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Articles by Brandon E. Johnson in JoVE
JoVE General
Xenopus Oocytes의 표현 이온 채널 패치 클램프 녹음
1Department of Molecular and Cellular Physiology, Stanford University, 2Department of Molecular and Cellular Physiology, Stanford University School of Medicine
이것은 Xenopus laevis oocytes에서 클램프의 녹음 패치에 대한 소개로서 것입니다. 그것은 vitelline 막 제거, gigaohm 인감 (gigaseal)의 형성, 그리고 외부 아웃 토폴로지에 패치의 선택 변환을 다룹니다.
JoVE General
프로그래밍 풀러와 패치 - pipettes와 샤프 전극을 만들기
1Department of Molecular and Cellular Physiology, Stanford University, 2Department of Molecular and Cellular Physiology, Stanford University School of Medicine
이 동영상은 전기 생리학에 대한 패치 pipettes과 날카로운 전극을 만들 수있는 프로그램 풀러를 사용하는 방법을 보여줍니다. 동일한 절차는 주사 바늘을 포함한 유리 다양한 도구를 만드는 데 사용할 수 있습니다.
Other articles by Brandon E. Johnson on PubMed
알파 Synuclein 신진 효 모 모델: 독성 장애인된 프로테아좀과 산화 스트레스에 의해 강화
파 킨 슨 병 (PD) midbrain dopaminergic 신경 세포의 선택적 손실에 발생 하는 일반적인 신경 퇴행 성 질환 이다. Misfolding 및 단백질 알파-synuclein, 산화 손상, 및 proteasomal 장애의 집계는이 선택적 neurotoxicity 분자 원인에 대 한 모든 가설. 여기, 우리 Saccharomyces cerevisiae 모델 misfolding, 집계, 평가를 설명 하 고 야생-타입 알파-synuclein의 독성 유도 능력 3 돌연변이 (A30P, A53T, 및 A30P/A53T), 그리고 우리가 비교 이러한 속성의 레 귤 레이 션 기능 장애 proteasomes와 산화 스트레스에 의해. 우리는 야생 형 및 A53T 알파-synuclein 플라즈마 막 근처의 눈에 띄는 지역화 알려진된 체 외 지질 바인딩 능력 지원 발견. 반면, a30p는 주로 세포질, A30P/A53T 형광의 두 종류를 표시 하는 반면. 놀랍게도, 알파-synuclein는 테스트 여러 효 모 종자에 독성이. 때 효 모 돌연변이 proteasomal 배럴 (doa3-1)에 대 한 평가, 지연 된 알파-synuclein 합성 및 멤브레인 협회 했다 관찰 했다; proteasomal 캡 (sen3-1)에 대 한 효 모 돌연변이 전시 증가 축적과 알파-synuclein의 집계. 두 sen3 1and doa3 1 돌연변이 알파 synuclein와 합성 치 명 전시. 효 모는 제 (과산화 수소)와 도전, 알파-synuclein는 셀 망간 superoxide dismutase 미네소타-잔디 (sod2Delta) 부족에 게 매우 치명적인 하지만 하지 셀에는 구리, 아연 superoxide dismutase Cu, Zn-잔디 (sod1Delta) 부족 했다. Sod2Delta 세포 독성에 불구 하 고 알파-synuclein의 세포내 집계 표시 되지 않습니다. 효 모에 독성 알파-synuclein 종 표시 집계 보다 작은 고 독성 알파 synuclein 멤브레인 협회 포함 될 수 있습니다 하는 것이 좋습니다. 따라서, yeasts 특성화 요소와 알파 synuclein 독성을 조절 하는 메커니즘에 대 한 효과적인 유기 체 등장.
병렬 웜 추적기: 평균 속도 약물 유발 마비 Nematodes 측정 하기 위한 플랫폼
Caenorhabditis elegans 운동 유전자 컴포넌트의 동작, 시 냅 스 전송 및 근육 기능 해 부를 널리 사용 하는 간단한 동작입니다. C. elegans 운동 공부를 만든 패러다임의 많은 질적 실험 관찰에 의존 합니다. 여기 우리는 동시에 여러 개의 개별 벌레의 운동 척도를 개발 된 자동된 추적 시스템 구현 보고서.
복잡 한 Dystrophin Caenorhabditis Elegans에 보 리 채널 현지화 및 근육 활동을 제어
유전자 결함 dystrophin 관련 단백질 복잡 한 (DAPC)에 다양 한 근육 영양 장애, 심장 근육 병 증, vasospasm 등 병 적인 조건에 대 한 책임. 인간에서 Caenorhabditis elegans 보존된 DAPC 부품 비슷한 분자 기능 제안. C. elegans DAPC 돌연변이 전시 독특한 빚고 적자 장기간된 근육 자극 및 수축에서 발생 합니다. 여기 우리가 C. elegans DAPC SLO-1, 대형 전도도, 전압-및 정상적인 생리 적인 조건 하에서 근육에 주요 바깥쪽으로 정류 전류를 실시 하 고 칼슘 의존형 칼륨 (BK) 채널의 적절 한 지역화를 위해 필수적입니다 보여줍니다. 와 DAPC 돌연변이 돌연변이와 같은 표현 형의 분석을 통해 우리는 막 횡단 도메인 두 예측 단백질 인코딩합니다 소설 islo-1 유전자 발견. ISLO-1 역할 근육에는 DAPC SLO-1에 연결 하는 새로운 어댑터 분자를 보여 줍니다. 우리는 결함 DAPC 또는 ISLO 1 근육에 정상적인 SLO-1 현지화 방해 보여. SLO-1 전체 활성화에 대 한 높은 칼슘 농도 필요로 하는 관찰과 일치, 우리는 SLO-1 칼슘 유입 바깥쪽으로 정류와 현재 커플링 메커니즘 제공 근육에 패-타입 칼슘 채널 근처 지역화 된은 찾을. 우리의 결과 DAPC SLO-1 채널 C. elegans 근육의 칼슘이 풍부한 영역을 지역화 하 여 근육 흥분을 변조를 나타냅니다.
또는 접합된 도메인 BK 칼륨 채널 게이팅 조절 작용
대부분의 인간의 유전자 복잡성과는 프로테옴의 다양성을 확장 하는 여러 대체 splice 사이트 포함. 그러나, 작은 대체 exons 간의 상호 작용 단백질 기능을 조절 하는 방법에 대 한 알려져 있다. Caenorhabditis elegans slo-1 대형 전도도 칼슘 사용 전압 활성화 칼륨 (BK) 채널 유전자 3 개 대안을 포함 하는 사이트 (A, B 및 C) 결합 및 대체 접합의 기능적 결과 조사에 적어도 12 스플라이스 변종 인코딩합니다. 이러한 사이트 사용 exons K(+) 전도도 (RCK) 1의 레 귤 레이 터의 일부 인코딩 삽입 철사 Ca(2+) 조정 도메인 (exons A1 및 A2)와 RCK1 RCK2 링커 (exons B0, B1, B2, C0, C1)의 일부. Exons a 1과 a 2 상호 배타적인 방식으로 사용 하 고 67% 일치 됩니다. 다른 exons 최대 41 잔류물 RCK1 RCK2 링커를 확장할 수 있습니다. 모든 isoforms electrophysiological 녹음 표시 a 1과 A2 exons 활성화 속도 론과 Ca(2+) 감도 조절 되지만 B 또는 C 사이트에 대체 exons 됩니다 경우에 삽입 따라서, RCK1 RCK1 RCK2 링커 상호 작용 그리고 게이팅의 exon 변형 효과 대체 exons 각 isoform에 조합에 따라 달라 집니다.
Intragenic 대안 조정 접합 Caenorhabditis Elegans Slo-1 유전자 기능을 위해 필수적 이다
대체 접합 하는 것이 진 핵 proteomes 다변화 중요 하지만 통치와 접합 개별 유전자 내의 여러 대체 splice 사이트 중에서 행사 협조를 잘 하는 규칙을 이해. 우리 세 대체 splice 사이트를 포함 하 Caenorhabditis elegans slo-1 유전자에 의해 부호화 12 성적 표현 척도를 정량 PCR에 기초를 둔 전략을 개발. 조건부 확률 기반 모델을 사용 하 여, 우리는 접합 이벤트 이러한 사이트를 통해 조정 됩니다 보여줍니다. 또한, 우리는 intron 대체 접합에 모든 3 개의 사이트를 방해 하는 하나의 대체 splice 사이트에 인접 한 점 돌연변이 식별 합니다. 이 돌연변이 신경 근육 학 교차로에서 탈 선 시 냅 스 전송 리드. 게놈 조사에서 우리는이 돌연변이 의해 중단 UAAAUC 요소 introns 여러 대체 splice 사이트와 유전자에 대체 exons 측면에서 풍부 하 게 발견. 이러한 결과 설정 intragenic 대체 접합의 적절 한 조정 slo 1 vivo에서의 일반 생리학에 대 한 필수적 이며 intragenic 대체 접합의 조정 규제 상 전문된 cis 규정 요소를 식별 합니다.
