Production Des Stocks De Parvovirus H1 Recombinantes Dépourvues De Virus Aptes à La Réplication

Human Gene Therapy. Dec, 2002  |  Pubmed ID: 12542845

Les plasmides vecteur et d'assistance pour la production de recombinants H1 (rH1) parvovirus, un vecteur de virus et candidat oncolytiques pour la thérapie génique du cancer, ont été construits dans le but de réduire la contamination de ces préparations avec virus aptes à la réplication (RCV). Split-helper plasmides furent construits en manipulant les signaux d'épissage pour les protéines de la capside tels que VP1 et VP2 étaient exprimés de plasmides distincts. H1 vecteurs avec des sites d'épissage de même mutés ont été emballées, en utilisant des plasmides de split-helper, et les résultantes virus recombinants de H1 complètement exemptes de RCV parce que la génération de recombinants exprimant les deux protéines de la capside est empêchée. Rendements en vecteur rH1 produites avec des plasmides de split-helper en combinaison avec épissure site modifié vecteurs étaient semblables (dans l'ordre de 10 7 réplication unités/ml) à des rendements de rH1 produites avec la paire de vecteur/programme d'assistance standard, auquel cas des niveaux significatifs de la valeur de remplacement ont été générés (10(4)-10(5) formant unités/ml). Pour évaluer la fonctionnalité de cette approche in vivo, rH1 a été produite qui contenait l'humain interleukine 2 (il-2) transgène et qui était dépourvue de valeur de remplacement. Cette rH1 porteurs d'IL-2 vector IL-2 exprimé efficacement dans les cellules tumorales humaines (HeLa) in vitro et généré des réponses antitumorales chez la souris nude xénogreffe avec les cellules HeLa ont été infectés ex vivo avec ce virus. Ces résultats devraient permettre la production massive d'oncotropic recombinante parvovirus et leur évaluation de la thérapie génique du cancer en milieu clinique.

Suppression D'angiosarcome Métastatique Par Un Vecteur De MVMp De Parvovirus Transduction De La Chimiokine IP-10 En Souris Immunocompétentes

Cancer Gene Therapy. May, 2002  |  Pubmed ID: 11961666

Nous avons déjà montré que la croissance des xénogreffes tumorales humaines chez des souris immunodéficientes peut être efficacement supprimée après infection par le parvovirus autonome H-1 ou avec leurs dérivés cytokine-transduction. Pour mieux évaluer les avantages de la mise en œuvre de parvovirus dans la thérapie génique du cancer, nous avons créé un nouveau recombinant vector, MVMp/IP-10, transduction de la mi-lutéale, anti-angiogéniques chemokine IP-10 et permettant de traiter les tumeurs syngéniques cultivés chez les souris immunocompétentes ce virus. Intratumoral/injection intrapéritonéale d'unités seulement 3 x 10 7, réplication de MVMp/IP-10 par animal inhibe fortement la progression de tumeurs vasculaires établis induite par les cellules H5V, un modèle de souris très malin pour Hémangiome caverneux humain et le sarcome de Kaposi. Un retard de croissance des tumeurs récurrentes et suppression de diffusion métastatique mortelles aux organes internes étaient accompagnés par un retard frappant hémangiome associée à la mortalité. MVMp parental n'avait un effet significatif dans ces conditions jusqu'à la dose de 10(10) unités infectieuses/animal, mais il avait antihemangiosarcoma forte activité lorsqu'il est utilisé pour infecter les cellules H5V ex vivo avant l'implantation. Dans tous les cas, les thérapies virales a été très bien toléré. Suppression viro-induite d'hémangiosarcome dépendait des lymphocytes T hôte associé intratumoral persistance des lymphocytes cytotoxiques de IFN gamma exprimant et conduit à la réduction de l'expression de PAI hépatique inhibiteur-1 (PAI-1), un marqueur lié à la métastase. Cette étude de preuve de principe montre que MVMp/IP-10 peut faciliter le traitement des tumeurs vasculaires et vecteurs parvovirus autonomes peuvent être considéré comme des outils puissants à des fins de thérapie génique du cancer.

Interaction Spécifique De La Protéine Non Structurale NS1 Minute Virus De Souris (MVM) Avec [motifs ACCA](2) Dans Le Centre Du Palindrome De MVM ADN De Bout Droit Induit Une Réplication De L'ADN Virale En épingle à Cheveux-amorcé

The Journal of General Virology. Jul, 2002  |  Pubmed ID: 12075084

Le génome de l'ADN monocaténaire linéaire minute virus de souris (MVM) est répliqué via un ADN intermédiaire forme réplicative bicaténaire (RF). Amplification de l'ADN viral de RF exige la transition structurelle de la palindrome de bout droit d'un duplex linéaire dans une structure de double-épingle à cheveux, qui sert pour le réamorçage de la synthèse de l'ADN unidirectionnelle. Cette transition conformationnelle a été trouvée précédemment induite par la protéine non structurale MVM NS1. Élimination des sites de liaison NS1 apparentés, [ACCA](2), de la région centrale de la palindrome de bout droit à côté de l'axe de symétrie s'est avéré nettement réduire l'efficacité de la réplication de l'ADN-amorcé en épingle à cheveux, tel que mesuré dans un système de réplication in vitro reconstitué. Ainsi, [ACCA](2) motifs de séquence sont essentiels comme des éléments de liaison NS1 dans le contexte de la transition structurelle de la palindrome MVM de bout droit.

Les Protéines NS2 Du Virus Minute De Parvovirus De Souris Sont Nécessaires Pour Efficient Egress Nucléaire Des Virions De La Progéniture Dans Les Cellules De Souris

Journal of Virology. Oct, 2002  |  Pubmed ID: 12239307

Les petites protéines NS2 non structurales du virus minute de parvovirus de souris (MVMp) ont été précédemment montrés d'interagir avec les récepteurs d'exportations nucléaires Crm1. Nous rapportons ici l'analyse de deux MVM les clones génomiques mutants générant NS2 protéines qui ne peuvent pas interagir avec Crm1 suite à des substitutions d'acides aminés dans les séquences de signal (NES) de leurs exportations nucléaires. Après transfection des humains et des cellules de souris, les clones génomiques mutants MVM-NES21 et MVM-NES22 étaient compétents dans la synthèse des quatre protéines virus-encodé. Tandis que le clone de MVM-NES22 était encore en mesure de produire des virions infectieux de mutantes, aucun virus ne pourrait être recouvrés auprès des cellules transfectées avec le clone de MVM-NES21. Alors que le défaut de MVM-NES21 semble être complexe, le phénotype de MVM-NES22 peut être retracé à une nouvelle fonction de NS2 distincte. L'infection des cellules de souris avec le mutant MVM-NES22 conduit à la plus forte rétention nucléaire non seulement des protéines NS2, mais aussi des particules MVM progéniture infectieuses. Cette séquestration nucléaire en corrélation avec un grave retard dans la libération des virions mutantes dans le milieu et une survie prolongée des populations cellulaires infectées par rapport aux cultures imprégnées par le virus de type sauvage. Ce défaut pourrait expliquer, au moins en partie, la petite taille des plaques générés par le mutant MVM-NES22 mesurée sur cellules indicatrices de souris. Au total, nos données indiquent que l'interaction des protéines MVMp NS2 avec le récepteur d'exportations nucléaires que CRM1 joue un rôle essentiel à un stade avancé du cycle de vie le parvovirus impliqué dans la libération de la progéniture virus.

Règlement De Minute Virus De Souris NS1 Fonctions Réplicatifs D'atypique PKClambda in Vivo

Journal of Virology. Jan, 2003  |  Pubmed ID: 12477848

Minute virus de protéine NS1 souris est une phosphoprotéine multifonctionnelle dotée d'une variété d'activités enzymatiques et réglementaires nécessaires pour la production de particules de virus de la progéniture. Pour régler toutes ses différentes fonctions dans le cadre d'une infection virale, NS1 a été proposé pour être modulée par des modifications post-traductionnelles, en particulier, phosphorylation. En effet, il a été démontré que le modèle de la phosphorylation de NS1 est altéré au cours du cycle infectieux et que le profil biochimique de la protéine dépend de l'état de phosphorylation du polypeptide. En outre, des approches in vitro ont identifié des membres de la protéine kinase C (PKC) famille en particulier, les PKC atypique, comme régulateurs de la réplication de l'ADN virale grâce à la phosphorylation des résidus NS1 T435 et S473, activant ainsi la protéine pour les activités de déroulement de l'ADN. Afin d'étayer ces conclusions in vivo, nous produit NS1 en présence d'un mutant de PKClambda dominant négatif et caractérisé la protéine purifiée in vitro. La protéine NS1 produite dans ces conditions, s'est avérée pour être seulement partiellement phosphorylée et par conséquent d'être insuffisantes pour la réplication de l'ADN virale. Toutefois, il pourrait être sauvé pour cette fonction virale par traitement avec PKClambda activée recombinante. Nos résultats démontrent clairement que NS1 est une cible pour PKClambda la phosphorylation in vivo et que cette modification est essentielle pour l'activité hélicase du polypeptide virale. En outre, la phosphorylation de NS1 résidus T435 et S473 semble se produire principalement dans le noyau, démontrant encore la participation des PKClambda qui, contrairement à PKCzeta, s'accumule dans le compartiment nucléaire des cellules infectées.

Parvovirus Chimériques Et Pseudo Minimiser La Contamination Des Stocks Recombinants Avec Virus Aptes à La Réplication Et Identifient Une Séquence D'ADN Qui Restreint Le Parvovirus H-1 Dans Les Cellules De Souris

Journal of Virology. Mar, 2003  |  Pubmed ID: 12610161

Des études récentes prouvé la capacité des recombinés parvovirus autonomes MVMp (variante fibrotropic du virus minute de souris) et H-1 à transmettre des gènes thérapeutiques dans les cellules tumorales. Cependant, les stocks de vecteur recombinant sont contaminés par virus aptes à la réplication (vaccins antirubéoleux) générés pendant le processus de production. Pour réduire les niveaux de vaccin à valence rubéole, génomes chimérique vecteur recombinant ont été conçus en remplaçant la région droite de H-1 virus ADN avec celui du virus apparenté MVMp ADN et inversement. Pseudotypes de virus recombinants H-1 et MVMp ont été également produites dans ce but. Dans les deux cas, les niveaux de contamination les stocks de virus vaccin à valence rubéole ont été considérablement réduits (virus ne était pas détecté dans les stocks de virus Pseudo, même après deux étapes de l'amplification), tandis que les rendements des virus vecteur produites ne sont pas affectées. H-1 virus pouvaient être distingués de virus MVMp par sa restriction dans les cellules de souris à un stade précoce de l'infection avant la réplication de l'ADN virale détectable et l'expression des gènes. L'analyse des virus composites a montré que cette restriction pourrait être assignée à un déterminants génomiques spécifiques. Contrairement au virus de la MVMp, capsides virus H-1 se sont avérés pour être un déterminant majeur de la plus grande permissivité de diverses lignées de cellules humaines de ce virus.

ONCOLYTIQUE Parvovirus H1 Induit Une Libération De Protéine De Choc Thermique HSP72 Dans Les Cellules Tumorales Humaines Sensibles Mais Peut Ne Pas Affecter Les Cellules Immunitaires Primaires

Cancer Gene Therapy. Jun, 2003  |  Pubmed ID: 12768193

Certains parvovirus autonomes préférentiellement répliquent à tuent dans les cellules transformées par vitro et peuvent réduire l'incidence des tumeurs spontanées et implantés chez les animaux. Par conséquent, ces virus et leurs dérivés sont actuellement en cours d'évaluation comme vecteurs antitumorales. Cependant, les mécanismes qui sous-tendent leurs propriétés suppresseur de tumeur ne sont pas encore compris. Nous avons demandé que le parvovirus lytique H1 peut améliorer l'immunogénicité des cellules tumorales infectées. Hors mélanome humain et les cellules de tumeurs gastro-intestinales, nous avons choisi la lignée cellulaire SK29-Mel-1 car il est très sensible à la destruction de l'apoptose induite par les H1. Ici, aucune augmentation de l'expression des molécules HLA de classe I et les molécules de costimulation pourrions observer suite à une infection H1. Toutefois, une version forte de la protéine immunogène le signal inductible-choc thermique HSP72, mais pas constitutive HSP73-a été observée après une infection H1. La HSP72 était plus élevé et de plus longue durée qu'un traitement de choc thermique conventionnelle. Nous avons exploré aussi la réplication H1 et cytotoxicité dans les cellules immunitaires humaines, que ces cellules peuvent constituer des cibles pour la réplication du virus H1. À long terme cultivés lymphocytes, monocytes, immatures et les cellules dendritiques matures n'étaient pas sensibles au virus H1. Au total, mort cellulaire induite par le parvovirus peut in vivo améliorer l'immunogénicité de tumeur par libération HSP72 et contribuer ainsi à l'effet antitumoral de parvovirus.

Modulation Du Virus Minute D'activités Cytotoxiques De Souris Par Mutagénèse Dirigée Au Sein De La Région Codante De NS

Journal of Virology. Dec, 2003  |  Pubmed ID: 14610171

Vers la fin de l'infection, virus minute de parvovirus de souris (MVMp) provoque la lyse des fibroblastes de souris A9. Cet effet dépend de la phosphoprotéine non structurale grande NS1, qui joue en outre un rôle important dans la réplication de l'ADN virale et la production de particules de la progéniture. Étant donné que la région C-terminale de NS1 est soumise à des événements de phosphorylation tardifs et protéine kinase C (PKC) membres de la famille réglementent les activités réplicatifs NS1, la présente étude visait à déterminer l'impact des PKCs sur NS1 fonctions cytotoxiques. À cette fin, nous avons effectué la mutagenèse dirigée, remplaçant les résidus alanine pour deux consensus PKC-sites de phosphorylation situées dans la région C-terminale de NS1, T585 et S588. Malgré ces substitutions aucun effet détectable sur la multiplication du virus dans une rond simple infection, le virus mutant NS1-585 a était nettement moins toxique pour les cellules A9 que MVMp de type sauvage, tandis que le virus mutant NS1-588A a été doté d'un potentiel plus élevé de la mise à mort. Ces altérations en corrélation avec des changements spécifiques dans le modèle fin de phosphorylation des protéines mutantes NS1 comparé le polypeptide de type sauvage. Étant donné que les mutations introduites dans cette région des variations du génome viral fait également les protéines non structurales mineures NS2, une contribution de ce polypeptide les phénotypes susmentionnées du virus mutants ne peuvent être exclues à présenter. Toutefois, l'implication de NS1 dans ces phénotypes a été directement pris en charge par la capacité réduite et améliorée respective des protéines recombinantes NS1-585 a et NS1-588A pour induire des altérations morphologiques et détachement de cellules transfectées A9 cultures. Au total, ces données suggèrent que tardive survenant la phosphorylation de NS1 réglemente spécifiquement les fonctions cytotoxiques du produit viral et que les résidus T585 et S588 contribuent à ce contrôle de façon antagoniste.

La Protéine Humaine Du TPR Contenant Des Riches En Glutamine Petite Est Nécessaire Pour Le Progrès Par Le Biais De La Division Cellulaire

Experimental Cell Research. Feb, 2004  |  Pubmed ID: 14729056

Organismes eucaryotes de la levure aux gènes humains harbor la petits riches en glutamine tetratricopeptide repeat (SGT) protéine. Travaux présentés ici ont démontré la présence de la protéine humaine SGT (hSGT) dans un panneau de lignées cellulaires humaines et tout au long du cycle cellulaire. Pour identifier les processus cellulaires dans lesquels est impliqué hSGT, abattre les populations ont été analysées qui ont été générés par le biais de transfection de petits ARN interférent hsgt spécifiques. Plus frappant, appauvrissement de hSGT conduit à réduit la prolifération des populations des cellule affectée tandis que l'indice mitotique a augmenté. Microscopie vidéo Time-Lapse a révélé que les cellules des populations appauvries en hSGT étaient incapables de la division cellulaire complete en raison d'arrêt mitotique, qui a été fréquemment suivie par la mort des cellules. Une preuve supplémentaire pour un rôle dans la division cellulaire a été donnée par l'accumulation de hSGT dans le milieu du fuseau et le milieu du corps et par un patron de migration spécifiques à la mitose de hSGT tel que détecté par éponger occidental après électrophorèse bidimensionnelle sur gel SDS-PAGE. En conclusion, les résultats obtenus dans cette étude démontrent que la protéine de la hSGT est un élément constitutif de toutes les lignées cellulaires humaines testé et que cette protéine est essentielle pour la réussite de la division cellulaire.

Parvovirus H-1 Infection Des Cellules De Gliome Humain Entraîne La Réplication Virale Complète Et Mort Cellulaire Efficace

International Journal of Cancer. Journal International Du Cancer. Mar, 2004  |  Pubmed ID: 14735471

Le très mauvais pronostic des gliomes malins nécessite l'étude des autres que les traitements classiques, c'est-à-dire, la demande de virus oncolytiques. Dans notre étude, nous évaluons les effets de la parvovirose oncosuppressive 1 H sur glioblastome établi différentes lignées de cellules de rat et d'origine humaine et sur le court terme/faible passage cultures de cellules de glioblastome humain. Nous avons observé un meurtre efficace et dose-dépendante de toutes les cultures de cellules de gliome à faibles multiplicités de particules infectieuses (MOI) par cellule. Analyse Southern de l'amplification de l'ADN virale, analyse RT-PCR virale expression RNA et Western blot analyse de l'expression de la structure virale (VP-1/VP-2) et les protéines non structurales de (NS-1) a démontré la biosynthèse de ces composants viraux macromoléculaires dans toutes les cultures. En outre, toutes les cellules de gliome étaient compétents pour la production de particules de virus infectieuses H-1. Le montant de la production de virus diffère entre un plusieurs fois plus du titre d'entrée de virus dans la plupart des cultures court terme/faible passage jusqu'à 1000 dans un gliome à court terme et dans les cellules de rat. Lignées de cellules de gliome et, plus important encore, des cultures de court terme/faible passage de glioblastome humain trouvées cellules cibles hautement sensibles du virus H-1 médiée par cytotoxicité. La formation de particules de progéniture pleinement infectieux dans les cellules de gliome infectés offre la possibilité pour l'induction des cycles secondaires d'infection qui donne un effet cytotoxique avancé. Ces caractéristiques avantageuses de l'infection par le virus des cellules de gliome, combinée à la faible toxicité connue du virus H-1 dans les cellules non transformées, H-1 font parvovirus H-1 un candidat prometteur pour le traitement de gliomes oncolytiques.

Vecteurs Basés Sur Parvovirus Autonomes : Nouveaux Outils Pour Traiter Le Cancer ?

The Journal of Gene Medicine. Feb, 2004  |  Pubmed ID: 14978762

Parvovirus autonomes sont nucléaires répliquées petit virus à ADN. Les parvovirus rongeurs sont habituellement non- ou faiblement pathogènes chez les animaux adultes, se lient à des récepteurs membranaires qui sont exprimées sur la plupart des cellules et ne semblent pas intégrer dans les chromosomes de l'hôte lors d'infections lytiques ou persistantes. Fait intéressant, la transformation maligne des cellules cibles s'est souvent avéré en corrélation avec une augmentation de leur capacité d'amplification et/ou exprimant l'ADN adénoviraux entrant et est associée à oncolysis, c'est à dire, l'abatage sélectif des cellules tumorales infectées. En outre, les parvovirus apparentées MVM, H-1 et LuIII infectent efficacement des lignées cellulaires humaines. Cette constatation rend ces parvovirus promettant des vecteurs de candidats pour les thérapies nécessitant l'expression transitoire d'un gène transduite. En particulier, le parvovirus peuvent convenir cibler et détruire les cellules tumorales et offrir simultanément des transgènes appropriés, par exemple, gènes codant pour des facteurs immuno-stimulants. Piloter des expériences réalisées chez l'animal afin de déterminer si la base de parvovirus vecteurs portant l'interleukine 2 (il-2) gènes de cytokines ont renforcé la capacité contre le cancer a montré que ces virus recombinants a supprimé la formation de tumeurs plus efficacement que les virus dépourvus d'un transgène. Forts effets anticancéreux du parvovirus recombinants exprimant la protéine de l'interféron gamma-inducible 10 (IP-10) et la protéine chimiotactique monocyte 3 (MCP-3) ont été observées également contre des hémangiosarcomes et mélanomes malins chez les souris immuno-compétents, respectivement. Au total, ces données illustrent le potentiel énorme des recombinants parvovirus autonomes comme agents anti-tumoraux et donnent de l'espoir de les utiliser contre le cancer chez l'humain.

Livraison Du Transporteur à Médiation Cellulaire De Parvovirus Oncolytiques Afin De Cibler Des Métastases

International Journal of Cancer. Journal International Du Cancer. May, 2004  |  Pubmed ID: 14999784

Au cours de la dernière des dernières années, d'origine naturelle ou génétiquement manipulés virus oncolytiques a gagné une attention croissante tant que de nouveaux médicaments pour le traitement du cancer. Le présent ouvrage présente la preuve du principe selon lequel un système d'organotropes cellule de télécommunications est indiqué pour livrer oncolytiques parvovirus à un tissu connu pour être une cible pour la formation des métastases. Les cellules de support sont inactivées par irradiation gamma après l'infection, qui s'est avérée ne pas avoir une incidence sur la production et la libération de parvovirus étaient capables de lyser les cellules néoplasiques cible cocultured. Bien que systématiquement administré parvovirus que h-1 ont montré un effet thérapeutique prononcé contre l'apparition de métastases pulmonaires de hépatome (MH3924A) de Morris établies, la stratégie de la cellule support offert un certain nombre d'avantages. Transporteurs infectés étaient capables de soutenir l'expression des virus H-1 pour 6 jours dans les poumons des rats atteints de la maladie métastatique et de réduire la propagation du virus aux organes périphériques. Par rapport à l'injection directe de virus, le protocole de cellules de transporteur a conduit pour un meilleur effet thérapeutique (suppression des métastases) et une moindre production d'anticorps neutralisant le virus. Ces données appuient l'utilisation de cellules de transporteur pour livrer les virus oncolytiques et/ou les vecteurs viraux localement dans les tumeurs et, plus particulièrement, les métastases.

Thérapie Génique De Cancer Grâce à Parvovirus Autonome--transfert De Gènes Par Médiation

Current Gene Therapy. Sep, 2004  |  Pubmed ID: 15384939

Les parvovirus sont de petits virus à ADN nucléaires réplication. Les parvovirus rongeurs sont généralement faiblement pathogènes chez les animaux adultes, se lient à des récepteurs membranaires qui sont assez omniprésent exprimés sur les cellules et ne semblent pas intégrer des chromosomes de l'hôte pendant l'infection persistante ou lytique de la cellule. Les parvovirus rongeurs apparentées MVM, H-1 et LuIII infectent efficacement des lignées cellulaires humaines. Transformation plus intéressante et maligne de cellules humaines et rongeurs s'est avérée souvent corrélés avec une plus grande sensibilité à la mort induite par le parvovirus (oncolysis) et avec une augmentation de la capacité cellulaire pour amplifier et / ou exprimant l'ADN adénoviraux entrant. Ces et autres propriétés intéressantes faites ces parvovirus rongeurs autonomes et recombinants dérivés promettant candidat vecteurs antitumorales. Vecteurs de remplacement de capside ont été produites de MVM ou H-1 virus qui transportent les transgènes codant pour deux produits thérapeutiques (cytokines/chimiokines, apoptine, thymidine kinase du virus herpès simplex) ou protéines de marqueur (protéine fluorescente verte, chloramphenicolacetyl transférase, luciférase). Cette revue décrit l'état actuel de la technique au sujet de l'application éventuelle des parvovirus sauvage et dérivés des vecteurs pour le traitement du cancer. En particulier, on discute des récents succès avec le développement des actions aptes à la réplication sans virus vecteur et les résultats provenant d'études précliniques à l'aide de parvovirus recombinantes transduction divers de cytokines et de chimiokines sont présentés.

Altérations Sélectives De L'architecture Des Cellules Hôtes Infectées Par Virus Minute De Parvovirus Chez Les Souris

Virology. Jan, 2005  |  Pubmed ID: 15582663

Au cours d'une infection productive, la souche prototype parvovirus minute virus de souris (MVMp) induit des altérations morphologiques dramatiques à la cellule hôte de fibroblastes A9, entraînera une cellule lysis et progéniture virus communiqué. Afin de comprendre les mécanismes qui sous-tendent ces changements, nous caractérise le sort de plusieurs filaments cytosquelettiques et étudié la compartimentation nucléaire et cytoplasmique des cellules infectées. Alors qu'on voyait des effets plus prononcés sur les micro - et les filaments intermédiaires, manifeste des réarrangements dramatiques et dégradation des (F-) l'actine et la vimentine structures filamenteuses, peu d'impact on voyait sur les microtubules ou de l'enveloppe nucléaire pendant toute la durée de surveillance de l'infection. Pour analyser la perturbation de la structure du cytosquelette, nous avons étudié l'effet viral sur les voies de régulation sélectives. Ainsi, nous avons trouvé une corrélation entre la stabilité des microtubules et la phosphorylation induite par le MVM de tubuline alpha/bêta. En revanche, démontage des filaments d'actine vers la fin de l'infection peut être retracée à la dérégulation de deux F-actine associé protéines gelsoline et protéine de Syndrome de Wiscott-Aldrich (WASP). Ainsi, une augmentation de la gelsoline, une protéine de sectionnement de l'actine F a été observée lors de l'infection, comptabilité pour compenser l'interruption des fibres de stress après infection. En même temps, l'activité de la polymérisation de l'actine également diminuée en raison d'une perte de guêpe, la protéine activatrice de la machinerie de polymérisation de l'actine du complexe Arp2/3. Aucun effet ne se voyait dans la quantité et la distribution des autres facteurs de régulation de l'actine F tels que cortactin cofilin et profilin. En résumé, l'attaque sélective de MVM vers les structures du cytosquelette de cellules hôtes distincts plaide pour une fonction de réglementation pendant l'infection, plutôt que d'un effondrement de la cellule hôte comme un simple effet secondaire de la production de virus.

L'infectiosité Et Activité Lytique Du Virus Minute De Particules De Vecteur Sauvage Et Provenant De Souris Sont Remarquablement Différents

Journal of Virology. Jan, 2005  |  Pubmed ID: 15596824

Vecteurs de thérapie génique ont été élaborés des parvovirus rongeurs autonomes qui portent un gène thérapeutique ou un gène marqueur à la place les gènes codant les protéines de la capside. Ces vecteurs sont actuellement évalués dans des expériences précliniques. L'infectiosité des particules vecteur dérivant de la souche fibroblastique de minute virus de souris (MVMp) (produite par transfection dans les cellules humaines) a été trouvée à être beaucoup moins (environ 50-fois moins) infectieux que des particules de virus de type sauvage couramment produites par infection de fibroblastes de souris A9. De même, MVMp sauvage produite par transfection avait également un faible potentiel infectieux dans les cellules de souris, indiquant que les méthode et producteur de cellules influencent l'infectiosité du virus produit. Fait intéressant, les cellules de producteur faite comme beaucoup de particules vectoriel complet sous forme de particules de type sauvage, argumentant contre être emballage déficient responsable de la faible potentiel infectieux du virus extraites des cellules transfectées. L'obstacle à l'infection avec des particules complets issu de la transfection a été trouvé à prendre place à une étape précoce après entrée et limitant virale DNA réplication et l'expression génique. Les infections par transfection ou des stocks de virus infection dérivé normalisé pour leur capacité de réplication ont donné le même monomère et du dimère ADN amplification et gène niveaux d'expression. Étonnamment, en unités d'équivalent de la réplication, la capacité des vecteurs de la parvovirose pour tuer les cellules tumorales a été inférieure que du virus sauvage parental produit dans les mêmes conditions de transfection, suggérant que, à côté des protéines virales non structurales, les protéines de la capside, assemblé des capsides, ou la région codante correspondante contribuent à l'activité lytique de ces virus.

Profilage De L'expression Des Cellules D'hépatome Humain Révèle Une Répression Mondiale Des Gènes Impliqués Dans La Prolifération Cellulaire, La Croissance Et L'apoptose Lors De L'infection Par Le Parvovirus H-1

Journal of Virology. Feb, 2005  |  Pubmed ID: 15681429

Parvovirus autonomes sont caractérisent par leur dépendance stricte sur la phase de S de cellule hôte et leurs effets cytopathogènes sur cellules néoplasiques. Pour mieux comprendre les interactions entre le virus et la cellule hôte, nous avons utilisé d'oligonucléotide qui transportent plus de 19 000 séquences de gène humain unique pour définir le profil l'expression du gène de la lignée de cellules de carcinome hépatocellulaire humaine QGY-7703 à deux points dans le temps après l'infection par le parvovirus H-1. Au point de temps de 6 h, un seul gène a été exprimé avec une > 2.5-fold changement. A 12 h, 105 gènes distincts ont été exprimés dans les cellules infectées par le virus par rapport à des cellules traitées maquette, avec 93 % de ces gènes sont diminuées. Ces réprimée gènes regroupés principalement en classes impliquées dans la régulation transcriptionnelle, transduction du signal, immunitaire et réponse au stress et l'apoptose, comme en témoigne les gènes codant pour des facteurs de transcription Myc, Jun, Fos, Ids et CEBPs. Analyse quantitative en temps réel reverse transcription-PCR sur des gènes sélectionnés validé les données du tableau et autorisé les changements dans l'expression des gènes cellulaires corrélée à l'accumulation des transcriptions virales et de la protéine NS1. Analyse par Western blot de plusieurs protéines cellulaires soutenu les résultats du tableau et corroboré le témoignage de ces et d'autres données de suggérer que le H-1 virus tue les cellules QGY-7703 par un processus de nonapoptotic. Les régions promotrices de la plupart des gènes différentiellement exprimés analysés ne parviennent pas à héberger n'importe quel motif pour la liaison de la séquence-spécifique de NS1, suggérant que les liaison directe de NS1 aux promoteurs cellulaires ne peut pas participer à la modulation de l'expression génique cellulaire dans les cellules infectées par le virus H-1.

B1 Les Lymphocytes Et Les Cellules Dendritiques Myéloïdes Dans Les Organes Lymphoïdes Sont Préférentiels Extratumoral Sites Du Virus Minute De Parvovirus D'expression De Souche Souris Prototype

Journal of Virology. Mar, 2005  |  Pubmed ID: 15731246

En raison de leurs propriétés oncolytiques et apathogenicity, parvovirus autonomes ont attiré beaucoup d'intérêt en tant qu'agents anticancéreuses possibles. De récentes études précliniques fourni la preuve du potentiel thérapeutique de la minute virus de souche prototype de souris (MVMp) et ses dérivés recombinantes. Dans un modèle murin d'angiosarcomes, des résultats thérapeutiques positifs en corrélation avec intratumorale haute expression des gènes codés MVMp dans les tumeurs et les organes lymphoïdes, en particulier dans les ganglions drainant tumeur. La source et la pertinence de cette expression d'extratumoral, qui fut une surprise en raison de la fibrotropism connu de MVMp, restaient incertaine. Dans la présente étude, nous avons étudié (i) si le modèle d'expression observée se produit dans des modèles de différentes tumeurs, (ii) dont la population cellulaire est ciblée par le virus et (iii) les conséquences immunologiques de cette infection. Expression de gène de MVMp significative a été détectée dans les tissus lymphoïdes des infectés exempt de tumeur ainsi que le mélanome, lymphome et souris porteuses hémangiosarcome. Cette expression a été particulièrement marquée dans les ganglions lymphatiques drainant virus-injecté des tumeurs. Analyse de l'hybridation in situ fluorescente, multicolor fluorescence-lancée de cellules tri et reverse transcription-PCR quantitative a révélé que MVMp est exprimée dans les sous-populations rares de CD11b (Mac1)-cellules positives affichant CD11c + (cellules dendritiques myéloïdes [CDM]) ou CD45B (B220 + [lymphocytes B1]) marqueurs. Mis à part la suppression fin des cellules mémoire cytotoxiques (CD8 + CD44 + CD62L-), cette infection ne mène pas à une altération significative du profil immunologique des cellules du remplissage des organes lymphoïdes. Cependant, des changements subtils ont été détectés dans la production de cytokines pro-inflammatoires spécifiques dans les ganglions lymphatiques des animaux traités au virus. Compte tenu du rôle des lymphocytes de B1 et de MDC dans le cancer et la surveillance immunologique, la capacité spécifique de ces types de cellules à soutenir l'expression des gènes pilotée par le parvovirus peut être exploitée dans les protocoles de thérapie génique.

Changements Dans Les Profils D'expression Génique Induits Par Le Parvovirus H-1 Dans Les Cellules Humaines De Cancer Gastrique

Chinese Journal of Digestive Diseases. 2005  |  Pubmed ID: 15904425

La parvovirose autonome H-1 pièces de toxicité préférentielle pour transformé ou des cellules tumorales. Le mécanisme moléculaire précis de cytotoxicité de virus-associée de H-1 n'est pas entièrement compris. La présente étude visait à obtenir plus d'informations sur les perturbations cellulaires induites par le parvovirus.

Parvovirose La Mort Des Cellules Tumorales Induite Par H-1 Améliore La Réponse Immunitaire Humaine in Vitro Par Une Augmentation De La Phagocytose, La Maturation Et Présentation Croisée Par Des Cellules Dendritiques

Human Gene Therapy. Aug, 2005  |  Pubmed ID: 16076257

Virus oncolytiques et de Oncotropic ont attiré l'attention élevée comme agents antitumoraux parce qu'ils préférentiellement de tuent les cellules cancéreuses in vitro et réduisent l'incidence de spontané, induit ou à implanter des tumeurs animales. Certains parvovirus autonomes (H-1, minute virus de souris) et les dérivées des vecteurs recombinants sont actuellement en cours d'évaluation préclinique. Pas encore complètement compris, leurs propriétés antitumorales impliquent de mort cellulaire tumorale plus que de simples. Parce que le type sauvage médiée par le parvovirus lysats de cellules tumorales (TCLs) peuvent déclencher des cellules présentatrices d'antigène (CPA) pour augmenter le répertoire immunitaire de l'hôte, nous avons analysé la phagocytose, la maturation et crosspresentation de TCLs induite par H-1 par des cellules dendritiques humaines (DCs). Tout d'abord, nous avons établi oncolysis induite par H-1 dans les clones de cellules mélanome variante deux HLA-A2(+) et a2. Dérivés de monocytes immatures DCs phagocytés H - 1-infected TCLs comme ainsi que l'apoptose induite par le rayonnement ultraviolet TCLs et mieux qu'induite par le gel-dégel nécrotiques TCLs. immatures DCs incubées avec TCLs induite par H-1 marqueurs maturation spécifiques acquis comparables à un cocktail de cytokine standard. En outre, A2(+) DCs pulsé avec a2 H-1-infected TCLs d'antigènes mélanome Croix-présenté pour les lymphocytes T cytotoxiques (CTL) spécifiques et des cytokines proinflammatoires libéré. Pour la première fois, cela montre que le meurtre de cellules de tumeur par un virus de type sauvage oncolytiques directement stimule TTB humaine et CTL. Parce que le H-1-infected tumeurs accroître le répertoire immunitaire, les perspectives cliniques des vecteurs adénoviraux sont encore plus prometteurs.

La Phosphorylation Sur Ser106 Module Les Fonctions Cellulaires De La Protéine Du Gène SHOX Homéodomaine

Journal of Molecular Biology. Jan, 2006  |  Pubmed ID: 16325853

Des mutations dans le gène SHOX homéobox ont été associés à une petite taille et les déformations squelettiques trouvés dans Leri-Weill, Turner et Langer syndromes impliquant une participation de SHOX dans la croissance et la formation osseuse. En dépit de son importance clinique, le rôle précis de SHOX et les mécanismes qui modulent ses fonctions demeurent inconnues. Nous avons signalé précédemment que SHOX est une protéine nucléaire qui se lie spécifiquement l'ADN et agit comme un activateur transcriptionnel. Nous avons montré que l'expression ectopique de SHOX conduit à l'arrêt du cycle cellulaire et l'apoptose dans l'ostéosarcome et les cellules primaires. Afin de caractériser davantage SHOX, nous avons examiné si la protéine pourrait être une cible pour la phosphorylation. Ici, nous déclarons que SHOX est phosphorylée exclusivement sur les résidus sérine in vivo. Deux dimensions phospho-peptide a montré que la cartographie du gène SHOX est phosphorylée à des degrés divers sur plusieurs sites. La mutagénèse dirigée ont démontré que la sérine 106 est le site de phosphorylation importante du gène SHOX. Nous montrons également que la caséine kinase II phosphoryle sur la sérine 106 SHOX efficacement in vitro et spécifique la caséine kinase II inhibiteurs de réduire la phosphorylation SHOX fortement in vivo. Enfin, nous apportons la preuve que la phosphorylation peut jouer un rôle important dans les activités SHOX modulation biologiques, depuis un mutant S106A SHOX, défectueuse dans la phosphorylation, ne pas activer la transcription et ne parvient pas à induire arrêt du cycle cellulaire et l'apoptose.

Activité Suppressive De Tumeur D'une Isoforme Variant De Manganèse Superoxyde Dismutase Libéré Par Une Lignée De Cellules Humaines Liposarcome

International Journal of Cancer. Journal International Du Cancer. Aug, 2006  |  Pubmed ID: 16550599

Une lignée cellulaire provenant d'un liposarcome pléiomorphes, nommé LSA, a été signalée précédemment à sécréter (un) ou des facteurs présentant des propriétés oncotoxic. Le présent article décrit l'isolement, la purification et l'analyse de la séquence d'une protéine libérée par les cellules LSA en milieu de culture conditionné. Cette protéine s'est avéré être une variante isoforme de manganèse superoxyde dismutase (MnSOD), d'où sa désignation comme LSA-type-MnSOD. Ce type-LSA-SOD différait de mottes conventionnels dans sa sécrétion par les cellules de producteur, contrastant avec la localisation normale des mottes dans la matrice mitochondriale. Fait intéressant, pendant le processus de purification de protéines, LSA-type-SOD ont coségrégé avec une activité cytotoxique dirigée contre un certain nombre de lignées cellulaires tumorales, tel que déterminé dans les conditions in vitro. Cet effet cytopathique était probablement à cause de la LSA-type-SOD, puisqu'il pourrait être entièrement reproduite à l'aide de SOD recombinante a été relayées par de clones d'ADNc isolement des préparations de LSA cellules mRNA et dorénavant désignée L-rSOD. En plus de sa manifestation dans les lignées cellulaires maintenues en culture tissulaire, l'oncotoxicity de la LSA-type-SOD a été encore reflétée dans une capacité remarquable de cette protéine pour la suppression des tumeurs mammaires chez la souris Balb-C-FR(III). Animaux injectés par voie sous-cutanée avec L-rSOD dans la région de la tumeur a montré une rupture complète des carcinomes mammaires établies, sous la supervision de la résonance magnétique nucléaire (RMN) à balayage. En outre, métastatique s'étalant, qui était facilement détectable dans le groupe témoin, était supprimée chez les animaux traités. Au total, ces données suggèrent que LSA-type-SOD interfère avec la survie et la propagation de cellules transformées neoplastically et mérite d'être futur validé comme agent thérapeutique contre le cancer, seul ou en combinaison avec les traitements conventionnels.

Ns1 Interaction Avec Alpha CKII : Nouvelle Protéine Complexe Médiant La Toxicité Induite Par Le Parvovirus

Journal of Virology. May, 2006  |  Pubmed ID: 16641266

Au cours d'une infection productive, la souche du virus de la parvovirose minute de souris (MVMp) du prototype induit des altérations morphologiques dramatiques dans les fibroblastes permissives de l'A9, aboutissant à la lyse des cellules à la fin de l'infection. Ces effets cytopathogènes (CPE) résultent de réarrangements et destruction du cytosquelette micro - et des filaments intermédiaires, tandis que d'autres structures telles que la lamina nucléaire et en particulier le réseau de microtubules demeurent protégés tout au long de l'infection (J. P. F. Nüesch et coll., virologie 331:159-174, 2005). Afin d'élucider les mécanismes par lesquels les parvovirus déclenchent CPE, nous avons recherché pour les partenaires d'interaction NS1 par chromatographie d'affinité différentielle, utilisant des mutants NS1 distinctes débilités spécifiquement pour cette fonction. Ainsi, les auteurs ont isolé un polypeptide de partenaire NS1, dont l'interaction avec NS1 corrélée avec la compétence du produit virale pour l'induction de la CPE et plus il identifiés par spectrométrie de masse et des analyses Western Blot comprendra la sous-unité catalytique de la caséine kinase II, CKIIalpha. Cette interaction de NS1 avec CKIIalpha a suggéré d'interférence par la protéine virale avec signalisation intracellulaire. L'utilisation permanente de lignées exprimant des mutants CKIIalpha dominant négatif, nous étions en mesure de démontrer que cette activité kinase était en effet spécifiquement impliquée dans adénoviraux communiqué de particule CPE et de leur descendance. En outre, le complexe NS1/CKIIalpha avéré pour être capable de phosphoryler spécifiquement des capsides virales, indiquant une fonction de médiateur de NS1 pour activité CKII et spécificité, du moins in vitro. Au total, nos données suggèrent que les CPE induite par le parvovirus est médiée par NS1 interférence avec signalisation intracellulaire de CKII.

Oncolytiques Murin Autonome Parvovirus, Un Vecteur De Candidat Pour La Thérapie Génique Gliome, Est Inoffensif Pour Les Cellules Gliales Des Souris Normales Et Immunocompétents

Cell and Tissue Research. Sep, 2006  |  Pubmed ID: 16699801

La sensibilité des cellules de tumeur du cerveau à parvovirus sauvage ou recombinantes H1-PV et MVMp rend ces agents prometteurs des candidats pour la thérapie génique de l'astrocytome. Cette demande soulève la question de savoir si parvovirus exercent délétères ou effets un observateur sur la normales cellules gliales entourant les tumeurs. Nous avons abordé cette question dans le modèle de souris en utilisant des cultures de cellules dérivées de souches de souris BALB/c et C57BL/6, VM/Dk. Astrocytes et une grande partie des cultures de cellules microgliales étaient compétents pour l'absorption du MVMp. L'infection est cependant avortée comme la synthèse de protéines virales associées à la réplication a eu lieu à moins de 10 % des astrocytes et des virions aucune progéniture ont été produites. Cette restriction a été encore plus marquée pour la microglie dans lequel aucune expression de la protéine virale ne pourrait être détectée, économiser pour une fraction infime de cellules d'origine VM/Dk. Infectionà MVMp n'eu aucun effet significatif sur la survie des cellules gliales et n'interfère pas avec leur potentiel immunitaire. En effet, ni le lipopolysaccharide (LPS) / interféron (IFN-gamma)-induite de la cytotoxicité des microglies VM/Dk-dérivé vers la lignée de cellules de gliome (MT539MG) souris, ni la capacité de cellules gliales pour production alpha de facteur nécrose tumorale lors de la stimulation de LPS ou stimulation LPS/IFN-gamma ont été touchés par l'infection avec MVMp. En outre, la stimulation avec LPS et/ou IFN-gamma a provoqué une diminution de l'expression de la protéine virale de réplicative et cytotoxique NS1. Ensemble, nos données indiquent que, chez l'hôte naturel, une majorité de cellules gliales normales ne sont pas compétentes pour la réplication de MVMp et que l'infection avortée qui se déroulent dans une fraction mineure de ces cellules ne parvient pas à empêcher leur survie et leur immunocompétence, donnant crédit à l'examen des parvovirus autonomes pour le traitement des gliomes.

Le SGT Humain Interagit Avec Sac-6/Bat-3/faux Et Les Cellules Avec Des Niveaux Réduits De Deux Protéines Affichent La Persistance De Quelques Chromosomes Mal Alignées Et Arrêt Mitotique

Experimental Cell Research. Aug, 2006  |  Pubmed ID: 16777091

La petite riches en glutamine contenant du TPR protéine humaine (hSGT) est essentielle pour la division cellulaire, car RNA interference-induite par la forte réduction du taux de protéines hSGT cause arrêt mitotique (M. Winnefeld, Rommelaere J. et C. Cziepluch, l'humaine petite protéine riche en glutamine contenant du TPR est nécessaire pour progresser à travers la division cellulaire, exp. cellule res. 293 (2004), 43-57). Analyse des cellules HeLa exprimant une protéine de fusion histone YFP-2 a a révélé la présence continue de quelques chromosomes mislocalized proches des pôles du fuseau comme cause possible pour arrestation prométaphase de déplétion dépendant hSGT. Cellules incapables de sauver ces chromosomes mislocalized dans la plaque métaphasique est mort à ce stade par apoptose. Afin de répondre à la fonction de hSGT au niveau moléculaire, masse analyse par spectrométrie de protéines qui co-immunoprécipitée avec le drapeau-tag hSGT a été réalisée. Ainsi, Hsp70 et sac-6/Bat-3/faux ont été identifiés comme nouveaux partenaires d'interaction de hSGT alors que l'interaction avec Hsc70 a été confirmée. Résultats obtenus avec des versions tronquées de la protéine hSGT ont révélé ce sac-6/Bat-3/faux et la Hsp70 ou l'Hsc70 purent indépendamment pour former des complexes avec hSGT. Interaction entre hSGT et Hsc70, Hsp70 ou sac-6/Bat-3/Scythe a été démontrée en prométaphase, ce qui suggère un rôle possible pour les complexes contenant hSGT et distincte (co)-accompagnateurs au cours de la mitose. Enfin, les cellules provenant de populations avec des niveaux réduits de persistance sac-6/Bat-3/Scythe également affiché des chromosomes mislocalized et arrêt mitotique, qui a fermement indiqué que hSGT-sac-6/Bat-3/faux complexes pourraient être exigés directement ou indirectement pour toutes congression chromosome.

Immunité Humorale Contre Le Virus Minute Des Vecteurs De La Souris

The Journal of Gene Medicine. Sep, 2006  |  Pubmed ID: 16800041

En raison de leurs propriétés oncolytiques, parvovirus rongeurs autonomes et dérivées des vecteurs constituent des agents antitumoraux potentiels.

MCP-3 (CCL7) Envoyées Par Le Parvovirus MVMp Réduit Tumorigénicité Des Cellules De Mélanome De Souris Grâce à L'activation Des Lymphocytes T Et Les Cellules NK

International Journal of Cancer. Journal International Du Cancer. Mar, 2007  |  Pubmed ID: 17154174

Protéine chimiotactique monocytaire 3 (MCP-3/CCL7), une chimiokine CC capable d'attirer et d'activer un large panel de leucocytes, y compris les cellules NK et les lymphocytes T, pourrait être bénéfique dans la thérapie antitumorale. Vecteurs ont été construits selon le virus minute de parvovirus autonome de souris (MVMp), transportant l'humain cDNA (MCP-3). Ces vecteurs ont été évaluées par la suite dans le modèle de mélanome de souris peu immunogène B78/H1. L'infection de la tumeur des cellules avec un vecteur MCP3-transduction à multiplicités d'entrée de virus faiblement, mais pas avec les virus de type sauvage, la croissance de tumeur fortement inhibée après implantation chez la souris euthymique. Un modèle thérapeutique de B78/H1, des injections répétées intratumorale du virus MCP3-tranducing a empêché une nouvelle expansion de la tumeur tant que le traitement a été poursuivi. Les effets antitumoraux du vecteur MCP-3-transduction n'étaient pas limitées à ce modèle de tumeur car ils pourraient également être observés dans le mélanome K1735. L'épuisement des CD4, CD8, les cellules NK et d'interféron gamma (IFNgamma) chez les souris implanté des cellules infectées par le MVMp/MCP3 B78/H1 abolit l'activité antitumorale du vecteur. Ces dernières données, ainsi que de la croissance tumorale chez la souris nude et transcriptase inverse (RT)-analyses PCR des tumeurs MVMp/MCP3-traités, montre clairement qu'activé CD4, CD8 et cellules NK sont indispensables pour l'effet anticancéreux dans la tumeur B78/H1. Au total, nos résultats montrent que les vecteurs de parvovirus MCP3-transduction peuvent être très puissants contre les tumeurs mal ou nonimmunogenic, même dans des conditions où seulement une fraction de la population cellulaire tumorale est efficacement infectée avec parvovirus recombinantes.

Activation Cytosolique Des Cathepsines Intervient Dans Le Meurtre De Parvovirus Induite Par H-1 De Cisplatine Et De Cellules De Gliome Résistantes à La Piste

Journal of Virology. Apr, 2007  |  Pubmed ID: 17287256

Les gliomes sont souvent résistantes à l'induction de la mort cellulaire par apoptose par suite de l'élaboration de mécanismes de survie au cours de la transformation maligne astrocyte. En particulier, la surexpression de membres de la famille Bcl-2 interfère avec l'initiation de l'apoptose en endommageant l'ADN des agents (p. ex., cisplatine) ou des ligands solubles mort (p. ex., TRAIL). En utilisant des cultures de faible-passage-nombre de cellules de gliome, nous avons montré que le parvovirus H-1 est capable d'induire la mort de cellules résistantes à TRAIL, cisplatine ou les deux, même lorsque la protéine Bcl-2 est surexprimée. Parvovirus H-1 se déclenche la mort à travers les deux l'accumulation de lysosomales cathepsines B et L dans le cytosol des cellules infectées et la réduction des niveaux de cystatine B et C, deux inhibiteurs de la cathepsine des cellules. L'atteinte d'un de ces effets protège les cellules de gliome de l'effet lytique viral. Dans les astrocytes humains normaux, parvovirose H-1 ne parvient pas à induire un mécanisme de mise à mort. In vivo, l'infection des cellules de gliome rat parvovirose H-1 données implanté dans cathepsine déclencheurs receveuses activation B aussi bien. Ce rapport identifie pour les premières effecteurs cellulaires de temps de l'activité de mise à mort du parvovirus H-1 contre les cellules malignes du cerveau et ouvre une approche thérapeutique qui contourne leur résistance fréquente aux autres inducteurs de la mort.

Activités Combinées Oncolytiques Et Vaccination Du Parvovirus H-1 Dans Un Modèle De Tumeur Métastatique

Oncology Reports. Jun, 2007  |  Pubmed ID: 17487410

Virus oncolytiques sont apparus comme une nouvelle classe d'agents anticancéreux puissants, offrant une amélioration par rapport à la chimio - et radiothérapie en termes de ciblage tumoral et la réduction des effets secondaires. Parmi ces agents, parvovirus autonomes ont attiré l'attention des chercheurs pour leur capacité à reproduire dans de manière préférentielle et tuer les cellules transformées et pour supprimer les tumeurs en l'absence d'effets indésirables dans divers modèles animaux. Nous avons déjà montré que les cellules tumorales autologues mortellement irradiés peuvent soutenir la production de parvovirus H-1PV et servent de supports pour livrer la progéniture H-1PV dans le voisinage des métastases pulmonaires dans un modèle de tumeur rat, résultant en H-1PV infection et la multiplication des cellules métastatiques. On sait que les cellules (néoplasiques) autologues irradiées peuvent aussi agir comme un vaccin thérapeutique contre la tumeur d'origine. Encore la capacité de ces cellules à supprimer des métastases dans le modèle ci-dessus s'est avérée être beaucoup augmenté à la suite de leur infection H-1PV. Cela nous a amenés à déterminer si H-1PV a renforcé la capacité de suppresseur de tumeur du vaccin autologue en augmentant son potentiel immunogène et/ou en le rendant une usine de virus oncolytiques capables d'atteindre et de détruire les métastases. Les deux effets peuvent être dissociés en présence d'anticorps neutralisants qui empêchent les virus de la progéniture ne se propage aux cellules métastatiques ou appauvrissent les cellules effectrices CD8 du système immunitaire. Cette stratégie a révélé que l'infection H-1PV des cellules tumorales amélioré leur capacité à déclencher une réponse immunitaire, pour lesquels des cellules tumorales non infectés pourraient être les cibles, ainsi amplifier et prise en charge de l'activité ONCOLYTIQUE virale directe. Ce double effet oncolytiques/vaccinales de H-1PV entrevoir les promesses des applications cliniques pour le traitement du cancer.

Une Protéine Virale Adaptateur Modulant L'activité De Caséine Kinase II Induit Des Effets Cytopathogènes Dans Les Cellules Permissives

Proceedings of the National Academy of Sciences of the United States of America. Jul, 2007  |  Pubmed ID: 17636126

Parvovirus autonomes induisent de graves altérations morphologiques et physiologiques dans les cellules de l'hôte permissive, aboutissant à la lyse des cellules et la libération des virions de la progéniture. Une effet cytopathique (ECP) résultat d'aménagements spécifiques et destruction des micro du cytosquelette et les filaments intermédiaires. Nous avons récemment rapporté que l'inhibition d'endogène de caséine kinase II (CKII) protège les cellules de cible de virus minute de parvovirus de souris (MVM)-induite par le CPE, pointant vers cette kinase comme un processeur d'effets de toxicité MVM. Le présent travail montre que la protéine NS1 adénoviraux médie cytosquelettiques CKII-dépendante et la mort cellulaire. Ns1 peut agir comme une molécule de l'adaptateur, qui relie la kinase des protéines cellulaires CKIIalpha à la tropomyosine et modulant ainsi la spécificité de substrat de la kinase. Cette action se traduit par un patron de phosphorylation tropomyosine modifié in vitro et dans les cellules vivantes. La capacité de NS1 pour induire la CPE était affaiblie par des mutations abolissant la liaison avec CKIIalpha ou tropomyosine. La fonction d'adaptateur cytotoxique de NS1 a été confirmée avec des peptides de fusion, où le domaine de liaison tropomyosine NS1 et CKIIalpha sont physiquement connectées. Ces peptides adaptateur pouvaient imiter NS1 dans sa capacité à induire la mort des cellules transformées de MVM-permissive.

Interférence De Parvovirus Avec Signalisation Intracellulaire : Mécanisme D'activation De PKCeta Dans Les Fibroblastes Infectés Par MVM A9

Cellular Microbiology. Mar, 2008  |  Pubmed ID: 18042254

Parvovirus autonomes sont fortement dépendantes de la phosphorylation de la principale protéine NS1 non structurelles, par des membres de la protéine kinase famille C (PKC). En plus d'être accompagné avec des changements dans le schéma général de la phosphorylation de NS1 et d'acquérir de nouvelles modifications au consensus sites PKC, continue virus minute de souris (MVM) infections plomb à l'apparition de nouvelles espèces de phosphoryle des protéines cellulaires. Cela nous a amenés à étudier si MVM gêne activement phosphoinositol dépendante kinase (PDK) / signalisation de la PKC. L'activité, la localisation subcellulaire et l'état de phosphorylation des protéine kinases PDK1, PKCeta et PKClambda ont été mesurés dans les cellules A9 en présence ou en absence d'infection MVM. Infection à parvovirus s'est avérée pour résulter dans l'activation de PDK1 et PKCeta, comme en témoignent des changements dans leur distribution subcellulaire et la phosphorylation globale (auto). Nous montrent que l'activation des PKCeta par PDK1 est entraînée par PKClambda atypique. En modifiant le motif hydrophobe de PKCeta, PKClambda semble contrôler la phosphorylation d'amarrage et consécutive d'activation boucle de PKCeta par PDK1, un processus qui a été inhibé in vivo en présence d'un mutant de PKClambda dominant négatif.

Armement Parvovirus Avec Motifs CpG Pour Améliorer Leur Capacité D'oncosuppressive

International Journal of Cancer. Journal International Du Cancer. Jun, 2008  |  Pubmed ID: 18360875

Virus oncolytiques représentent des outils nouveaux pour le traitement du cancer. Outre spécifiquement tuer des cellules cancéreuses (oncolysis), ces agents fournissent également des signaux de danger, ce qui incite le système immunitaire à éliminer des tumeurs infectées par le virus. Par suite d'événements oncolytiques, le système immunitaire inné et adaptatif accéder aux antigènes tumoraux, entraînant des effets d'amorçage-Croix et de la vaccination. Ici le but était de voir si nous pourrions améliorer ce titre adjuvant en incorporant des motifs CpG immunostimulantes dans le génome de simple brin d'un parvovirus oncolytiques (H-1PV). Nous avons conçu 2 variantes de H-1PV enrichie en CpG (JabCG1 et JabCG2), préservant la compétence de réplication tant les caractéristiques ONCOLYTIQUE du virus parental. En accord avec leur teneur accrue en CpG, les génomes de JabCG1 et JabCG2 prouvé in vitro afin d'être plus puissants déclencheurs de TLR-9-mediated signalisation que l'ADN de type sauvage H-1PV. Activité antitumorale a été évaluée dans un modèle de rat de métastases pulmonaires de MH3924A hépatome, où une infection par le virus parentales ou mis à jour le servit un ex vivo adjuvant à un vaccin administré par voie sous-cutanée de cellules autologues. Dans cette configuration, ce qui exclut les effets directs oncolytiques sur métastases, le vecteur JabCG2 affiché immunogénicité améliorée, induisant des marqueurs de l'immunité cellulaire (IFN-gamma) et l'activation des cellules dendritiques (CD80, CD86) dans les ganglions lymphatiques médiastinaux (tumeur-vidange). Cela a conduit à un taux significativement réduit métastatique (50 %) par rapport à d'autres calendriers de vaccination (H - 1PV-, JabCG1-, les cellules JabGC ou mock-traitées). Les données fournissent la preuve du principe selon lequel l'augmentation du nombre de motifs CpG immunostimulantes dans virus oncolytiques permet d'améliorer leur effet global anticancéreux en induisant la vaccination anti-tumorale.

Mort Des Cellules P53-deficient Hépatome De Parvovirus H-1 Et Agents Chimiothérapeutiques Nécessite Protéine De Leucémie Promyélocytaire

World Journal of Gastroenterology : WJG. Jun, 2008  |  Pubmed ID: 18609705

Afin d'évaluer le ciblage synergique et l'assassinat de hépatocellulaire humaine carcinome (CHC) cellules sans p53 par agents H-1 et chimiothérapeutiques oncolytiques parvovirose autonome (PV) et sa dépendance vis-à-vis des protéines de la leucémie promyélocytaire fonctionnelle (PML).

Évacuation Vésiculaire Du Parvovirus Lytiques Non Enveloppés Dépend De La Gelsoline Fonctionnement

PLoS Pathogens. 2008  |  Pubmed ID: 18704167

La parvovirose autonome Minute Virus de souris (MVM) induit des changements spécifiques dans les filaments du cytosquelette des cellules infectées de permissives, provoquant notamment la dégradation des fibres d'actine et de la génération des « rustines actine. » Ceci est attribué à un déséquilibre viro-induite entre le facteur de polymérisation N-WASP (protéine de syndrome de Wiscott-Aldrich) et de la gelsoline, une protéine multifonctionnelle clivant les filaments d'actine. Ici, l'accent est sur l'implication de la gelsoline dans la propagation de la parvovirose et le traitement de l'actine induite par le virus. Activité de la gelsoline a été démontés et conséquences qui en découlent ont été déterminées pour l'évacuation et la réplication du virus et pour l'intégrité du réseau actine. Bien que non requis pour la réplication du virus ou l'assemblage de particules de descendance, la gelsoline découvrit contrôle MVM (et associés H1-PV) transport du noyau à la périphérie de la cellule et le rejet dans le milieu de culture. Dégradation de l'actine de la gelsoline dépendante et progéniture virus communiqué ont été toutes deux contrôlées par (NS1) / CKIIalpha, un complexe récemment identifié entre une kinase cellulaire et une protéine non structurale MVM. De plus, l'exportation des virions nouvellement synthétisées dans le cytoplasme semble être médiée par des vésicules endosomale lysomal/fin (modifiée par le virus). En montrant que les rejets MVM, comme entrée, est guidé par le cytosquelette et médiée par des vésicules, ces résultats remettent en question l'affichage actuel que la sortie des virus lytiques non enveloppé est un processus passif.

Protéines Virales En Tuant Les Cellules Tumorales : Nouvelles Armes Dans La Lutte Contre Le Cancer

Cancer Biology & Therapy. Sep, 2008  |  Pubmed ID: 18769128

Caractérisation Biophysique Et Biochimique D'une Dérivée De Liposarcome Recombinante MnSOD Protéine Agissant Comme Un Agent Anticancéreux

International Journal of Cancer. Journal International Du Cancer. Dec, 2008  |  Pubmed ID: 18798256

Un recombinant MnSOD (rMnSOD) synthétisé par des clones d'ADNc spécifiques provenant d'une lignée de cellules de Liposarcome a démontré que la même séquence que la MnSOD sauvage exprimée dans la lignée de cellules de leucémie myéloïde humaine U937, à l'exception de la présence du peptide leader à l'extrémité N-terminale. Ces résultats ont été entièrement confirmées par la masse moléculaire de rMnSOD, telle qu'évaluée par analyse ES/SM (Da 26662.7) et la séquence nucléotidique de l'ADNc de la MnSOD. Le rôle du peptide leader en rMnSOD a été étudié à l'aide d'un fluorescent et/ou (68) marqué au Gallium peptide synthétique. Le peptide étiqueté imprégné des cellules MCF-7 et l'absorption peut être inhibée en présence d'un excès de œstrogène. In vivo il fut repris par la tumeur, ce qui suggère que la molécule peut être utilisée pour le traitement et le diagnostic. Les tests pharmacologiques in vitro et in vivo ont confirmé que rMnSOD est seulement oncotoxic pour les cellules tumorales exprimant les récepteurs oestrogéniques. Des études pharmacocinétiques chez les animaux effectuées avec (125) j'ai- et (131) protéines j'ai marqué a confirmé que, lorsqu'il est administré de façon systémique, rMnSOD atteint sélectivement la tumeur, où sa présence a été clairement démontrée par scintigraphie et PET scans. Analyse par PCR a révélé que l'expression des gènes Bax a été augmentée et le gène Bcl2 était réglementé, vers le bas, dans les cellules MCF7 traités avec rMnSOD, ce qui suggère que la protéine induit un mécanisme de pro-apoptotic.

Amélioration Du Traitement à Base De Gemcitabine Du Cancer Du Pancréas Au Moyen De La Parvovirose Oncolytiques H-1PV

Clinical Cancer Research : an Official Journal of the American Association for Cancer Research. Jan, 2009  |  Pubmed ID: 19147756

Cancer du pancréas est un cancer gastro-intestinal avec mauvais pronostic. Traitement avec la gemcitabine, le plus puissant chimiothérapeutique contre ce cancer à jour, n'est pas curatif et résistance peut apparaître. Traitement complémentaire avec un virus ONCOLYTIQUE, tels que le parvovirus rat H-1PV, qui est infectieux mais non pathogènes chez l'homme, apparaît comme une option innovante.

Ezrin-radixine-moésine Protéines De La Famille Sont Impliqués Dans La Réplication De La Parvovirose Et La Diffusion

Journal of Virology. Jun, 2009  |  Pubmed ID: 19321616

La propagation des parvovirus autonomes dépend fortement de la phosphorylation de la protéine non structuraux majeure NS1 par des membres de la protéine kinase famille C (PKC). Virus minute de réplication de la souris (MVM) s'accompagne de changements dans le schéma général de la phosphorylation de NS1, qui est nouvellement modifié sur les sites PKC un consensus. Ces changements induisent, au moins en partie, de la capacité de MVM à moduler la voie de PDK-1/PKC, conduisant à l'activation et la redistribution du PDK-1 et PKCeta. Nous montrons que les protéines de la famille (ERM) d'ezrin-radixine-moésine sont essentiels pour la propagation de virus et de se répandre dans leurs fonctions, comme les adaptateurs pour PKCeta. Infection MVM a conduit à la redistribution des radixine et moésine dans la cellule, ayant pour résultat une colocalisation accrue de ces protéines avec PKCeta. Radixine a été trouvé pour contrôler la phosphorylation axée sur les PKCeta de NS1 et capsides nouvellement synthétisés in vivo. Inversement, l'activation et la phosphorylation de radixine furent chassés par le complexe NS1/CKIIalpha. Au total, ces données plaident pour des protéines MCE étant les cibles et les modulateurs de l'infection par le parvovirus.

Le Parvovirus Rat Oncolytiques H-1PV, Un Candidat Pour Le Traitement Du Lymphome Humain : études In Vitro Et in Vivo

Molecular Therapy : the Journal of the American Society of Gene Therapy. Jul, 2009  |  Pubmed ID: 19367260

L'incidence des lymphomes développant à la fois immunocompétents et patients immunodéprimés continue sans cesse augmenter dans le monde entier. Les approches actuelles de chimiothérapie et immunothérapie présentent plusieurs limites, telles que la toxicité sévère côté et sélection de variants de cellules résistantes. Parvovirus autonomes (PVs), en particulier la parvovirose rat H-1PV, ont émergé des agents anticancéreux aussi prometteurs. Bien qu'il soit apathogenic chez l'homme, H-1PV a démontré d'infecter et de supprimer différents de rat et de tumeurs humaines dans des modèles animaux. Dans cette étude, nous démontrons la capacité des H-1PV pour tuer efficacement, par l'intermédiaire de nécrose, cultures de cellules provenant de Burkitt (BL), tout en épargnant les lymphocytes B normaux. L'effet cytotoxique s'accompagne généralement d'une infection productive de H-1PV. Remarquablement, axée sur la parvovirose monothérapie efficacement supprimé établi BL à un stade avancé dans un sévère combiné immunodéficientes (SCID) modèle murin de la maladie. Les données montrent pour la première fois qu'un parvovirus oncolytiques mérite d'être examinée comme un outil potentiel pour le traitement des certains lymphomes non hodgkiniens B-cellule, y compris ceux résistants à l'induction de l'apoptose par rituximab.

SMAD4 : Marqueur Prédictif De La Permissivité De Cellule ACPE Pour Oncolytiques L'infection Par Le Parvovirus H-1PV

International Journal of Cancer. Journal International Du Cancer. Jun, 2010  |  Pubmed ID: 19856310

Adénocarcinome ductal pancréatique (ACPE) représente la huitième fréquente des tumeurs solides et la quatrième cause de décès par cancer. Parce que les traitements actuels contre l'ACPE sont toujours insatisfaisantes, nouvelles stratégies anticancéreuses sont nécessaires, y compris les virus oncolytiques. Parmi ceux-ci, le parvovirus autonomes (PV), comme MVMp (minute virus de souris) et H-1PV sont explorées comme candidats pour la thérapie génique du cancer. Lignées de cellules humaines ACPE ont été identifiées pour afficher différentes susceptibilités à une infection par H-1PV. La corrélation entre l'intégrité de la transcription factor SMAD4, muté dans 50 % des tous les ACPE, et H-1PV permissivité a été particulièrement frappant. En effet, mutation ou suppression de SMAD4 considérablement réduit l'activité du promoteur P4 et, par conséquent, l'accumulation de la protéine NS1 pivotale. Au moyen de l'ADN affinité immunoblotting, roman accepteurs pour SMAD4 et facteurs de transcription c-JUN pouvaient être identifiés dans le promoteur P4 de H-1PV. La surexpression de SMAD4 sauvage dans des lignées de cellules déficientes (CPIRA-1, 1-Capan) stimule l'activité du promoteur P4, tandis que l'interférence d'endogène SMAD4 fonction avec un mutant dominant négatif diminue l'activité de promoteur viral de type sauvage exprimant SMAD4 cellules (Panc-1, MiaPaCa-2) réduction de la production de virus de la progéniture. En conclusion, l'importance des membres de la famille SMAD pour promoteur précoce H-1PV P4 activité doit nous guider pour sélectionner SMAD4 positif PDACs, qui peuvent être des cibles potentielles pour une thérapie du cancer à base de H-1PV.

Activation D'une Réaction Antivirale Dans Des Conditions Normales Mais Les Cellules De Souris Transformées Pas : Un Nouveau Déterminant De Minute Virus De Souris Oncotropism

Journal of Virology. Jan, 2010  |  Pubmed ID: 19864388

Minute de parvovirus virus de souris (MVMp) est doté de propriétés oncotropic jusqu'à présent attribuées uniquement à la subordination du cycle de vie virus sur cellulaire facteurs exprimées au cours de la phase S ou modulée par une transformation maligne. Pour autre oncotropism virus dépend de leur incapacité à contourner type I l'interféron (IFN)-induit des mécanismes antiviraux innées, la première ligne de défense déclenchée par les cellules normales contre les infections virales. Ces agents se propagent, par conséquent, préférentiellement dans les cellules transformées/tumorales, qui manquent souvent des mécanismes antiviraux fonctionnels. La présente étude visant à déterminer si les processus antivirales contribuent aussi à MVMp oncotropism. Nos résultats démontrent que contrairement aux fibroblastes de souris A9 MVMp-permissive transformée, fraîchement isolées homologues normaux (fibroblastes embryonnaires de souris [MEFs]) installe, au travers de la production et la libération de type j'ai IFNs après leur infection, une réponse antivirale contre MVMp multiplication lytique. Prétraitement de MEFs avec un type, j'ai des anticorps neutralisant IFN-bêta, avant l'infection MVMp, inhibe la réponse antivirale virus déclenchées et améliore l'accomplissement du cycle de vie MVMp. Nos résultats montrent également que partie de la permissivité de l'A9 à MVMp repose sur l'incapacité à produire le type j'ai IFNs sur infection à parvovirus, une caractéristique liée à une déficience intrinsèque de l'A9 de ce processus ou à un mécanisme inhibiteur MVMp-déclenchée, puisque la stimulation de ces cellules par exogène IFN-bêta inhibe fortement le cycle de vie du parvovirus. Pris ensemble, nos résultats démontrent pour la première fois qu'infection par le parvovirus l'déclenche une réaction innée antivirale dans les cellules normales et suggèrent que l'oncotropism de MVMp dépend au moins en partie la défaillance des cellules transformées infectées pour monter une telle réponse.

Le Parvovirus H1 Induit Sélectivement Des Effets Cytotoxiques Sur Les Cellules De Neuroblastome Humain

International Journal of Cancer. Journal International Du Cancer. Sep, 2010  |  Pubmed ID: 20087864

Malgré des concepts thérapeutiques multimodales, avancée des neuroblastomes localisés et à haut risque demeure un défi thérapeutique avec un taux de survie à long terme inférieur à 50 %. Par conséquent, de nouvelles modalités pour le traitement d'un neuroblastome, par exemple, oncolytiques virothérapie sont requises de toute urgence. H-1PV est un parvovirus rongeur dépourvus des effets pathogènes chez les animaux adultes infectés. En revanche, le virus a des propriétés oncolytiques et est particulièrement cytotoxique pour les cellules transformées ou dérivées de tumeurs de diverses espèces, y compris les cellules d'origine humaine. Ici, une évaluation préclinique in vitro de la demande d'oncolytiques H-1PV pour le traitement des cellules de neuroblastome a été réalisée. Efficacité de l'infection, la réplication virale et activité lytique du H-1PV ont été analysés dans 11 lignées de cellules de neuroblastome statut MYCN différent. Oncoselectivity du virus a été confirmée par l'infection des cultures à court terme de cellules de nourrissons non malins d'origine différente. Dans ces cellules non transformées, aucun effet de H-1PV sur la viabilité ou la morphologie des cellules a été observée. En revanche, une infection lytique a été induite chez toutes les lignées de cellules de neuroblastome examinées au MOIs entre 0,001 et 10 pfu/cellule. H-1PV répliqué activement avec des titres de virus augmente jusqu'à 5,000-fold dans les 48-96 h après l'infection. L'effet lytique de H-1PV observa indépendante du statut de MYCN oncogene amplification ou de différenciation. En outre, une importante G2-arrestation et induction de l'apoptose a peuvent démontrer. Efficacité de l'infection, réplication virale rapide et exhaustives effets lytiques sur les cellules de neuroblastome ainsi que de la faible toxicité du H-1PV pour les cellules non transformées, rendent cet parvovirus un candidat prometteur pour la virothérapie ONCOLYTIQUE du neuroblastome.

ONCOLYTIQUE Parvovirus Comme Agents Thérapeutiques Du Cancer

Cytokine & Growth Factor Reviews. Apr-Jun, 2010  |  Pubmed ID: 20211577

L'infectiosité expérimentale et l'excellente tolérance de certains rongeurs parvovirus autonomes chez l'homme, ainsi que leurs effets oncosuppressive dans les modèles précliniques, parlent pour l'inclusion de ces agents dans l'arsenal du virus oncolytiques envisagées pour le traitement du cancer. En particulier, le parvovirus sauvage H-1PV peut obtenir une guérison complète de diverses tumeurs chez des modèles animaux et tuer les cellules tumorales qui résistent aux traitements anticancéreuses conventionnels. Il n'y a plus de preuves que H-1PV oncosuppression comporte une composante immunitaire, en plus de l'effet direct oncolytiques virale. Cet article résume l'évaluation récente de l'activité antinéoplasique H-1PV gliome, adénocarcinome ductal pancréatique, et modèles de lymphome non hodgkinien, jetant les bases pour l'instant lancer une première phase I / IIa essai clinique sur des patients de gliome.

Améliorée De Tuer Des Cellules De Gliome Humain En Combinant Des Rayonnements Ionisants Avec H-1 Infection Par Le Parvovirus Oncolytiques

Journal of Biomedicine & Biotechnology. 2010  |  Pubmed ID: 20224643

Pour élucider l'influence des rayonnements ionisants (IR) sur l'activité ONCOLYTIQUE du Parvovirus H-1 (H-1PV) dans les cellules de gliome humain.

Régression De Rat Avancé Et Gliomes Humains Par Un Traitement Local Ou Systémique Avec Oncolytiques Parvovirus H-1 Dans Les Modèles De Rat

Neuro-oncology. Aug, 2010  |  Pubmed ID: 20299703

ONCOLYTIQUE virothérapie est une modalité de traitement potentiel sous enquête pour diverses tumeurs malignes, y compris les tumeurs malignes du cerveau. Contrairement à d'autres virus naturels ou modifiés qui montrent une activité ONCOLYTIQUE contre les tumeurs cérébrales, le parvovirus rongeur H-1 (H-1PV) est complètement apathogenic chez l'homme. H-1PV tue efficacement un certain nombre de cellules tumorales sans nuire à ceux normal correspondant. Dans cette étude, le concept de base H-1PV virothérapie de gliome a été testé pour rat (RG 2 culture cellulaire) et humaines (U87 culture cellulaire) gliomes dans les modèles de rat immunocompétent et immunodéprimé, respectivement. Rat orthotopique grand et tumeurs de cellules dérivées de gliome humain ont été traités avec intratumorale stéréotaxique unique ou multiples par voie intraveineuse (iv) les injections H-1PV. Oncolysis a été surveillé par imagerie par résonance magnétique et prouvé par l'histologie. La réplication et la distribution de virus ont été déterminées dans le cerveau et les organes. Immunocompétentes rats porteurs de tumeurs dérivés du RG-2, une injection intratumorale stéréotaxique unique de H-1PV et plusieurs applications de (iv) systémiques du virus ne suffisaient pas pour la rémission des avancées et même symptomatiques des gliomes intracrâniens sans endommager le tissu cérébral normal ou d'autres organes. H-1PV permis de survie significativement améliorée (analyse de Kaplan-Meier) chez le rat et le modèles de gliome humain. Réplication du virus dans les tumeurs ont indiqué une contribution d'infection secondaire par le virus de la progéniture à l'efficacité du oncolysis. Réplication du virus a été restreinte aux tumeurs, bien que H-1PV ADN puisse être détecté transitoirement dans le tissu cérébral normal adjacent ou à distance et dans les tissus noncerebral. Les résultats présentés ici et l'innocuité de H-1PV pour l'homme plaident pour l'utilisation du H-1PV comme un moyen puissant pour exécuter oncolytiques des gliomes malins.

Grâce à Son Protéine Non Structurale NS1, Le Parvovirus H-1 Induit L'apoptose Par L'accumulation Des Espèces Réactives De L'oxygène

Journal of Virology. Jun, 2010  |  Pubmed ID: 20375165

Le parvovirus du rat H-1 (H-1PV) attire une grande attention en tant qu'agent anticancéreux, car il n'est pas pathogène pour l'homme et possède des propriétés oncotropic et oncosuppressive. La protéine non structurale NS1 virale est pensé pour servir de médiateur H-1PV cytotoxicité, mais sa contribution exacte à ce processus n'est pas encore défini. Dans cette étude, nous avons analysé les effets de la H-1PV protéine NS1 sur la prolifération cellulaire humaine et la viabilité cellulaire. Nous montrons que la protéine NS1 expression est suffisante pour induire l'accumulation de cellules dans G (2) de phase, l'apoptose via la caspase 9 et 3 activation, et la lyse cellulaire. De même, les cellules infectées par le type sauvage H-1PV arrestation en G (2) de phase et l'apoptose. En outre, nous montrons aussi que la fois l'expression de la protéine NS1 et le plomb infection H-1PV à des niveaux plus élevés de intracellulaires espèces réactives de l'oxygène (ROS), associée à l'ADN double-brin. Traitement antioxydant réduit les niveaux de ROS et diminue fortement dommages à l'ADN NS1 et induite par le virus, arrêt du cycle cellulaire et l'apoptose, ce qui indique que la protéine NS1 induit ROS sont des médiateurs importants de H-1PV cytotoxicité.

Butyrate De Sodium Avec L'UCN-01 a Marqué Une Activité Antitumorale Contre Les Cellules Cancéreuses Du Col Utérin

Anticancer Research. Oct, 2010  |  Pubmed ID: 21036719

L'effet de combiner le butyrate de sodium (NAB), un inhibiteur d'histone désacétylase, et 7-hydroxy-staurosporine (UCN-01) sur la cytotoxicité dans des cellules de carcinome du col utérin a été évaluée.

Implications Thérapeutiques De La Cytotoxicité Accrue De Courte Et Long Terme De La Radiothérapie Suivie Oncolytiques Parvovirus Infection H-1 Dans Les Cellules De Gliome

Bioengineered Bugs. Nov-Dec, 2010  |  Pubmed ID: 21468212

Le pronostic des tumeurs malignes du cerveau reste extrêmement mauvais en dépit de modestes améliorations des traitements conventionnels. Une approche alternative prometteuse est l'utilisation de virus oncolytiques. Stratégies visant à améliorer la toxicité virale comprendre la combinaison des virus oncolytiques avec des thérapies standards. Le parvovirus H-1 (H-1PV) est un virus ONCOLYTIQUE toxicité éprouvée dans les cellules de gliome. Récemment, il a été démontré que la combinaison du rayonnement ionisant (IR) avec H-1PV ont montré des résultats prometteurs. Précédemment, des cellules de gliome irradiés est restés totalement permissives pour H-1PV induite par cytotoxicité justifiant l'utilisation de H-1PV pour les gliomes récurrents, qui découlent en général de clones de cellules irradiées. Lorsque les cellules de gliome étaient infectés par H-1PV peu (24h) après IR, mort cellulaire améliorée et seule la combinaison de deux traitements entraînent complète à long terme mort cellulaire de tumeur. La dernière constatation soulève la question si IR en combinaison avec H-1PV exerce un effet thérapeutique supplémentaire sur les cellules souches de gliomes hautement résistant. Une traduction probable dans des protocoles de traitement clinique actuelle consiste à utiliser la radiothérapie stéréotaxique de gliomes récurrents non résécables, suivie d'une injection intratumorale de H-1PV de récolter les effets synergiques de la polythérapie.

Les Effets Combinés Des Réovirus Oncolytiques Plus De Virus De La Maladie De Newcastle Et De Réovirus Plus De Parvovirus U87 Et U373 Des Cellules in Vitro Et in Vivo

Journal of Neuro-oncology. Sep, 2011  |  Pubmed ID: 21607667

Les résultats antérieurs avaient documenté oncolytiques capacité de réovirus, parvovirose et virus de la maladie de Newcastle (NDV) sur plusieurs types de cellules de tumeur. Pour vérifier si les combinaisons de ces virus peuvent augmenter cette capacité, U87 - et U373-glioblastome humain cellules in vitro ou xénogreffe immunodéprimés chez la souris, ont été soumis à des infections doubles simultanées et analysés. Nos résultats montrent que les réovirus (sérotype-3) plus de NDV (Hitcher-B1) et de réovirus plus de parvovirus-H1 conduisent à une augmentation significative de la tumeur cellulaire tuant in vitro dans les deux lignées cellulaires (test de Kruskal-Wallis, P < 0,01) et in vivo. Immunofluorescence et écoulement cytometry analyses ont démontré la réplication simultanée des virus dans presque toutes les cellules (> 95 %) après avoir combiné l'infection. Ces données indiquent donc qu'un effet antitumoral synergique est possible par l'infection combinée avec les virus oncolytiques.

Régression De Gliome Dans Les Modèles De Rat Par Application Intranasale De Parvovirus H-1

Clinical Cancer Research : an Official Journal of the American Association for Cancer Research. Aug, 2011  |  Pubmed ID: 21715567

Dans des études précédentes, nous avons montré que la parvovirose de rat apathogenic H-1 (H-1PV) est capable d'induire la régression des avancées rat symptomatique et gliomes humains dans un modèle de rat, lorsque le virus a été injecté dans la tumeur (données) ou par voie intraveineuse. L'infection par H-1PV n'a pas provoqué de toute pathologie dans le tissu retrouve. Cette étude aborde la question si l'application intranasale de ce virus oncolytiques est également appropriée et suffisante pour le traitement des gliomes chez ce modèle animal.

L'interféron γ Améliore Le Potentiel De La Vaccination Du Oncolytiques Parvovirus H-1PV Pour Le Traitement De La Carcinose Péritonéale Dans Le Cancer Pancréatique

Cancer Biology & Therapy. Nov, 2011  |  Pubmed ID: 22024742

Virus oncolytiques avec leur capacité de répliquer en spécifiquement et de tuer les cellules tumorales a émergé comme une nouvelle classe de traitements du cancer. Le parvovirus oncolytiques rat (H-1PV) a été utilisé pour traiter différents types de cancer chez les paramètres précliniques et a été récemment avec succès combiné avec gemcitabine standard de chimiothérapie dans le traitement de l'adénocarcinome ductal pancréatique (ACPE) chez les rats. Nos travaux antérieurs ont montré que le système immunitaire et en particulier la libération de l'interféron gamma (IFNγ) semblent médier l'effet anticancéreux de H-1PV dans ce modèle. Par conséquent, nous avons pensé que les propriétés thérapeutiques des H-1PV peuvent être augmentées avec IFNγ pour le traitement des stades incurables du CCPP comme carcinose péritonéale. Rats porteurs établi orthotopique carcinomes pancréas avec métastases péritonéales ont été traités avec un seul intratumorale (i.t.) ou injection intrapéritonéale (i.p.) de 5 x 10⁸ plaque unités formatrices de H-1PV avec ou sans application d'IFNγ concomitante. Injection intratumorale s'est avéré plus efficace que la voie intrapéritonéale en contrôlant la croissance des tumeurs pancréatiques primaires et carcinose péritonéale, accompagné de migration du virus du primaire aux dépôts métastatiques. Traitement concomitant i.p. de H-1PV avec recIFNγ a effet thérapeutique améliorée, ce qui donne une survie animale étendue, comparée à traitement i.p. avec H-1PV seul. Tout en causant une réduction significative dans les titres d'anticorps H1-PV-neutralisant dans le liquide d'ascite, l'application de l'IFNγ accrue induite par H-1PV péritonéales macrophage et splénocytes réponses contre les cellules tumorales. Ainsi, acquises IFNγ avec H-1PV pourrait être considéré comme une nouvelle option thérapeutique pour améliorer la survie des patients ACPE avec carcinose péritonéale.

Activation Du Système Immunitaire Humain Par Des Agents Chimiothérapeutiques Ou Ciblées, Combinée Avec La Parvovirose Oncolytiques H-1

BMC Cancer. 2011  |  Pubmed ID: 22029859

Le parvovirus H-1 (H-1PV) infecte et lyse des cellules tumorales humaines, y compris le mélanome, hépatome, cancer colorectal, cancer gastrique, du col de l'utérus et cancers du pancréas. Nous avons évalué si les effets bénéfiques d'une chimiothérapie ou agents ciblés pourraient être combinées avec les propriétés oncolytiques et immunostimmulatory de H-1PV.

Cellules Immunitaires Participent à L'activité Oncosuppressive Du Parvovirus H-1PV Et Sont Activées à La Suite De Leur Infection Avortée Avec Cet Agent

Cancer Biology & Therapy. Jan, 2011  |  Pubmed ID: 21124075

Traitement des cancers par le biais de virus, plus précisément répliquent dans (oncotropism) et tuent les cellules néoplasiques (oncolysis), est de plus en plus plus accepté dans la clinique. Parmi ces agents, parvovirus ont démontré non seulement oncolytiques direct mais aussi des propriétés immunomodulatrices, agissant comme un adjuvant pour amorcer le système immunitaire à réagir contre les tumeurs infectées. Ici, nous avons cherché à établir si des mécanismes immunomodulateurs participent au potentiel thérapeutique rapporté récemment des parvovirus contre le cancer du pancréas. À l'aide d'expériences de transfert adoptif nous avons découvert que le transfert des splénocytes de rats donneur hébergeant des tumeurs traitées H-1PV orthotopique ACPE pourrait prolonger significativement la survie des naïfs avec tumeur destinataires, par rapport aux cellules réceptrices des donateurs imprégnées sur la maquette. Enquête plus proche des paramètres immunologiques chez le rat donneur contaminé a révélé que la production de gamma d'interféron induite par le virus et la réponse immunitaire cellulaire joué un rôle important à cet effet. Ces données ont également préclinique pertinence depuis avortée H-1PV infection des cellules mononucléaires de sang périphérique humain ou la co-culture de ces cellules avec des cellules de H-1PV-preinfected d'un cancer du pancréas, a donné lieu à une amélioration de la réactivité immunitaire innée et adaptative. Ensemble nos données révèlent qu'oncolytiques H-1PV module le système immunitaire dans un État anticancéreux et étayer davantage le concept de l'utilisation de parvovirus dans la lutte contre le cancer du pancréas.

Amélioration Des Réponses Antitumorales Des Cellules NK Utilisant Un Parvovirus Oncolytiques

International Journal of Cancer. Journal International Du Cancer. Feb, 2011  |  Pubmed ID: 20473905

Naturels killer (NK) cellules jouent un rôle vital dans le rejet de tumeurs. Adénocarcinome ductal pancréatique (ACPE), cependant, reste un cancer de mauvais pronostic, en raison de sa résistance à radio - chimiothérapie et faible immunogénicité. Nous montrons ici qu'IL-2-activé de humains cellules NK sont capables de tuer des cellules de l'ACPE. Actuellement, les nouvelles stratégies sont menés pour combattre l'ACPE. À cet égard, les virus oncolytiques, en plus de tuer les cellules tumorales, peut-être aussi le potentiel pour augmenter les réponses immunitaire antitumorales. Nous avons constaté que, en plus d'avoir une activité intrinsèque oncolytiques, parvovirose H-1PV est en mesure d'améliorer la mort de NK médiation cellulaire des cellules de l'ACPE. Nos résultats montrent que l'infection des cellules Panc-1 H-1PV augmente la capacité de la cellule NK pour libérer l'IFN-γ, TNF-α et MIP-1α / β. plusieurs récepteurs activation sont impliqués dans le NK cell-mediated tuant des cellules Panc-1. En effet, blocage des récepteurs des cytotoxicité naturelle-NKp30, 44 et 46 en combinaison et NKG2D et DNAM1 seul inhibent la mort des cellules Panc-1. Fait intéressant, l'infection des cellules Panc-1 H-1PV surmonte la partie des effets inhibiteurs, ce qui suggère que le parvovirus peut induire des ligands de cellules NK supplémentaires sur les cellules Panc-1. La sensibilité accrue des cellules infectées par H-1PV ACPE à tuer dépendant des lymphocytes NK peut être retracée jusqu'à la régulation positive du ligand DNAM-1, CD155 et à la diminution de l'expression du CMH de classe I expression. Nos données suggèrent que les cellules NK affichent antitumoral potentiel contre l'ACPE et cette immunothérapie oncolytiques H dotés de 1PV pourrait plus poussée des réponses immunitaires à médiation – cellules NK et contribuent à développer une approche combinatoire thérapeutique contre l'ACPE.

Reciblage Du Parvovirus H-Rat 1PV à Cellules Cancéreuses Par Le Génie Génétique De La Capside Virale

Journal of Virology. Apr, 2012  |  Pubmed ID: 22258256

Le parvovirus du rat H-1PV est un agent anticancéreux prometteur compte tenu de ses propriétés oncosuppressive et l&#39;absence d&#39;effets secondaires connus chez les humains. H-1PV réplique préférentiellement dans les cellules transformées, mais le virus peut pénétrer à la fois normale et les cellules cancéreuses. L&#39;absorption par les cellules normales séquestre une partie importante de la dose administrée virale loin de la cible tumorale. Par conséquent, le ciblage H-1PV entrée spécifiquement aux cellules tumorales est important d&#39;augmenter l&#39;efficacité de traitements à base de parvovirus. Dans cette étude, nous avons d&#39;abord constaté que l&#39;acide sialique joue un rôle clé dans la H-1PV entrée. Nous avons ensuite génétiquement la capside H-1PV pour améliorer son affinité pour les cellules tumorales humaines. Par analogie avec la structure cristalline résolue du virus minute parvovirus étroitement lié de souris, nous avons développé un modèle in silico en trois dimensions (3D) de la H-1PV de type sauvage capside. Basé sur ce modèle, nous avons identifié putatifs des acides aminés impliqués dans la reconnaissance membrane cellulaire et l&#39;entrée du virus au niveau de l&#39;axe 2-fois de la symétrie de la capside, dans la région fossette dite. En mutagenèse in situ de ces résidus considérablement réduit la liaison et l&#39;entrée de la H-1PV dans les cellules permissives. On puis conçu une capside virale entrée de déficience de et inséré une cyclique RGD-4C peptide au niveau de son pic axe 3 fois. Ce peptide se lie α (v) β (3) et α (v) β (5) intégrines, qui sont surexprimées dans les cellules cancéreuses et les vaisseaux sanguins en croissance. L&#39;insertion du peptide sauvé infectivité virale vers les cellules surexprimant α (v) β (5) les intégrines, qui entraîne la mort efficace de ces cellules par le virus remanié. Ce travail démontre que H-1PV peuvent être génétiquement réorientées par la modification de sa capside, semble très prometteur pour une utilisation plus efficace de ce virus dans le traitement du cancer.

Activation D'un D'assistance Et De La Réponse Des Lymphocytes T CD4 + Humaine Non Réglementaire Par Le Parvovirus Oncolytiques H-1

PloS One. 2012  |  Pubmed ID: 22359669

H-1 parvovirus (H-1 PV), un rongeur oncolytiques autonome le parvovirus, est apparu comme une nouvelle classe d'agents anticancéreux prometteurs, à cause de sa capacité à trouver de manière sélective et détruire les cellules malignes. Toutefois, pour sonder le potentiel antitumoral multimodal de PV de H-1, l'une des conditions principales est à déchiffrer l'interaction directe de H-1 PV avec le système immunitaire humain et prévenir ainsi tout risque de déficience.

La Phase I / IIa De L'administration Intratumorale/intracérébrale Ou Intraveineuse/intracérébrale De Parvovirus H-1 (ParvOryx) Chez Les Patients Atteints De Glioblastome Primaire Ou Récurrente Progressive : Protocole De ParvOryx01

BMC Cancer. Mar, 2012  |  Pubmed ID: 22436661

Résumé : Contexte : le traitement des patients atteints de tumeurs malignes du cerveau reste un problème majeur d'oncologique. La survie médiane des patients atteints de glioblastome multiforme (GBM), le type plus malin, est seulement 15 mois après le diagnostic initial et encore moins après une récidive tumorale. Améliorations du traitement standard, y compris la chirurgie et la radio-chimiothérapie n'ont pas de conduire à des améliorations majeures. Par conséquent, des thérapies alternatives telles que les virus oncolytiques qui précisément cibler et détruire les cellules cancéreuses sont sous enquête. Données précliniques du parvovirus oncolytiques H-1 (H-1PV) infection des cellules de gliome a démontré des effets cytotoxiques et oncosuppressing, menant à une phase I / IIa trial de H-1PV chez les patients atteints de GBM récurrent (ParvOryx01). ParvOryx01 est le premier essai avec un virus oncolytiques compétente de réplication en Allemagne. Méthodes : ParvOryx01 est un ouvert, non contrôlé, deux groupes, augmentation des doses intra-groupe, seul centre, phase I / IIa trial. 18 patients avec GBM récurrent seront traités dans les 2 groupes de 9 patients chacun. Le groupe de traitement 1 recevra tout d'abord H-1PV en injection intratumorale et, deuxièmement, par l'administration dans les parois de la cavité de la tumeur au cours de la résection de la tumeur. Dans le groupe de traitement 2 le virus sera initialement injecté par voie intraveineuse et par la suite, identique au groupe 1, dans les tissus environnants du cerveau au moment du retrait de la tumeur. Les critères principaux sont : moins de 18 ans, unifocales GBM récurrent, se prêtent à la résection totale ou subtotale. Augmentation des doses se fondera sur la méthode de réévaluation continuelle. Le principal objectif du procès est la tolérabilité et locale et systémique de la sécurité et pour déterminer la valeur maximale tolérée (MTD) de dose. Les objectifs secondaires sont une preuve de concept (PoC) et de la survie sans Progression (PFS) jusqu'à 6 mois. DISCUSSION : Il s'agit du premier procès avec H-1PV chez les patients atteints de GBM récurrent. Les risques pour les participants paraissent bien prévisible et justifiés. En outre, ParvOryx01 sera la première évaluation du combiné intratumorale et application par voie intraveineuse d'un virus oncolytiques. En raison de sa conception de l'étude, le procès sera non seulement de générer des données sur l'effet local de H-1PV mais également étudier la pénétration de H-1PV dans la tumeur après délivrance systémique et obtenir des données sur l'innocuité de délivrance systémique éventuellement appuyer les essais cliniques avec H-1PV dans autres, hors SNC malignes. Enregistrement des essais identificateur ClinicalTrials.gov : NCT01301430.