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Articles by Michael Cammer in JoVE
JoVE Immunology and Infection
Imaging di HIV-1 Envelope indotta Synapse virologica e segnalazione sui doppi strati lipidici sintetici
1Department of Pathology, New York University Langone School of Medicine, 2Program in Molecular Pathogenesis, Marty and Helen Kimmel Center for Biology and Medicine and Skirball Institute for Biomolecular Medicine, 3Laboratory of Molecular Immunogenetics, National Institute of Arthritis and Musculoskeletal and Skin Diseases, National Institutes of Health, 4Veteran Affairs New York Harbor Healthcare System
Questo articolo descrive un metodo per visualizzare la formazione di una sinapsi HIV-1 busta-indotta virologici vetro bistrati planari supportate da fluorescenza riflessione interna totale (TIRF) microscopia. Il metodo può anche essere combinato con immunofluorescenza per rilevare l'attivazione e ridistribuzione di molecole di segnalazione che si verificano durante HIV-1 busta indotta la formazione di sinapsi virologica.
Other articles by Michael Cammer on PubMed
Visualizzazione in Tempo Reale Dell'attività Della Chinasi Di Proteina in Cellule Viventi
Una libreria di substrati di fluorescente contrassegnati protein chinasi C (PKC) del peptide è stata preparata per identificare un reporter di fosforilazione indotto di attività della chinasi di proteina. Il substrato PKC piombo Visualizza un d' cambiamento intensità di fluorescenza su fosforilazione. Attività PKC è prontamente campionata in cella lysates contenente che attivato PKCs. Immunodepletion di PKCs convenzionale dalla cella lysate elimina la risposta di fluorescenza, suggerendo che questo substrato peptidico selettivamente è fosforilato da PKCalpha, beta e gamma. Infine, cellule viventi microinjected con il substrato peptide mostrano un aumento di 2 volte nell'intensità di fluorescenza su esposizione a un attivatore PKC. Questi risultati suggeriscono che biosensori di chinasi di proteina di base del peptide possono essere utile per monitorare la dinamica spaziale e temporale delle attività PKC in cellule viventi.
Miosina X è Un Effettore a Valle Di PI (3) K Durante La Fagocitosi
Fagocitosi sono una fosfatidilinositolo-3-OH-chinasi (PI (3) K)-processo dipendente in macrofagi. Abbiamo identificato Myo10 (miosina-X), un'anticonvenzionale miosina con settori dominii di omologia (PH), come un potenziale bersaglio a valle di PI (3) K. Myo10 è stati reclutati per fagocitaria tazze in maniera sensibile wortmannin. Espressione di un costrutto di troncamento di Myo10 (coda Myo10) in una linea cellulare dei macrofagi o caricamento citosolica degli anticorpi anti-Myo10 di fagocitosi dei macrofagi alveolari bovina inibiti. Al contrario, espressione di una coda Myo10 costrutto contenente una mutazione puntiforme in uno dei suoi domini PH non è riusciti a inibire la fagocitosi. Espressione di Myo10 coda ha inibito la diffusione, ma non l'adesione, su substrati ricoperti da IgG, coerenti con una funzione per Myo10 in estensione pseudopodo. Proponiamo che Myo10 fornisce un legame molecolare tra PI (3) K e pseudopodo estensione durante la fagocitosi.
Il Prodotto Del Gene Specifico Arresto Di Crescita Gas6 Promuove La Sopravvivenza Degli Oligodendrociti Umani Via Via Fosfatidilinositolo 3-chinasi-dipendente
Analisi di microarray ha rivelato che le trascrizioni per l'Axl e Mer le chinasi del recettore tirosina sono espressi ad alti livelli in O4 +-immunopanned oligodendrociti isolati dal secondo trimestre umano fetale del midollo spinale. Nell'uomo l'unico ligando noto per la chinasi Axl/Rse/Mer è gene specifico arresto di crescita 6 (Gas6), che nel SNC è secreta dalle cellule endoteliali e dei neuroni. Abbiamo ipotizzato che il Gas6 è un fattore di sopravvivenza per gli oligodendrociti e recettore attivazione segnali a valle per il fosfatidilinositolo 3 (PI3)-chinasi/Akt pathway di aumentare la sopravvivenza delle cellule in assenza di proliferazione cellulare. Per verificare questa ipotesi, siamo cresciuti arricchiti gli oligodendrociti umani per 6 d su un monostrato di cellule NIH3T3 che esprimono stabilmente Gas6. CNP + oligodendrociti su cellule 3T3 che secernono Gas6 avevano più primari processi e arborizations rispetto a quelli placcati unicamente su cellule 3T3. Inoltre, è stato osservato un aumento di duplice CNP + e MBP + oligodendrociti quando essi sono stati placcati sulle cellule secernenti Gas6. L'effetto è stato abolito in presenza di Axl-Fc ma è rimasta invariata in presenza della molecola di fusione irrilevante recettore TrkA-Fc. Una diminuzione significativa della CNP + TUNEL + oligodendrociti è stata osservata quando Gas6 umana ricombinante (rhGas6) è stato somministrato a oligodendrociti placcati su poli-L-lisina, sostenendo un ruolo per Gas6 segnalazione nella sopravvivenza Oligodendrocita durante un periodo di mielinizzazione attivo nello sviluppo fetale umano del midollo spinale. Gli inibitori della chinasi PI3 bloccato l'effetto anti-apoptotic di rhGas6, considerando che un inibitore MEK/ERK ha avuto alcun effetto. Così Gas6 sostiene la vitalità Oligodendrocita fetale umano dall'attivazione del recettore e segnalazione a valle attraverso il pathway PI3-chinasi/Akt.
Cyclin D1 Governa L'adesione E La Motilità Dei Macrofagi
Il cyclin D1 gene codifica per la subunità regolamentare di un esonucleasica che fosforila e inattiva la proteina del retinoblastoma, promuovendo così la progressione del ciclo cellulare. Cyclin D1 è overexpressed in hematopoetic e neoplasie epiteliali correlazione con prognosi infausta e metastasi in diversi tipi di cancro. Perché macrofagi associati al tumore hanno dimostrati di migliorare la progressione maligna e metastasi, e topi di cyclin D1-carenti sono resistenti ai tumori maligni del oncogene-indotta, abbiamo studiato la funzione del cyclin D1- / -macrofagi derivati dal midollo osseo. Cyclin D1 deficit focale formazione complessa presso il sito di contatto substrato è aumentato e migliorata adesione dei macrofagi, producendo una morfologia appiattita, circolare con membrana ridotta volant. Migrazione in risposta al ferimento, mediata da citochine chemiotassi e migrazione cellulare transendoteliale di cyclin D1- / -macrofagi derivati dal midollo osseo sono stati tutti sostanzialmente ridotto. Così, oltre alla motilità proliferativa e possibili difetti nel tumore delle cellule stesse, l'invasività e ridotta motilità dei macrofagi cyclin D1 /-tumore-associati possono contribuire alla resistenza tumorale di questi topi.
Trattamento (MG-132) Inibitore Del Proteasoma Di Topi Mdx Salvò La Localizzazione Membrana Ed Espressione Di Distrofina E Distrofina-associated Proteins
Distrofina, il proteina prodotto del gene Duchenne muscular dystrophy (DMD), è assente nel muscolo scheletrico di pazienti DMD e topi mdx. Alla membrana del plasma delle fibre muscolari scheletriche, distrofina associa una proteina multimerica complessa, definito la distrofina-glicoproteina complesso (DGC). Membri della proteina di questo complesso sono normalmente assente o notevolmente ridotta nelle fibre muscolari scheletriche distrofina-carenti e si pensiero che subiscono degradazione attraverso un percorso sconosciuto. Come tale, abbiamo ragionato che l'inibizione della via di degradazione proteosomale potrebbe salvare l'espressione e la localizzazione sottocellulare della distrofina-associated proteins. Per verificare questa ipotesi, abbiamo trattato topi mdx con l'inibitore di proteosomale ben caratterizzati MG-132. In primo luogo, abbiamo localmente iniettato MG-132 nel muscolo gastrocnemio e osservate il risultato dopo 24 ore. Successivamente, abbiamo eseguito il trattamento sistemico, utilizzando una pompa osmotica che ci ha permesso di fornire diverse concentrazioni dell'inibitore proteosomale, per un periodo di 8 giorni. Di immunofluorescenza e analisi Western blot, ci mostra che la somministrazione dell'inibitore proteosomale MG-132 salvò efficacemente i livelli di espressione e localizzazione della membrana plasmatica della distrofina, beta-distroglicano, alfa-distroglicano e alfa-sarcoglicano nelle fibre muscolari scheletriche da topi mdx. Inoltre, ci mostra che il trattamento sistemico con l'inibitore proteosomale 1) riduce danno della membrana muscolare, come rivelato dalla colorazione vitale (con colorante blu di Evans) del diaframma e gastrocnemio muscolo isolato da topi mdx trattata e 2) migliora i segni istopatologici di distrofia muscolare, a giudicare dalle ematossilina ed eosina colorazione delle biopsie muscolari prelevate da topi mdx trattata. Così, l'attuale studio apre vie nuove e importanti nella nostra comprensione della patogenesi della DMD. Soprattutto, queste nuove scoperte possono avere implicazioni cliniche per il trattamento farmacologico dei pazienti con DMD.
Espressione Genica E Mitotica Uscita Indotta Da Farmaci Microtubule-stabilizzante
Per esplorare i meccanismi molecolari sottostanti le azioni di Taxol e la molecola funzionalmente correlati epothilone B (EpoB), abbiamo analizzato i profili di espressione genica in cellule A549 in risposta all'aumento di concentrazioni di questi farmaci di stabilizzazione dei microtubuli. Un modello di espressione quasi identica è stato osservato nelle cellule trattate con Taxol o EpoB. Basse concentrazioni dei farmaci indussero mitosi aberrante tra cui asimmetriche e multipolare divisioni cellulari. A concentrazioni di farmaco che ha scatenato G (2)-M arrestare, cellule fuoriuscite da un prolungato arresto mitotico senza divisione cellulare, con conseguente tetraploidi cellule g (1). Questo slittamento mitotico è correlato con diminuita espressione di cdc2 chinasi, topoisomerasi IIalpha, BUB3 e BUB2-come proteina 1, nonché con un'aumentata espressione del 14-3-3-sigma. Poly(ADP-Ribose) scissione della polimerasi, un indicatore precoce di apoptosi, si è verificato nelle cellule in fase di slittamento mitotico e in cellule aneuploidi risultanti dalla mitosi aberrante. Al contrario, cellule arrestate nella mitosi dimostrato che alcun segnale per apoptosi, ma non aveva un'aumentata espressione di survivina, un inibitore dell'apoptosi. Induzione di cellule g (1) aneuploidi o tetraploidi era accompagnata da aumentata espressione di CD95, p21 e BTG2 che possono contribuire alla morte delle cellule, perché la loro espressione è stata diminuita in una linea cellulare EpoB-resistente. Al contrario, espressione di GADD45 e PTGF-beta potrebbe promuovere la sopravvivenza delle cellule. Concludiamo che uscita mitotica anormale è richiesto per morte cellulare apoptotica indotta da farmaci microtubule-stabilizzante.
Analisi Strutturale E Funzionale Del Recettore Costimolazione Programmato Morte-1
PD-1, un membro della famiglia di costimolazione recettore CD28/CTLA-4/ICOS, trasporta segnali negativi che hanno effetti profondi sull'immunità delle cellule B e T. Il 2.0 una struttura di cristallo del dominio extracellulare di murino PD-1 rivela una topologia di tipo Ig V con generale somiglianza con il monomero CTLA-4; Tuttavia, ci sono notevoli differenze nelle regioni pertinenti alla funzione. I nostri dati strutturali e biofisici dimostrano che PD-1 è monomerico sia in soluzione che sulla superficie di cellule, a differenza di CTLA-4 e altri membri della famiglia che sono tutti collegati a disolfuro omodimeri. Inoltre, i nostri studi di mutagenesi basati sulla struttura identificano la superficie di associazione del ligando di PD-1, che mostra differenze significative rispetto a quelli presenti in altri membri della famiglia.
Macrofagi Promuovere L'invasione Delle Cellule Di Carcinoma Del Seno Tramite Un Colony-stimulating Factor-1/epidermal Growth Factor Paracrina Loop
Precedenti studi hanno dimostrato che i macrofagi e le cellule tumorali sono comigratory nei tumori mammari e che questi tipi di cellule sono reciprocamente dipendenti per invasione. Qui dimostriamo che i macrofagi e le cellule tumorali sono necessarie e sufficienti per comigration e l'invasione in collagene I e che questo processo comporta un paracrina loop. Macrofagi esprimono il fattore di crescita epidermico (EGF), che promuove la formazione di sporgenze allungate e invasione delle cellule da parte delle cellule di carcinoma. Fattore stimolante Colonia 1 (CSF-1) prodotte dalle cellule di carcinoma promuove l'espressione di EGF dai macrofagi. Inoltre, EGF promuove l'espressione di CSF-1 da cellule di carcinoma quindi generando un ciclo di feedback positivo. Interruzione di questo ciclo di blocco del recettore EGF o CSF-1 receptor signaling è sufficiente per inibire la migrazione delle cellule di tumore e dei macrofagi sia invasione.
Estrogeni E Resveratrolo Regolano Rac E Cdc42 Segnalazione Al Citoscheletro Di Actina Delle Cellule Di Cancro Al Seno Metastatico
Estrogeni e molecole strutturalmente correlati svolgono un ruolo critico nel cancro al seno. Abbiamo segnalato che il resveratrolo (50 microM), un fitosterolo estrogeno-simile dall'uva, agisce in maniera antiestrogenica in cellule cancro al seno per ridurre la migrazione cellulare e di indurre un'estensione globale e duratura di actina strutture chiamate filopodia. Qui, segnaliamo che la formazione indotta da resveratrolo filopodia è dipendente dal tempo e concentrazione-dipendente. In contrasto con resveratrolo a 50 microM, resveratrolo a 5 microM agisce in maniera simile agli estrogeni aumentando lamellipodia, così come cella di migrazione e invasione. Perché Rho GTPases regolano l'estensione delle strutture dell'actina, abbiamo studiato un ruolo per Rac e Cdc42 in estrogeni e segnalazione di resveratrolo. I nostri risultati dimostrano che il resveratrolo 50 microM diminuisce attività Rac e Cdc42, considerando che gli estrogeni e 5 microM resveratrolo aumentare l'attività di Rac in cellule di cancro al seno. Cellule MDA-MB-231 esprimendo Cdc42 dominante-negativo o Rac-dominante-negativo mantengono filopodia risposta a 50 microM resveratrolo. Risposta Lamellipodia 5 microM resveratrolo, estrogeni o fattore di crescita epidermico è inibita nelle cellule che esprimono Rac dominante-negativo, indicando che Rac regola estrogeni e resveratrolo (5 microM) di segnalazione per il citoscheletro di actina. Questi risultati indicano che segnalazione al citoscheletro di actina da alte e basse concentrazioni di resveratrolo potrebbe essere diversamente regolamentata dal Rac e Cdc42.
Cdc42 è Richiesto Per La Protrusione EGF-stimolata E Motilità in Cellule Di Carcinoma MTLn3
Cdc42 svolge un ruolo centrale nella regolazione del citoscheletro di actina e mantenendo la polarità delle cellule. Qui, vi mostriamo che Cdc42 è cruciale per il fattore di crescita epidermico (EGF)-stimolato protrusione in cellule di carcinoma MTLn3. Quando stimolati con EGF, cellule di carcinoma ha mostrato un aumento rapido Cdc42 attivato che è principalmente localizzata al bordo sporgente delle cellule. siRNA-mediata atterramento di espressione Cdc42 ha causato una diminuzione della protrusione EGF-stimolata e ridotta motilità cellulare in studi time-lapse. Questi cambiamenti sono stati correlati con una diminuzione della formazione di filo spinato-fine e localizzazione Arp2/3 presso il bordo della cella e un marcato difetto di actina filamenti ramificazione, come rivelato dal rotary shadowing scanning electron microscopy. A Monte di Arp2/3, Cdc42 atterramento inibito EGF-stimolata l'attivazione di PI 3-chinasi a precoce (entro 1 minuto) ma punti temporali non tarda (entro 3 minuti). Membrana di targeting di N-WASP, WAVE2 e IRSp53 sono stati anche inibito. Effetti sul WAVE2 non erano causa di Rac1 inibizione, perché WAVE2 reclutamento è influenzato da Rac1 atterramento. I nostri dati suggeriscono che l'attivazione Cdc42 è cruciale per la regolazione della polimerizzazione dell'actina nelle cellule di carcinoma e necessari per protrusione EGF-stimolata e la motilità cellulare indipendentemente dagli effetti sulla Rac.
EGF-indotta PIP2 Idrolisi Rilascia E Attiva Cofilin Localmente in Cellule Di Carcinoma
Lamellipodial protrusione e migrazione direzionale delle cellule di carcinoma verso chemioattrattanti, come fattore di crescita epidermico (EGF), dipendono dal regolamento spaziale e temporale del citoscheletro di actina di actina-binding proteins (SOA). Generalmente si ipotizza che l'attività di molti SOA sono temporalmente e spazialmente regolati da PIP(2); Tuttavia, questo è principalmente basato su negli studi in vitro-associazione e strutturali, e generalmente sono privo di prove in vivo. Qui, forniamo i dati in vivo primi che visualizzare direttamente il regolamento spaziale e temporale dei cofilin di PIP(2) in cellule viventi. Mostriamo che EGF induce una rapida perdita di PIP(2) attraverso l'attività PLC, risultante in un rilascio e l'attivazione di un pool di membrana-limiti di cofilin. Dopo il rilascio, troviamo che cofilin si lega a e recide F-actina, che è coincidente con formazione di actina polimerizzazione e lamellipod. Inoltre, i nostri dati forniscono la prova per come PLC è coinvolto nella formazione di protrusioni in cellule di carcinoma del seno durante la chemiotassi e metastasi verso EGF.
Crescita E Pigmento Produzione Su Supporto D-triptofano Da Cryptococcus Gattii, Cryptococcus Neoformans E Candida Albicans
Data la crescente prevalenza di criptococcosi causate da ceppi di Cryptococcus gattii (sierotipi B e C), c'è bisogno di test rapidi e affidabili che discriminano gattii c. da Cryptococcus neoformans (sierotipi A, D e AD). Settanta-due C. neoformans ceppi, ceppi di C. sessantasette gattii e cinque ceppi di Candida albicans sono stati analizzati per la loro capacità di crescere e produrre pigmento su terreno minimo D-triptofano D-prolina (DTDP-m), sul mezzo di lievito carbonio base D-triptofano D-prolina (DTDP-YCB) e sul mezzo di fruttosio D-triptofano glicina (m-FDTG). Il c. gattii e c. neoformans isolati, 94% e 0% è cresciuta su agar m-DTDP, rispettivamente, e 98% e 0% è cresciuto in mezzo YCB DTDP, rispettivamente. C. gattii prodotto grandi quantità di pigment(s) intracellulare marrone su agar m-DTDP e piccole quantità di giallo-marrone pigment(s) extracellulare (ambra). C. albicans è cresciuto su entrambi i media e prodotto un pigmento rosa photoactivated su agar m-DTDP. C. gattii è prodotto in grandi quantità di pigmenti marroni intracellulare sul differenziale medio m-FDTG, mentre c. neoformans prodotte piccole quantità di pigmenti marroni e c. albicans prodotto un pigmento rosa. I pigmenti prodotti da c. gattii da D-triptofano sono stati distinti e non erano correlati alla formazione di melanina da 3,4-diidrossifenilalanina. Cromatografia di strato sottile di cellule estratte dal metanolo c. gattii rilevato quattro diversi pigmenti, tra cui brown (due tipi), giallo e rosa-viola composti. Possiamo concludere che i pigmenti derivati da triptofano non sono melanine e che crescita su m-DTDP o YCB DTDP agar può essere utilizzata per differenziare rapidamente gattii c. da c. neoformans.
Transcellular Migrazione Dei Neutrofili è Un Pathway Quantitativamente Significativi Attraverso Le Cellule Endoteliali Microvascolari Dermico
Stravaso del neutrofilo è centrale a malattie infiammatorie della pelle come psoriasi e dermatite atopica. In vivo, i neutrofili hanno dimostrati di migrare attraverso giunzioni cellula-cellula (paracellular pathway) o direttamente attraverso il corpo della cellula endoteliale (transcellular pathway). In vitro, tuttavia, migrazione dei neutrofili è un processo in gran parte paracellular dove cellule preferenzialmente croce agli angoli tricellular privo di giunzioni strette. Per approssimare il tipo delle cellule incontrate da extravasating neutrofili in vivo, abbiamo sviluppato un dosaggio di neutrofili-migrazione utilizzando primarie cutanee microvascolare endothelial cellule umane. Mostriamo qui che una grande percentuale di migrazione neutrofili traverse un monostrato di endotelio microvascolare utilizzando un percorso puramente transcellular. Inoltre, noi dimostrare che F-actina viene ridisposto similmente in neutrofili subendo diapedesi lungo una rotta. Questo modello in vitro strettamente simula il processo fisiologico di neutrofili stravaso in vivo e può essere ulteriormente utilizzato per valutare il contributo relativo di distinti percorsi migratori per la fisiopatologia della malattia infiammatoria della pelle.
Caveolina-1 Espressione Determina La Route Del Neutrofilo Stravaso Attraverso Microvasculature Pelle
Interleukin-8 gioca un ruolo chiave nella risposta infiammatoria acuta di mediazione del reclutamento dei neutrofili attraverso le pareti dei vasi nei tessuti colpiti. Durante questo processo, segnali molecolari guidano i neutrofili sangue circolante a target specifici vasi per stravaso e migrare attraverso tali vasi attraverso percorsi particolari. I nostri risultati mostrano che livelli endoteliali caveolina-1, la proteina responsabile dell'induzione dei domini di membrana denominate caveolae, sono fondamentali per ognuno di questi processi. Dimostriamo che, in risposta all'iniezione intradermica di interleuchina-8, i neutrofili sono reclutati preferenzialmente a un unico sottoinsieme di venule che esprimono alti livelli di adesione intercellulare molecola-1 e bassi livelli di caveolina-1. I nostri risultati mostrano che i neutrofili attraversano umane cellule endoteliali Microvascolari dermico utilizzando uno dei due percorsi: un percorso di transcellular direttamente attraverso la cellula o di un percorso paracellular attraverso giunzioni cellulari. Caveolina-1 espressione sembra favorire il percorso di transcellular mentre down-regulation della caveolina-1 promuove l'itinerario paracellular.
Il Meccanismo Di Attivazione Di Proteina Di CSF-1-induced Wiskott - Aldrich-Syndroms in Vivo: Un Ruolo Per Fosfatidilinositolo 3-chinasi E Cdc42
Un ruolo per la proteina di Wiskott - Aldrich-Syndroms (WASP) nella chemiotassi ai vari agenti è stato dimostrato in tipi di cellule derivate da monociti. Sebbene WASP ha dimostrato di essere attivato da molteplici meccanismi in vitro, non è chiaro come WASP è regolata in vivo. Un biosensore WASP (WASPbs), che utilizza la fluorescenza intramolecolare resonance energy transfer per segnalare l'attivazione di WASP in vivo, è stato costruito, e a seguito di transfezione di macrofagi, attivazione di WASPbs previo trattamento con colony-stimulating factor-1 (CSF-1) è stato rilevato globalmente più presto 30 s e rimasto nelle regioni localizzato alla protrusione a punti temporali successive. Risultati simili sono stati ottenuti quando attivazione endogena di WASP è stata determinata utilizzando anticorpi sensibili alla conformazione. Attivazione in vivo di CSF-1-induced WASP era completamente Cdc42-dipendente. Attivazione di Vespa in risposta al trattamento con CSF-1 è stato anche dimostrato di essere fosfatidilinositolo 3-chinasi-dipendente. Tuttavia, il trattamento con gli inibitori di chinasi della famiglia Src PP2 o SU6656 o interruzione del sito fosforilazione della tirosina principali di WASPbs (mutazione Y291F) non riduce il livello di attivazione indotta da CSF-1 WASP. I nostri risultati indicano che il WASP attivazione a valle del CSF-1R è fosfatidilinositolo 3-chinasi - e Cdc42-dipendente coerente con un coinvolgimento di queste molecole nella migrazione di macrofagi. Tuttavia, sebbene la fosforilazione della tirosina di Vespa è stato proposto di stimolare l'attività di WASP, abbiamo non trovato alcuna prova per indicare che questo si verifica in vivo.
Migrazione Cellulare Direzionale E Chemiotassi in Risposta Guarigione Ferita Di PDGF-AA Sono Coordinati Dal Cilio Primario Nei Fibroblasti
Motilità cellulare e migrazione svolgono un ruolo fondamentale in numerosi processi fisiologici e fisiopatologici, compresi lo sviluppo e la riparazione dei tessuti. Migrazione cellulare è regolato attraverso stimoli esterni quali derivato dalle piastrine growth factor-AA (PDGF-AA), un regolatore chiave nella migrazione direzionale delle cellule durante lo sviluppo embrionale e un chemoattractant durante postnatale risposte migratorie tra cui la guarigione della ferita. Abbiamo precedentemente dimostrato che PDGFRalpha segnalazione è coordinato dal cilio primario in cellule quiescenti. Tuttavia, poco è noto circa la funzione del cilio primario nella migrazione cellulare. Qui abbiamo usato analisi micropipetta per mostrare che una normale risposta chemosensory PDGF-AA in fibroblasti richiede il cilio primario. In vitro e in vivo wound healing dosaggi ha rivelato che in mouse ORPK (IFT88(Tg737Rpw)) fibroblasti, dove assembly ciliare è difettoso, chemiotassi verso PDGF-AA è assente, che porta ad alta velocità non regolamentata e incontrollata delle cellule direzionale spostamento durante la chiusura della ferita, con successivi difetti nella guarigione delle ferite. Questi dati suggeriscono che, in coordinamento con la riorganizzazione del citoscheletro, il cilio primario del fibroblasto funzioni via ciliare PDGFRalpha segnalazione per monitorare il movimento direzionale durante la guarigione della ferita.
