Translate this page to:
German
In JoVE (1)
Other Publications (4)
Automatic Translation
This translation into German was automatically generated.
English Version | Other Languages
Articles by Nuno Costa-Borges in JoVE
JoVE General
Sammlung und Kryokonservierung von Oozyten Hamster und Maus Embryonen
Unitat Biologia Cellular (Facultat de Biociències), Universitat Autonoma de Barcelona
In diesem Video-Artikel präsentieren wir Ihnen eine Schritt-für-Schritt-Demonstration von Möglichkeiten zur Sammlung und Kryokonservierung Hamster-Oozyten mit hoher post-Tau-Überlebensraten. Das gleiche Verfahren kann auch angewendet werden, um erfolgreich einfrieren und auftauen Maus-Embryonen in verschiedenen Stadien der Präimplantationsdiagnostik Entwicklung sein.
Other articles by Nuno Costa-Borges on PubMed
Antimitotic Behandlungen Für Assistierte Chemisch Eizelle Enukleations Kerntransfer Verfahren
Chemisch unterstützte Enukleations wurde erfolgreich an Schweinen und Rindern Eizellen zur Empfänger Cytoplasts Vorbereitung Kerntransfer Verfahren angewandt. In dieser Studie wurden die antimitotic Drogen Demecolcine, Nocodazole und Vinblastin zuerst für ihre Fähigkeit zu induzieren die Bildung von kortikalen Membran Vorsprünge in der Maus, Ziege und menschlichen Eizellen beurteilt. Während nur 2 % der behandelten menschlichen Eizellen eine Vorwölbung bilden konnten, wurden hohe Raten von Vorwölbung Bildung erzielt, sowohl in der Maus (84 %) und Ziege Eizellen (92 %), einmal für jede Art die Behandlung optimiert wurde. Keiner von den Mitosehemmstoffen angewendet war besser als die anderen in Bezug auf Vorwölbung Bildung, aber Maus Eizellen mit Vinblastin behandelt waren nicht normal Spindel Morphologie nach Droge entfernen und ihre in-vitro-Entwicklung wiederherstellen, nachdem parthenogenetic Aktivierung schwer gefährdet war, Rendern dieser Antimitotic nutzlos für chemisch assistierte Enukleations Ansätze. Aspiration von Vorsprüngen in Maus Eizellen mit Demecolcine oder Nocodazole zu 90 % erfolgreich entkernten Eizellen und erlaubt die Extraktion von eine kleinere Menge von Zytoplasma als mit mechanischen Enukleations behandelt, aber beide Enukleations-Methoden führte zu Erschöpfung der Spindel-assoziierte Gamma-Tubulin aus der vorbereiteten Cytoplasts. Behandlung von Maus-Eizellen mit Demecolcine oder Nocodazole hatten keine Auswirkungen auf ihre in-vitro-Entwicklung nach parthenogenetic Aktivierung oder auf ihre Fähigkeit, eine neue Spindel nach der Entfernung des Medikaments oder die Rekonstruktion der behandelten Cytoplasts mit einem somatischen Kern repolymerize. Daher erscheint die Demecolcine and Nocodazole-assisted Enukleations als effiziente Alternative zu mechanischen Enukleations, der Kerntransfer Verfahren vereinfachen kann.
Vergleich Zwischen Den Auswirkungen Der Valproinsäure Und Trichostatin A Auf Der In-vitro-Entwicklung, Blastozyste Qualität Und Endgültigen Entwicklung Der Maus Somatische Kerntransfer Embryonen
Eine Anpassung der differenzierten Kerne totipotente embryonalen Zustand nach Kerntransfer somatischer Zellen (SCNT) ist nicht effizient. Frühere Studien im Hybrid B6D2F1 Maus Belastung ergab, dass eine vorübergehende Behandlung der SCNT Embryonen mit dem Histon Deacetylase Inhibitor (HDACi) Trichostatin A (TSA) deutlich das Potenzial der geklonten Embryonen in vitro zu entwickeln und zu verbessern. Hier wir vergleichen zwei verschiedene SCNT-Protokolle mit TSA und erkunden, zum ersten Mal die Wirkung von anderen HDACi, Valproinsäure (VPA), auf der in-vitro-Entwicklung, Blastozyste-Qualität, und endgültigen Entwicklung der Maus B6CBAF1 geklonten Embryonen. Preise der Blastozyste Entwicklung SCNT Embryonen behandelt mit entweder 5 nM TSA während und nach der Aktivierung (31,8 %) oder mit 100 nM TSA oder 2 mM VPA vor und während der Aktivierung (34,5 und 38,3 %, beziehungsweise) waren diejenigen von unbehandelten SCNT Embryonen (22,9-25,1 %) deutlich überlegen. Diese in-vitro-Entwicklung-Preise der HDACi behandelten Embryonen wurden mit einer erhöhten Anzahl von Histon H3 Lysin 14 Acetylierung und verbesserte Blastozyste Qualität, korreliert, wie durch die erhöhte Anzahl von Total und ICM-Zellen im Vergleich zu den unbehandelten Embryonen (30-35 % Steigerung) beurteilt. Behandlung SCNT Embryonen mit TSA oder VPA ermöglichte auch die Obtention lebensfähigen geklonte Mäuse, während keiner aus unbehandelten SCNT Embryonen hergestellt werden konnte. Abschließend haben wir zum ersten Mal bewiesen, dass VPA die in vitro und endgültigen Entwicklung B6CBAF1 SCNT Embryonen auf einem ähnlichen Niveau wie TSA verbessern kann. Unsere Ergebnisse können neue Möglichkeiten zur Verbesserung von Klonen Effizienz in anderen Maus-Sorten oder Arten öffnen.
Demecolcine - Und Nocodazole-induzierte Enukleations in Maus Und Ziege Eizellen Für Die Vorbereitung Der Empfänger Cytoplasts in Somatische Kerntransfer Verfahren
Behandlung von voraktivierte Eizellen mit Demecolcine (DEM) hat sich die Extrusion alle Chromosomen der Eizelle im zweiten Polar Body (PB2) induzieren gezeigt. Jedoch induzierten Enukleations (IE) Preise sind im Allgemeinen gering und die Kompetenz der diese Cytoplasts zur Unterstützung der Entwicklung des Embryos nach Kerntransfer somatischer Zellen (SCNT) ist beeinträchtigt. Hier untersucht wir, ob kurze Behandlungen mit DEM oder einem anderen antimitotic, Nocodazole (NOC), IE-Effizienz verbessern und festgestellt hat, dass der geeignetste Zeitpunkt für Kerntransfer in der Cytoplasts produziert. Wir zeigen erstmals, dass IE in Maus und Ziege Eizellen mit NOC und dass kurze Behandlungen mit DEM oder NOC ähnliche IE-Preise, die erwies führen sich als Stamm - versierter und artspezifische sein kann. Da Enukleations, die durch waren beide antimitotic Drogen ist reversibel, das IE-Protokoll wurde zusammen mit der mechanischen Aspiration von PB2s, permanente Enukleations Preise in Maus Eizellen zu erhöhen. Keiner der geklonten Maus Embryonen produziert aus den resultierenden Cytoplasts entwickelt, um das Blastozystenstadium. Allerdings, wenn sie vor der Aktivierung und antimitotic Behandlung rekonstruiert wurden, war ihre in-vitro-Embryonalentwicklung ähnlich der geklonten Embryonen aus mechanisch enucleated Eizellen produziert.
Wirkung Des Enukleations Verfahrens Die Neuprogrammierung Potenzielle Und Entwicklungsstörungen Kapazität Der Maus Geklonten Embryonen Mit Valproinsäure Behandelt
Maus Empfänger Cytoplasts für Kerntransfer somatischer Zellen (SCNT) werden routinemäßig von mechanischen Enukleations (ME), ein invasives Verfahren zubereitet, die teure Ausrüstung und erhebliche Mikromanipulation Fähigkeiten erfordert. Alternativ können Eizellen mit chemisch unterstützte (AE) oder chemisch induzierte (IE)-Enukleations-Methoden, die technisch einfach enucleated werden. In dieser Studie verglichen wir die Neuprogrammierung potenzielle und Entwicklungsstörungen Kapazität der geklonten Embryonen von ME, AE und IE Verfahren generiert und mit der Histon-Deacetylase Inhibitor Valproinsäure behandelt. Eine rasche und fast vollständige Deacetylierung von Histon H3 Lysin 14 im somatische Zellkern folgte eine ebenso rasche und vollständige Re-acetylation nach der Aktivierung wurde nach der Injektion von einer Cumulus-Zellkern in ME und AE Cytoplasts beobachtet werden. Im Gegensatz dazu trat Histon-Deacetylierung auf einem viel niedrigeren Niveau in IE Cytoplasts. Trotz dieser Unterschiede die geklonten Embryonen erzeugt von den drei Typen der Cytoplasts entwickelte sich zu Blastozysten entspricht insgesamt und innere Zelle Masse mittlere Zelle Zahlen und die Blastozyste Formation und embryonalen Stammzellen Ableitung waren zwischen den drei Gruppen vergleichbar. Die geklonten Embryonen produziert von mir und AE Cytoplasts zeigte eine entsprechende Zinssatz der endgültigen Entwicklung, aber keine Nachkommen konnte der IE-Gruppe, schlägt eine niedrigere Neuprogrammierung Speicherkapazität von IE Cytoplasts entnommen werden. Unsere Ergebnisse zeigen die Nützlichkeit der AE Maus SCNT Verfahren, als Alternative zu mir. AE Eizelle Enukleations erleichtern und die Notwendigkeit für teure Mikroskopoptik oder potentiell schädlichen Bestrahlung der Hoechst Färbe- und you.v., normalerweise benötigt, in mir zu vermeiden kann Verfahren.
