육 층의 수동 제거 후 EGCs lamina propria submucosa 상용 비 효소 세포 복구 솔루션에 외피 다음 순차 HEPES 버퍼링 EDTA 외피를 사용 하 여에서 해방 되었다. EDTA 외피 세포 복구 솔루션 submucosal EGCs 해방 수 있도록 lamina propria에서 상피 점 막의 대부분을 제거 하기에 충분 했다. 모든 잔여 lamina propria와 부드러운 근육 myenteric 명과 함께 삭제 되었다. EGCs 쉽게 폐해 fibrillary 산 성 단백질 (GFAP)를 표현 하는 그들의 능력에 의해 확인 되었다. 세포 현 탁 액의 약 50% 포함 된 GFAP + 셀 조직 외피를 완료 한 후 폴 리-D-리/laminin 기판에 도금 하기 전에. 그러나, glial 세포 파생 된 neurotrophic 요인 (GDNF)에서 세포 배양의 3 일 후-문화 미디어를 포함, 기판 코팅 판에 고착 하는 세포 인구 구성 > 95% 장 명과. 우리는 hGFAP-Cre 마우스 GFAP + 생 세포 형광을 사용 하 여 셀의 비율을 추적 하는 사 tdTomato 기자 라인을 사육 하 여 하이브리드 마우스 라인을 만들었습니다. 따라서, 비-myenteric 장 명과 비 효소 방법으로 격리 하 고 적어도 5 일 동안 배양 될 수 있습니다.

Preps는 GFAP + 셀 준수 하지 않았고 24 h (그림 4A) 내에서 확산 하는 경우 실패 한 고려 되었다. Glial 세포 수 전지와 준수 플랫 집계 (그림 4B)으로 확산의 증거를 보여주었다 때 24 h 이후까지 확인할 수 없습니다. 클러스터의 가장자리에 세포는 긴 프로세스를 확장 하는 경향이 하 고 고전적인 glial 마커, 예를 들어, GFAP, S100b 및 p75NTR (그림 4C, 4d)10,16. 2nd 하루 glial 세포 비 점착 인구 PBS로 멀리 씻어 서 있을 수 있도록 표면에 밀접 하 게 준수 ...

여기, 우리 장 submucosa 순차적 EDTA 외피를 사용 하 여 divalent 양이온 그리고 외피 비 효소 세포 복구 솔루션에 킬레이트 하에서 장 glial 세포의 설명. 폴 리-D-리 신과 laminin에 결과 세포 현 탁 액을 도금 기능 분석을 위한 submucosal glial 세포의 매우 풍부한 문화에 발생 합니다.

Submucosa 및 성인 마우스의 Lamina Propria 장의 Glial 세포의 고립

The enteric nervous system (ENS) consists of neurons and enteric glial cells (EGCs) that reside within the smooth muscle wall, submucosa and lamina ...

이 방법은 신경 과학 분야의 주요 질문, 특히 장 신경계의 기능에 대한 답을 찾는 데 도움이 될 수 있습니다. 이 기술의 주요 장점은 평활근이 아닌 얇은 판과 점막하에서 장 세포를 분리하는 빠르고 비효소적인 방법이라는 것입니다. 원위 위와 유문을 식별하는 것으로 시작합니다.장간막을 잘라내면서 집게로 유문을 잡습니다. 그런 다음 가위 뒷면으로 둔기 절개를 사용하여 부착된 췌장을 긁어냅니다. 그런 다음 가위를 사용하여 찢어지지 않고 근위 장의 7cm를 제거합니다.장 분절을 칼슘이나 마그네슘이 없는 얼음처럼 차가운 DPBS에 넣습니다. 다음으로, 18-20 게이지 바늘의 뭉툭한 끝에 부착된 5-10밀리리터 주사기를 사용하여 얼음처럼 차가운 DPBS로 배설물 내용물을 씻어냅니다. 장을 3cm 분절로 나누어 세로 근육을 제거합니다.장간막과 종방향 근육의 신속한 제거는 얇은 판과 점막하에서 건강한 장 신경교세포를 분리하는 데 필수적입니다. 다음으로 면봉을 가지고 약 4cm 정도 잘라 목봉과 목봉을 분리합니다. DPBS에 나무 막대기를 담그십시오.장 분절 중 하나를 젖은 스틱에 부드럽게 밀어 넣은 다음 바늘 코 집게를 사용하여 남아 있는 접착 장간막을 제거합니다. 그런 다음 깨끗한 면도날이나 메스를 사용하여 장간막이 부착된 장을 따라 두 개의 세로 흠집을 냅니다. 엄지와 검지 사이에 스틱 끝을 잡고 중지와 네 번째 손가락으로 세그먼트를 고정합니다.DPBS로 면 끝을 적십니다. 젖은 면 끝을 근육을 따라 세로로 문질러 세로 근육 장간막 신경총 또는 LMMP를 풉니다. 그런 다음 면 끝을 수평으로 움직여 원형 근육에서 LMMP를 떼어냅니다.완료되면 LMMP는 장 분절을 쉽게 벗겨냅니다. 장간막 신경총에서 EGC를 채취하려는 경우가 아니면 LMMP를 폐기합니다. 그런 다음 면도날을 사용하여 장 부분을 세로로 열어 나무 막대기를 제거합니다.주로 점막과 점막하로 구성된 벗겨진 장 조직과 DPBS의 원형 근육을 얼음 위에 보관하십시오. 모든 장 분절이 준비될 때까지 다른 샘플에 대해 해부를 반복합니다. 상피 점막을 제거하려면 먼저 가는 가위를 사용하여 장을 약 0.5cm 조각으로 자르고 얼음처럼 차가운 EDTA HEPES DPBS 용액 30ml에 조각을 모읍니다.용액이 들어있는 조직을 섭씨 4도에서 분당 약 60 틸트로 10 분 동안 흔듭니다. EDTA HEPES DPBS 버퍼를 위아래로 한 번 피펫팅하여 5ml 플라스틱 피펫을 미리

isolation-enteric-glial-cells-from-submucosa-lamina-propria-adult

Research

연구

JoVE Journal

Biology

생물학

이 비디오는 성인 쥐의 뇌 피질에서 미세아교세포를 분리하는 기술을 보여줍니다. 첫째, 피질은 뉴런과 다른 신경교세포를 제거하기 위해 세분화와 균질화를 거쳐 미세아교세포를 보존합니다. 그 후, 세포 현탁액은 항 미엘린 자기 마이크로비드와 자기장에 노출되어 미엘린 파편과 미엘린을 포함하는 세포에서 미세아교세포와 골수성 세포를 효과적으로 분리합니다.

성인 마우스 뇌의 피질에서 미세아교세포의 분리

이 비디오는 쥐 장의 점막하 및 판막에서 장 신경교세포를 분리하는 방법을 보여줍니다. 점막하 및 얇은 판 propria 조직을 추출하고, 장 신경교세포를 분리하고, 코팅된 웰 플레이트에서 세포를 배양하여 장 신경교세포 배양을 확립하는 단계를 간략하게 설명합니다.

쥐의 점막하부(submucosa and lamina propria)에서 장 신경교세포(enteric glial cells)를 분리(isorating enteric glial cells from the submucosa and lamina propria of a mouse)

이 비디오는 신생아 쥐의 뇌에서 세포를 분리하고 배양하는 방법을 보여주었습니다. 그것은 뇌의 효소적, 기계적 해리를 포함했으며, 그 다음에는 혼합 신경교세포 집단을 얻기 위해 신경 세포 성장 인자가 결핍된 성장 매체에서 배양하는 것이 포함되었습니다.

Obtaining a Mixed Glial Cell Culture from a Neonatal Mouse Brain(신생아 마우스 뇌에서 혼합 신경교세포 배양 얻기)

우리는 장용 신경계의 신경 세포 및 교세포 구성 요소의 직접적인 연구를위한 세포 배양 프로토콜을 보여줍니다. coverslips는에 신경 / glia의 혼합 문화, 면역 전기 생리학, 개별 신경 세포와 아교 세포 기능을 검사 할 수있는 기능을 제공하는 성인 마우스 myenteric 신경 얼기에서 준비가되어...

<em&gt; 체외</em성인 마우스 Myenteric 신경총에서 분리 된 장내 뉴런과 교세포의&gt; 준비

미세 아교 세포 생물학의 성공적인 조사에 하나의 키는 CNS의 조직으로부터 분리하는 동안 생체 미세 아교 immunofunction의 보존이다. 형광 이미징, 면역 세포 화학, 및 염증성 자극 지질 다당류 (LPS)와 팸 3 CSK 4 (팸)와 ELISA 다음 미세 아교 세포의 활성에 의해 평가 매우 순수하고 immunofunctional 세포 배양에 회전 흔들림 결과를 통해 미세 아교 세포를 분리.

쥐과 신생아에서 보존 면역 표현형과 기능으로 두피 소교 세포의 분리

기본 microglia murine 두뇌에서의 격리에 대 한 프로토콜 제공 됩니다. 이 기술은 신경 상황의 현재 이해를 발전에 에이즈. 조밀도 기온 변화도 원심 분리와 자력 분리 매우 순수한 샘플의 충분 한 수확량을 생산 하기 위해 결합 됩니다. 또한, 우리 microglia의 특성에 대 한 단계를 설명합니다.

특성화 및 조밀도 기온 변화도 원심 분리 하 여 마우스 기본 Microglia의 절연

눈물 샘 (LG)에는 α-평활 근 액 틴를 발현 하는 두 가지 세포 유형 (α Sma)이 있습니다. MECs는 많은 선 조직에서 발견 되는 외 배 엽 기원 이며, 심 낭은 내 배 엽 기원의 혈관 평활 근 세포입니다. 이 프로토콜 뮤 린 LGs에서 MECs 및 심 낭을 분리 합니다.

성인 뮤 린 눈물과 턱 밑 동맥에서 Myoepithelial 세포의 고립

우리는 성인 마우스 뇌 반구의 다른 해부 된 영역에서 microglia의 격리를위한 프로토콜을 제공하고, 전체 길이 전사체의 깊은 단일 세포 RNA 시퀀싱을위한 반자동 라이브러리 준비를 제공합니다. 이 방법은 건강과 질병에서 microglia의 기능적 이질성을 해명하는 데 도움이됩니다.

깊은 단세포 RNA 염기서열 분석에 대한 하나의 성인 마우스 뇌 반구에서 영역 별 Microglia의 격리

여기에서는 마우스 CNS로부터 다중 신경교 세포 집단의 시험관 내 분리를 위한 프로토콜을 제시합니다. 이 방법을 사용하면 국소 미세아교세포, 희소돌기아교세포 전구체 세포 및 성상세포를 분리하여 다양한 배양 시스템에서 각각의 표현형을 연구할 수 있습니다.

여러 중추 신경계 영역에서 쥐 아교 세포의 해부 및 분리

이 프로토콜은 성체 마우스 척수에서 정제된 성상교세포와 미세아교세포를 분리하여 RNA 분석 및 세포 배양과 같은 후속 응용 분야를 용이하게 합니다. 여기에는 분리된 세포의 품질과 수율을 모두 향상시키기 위해 고안된 상세한 세포 해리 방법 및 절차가 포함됩니다.

Isolation of Pure Astrocytes and Microglia from the Adult Mouse Spinal Cord For In Vitro Assays and Transcriptomic Studies( 체외 분석 및 전사체 연구를 위한 성인 마우스 척수에서 순수 성상교세포 및 미세아교세포의 분리)

배우세요 성인 마우스 장 점막하층과 고유층에서 장신경교세포를 비효소적 방법으로 분리하는 기술입니다. 이 방법은 신경과학 연구에서 세포 기능 분석을 위한 고도로 농축된 배양을 제공합니다.

Submucosa 및 성인 마우스의 Lamina Propria 장의 Glial 세포의 고립

더 많은 동영상 탐색