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Articles by Caitlyn C. Gertz in JoVE
JoVE Neuroscience
La culture de moteur primaire et neurones sensoriels de médias définis sur les échafaudages électrofilées poly-L-lactide nanofibres
1Department of Biomedical Engineering, University of Michigan, 2State Key Laboratory of Bioelectronics, Southeast University, 3Department of Neurology, University of Michigan, 4Geriatric Research, Education and Clinical Center, Veterans Affairs Ann Arbor Health System
Alignés fibres électrofilées diriger la croissance des neurones in vitro et sont un élément potentiel de régénération nerveuse échafaudages. Nous décrivons une procédure pour la préparation des substrats de fibres électrofilé et la culture sans sérum de rat E15 sensorielles primaires (DRG) et les neurones moteurs. Visualisation des neurones par immunocytochimie est également inclus.
Other articles by Caitlyn C. Gertz on PubMed
Les Effets Du Méthylmercure Sur La Fonction Mitochondriale Et La Formation D'espèces Réactives De L'oxygène Dans Les Synaptosomes Striataux Du Rat Sont Fonction De L'âge
Le méthylmercure (MeHg) est particulièrement toxique pour le développement du système nerveux central. Afin de comprendre les raisons de cette vulnérabilité de fonction de l'âge, nous avons comparé les effets de MeHg sur la formation d'espèces réactives de l'oxygène (ROS) et la fonction mitochondrique synaptosomes striataux provenant de rats d'âges divers. Basales ROS niveaux étaient plus élevés et la fonction mitochondrique basale plus faible, synaptosomes de jeunes animaux, par rapport aux animaux adultes. MeHg induit la formation de ROS synaptosomes de rats de tous âges, bien que l'augmentation a été plus grande dans les synaptosomes des animaux plus jeunes. MeHg a également réduit la fonction métabolique mitochondriale, tel qu'évalué par réduction du MTT, ainsi que la membrane mitochondriale potentielle ; encore une fois, les plus grands changements ont été observés synaptosomes provenant d'animaux postnatale précoce. Ces différences en fonction de l'âge dans la susceptibilité au MeHg sont probables dus à un ROS moins efficace détoxifier le système et la faible activité des enzymes mitochondriales dans les tissus de jeunes animaux.
La Conception De électrofilées PLLA Nanofibres Échafaudages Compatible Avec Culture Exempt De Sérum De Moteur Primaire Et Les Neurones Sensoriels
Alignés électrofilées nanofibres la croissance des neurites direct et peut se révéler efficace pour la réparation dans le système nerveux. L'application des échafaudages de nanofibres de différentes régions du système nerveux, il faudra avant les tests in vitro des modèles d'échafaudage avec des types spécifiques de cellules neuronales et gliales. Ce serait mieux accomplie en utilisant des neurones primaires dans un milieu sans sérum; cependant, une telle croissance sur des substrats de nanofibres n'a pas encore été atteint. Nous rapportons ici le développement de la poly (acide L-lactique) (PLLA) substrats de nanofibres qui soutiennent la croissance sans sérum du moteur primaire et les neurones sensoriels, à des densités faibles de placage. Dans notre étude, nous avons d'abord comparé les matériaux utilisés pour ancrer les fibres de verre à conserver les cellules submergées et de maintenir l'alignement des fibres. Nous avons constaté que le poly (lactique-co-acide glycolique) (PLGA) des fibres de verre ancres à et est moins toxique pour les neurones primaires que bandage et la colle utilisée dans d'autres études. Nous avons ensuite conçu un substrat produit par électrofilage nanofibres PLLA directement sur des lamelles de pré-revêtus de PLGA. Ce substrat d'alignement de fibres conserve, même lorsque le faisceau de fibres se détache de la lamelle et maintient les cellules dans le même plan focal. Pour voir si l'augmentation de la mouillabilité améliore la survie des neurones moteurs, quelques fibres ont été gravée par plasma avant l'ensemencement des cellules. Survie sur les fibres gravées a été réduit à la plus faible densité de placage. Enfin, l'alignement des neurones cultivés sur ce substrat était égale à l'alignement de nanofibres et dépassé l'alignement des neurites à partir d'explants testés dans une étude précédente. Ce substrat devrait faciliter l'étude du comportement de nombreux types de neurones sur les fibres électrofilées dans un milieu sans sérum.
Cellules De Neuroblastome Modélisation De Type N Et S-type Avec Pluronic F108 Et Protéines De La MEC
Influencer la forme des cellules en utilisant des substrats microélectrodes affecte les comportements cellulaires, tels que la prolifération et l'apoptose. Forme de la cellule peut également affecter ces comportements dans le neuroblastome humain (NBL) le cancer, mais à ce jour, aucun dessin ou modèle a effectivement substrat à motifs multiples cliniquement importantes des lignées de NBL. Dans cette étude, nous avons examiné si Pluronic F108 était un revêtement anti-adhésif efficace pour les cellules humaines NBL et si elle serait de localiser trois lignes NBL aux régions adhésives de la culture de tissus en plastique ou je collagène sur les modes de substrat. L'adhérence et la structuration d'une ligne de S-Type, SH-EP, et deux lignes de type N, SH-SY5Y et IMR-32, ont été testés. Dans les essais d'adhérence, F108 dissuadé adhérence NBL tout aussi bien que deux anti-adhésives silanes organofonctionnels et beaucoup mieux que la sérum albumine bovine. Rayures à motifs de F108 restreint tous les trois des lignées de NBL à bandes adhésives de la culture de tissus en plastique. Nous avons ensuite étudié quatre régimes d'application de collagène et F108 à des régions différentes d'un substrat. Le contact avec le collagène oblitère la capacité de F108 à dissuader l'adhérence NBL, limitant la fois des matériaux peut être appliquée à des substrats pour produire un motif de haute fidélité NBL. Cette conception substrat gravé devrait faciliter les enquêtes sur le rôle de la forme des cellules dans le comportement des cellules NBL.
Neuritogenèse Accélérée Et La Maturation Des Neurones Moteurs Spinaux Primaires En Réponse à Nanofibres
Neuritogenèse, la formation de la polarité neuronale, et la maturation des axones et des dendrites sont fortement influencés par deux biochimiques et topographique composants extracellulaires. Le but de cette étude était d'élucider les effets de la topographie d'acide polylactique fibres électrofilées sur les soins primaires des neurones moteurs du développement, parce que la régénération des axones du moteur est extrêmement limitée dans le système nerveux central et pourraient potentiellement bénéficier de la mise en œuvre d'un échafaudage de synthèse afin d'encourager la repousse. Dans cette analyse, nous avons constaté que tous deux alignés et orientés de façon aléatoire des fibres submicroniques considérablement accéléré les processus de neuritogenèse et la formation de la polarité des neurones moteurs individuels cultivés par rapport à plat des films polymères et les contrôles de verre, probablement en raison de lamellipodes formation restreinte observée sur les fibres. En revanche, la maturation dendritique et soma épandage ont été inhibées sur des substrats de fibres au bout de 2 jours in vitro. Cette étude est la première à examiner les effets de la topographie des fibres électrofilées sur des neurones moteurs et la formation neuritogenèse polarité. Nanofibres alignées ont été démontré qu'elle affecte la directionnalité et le calendrier des neurones moteurs du développement, en fournissant une preuve supplémentaire de l'utilisation efficace des échafaudages électrofilées dans les applications de régénération de neurones.
Suppression Monoallélique Du Gène Biogenèse MicroRNA Dgcr8 Produit Déficits Dans Le Développement De La Transmission Synaptique Excitatrice Dans Le Cortex Préfrontal
Phénotypes neuronaux associés à hémizygotie des gènes individuels dans le locus 22q11.2 suppression du syndrome ont un potentiel vers la compréhension de la pathogenèse de la schizophrénie et l'autisme. Parmi ces gènes est Dgcr8, qui code pour une protéine ARN-contraignante nécessaire pour la biogenèse des microARN. Dgcr8 souris haploinsuffisant (Dgcr8 + / -) ont réduit l'expression de microARN dans le cerveau et d'afficher des déficits cognitifs, mais la carence en micro-ARN comment influe sur le développement et la fonction des neurones dans le cortex cérébral n'est pas entièrement comprise.
Les étapes Du Développement Morphologique Neuronale in Vitro - Un Dosage Automatisé
Après placage in vitro, les neurones passent à travers une série d'étapes morphologiques autant qu'elles adhèrent et mûrir. Ces transitions de scène morphologiques peuvent être surveillés en fonction du temps pour évaluer la santé relative et le développement de cultures de neurones dans des conditions différentes. Bien que le développement morphologique est habituellement tout à fait évident à l'œil expérimenté, il peut souvent être difficile à quantifier d'une manière significative. Morphologie quantification repose généralement sur la mesure d'image manuel et peut donc être fastidieux, chronophage et sujet aux erreurs humaines. Nous rapportons ici le succès du développement d'un processus automatisé à l'aide disponible dans le commerce d'analyse d'image programme MetaMorph (®) pour analyser la morphologie et de quantifier la croissance de neurones moteurs spinaux embryonnaires in vitro. Notre processus s'est appuyé sur l'excroissance des neurites et des modules de notation cellulaires incluses dans MetaMorph (®) et sur l'analyse des données exportées avec un algorithme écrit en MATLAB (®). Nous avons d'abord adopté une série de stades de développement des motoneurones in vitro. Neurones ont été classés dans ces étapes directement à partir de la sortie de la disposition MetaMorph (®) en utilisant l'algorithme écrite dans MATLAB (®). Nous avons validé les résultats de l'analyse automatisée contre une analyse manuelle des mêmes images et n'a trouvé aucune différence statistiquement significative entre les deux méthodes. Lorsqu'il est correctement configuré, l'analyse d'image automatisée avec MetaMorph (®) est une alternative rapide et fiable à la mesure manuelle et a le potentiel pour accélérer le processus de recherche.
