Romanzo Anticorpo Monoclonale Specifico Per Il Recettore Del Fattore Di Crescita Epidermico De2-7 (EGFR) Che Riconosce Anche L'EGFR Espressa Nelle Cellule Contenenti Amplificazione Del Gene EGFR

International Journal of Cancer. Journal International Du Cancer. Mar, 2002  |  Pubmed ID: 11920591

Per alcuni aspetti, l'EGFR sembra essere un obiettivo attraente per la terapia dell'anticorpo targeting tumorale: esso è sovraespressa in molti tipi di tumore epiteliale e inibizione della segnalazione spesso induce un effetto anti-tumorale. L'uso di anticorpi specifici EGFR, tuttavia, può essere limitato da assorbimento negli organi che hanno alti livelli endogeni di EGFR wild type come il fegato. L'EGFR de2-7 (o EGFRvIII) è un troncamento naturalmente extracellulare dell'EGFR trovato in un certo numero di tipi di tumore tra cui glioma, seno, polmone e prostata. Anticorpi diretti a questa variante specifica del tumore dell'EGFR forniscono un'alternativa targeting strategia, anche se la bassa percentuale di tumori che esprimono l'EGFR de2-7 limita questo approccio. Descriviamo un anticorpo monoclonale (MAb 806) romanzo che potenzialmente supera le difficoltà associate con targeting per l'EGFR espressa sulla superficie delle cellule tumorali. 806 MAb associato a de2-7 EGFR transfected le cellule di glioma U87MG (U87MG.Delta 2-7) con alta affinità (circa 1 x arrecavano M(-1)), ma lo legano non parentale cellule che esprimono EGFR wild type. Coerente con questa osservazione, MAb 806 fu in grado di associare una versione solubile del tipo wild EGFR contenente il dominio extracellulare. Al contrario, immobilizzazione di questo dominio extracellulare di piastre ELISA indotta associazione risposta saturando e dose di MAb 806, suggerendo che MAb 806 può associare EGFR wild type in determinate condizioni. MAb 806 legato anche alla superficie delle cellule A431, che a causa di un'amplificazione del gene EGFR esprimono grandi quantità dell'EGFR. È interessante notare, MAb 806 riconosciuto solo il 10% delle molecole di EGFR totale espresse dalle cellule A431 e l'affinità di legame è stato inferiore a quello determinato per l'EGFR de2-7. MAb 806 mirati specificamente U87MG.Delta 2-7 e xenotrapianti A431 coltivate in topi nudi con livelli di picco in U87MG.Delta 2-7 xenotrapianti rilevato 8 h dopo l'iniezione. È stato osservato nessun specifico di targeting parentale U87MG xenotrapianti. Nell'associazione a U87MG.Delta 2-7 celle, MAb 806 fu rapidamente interiorizzato da Macropinocitosi e successivamente trasportati ai lisosomi, un processo che probabilmente contribuisce ai primi targeting picco osservato nei xenotrapianti. Così, MAb 806 può essere utilizzato come bersaglio le cellule di tumore contenente amplificazione del gene EGFR o EGFR de2-7 ma non associare a wild type EGFR quando espresse sulla superficie delle cellule.

La Struttura Di Cristallo Della Glicoproteina Di Guaina Mielinica Oligodendrocita, Un Autoantigen Chiave Nella Sclerosi Multipla

Proceedings of the National Academy of Sciences of the United States of America. Sep, 2003  |  Pubmed ID: 12960396

Guaina mielinica Oligodendrocita glicoproteina (MOG) è un autoantigen chiave CNS specifici per demielinizzazione primaria nella sclerosi multipla. Anche se è stato stabilito il ruolo di indurre malattia di MOG, sua precisa funzione nel sistema nervoso centrale rimane oscuro. Per acquisire nuove conoscenze nel ruolo fisiologico e immunopathological di MOG, abbiamo determinato la struttura cristallina di 1.8-A del dominio extracellulare MOG (MOGED). MOGED adotta una classica piega Ig (dominio variabile Ig) che è stata osservata per formare un dimero antiparallelo di testa-coda. È stata osservata una forma dimerica di MOG nativo, e MOGED è stato anche dimostrato a dimerize in soluzione, coerente con la vista che agisce come un recettore di adesione omofile MOG. Il peptide MOG35-55, un determinante importante encephalitogenic riconosciuto sia cellule T demielinizzante autoanticorpi, è parzialmente occluso all'interno dell'interfaccia del dimero. La struttura di questa chiave autoantigen suggerisce una relazione tra la forma dimerica di MOG all'interno della guaina mielinica e una ripartizione della tolleranza immunologica a MOG che si osserva nella sclerosi multipla.

Generazione Di Anticorpi Anti-idiotipo Per Applicazione in Analisi Di Laboratorio Di Immunoterapia Clinica

Hybridoma and Hybridomics. Aug, 2003  |  Pubmed ID: 14511567

L'anticorpo monoclonale chimerico ch806 specificamente rivolge il tumore-associati mutante epidermal growth factor receptor (de 2-7EGFR o EGFRVIII) ed è attualmente sotto inchiesta per il suo potenziale utilizzo nella terapia del cancro. Il hu3S193 di anticorpi monoclonali umanizzati specificamente gli obiettivi l'antigene epiteliale Lewis Y ed è attualmente in fase di sperimentazioni cliniche in pazienti con avanzato al seno, colon e carcinoma ovarico. Per assistere la valutazione clinica di ch806 e hu3S193, analisi di laboratorio sono necessari per monitorare la loro farmacocinetica di siero e quantificare eventuali risposte immunitarie per gli anticorpi. Topi immunizzati con ch806 o hu3S193 sono stati usati per generare ibridomi producono anticorpi con legame specifico per ch806 o hu3S193 e competitiva per l'associazione dell'antigene. Questi anticorpi anti-idiotipo (designato Ludwig Melbourne ibridomi, LMH) sono stati studiati come reagenti adatti per l'uso come controlli positivi per HAHA o HACA analisi e misura hu3S193 o ch806 nel siero umano. Sono stati identificati anti-idiotypes con la capacità di legarsi contemporaneamente due molecole di anticorpo bersaglio, quale permesso lo sviluppo di dosaggi ELISA altamente riproducibile, sensibile, specifici per la determinazione di concentrazioni sieriche di hu3S193 e ch806 con un limite di 3 ng/mL di quantificazione utilizzando LMH-3 e LMH-12, rispettivamente. BIAcore analisi determinata affinità di legame apparente alto per entrambi idiotypes: associazione LMH-3 immobilizzato hu3S193, Ka = 4,76 x 10, paragrafo 8 M(-1); LMH-12 associazione immobilizzato ch806, Ka = 1,74 x arrecavano M(-1). Stabilimento di HAHA o HACA analisi di campioni di siero mediante BIAcore era possibile utilizzando LMH-3 e LMH-12 come controlli positivi per la quantificazione della risposta immunitaria a hu3S193 o ch806 nel siero dei pazienti. Questi anti-idiotypes potrebbe essere utilizzato anche per studiare la penetranza e l'associazione di ch806 o hu3S193 per le cellule tumorali attraverso l'analisi di immunohistochemical delle biopsie del tumore. La generazione di anticorpi anti-idiotipo capace di legare contemporaneamente un anticorpo di destinazione su ciascun dominio variabile fornisce i reagenti ad alta sensibilità per la valutazione della sicurezza e profili farmacocinetici di anticorpi bersaglio amministrati clinicamente.

Efficacia Antitumorale Di Farmaci Citotossici E L'anticorpo Monoclonale 806 è Arricchito Da Inibitore Del Recettore EGF AG1478

Proceedings of the National Academy of Sciences of the United States of America. Dec, 2003  |  Pubmed ID: 14676326

Blocco del recettore del fattore di crescita epidermico (EGFR) segnalazione con specifici inibitori di tirosin-chinasi dell'EGFR ritarda la proliferazione cellulare e arresta la crescita di xenotrapianti tumorali. AG1478, un inibitore della chinasi della tirosina EGFR, è utilizzato in studi di laboratorio; Tuttavia, il suo potenziale terapeutico non è stata chiarita. Quindi, abbiamo valutato una forma acquosa di AG1478 per la sua attività antitumorale in topi cuscinetto xenotrapianti umane che esprimono l'EGFR WT o un troncamento natura ligando-indipendente di EGFR [EGFR delta2-7 (de2-7) o EGFRvIII]. Somministrazione parenterale di AG1478 solubile bloccato la fosforilazione dell'EGFR presso il sito del tumore e inibito la crescita di xenotrapianti A431 che iperesprimono l'EGFR WT e xenotrapianti di glioma che esprimono l'EGFR de2-7. Sorprendentemente, dosi subterapeutiche anche di AG1478 notevolmente migliorato l'efficacia dei farmaci citotossici, con la combinazione di AG1478 e temozolomide visualizzazione attività antitumorale sinergica contro xenotrapianti di glioma umano. AG1478 è stato esaminato anche in combinazione con mAb 806, un anticorpo anti-EGFR che è stato sollevato contro l'EGFR de2-7, ma inaspettatamente si lega anche un sottoinsieme di EGFR espressa nelle cellule espositrici amplificazione del gene EGFR. La combinazione di AG1478 e mAb 806 visualizzato additivo e in alcuni casi sinergica antitumorale attività contro xenotrapianti tumorali con sovraesprimono relativa l'EGFR. Qui, ci dimostrano che diverse classi di inibitori per l'EGFR possono avere azione sinergica attività antitumorale in vivo. Questi risultati stabilire l'efficacia antitumorale dell'inibitore EGFR AG1478 e forniscono una spiegazione logica per la sua valutazione clinica in combinazione con altre terapie EGFR e la chemioterapia.

CR1/CR2 Interazioni Modulano Le Funzioni Del Recettore Del Fattore Di Crescita Epidermico Superficiale

The Journal of Biological Chemistry. May, 2004  |  Pubmed ID: 15016810

Recenti dati cristallografici isolato dominio extracellulare del recettore dell'epidermal growth factor (EGFR) hanno suggerito un modello per la sua attivazione da ligando. Abbiamo testato questo modello nel contesto dell'EGFR full-length visualizzato alla superficie delle cellule, con l'introduzione di mutazioni in due regioni (CR1 e CR2) del dominio extracellulare pensato per essere critico per la regolazione dell'attivazione del recettore. Mutazioni nei domini CR1 e CR2 sono opposti effetti su ligand binding affinity, dimerizzazione del recettore, attivazione di chinasi della tirosina e competenza di segnalazione. Tyr(246) è un residuo critico nel ciclo CR1, che è implicato nel posizionamento e stabilizzazione dell'interfaccia del recettore dimero dopo l'associazione del ligando; mutazioni di Tyr(246), alterano o sopprimere la funzione del recettore. Mutazioni in CR2, che indeboliscono l'interazione che limita il recettore per lo stato legato (inattivo), aumentare la reattività di EGF aumentando l'affinità per il ligando. Tuttavia, indebolimento dell'interazione CR1/CR2 non risultare spontanea attivazione di chinasi dei recettori. Abbiamo utilizzato un anticorpo (mAb 806), che riconosce uno stato di transizione del recettore EGF tra lo stato negativamente vincolato, legato e la conformazione completamente attivo dimero back to back, per seguire i cambiamenti conformazionali nei recettori EGF wild-type e mutanti dopo l'associazione del ligando. I nostri risultati suggeriscono che EGFR sulla superficie delle cellule può essere untethered, ma questa forma è inattiva; così, svincolamento del recettore non è sufficiente per l'attivazione, e ligand binding è essenziale per il corretto posizionamento delle due subunità del recettore per ottenere l'attivazione della chinasi.

Identificazione Dell'epitopo Per L'anticorpo Monoclonale Specifico Recettore Epidermal Growth Factor 806 Rivela Che Preferenzialmente Riconosce Una Forma Untethered Del Recettore

The Journal of Biological Chemistry. Jul, 2004  |  Pubmed ID: 15075331

Il recettore del fattore di crescita epidermico (EGFR) è overexpressed in molti tumori epiteliali, un'osservazione spesso correlata con scarso risultato clinico. Sovraespressione dell'EGFR è comunemente causata da amplificazione del gene EGFR e talvolta è associato all'espressione di una variante EGFR (de2-7 EGFR o EGFRvIII) recanti un'eliminazione interna nel suo dominio extracellulare. Anticorpo monoclonale (mAb) 806 è un romanzo dell'anticorpo EGFR con significativa attività antitumorale che riconosce l'EGFR de2-7 e un sottoinsieme di wild type (wt) EGFR overexpressed ma non legare il wt che EGFR è espresso in tessuti normali. Nonostante vincolanti solo a una bassa percentuale di wt EGFR espressa nelle cellule tumorali A431 (10% circa), mAb 806 Visualizza robusta attività antitumorale contro A431 xenotrapianti coltivate in topi nudi. Per delucidare il meccanismo che porta alla sua unica specificità e modalità di attività antitumorale, abbiamo determinato l'EGFR associazione epitopo di mAb 806. Analisi dell'associazione 806 mAb a frammenti EGFR espressa o sulla superficie di lievito o in un immunoblot formato identificato un ciclo legato con disolfuro (aminoacidi 287-302) che contiene l'epitopo mAb 806. Infatti, mAb 806 si lega con alta affinità apparente (circa 30 nm) a un peptide sintetico EGFR corrispondenti a questi amminoacidi. Analisi delle strutture EGFR indicano che l'epitopo è completamente esposto solo in forma transitoria del recettore che si verifica perché EGFR cambia dalla conformazione inattiva legata a una forma attiva di ligando-bound. Sembrerebbe che mAb 806 associa questa piccola percentuale dei recettori transitori, impedendo la loro attivazione, che a sua volta genera un forte effetto antitumorale. Infine, le nostre osservazioni suggeriscono che la generazione di anticorpi a forme transitorie dei recettori del fattore di crescita può rappresentare un nuovo modo di ridurre il tessuto normale mantenendo ancora attività antitumorale di targeting.

Il Tumore-specifici De2-7 Epidermal Growth Factor Receptor (EGFR) Promuove La Sopravvivenza Delle Cellule E Heterodimerizes Con L'EGFR Wild-type

Oncogene. Aug, 2004  |  Pubmed ID: 15221011

Mutazioni del gene epidermal growth factor receptor (EGFR) si trovano a frequenza relativamente alta in glioma, con i più comuni essendo l'EGFR de2-7 (o EGFRvIII). Questa mutazione si pone una delezione nel frame esoni 2-7, che rimuove 267 aminoacidi dal dominio extracellulare del recettore. Pur essendo in grado di legare il ligando, la EGFR de2-7 è costitutivamente attivo e conferisce un vantaggio significativo di crescita in vivo di cellule di glioma. Al fine di esaminare le vie di segnalazione attivate l'EGFR de2-7 e suoi effetti biologici in un sistema in vitro, il gene EGFR de2-7 è stato transfected nella linea di cellule pro-B IL-3-dipendente murina BaF/3. Espressione dell'EGFR de2-7 ha migliorato la sopravvivenza delle cellule BaF/3 in assenza di IL-3 riducendo l'apoptosi in una fosfatidilinositolo 3-chinasi (PI3-K)-modo dipendente. È interessante notare che, mentre EGFR de2-7 anche una maggiore proliferazione delle cellule BaF/3 a bassi livelli di IL-3, questo effetto è stato indipendente del PI3-K. Sopravvivenza e proliferazione sono stati ulteriormente rafforzate quando BaF/3 celle sono state cotransfected con il de2-7 e wt EGFR. Questo era dovuto heterodimerization fra il de2-7 e wt EGFR che portano a trans-fosforilazione dell'EGFR il wt. Questa osservazione è direttamente rilevante per glioma dove sembra essere coespressi de2-7 e wt EGFR. Così, espressione dell'EGFR de2-7 nelle cellule BaF/3 fornisce un modello in vitro per valutare le vie di segnalazione attivate da questo recettore.

Effetti Immunologici Del Monoclonale Chimerico Anti-GD3 KM871 in Pazienti Con Melanoma Metastatico

Cancer Immunity : a Journal of the Academy of Cancer Immunology. Feb, 2005  |  Pubmed ID: 15723450

Abbiamo condotto una fase di dose-escalation open label I trial di chimerico anti-GD3 mAb KM871 in pazienti con melanoma metastatico. I pazienti sono stati inseriti in uno dei cinque livelli di dose (1, 5, 10, 20 e 40 mg/m2) e ha ricevuto tre infusioni di KM871 a intervalli di 2-wk. Un sito di melanoma metastatico è stato sottoposto a biopsia al giorno 7-10. Farmacocinetica, funzione immunitaria e meccanismo di azione del KM871 sono stati analizzati. Un totale di 17 pazienti sono stati inseriti nel trial; 15 erano valutabili. KM871 aveva un'emivita sierica (T1/2-beta) basata su ELISA del 10,39 + 1.12 d (media + /-SD). Livelli di depressione > 1,0 microg/mL KM871 al postinfusion wk 2 sono stati visti con 10 mg/m2 e dosi più elevate. Non c'erano cambiamenti significativi in sottoinsiemi di globuli bianchi o i livelli sierici di complemento durante il trattamento KM871. KM871 era affinità di legame in vivo e mantenuto stabile e funzione di citotossicità complemento-dipendente (CDC) fino a postinfusion 2 a settimana. Non significative tendenze in CDC o attività cellulare-citotossicità anticorpo-dipendente (ADCC) nei pazienti sono stati osservati durante il trattamento. L'analisi delle biopsie del tumore ha dimostrato un aumento significativo di infiltrati delle cellule T CD4 + rispetto per controllare il paziente tumori (P = 0.010), e nei pazienti con malattia stabile (2 pazienti) o una risposta parziale clinica (1 paziente) alla ripresa, è stato osservato un aumento significativo in CD3 e CD4 si infiltra nel tumore oltre gli pazienti. Le proprietà immunitarie favorevoli di KM871, combinati con i dati clinici preliminari, indicano che KM871 ha il potenziale per il trattamento del melanoma metastatico.

L'anticorpo Monoclonale Antitumorale 806 Riconosce Una Forma Alto-mannosio Del Recettore EGF Che Raggiunge La Superficie Della Cellula Quando Cellule Intra Il Recettore

FASEB Journal : Official Publication of the Federation of American Societies for Experimental Biology. May, 2005  |  Pubmed ID: 15774576

Sovraespressione dell'EGFR è comunemente causata da amplificazione del gene EGFR e talvolta è associato all'espressione di una variante EGFR (de2-7 EGFR o EGFRvIII) recanti un'eliminazione interna nel suo dominio extracellulare. mAb 806 è un romanzo dell'anticorpo EGFR con significativa attività antitumorale che riconosce l'EGFR de2-7 e un sottoinsieme di wild-type (wt) EGFR quando overexpressed ma non legare l'EGFR espressa nei tessuti normali. Recentemente, abbiamo dimostrato che l'epitopo 806 mAb è limitato a un ciclo breve cisteina dell'EGFR (aminoacidi 287-302) che è disponibile solo per il grippaggio dell'anticorpo in forma transitoria del recettore, che si verifica come le modifiche dei recettori dalla sua conformazione inattiva legato a una forma dimerica untethered. Il troncamento associato con la mutazione di EGFR de2-7 rende questo recettore costitutivamente untethered, portando a maggiore associazione di mAb 806. Mostriamo ora che mAb 806 si lega preferenzialmente il wt alta-mannosio immaturi e de2-7 EGFR precursori che normalmente si trova nel reticolo endoplasmatico, indicando che questa forma di wt EGFR è anche costitutivamente untethered. Utilizzando l'unica specificità del mAb 806, abbiamo chiaramente dimostrato la presenza di questi precursori EGFR alta-mannosio sulla superficie della cellula. Dato che le forme alto-mannosio di wt EGFR devono essere untethered essi possono contribuire alla spontanea EGFR signaling segnalati nelle cellule con sovraesprimono relativa al recettore. Queste forme precursore dell'EGFR così rappresentano obiettivi romanzo tumore e contribuiscono per l'eccezionale selettività di mAb 806 per EGFR quando overexpressed in cellule tumorali. Come le nostre osservazioni sono probabili da applicare ad altri recettori overexpressed in cancro, essi suggeriscono una strategia per lo sviluppo di anticorpi antitumorali anche quando il recettore bersaglio è espresso nel tessuto normale.

Trattamento Di Xenotrapianti Di Tumore Umano Con Anticorpo Monoclonale 806 in Combinazione Con Un Anticorpo Specifico Recettore Prototipo Epidermal Growth Factor Genera Una Maggiore Attività Antitumorale

Clinical Cancer Research : an Official Journal of the American Association for Cancer Research. Sep, 2005  |  Pubmed ID: 16144944

Anticorpo monoclonale (mAb) 806 è un romanzo epidermal growth factor receptor (EGFR) anticorpo con significativa attività antitumorale che riconosce un mutante EGFR comunemente espressa in glioma conosciuto come EGFR delta2-7 (7-de2 EGFR o EGFRvIII) e un sottoinsieme dell'EGFR wild-type (wt) trovati nelle cellule che iperesprimono il recettore. Abbiamo usato due modelli di mouse xenoinnesto umana per esaminare l'efficacia del mAb 806 in combinazione con mAb 528, un anticorpo anti-EGFR prototipo con specificità simile a cetuximab. Trattamento di topi nudi, cuscinetto s.c. o i.c. tumore umano xenotrapianti esprimendo il wt o de2-7 EGFR, con mAbs 806 e 528 in combinazione portato additivo e in alcuni casi attività sinergica, antitumorale. È interessante notare, mAb 528 fu anche efficace contro xenotrapianti esprimendo il ligando indipendente EGFR de2-7 quando utilizzato come agente singolo, mostrando che l'attività antitumorale non è meramente mediato attraverso l'inibizione del legame del ligando. Quando viene utilizzato come singoli agenti, né mAbs 806 o 528 indotta down-regulation dell'EGFR de2-7 sia in vitro che in vivo. Al contrario, la combinazione di anticorpi prodotto una diminuzione rapida e drammatica nella cella totale superficie EGFR de2-7 sia in vitro che in xenotrapianti. Coerente con questa diminuzione nella cella totale superficie de2-7 EGFR, abbiamo osservato in su-regolazione della p27(KIP1) di inibitore del ciclo cellulare e una diminuzione della proliferazione di cellule tumorali come misurato dal Ki-67 immunostaining quando gli anticorpi sono stati utilizzati in combinazione in vivo. Così, mAb 806 possono sinergizzare con altri anticorpi specifici EGFR fornendo un razionale per la sua traduzione in clinica.

Una Maggiore Efficacia Del Farmaco Radioimmunoterapico Con 90Y-CHX-A ' Hu3S193 - DTPA - Tramite Inibizione Del Recettore Del Fattore Di Crescita Epidermico (EGFR) Segnalazione Con Inibitore Di EGFR Tirosin Chinasi AG1478

Clinical Cancer Research : an Official Journal of the American Association for Cancer Research. Oct, 2005  |  Pubmed ID: 16203806

Anticorpi monoclonali e gli inibitori della chinasi della tirosina specifici per il recettore del fattore di crescita epidermico (EGFR) hanno dimostrati di aumentare l'effetto di radiazione esterna del fascio su tumori EGFR-positivi. L'effetto dell'abrogazione di segnalazione da inibitore di EGFR tirosin chinasi sull'efficacia del farmaco radioimmunoterapico EGFR non è stata segnalata in precedenza. Questo studio ha studiato l'effetto dell'EGFR tirosin chinasi inibizione sull'efficacia del farmaco radioimmunoterapico nel modello xenoinnesto cancro umano.

Effetti Funzionali Di Glicosilazione All'Asn-579 Del Recettore Del Fattore Di Crescita Epidermico

Biochemistry. Nov, 2005  |  Pubmed ID: 16274239

Abbiamo studiato gli effetti funzionali della glicosilazione a N(579) del recettore dell'epidermal growth factor (EGFR). Il nostro precedente studio ha mostrato che la popolazione della superficie cellulare espresso EGFRs nelle cellule A431, una linea cellulare di carcinoma umano epidermoidi, è composto da due sottopopolazioni che differiscono di glicosilazione presso N(579) [biochimica Zhen et al (2003) 42, 5478-5492]. Per caratterizzare la sottopopolazione dei recettori non glicosilata presso N(579), abbiamo stabilito una linea cellulare nettamente esprimendo un mutante punto di EGFR (N579Q), che non può essere glicosilata in questa posizione. Analisi di accessibilità epitopo suggeriscono che la mancanza di glicosilazione a N(579) indebolisce interazioni tether auto-inibitoria, e cross-linking esperimenti suggeriscono un livello piuttosto elevato di dimeri di N579Q-EGFR preformati in assenza di ligando rispetto al wild-type EGFR (WT-EGFR). Tuttavia, ligando spinge la maggior parte di dimerizzazione N579Q-EGFR, suggerendo che scatenando, pur necessaria, non è sufficiente per la dimerizzazione di auto. Ligand-legantesi esperimenti rivelano una frazione molto maggiore di N579Q-EGFRs in uno stato ad alta affinità rispetto alla frazione di WT-EGFRs in uno stato ad alta affinità. Tuttavia, le differenze nei tassi di associazione e dissociazione cinetici indicano che gli Stati ad alta affinità il WT e i recettori N579Q sono distinti. EGF-stimolata fosforilazione nelle cellule che esprimono N579Q-EGFRs risultati notevoli differenze nel modello di tirosina fosforilato proteine rispetto ottenuto in cellule che esprimono WT-EGFRs. Inoltre, sebbene WT-EGFRs conferiscono la sopravvivenza delle cellule in cellule nettamente in assenza di interleuchina-3 ed EGF, abbiamo trovato che i recettori privo di glicosilazione a N(579) non. Questo è il primo studio di cui siamo consapevoli di mostrare tale glicosilazione selettiva di uno specifico sito di N-glicosilazione può produrre due recettori funzionalmente distinti.

Un Automatizzato Thiazolidine Peptidi E Proteine Chimica Per Immobilizzazione Biosensore Dando Un Unico Orientamento N-terminale Di Accoppiamento

Analytical Biochemistry. Jan, 2006  |  Pubmed ID: 16310754

Attivazione Del Ricevitore Di Fattore Di Crescita Epidermico: Un Segnale a Monte Per La Transizione Degli Astrociti Quiescenti in Astrociti Reattivi Dopo Lesioni Neurali

The Journal of Neuroscience : the Official Journal of the Society for Neuroscience. Jul, 2006  |  Pubmed ID: 16837601

Modulando i comportamenti degli astrociti reattivi è una potenziale strategia terapeutica per le malattie neurodegenerative. Abbiamo trovato che upregulation e l'attivazione del recettore dell'epidermal growth factor (EGFR) si verificano negli astrociti dopo diverse lesioni a nervi ottici in vivo. Attivazione di EGFR regola geni e processi cellulari che rappresentano la maggior parte dei principali marcatori di geni correlati con neuropatia ottica glaucomatous ed altri disturbi neurali e astrociti reattivi. Questi risultati suggeriscono che l'attivazione di EGFR è un percorso comune, regolamentazione che innesca gli astrociti quiescenti in astrociti reattivi in risposta alle lesioni neurali nel nervo ottico e forse altre parti del sistema nervoso centrale. Targeting per EGFR attivazione utilizzando un inibitore di tirosin chinasi EGFR impedisce la perdita delle cellule gangliari della retina in un modello della neuropatia ottica glaucomatous. Perché questi inibitori sono attualmente utilizzati clinicamente, i nostri risultati presentano un approccio di astrociti reattivi come potenziale nuovo bersaglio per il trattamento di neurodegenerations.

L'inibitore Di Epidermal Growth Factor Receptor (EGFR) Tirosin Chinasi AG1478 Aumenta La Formazione Di Dimeri EGFR Untethered Inattivi. Implicazioni Per La Terapia Di Combinazione Con Anticorpo Monoclonale 806

The Journal of Biological Chemistry. Feb, 2007  |  Pubmed ID: 17092939

Il recettore del fattore di crescita epidermico (EGFR) ha almeno due conformazioni fondamentali: un inattivo legato conformazione e un'attiva untethered, ligando-bound "back to back" dimero, che può essere parte di un complesso oligomerici. Anticorpo monoclonale (mAb) 806 è un anticorpo specifico EGFR che solo si associa una forma transitoria del recettore dopo lo untethers ma prima di formare il back to back, logotipi, oligomero attivo. Abbiamo dimostrato che AG1478, un inibitore di tirosin chinasi dell'EGFR, sinergicamente inibisce la crescita di tumori con sovraesprimono relativa EGFR quando usato in combinazione con mAb 806, ma non è stato chiarito il meccanismo per questo (Johns, T. G., Luwor, R. B., Murone, C., Walker, F., Weinstock, J., Vitali, A. A., Perera, R. M., Jungbluth, A. A., Stockert, E., vecchio, L. J.C. Nizza, E., Burgess, A. W. e Scott, A. M. (2003) Proc Natl. acad. sci. u. s. a. 100, 15871-15876). Mostriamo ora che AG1478 aumenta il legame del mAb 806 alla superficie delle cellule attraverso due distinti meccanismi: un effetto immediato sulla conformazione del EGFR e un aumento di più lungo termine nella cella di superficie sotto-glicosilata EGFR, un evento noto per aumentare la reattività di mAb 806. Cross-linking studi hanno dimostrato la presenza di che si verificano spontaneamente mAb dimeri 806-reattiva sulla superficie delle cellule con sovraesprimono relativa EGFR, che sono rapidamente aumentati da AG1478. Perché reagiscono con mAb 806, questi dimeri devono esistere in una conformazione distinta dal dimero dei back to back. Infatti, abbiamo rilevato dimeri simili nelle cellule 293T che esprimono l'EGFR manca il braccio piccolo dimerizzazione/attivazione essenziale per la formazione del dimero back to back. Così, alcuni di EGFR sulla superficie delle cellule delle cellule tumorali deve esistere come un dimero untethered che adotta una conformazione non precedentemente dichiarata che è inattiva. Questa informazione è stata utilizzata per ottimizzare la sinergia terapeutica tra mAb 806 e AG1478 in un modello xenoinnesto.

A Phase I Trial Clinici Con Anticorpo Monoclonale Ch806 Targeting Stato Transitorio E Recettori Del Fattore Di Crescita Epidermico Mutante

Proceedings of the National Academy of Sciences of the United States of America. Mar, 2007  |  Pubmed ID: 17360479

Una matrice di antigeni di superficie cellulare espressa da tumori umani sono stati identificati come bersagli per terapie a base di anticorpi. La grande maggioranza di questi anticorpi non hanno specificità per il cancro, ma riconosca antigeni espressi su una gamma di tipi di cellule normali (antigeni di differenziazione). Negli ultimi due decenni, il nostro gruppo ha analizzato migliaia di anticorpi monoclonali di topo per specificità di cancro e identificato una batteria di anticorpi con rappresentanza limitata sulle cellule umane normali. La più tumore-specifici di questi anticorpi è 806, un anticorpo che riconosce un epitopo unico sul recettore epidermal growth factor (EGFR) che viene esposta solo su forme overexpressed, mutante o attivato dal ligando del recettore in cancro. L'analisi di immunohistochemical in vitro specificità dimostra poco o nessun rilevabile 806 reattività con i tessuti normali, anche quelli con alti livelli di wild-type (wt) EGFR espressione. Studi preclinici hanno dimostrato che 806 specificamente destinato a un sottoinsieme di EGFR espressa su cellule tumorali e ha significativi effetti anti-tumorale su xenotrapianti di tumore umano, principalmente attraverso l'abrogazione delle vie di segnalazione. Il presente studio clinico è stato progettato per esaminare la specificità in vivo di una forma chimerica di mAb 806 (ch806) in un'analisi di targeting/biodistribuzione/farmacocinetiche di tumore nei pazienti con tipi di tumore diversi. ch806 ha mostrato eccellente destinazione dei siti tumorali in tutti i pazienti, nessuna prova di assorbimento del tessuto normale e nessuna tossicità significativa. Queste caratteristiche in vitro e in vivo di ch806 distinguono da tutti gli altri anticorpi targeting EGFR.

L'efficacia Degli Anticorpi Epidermal Growth Factor Receptor-specifiche Xenotrapianti Di Glioma è Influenzata Dai Livelli Di Recettore, Stato Di Attivazione E Heterodimerization

Clinical Cancer Research : an Official Journal of the American Association for Cancer Research. Mar, 2007  |  Pubmed ID: 17363548

Fattori che influenzano l'efficacia terapeutici degli anticorpi monoclonali (mAb) diretto per il recettore del fattore di crescita epidermico (EGFR) rimangono relativamente sconosciuti, specialmente nel glioma.

Recettore Del Fattore Di Crescita Epidermico Unligated Forma Oligomeri Di Ordine Superiori All'interno Microclusters Su A431 Cellule Che Sono Sensibili All'associazione Di Inibitore Della Chinasi Della Tirosina

Biochemistry. Apr, 2007  |  Pubmed ID: 17381163

Caratterizzazione degli Stati associazione del recettore unligated fattore di crescita epidermico (EGFR) è importante per comprendere il meccanismo dell'EGFR tirosin chinasi attivazione in un ambiente di cellule tumorali. Abbiamo analizzato, in dettaglio, gli Stati di associazione di unligated, immunotagged EGFR sulla superficie delle cellule di carcinoma epidermoidi intatto A431, utilizzando anticorpi anti-EGFR AlexaFluor488 e AlexaFluor546, mAb528, come sonde. Microscopia correlazione immagine ha rivelato la presenza di unligated EGFR nei cluster di scala submicron contenente una media di 10-30 recettori (cluster densità media = 32 + 9 cluster per micron quadrato). Durata Förster risonanza energy transfer (FRET) tecniche basate come una funzione di accettore: donatore etichettatura rapporto divulgato un clustering dell'EGFR unligated in ammassi contenenti una media di quattro recettori sul nanometro (< 10 nm) scala. Il rapporto tra le associazioni di scala nanometrica e submicron è stato determinato utilizzando una nuova analisi che combina informazioni su scala nanometrica da rilevato lifetime imaging FRET con scala submicron ottenuti con microscopia di correlazione di immagine. Questa analisi ha rivelato la presenza di monomeri (o piccoli oligomeri) e più grandi ammassi contenenti 15-30 recettori che sono stati parzialmente associati su scala sub-10 nm. Pretrattamento delle cellule con l'inibitore di tirosin chinasi AG1478 ha causato una parziale dispersione dei cluster submicron (cluster densità media = 85 + /-15 cluster per micron quadrato; significa grado di associazione = 4-10 recettori per cluster) e ridotto il livello di tasto giù per il nostro limite di rilevazione. Questi risultati sono coerenti con un più alto ordine organizzazione recettore su scala nanometrica della popolazione unligated recettore che è parzialmente controllata da domini chinasi. Vengono discusse le ramificazioni dei risultati ai meccanismi di attivazione di EGFR in un ambiente di cellule tumorali.

Interiorizzazione, Traffico Intracellulare E Biodistribuzione Di Anticorpo Monoclonale 806: Un Anticorpo Di Romanzo Anti-epidermal Growth Factor Receptor

Neoplasia (New York, N.Y.). Dec, 2007  |  Pubmed ID: 18084617

Iperespressione del recettore dell'epidermal growth factor (EGFR) nei tumori epiteliali è associato a prognosi infausta ed è la destinazione per un certo numero di terapie del cancro. Anticorpo monoclonale (mAb) 806 è un anticorpo anti-EGFR romanzo con notevole efficacia terapeutica in modelli tumorali quando utilizzato come agente singolo e visualizza attività antitumorale sinergica in combinazione con altre terapie EGFR. A differenza di altri anticorpi EGFR, mAb 806 è selettiva per le cellule tumorali e non legarsi al tessuto normale, che lo rende un candidato ideale per la generazione del radioisotopo o coniugati tossina. Idealmente, gli anticorpi adatti a queste applicazioni terapeutiche devono associare a e interiorizzare attivamente il loro recettore affine. Abbiamo studiato il traffico intracellulare di mAb fluorescente contrassegnati 806 in cellule vive e analizzato la biodistribuzione in un modello di topo nudo xenografted tumore. Dopo la associazione di EGFR, mAb 806 era interiorizzato attraverso endocitosi clatrina-mediata, dynamin-dipendente. MAb interiorizzata 806 localizzato in early endosomes e successivamente smerciata a e accumulo lisosomiale compartimenti. Inoltre, analisi di biodistribuzione in topi nudi ha mostrato specifico assorbimento e ritenzione di mAb radiomarcato 806 per xenotrapianti di tumore umano. Questi risultati evidenziano il potenziale uso di mAb 806 per la generazione dei coniugati adatti per uso diagnostico e terapeutico in pazienti con tumori maligni EGFR-positivo.

Eparina-associazione Epidermal Growth Factor-like Growth Factor Segnalazione Nel Rimodellamento Arterioso Flusso-indotta

Circulation Research. May, 2008  |  Pubmed ID: 18436796

Eparina-binding epidermal growth factor (EGF)-come fattore di crescita (HB-EGF) è attivato dal ridotto endoteliali shear stress e stimola la proliferazione delle cellule muscolari lisce in vitro. Inoltre, HB-EGF è aumentata a siti di iperplasia intimale e aterosclerosi, condizioni favorite dalla bassa/disturbato shear stress. Abbiamo quindi testato se HB-EGF contribuisce a basso flusso-indotta negativi ipertrofica rimodellamento (FINR) dell'arteria carotide del mouse. Il flusso di sangue è stato chirurgicamente è diminuito a sinistra e aumentato nelle arterie carotide comune destra. Dopo 21 giorni, arteria carotide sinistra esposto lumen stringimento, ispessimento dell'intima-media e adventitia e aumento della circonferenza che sono stati inibiti da circa il 50% in HB-EGF(+/-) e circa il 90% nei topi HB-EGF(-/-). FINR era inibito anche da inibitore del recettore EGF AG1478. Al contrario, eutrofico ritoccando verso l'esterno della carotide destra era inalterato nei topi HB-EGF(+/-) e HB-EGF(-/-), né da AG1478. Indotta da FINR proliferazione e accumulo di leucociti sono stati ridotti in HB-EGF(-/-). FINR è stato associato con le specie ossigenate reattive aumentata, fosforilazione aumentata espressione di pro-HB-EGF e tumor necrosis factor alpha-converting enzyme (sheddase pro-HB-EGF), aumentato del recettore di EGF e chinasi segnale-regolata extracellulare 1/2 e maggiore fattore nucleare kappaB attività. Apocynin e l'eliminazione di p47(phox) inibito FINR, considerando che la soppressione di HB-EGF abolito l'attivazione fattore nucleare kappaB in cellule muscolari lisce. Questi risultati suggeriscono che HB-EGF segnalazione è necessaria per basso flusso-indotta ipertrofica rimodellamento e può partecipare alla malattia della parete vascolare e rimodellamento.

Anticorpi Specificamente Destinati Localmente Malpiegata Regione Del Tumore Associato EGFR

Proceedings of the National Academy of Sciences of the United States of America. Mar, 2009  |  Pubmed ID: 19289842

Epidermal Growth Factor Receptor (EGFR) è coinvolto nello stimolare la crescita di molti tumori umani, ma il successo di agenti terapeutici ha stato in parte limitato da interferenze da EGFR sui tessuti normali. In precedenza, abbiamo segnalato un anticorpo (mab806) contro una forma troncata di EGFR trovato comunemente in gliomi. Notevolmente, lo si riconosce anche full-length EGFR sulle cellule tumorali, ma non sulle cellule normali. Tuttavia, il meccanismo per questa attività era poco chiaro. Strutture cristallografiche per complessi di Fab:EGFR(287-302) di mAb806 (e un secondo, relativi anticorpi, mAb175) mostrano che questo peptide epitopo adotta conformazioni simili a quelli trovati nel wtEGFR. Tuttavia, in entrambe conformazioni osservati per wtEGFR, tethered e untethered, grippaggio dell'anticorpo sarebbe vietata dal significativi sterico scontri con il dominio CR1. Quindi, questi anticorpi devono riconoscere un epitopo criptico in EGFR. Strutturalmente, è apparso che rompendo il legame disolfuro precede l'epitopo potrebbe consentire il dominio CR1 di aprire sufficientemente per grippaggio dell'anticorpo. Il mutante EGFR(C271A/C283A) non solo si lega mAb806, ma si lega con stechiometria 1:1, che è significativamente maggiore di associazione wtEGFR. Anche se mAb806 e mAb175 diminuire la crescita tumorale in xenotrapianti visualizzazione mutante, overexpressed o autocrine stimolato EGFR, né anticorpo inibisce la crescita in vitro di cellule che esprimono wtEGFR. Al contrario, mAb806 inibisce completamente la stimolazione delle cellule che esprimono EGFR(C271A/C283A) associato al ligando. Chiaramente, l'associazione di mAb806 e mAb175 per la wtEGFR richiede l'epitopo per essere esposti durante l'attivazione del recettore, mutazione o sovraespressione. Questo meccanismo suggerisce la possibilità di generare anticorpi per indirizzare altri wild-type recettori sulle cellule tumorali.

Una Trappola Di Ligando Troncato Solubile Epidermal Growth Factor Receptor-Fc Fusion Visualizza Attività Antitumorale in Vivo

Growth Factors (Chur, Switzerland). Jun, 2009  |  Pubmed ID: 19333814

Un certo numero di strategie terapeutiche tra cui piccole molecole inibitori della chinasi della tirosina e gli anticorpi monoclonali è stato sviluppato per bersaglio il recettore del fattore di crescita epidermico (EGFR) segnalazione asse per il trattamento del cancro. Ad oggi, il focus dell'intervento terapeutico è stato l'EGFR stesso. In questo studio, abbiamo assemblato ed espresso in cellule di mammifero un solubile, trappola ligando EGFR che comprende i primo 501 amminoacidi della sequenza EGFR maturo fuse nel telaio con un dominio Fc IgG umano. La proteina di fusione, designata sEGFR501.Fc, è stata secreta come un omodimero bisolfuro-linked 220 kDa che esposto ad alta affinità (0,4-8 nM) nelle prove di concorso per un numero di ligandi EGFR compreso EGF e trasformando il fattore di crescita-alfa (TGF-alpha). sEGFR501.Fc inibisce la fosforilazione della tirosina EGF-stimolata di EGFR di linee di cellule di cancro al polmone A549 e H1437 e inibito e bloccato la proliferazione delle cellule H1437. Amministrazione di sEGFR501.Fc a topi cuscinetto xenotrapianti tumorali umane derivate da A431 (carcinoma epidermoidi) e DU145 linee di cellule del tumore (cancro alla prostata androgeno-indipendente) ha portati nel modesto ritardo della crescita del tumore. Questi risultati forniscono la prova in principio che usando solubile recettori ad alta affinità è un metodo praticabile per inibendo i sistemi multi-ligand e lo slancio per ottimizzare questo approccio e sviluppare i reagenti con maggiore affinità e specificità più ampio.

La Plasticità Della Dipendenza Del Oncogene: Implicazioni Per Terapie Mirate, Diretta a Chinasi Tirosina Del Recettore

Neoplasia (New York, N.Y.). May, 2009  |  Pubmed ID: 19412429

Una mutazione comune del recettore del fattore di crescita epidermico (EGFR) nel glioblastoma multiforme (GBM) è un troncamento extracellulare, conosciuta come l'EGFR de2-7 (EGFRvIII). Fattore di crescita degli epatociti (HGF) è il ligando per il recettore tirosina chinasi (RTK) c-Met, e questo asse segnalazione è spesso attivo nel GBM. L'espressione dell'asse HGF/c-Met o de2-7 EGFR migliora indipendentemente GBM crescita e invasività, particolarmente attraverso il pathway fosfatidilinositolo 3 chinasi/patto. L'utilizzo di matrici RTK, mostriamo che espressione di de2-7 EGFR nelle cellule U87MG GBM conduce al coactivation di RTKs diversi, tra cui beta di recettore del fattore di crescita derivato dalle piastrine e c-Met. Un anticorpo neutralizzante di HGF (AMG102) non ha fatto inibire de2-7 EGFR-mediato l'attivazione del c-Met, dimostrando che è ligando-indipendente. Terapia per xenotrapianti U87MG parentale con AMG 102 ha provocato inibizione significativa della crescita tumorale, mentre U87MG.Delta 2-7 xenotrapianti erano profondamente resistente. Trattamento di U87MG.Xenotrapianti 2-7 Delta con panitumumab, un anticorpo anti-EGFR, solo parzialmente inibiscono la crescita tumorale come xenotrapianti tornò rapidamente l'HGF/c-Met signaling pathway. Cotreatment con panitumumab e AMG 102 ha impedito questa fuga portando ad inibizione significativa di tumore attraverso un meccanismo di apoptosi, coerenza con l'induzione di shock oncogenica. Questa osservazione fornisce una spiegazione logica per l'utilizzo di panitumumab e AMG 102 in combinazione per il trattamento di pazienti GBM. Questi risultati dimostrano che le cellule GBM possono modificare rapidamente RTK loro dipendenza del oncogene di guida se il supplente RTK segnali attraverso la stessa via a valle. Di conseguenza, l'inibizione di un oncogene dominante di terapia mirata può alterare la gerarchia di RTKs con conseguente rapida resistenza terapeutica.

Targeting Per Un Unico Epitopo EGFR Con Anticorpo Monoclonale 806 Attiva NF-kappaB E Avvia La Normalizzazione Vascolare Tumorale

Journal of Cellular and Molecular Medicine. Sep, 2009  |  Pubmed ID: 19432811

Anticorpi monoclonali (mAbs) e inibitori della tirosina chinasi targeting per il recettore di fattore di crescita epidermico (EGFR), che è spesso pathogenetically overexpressed o mutato in glioma e neoplasie epiteliali, sono stati modesto successo, con alcuni approvati per uso umano. 806 MAb è stata sollevata contro de2-7EGFR (o EGFRvIII), una mutazione costitutivamente attiva espressa in gliomi, ma riconosce anche un sottoinsieme (< 10%) di wild-type (wt) EGFR quando è attivato da loop autocrino, sovraespressione o mutazione. Esso non legano EGFR inattivo nei normali tessuti come fegato. Xenotrapianti di glioma esprimendo de2-7EGFR trattati con mAb 806 Visualizza ridotto del recettore autophosphorylation, aumentato p27(KIP1) e ridotta proliferazione cellulare. Xenotrapianti esprimendo il wtEGFR attivato da iperespressione o autocrine ligando sono anche inibiti da mAb 806, ma il meccanismo di inibizione è stata difficile da spiegare, soprattutto perché non prevenire mAb 806 wtEGFR fosforilazione o segnalazione a valle in vitro. Così, abbiamo esaminato gli effetti del mAb 806 su A431 xenoinnesto angiogenesi. MAb 806 aumenta il fattore di crescita endoteliale vascolare (VEGF) e la produzione di interleuchina-8 attraverso l'attivazione di NF-kappaB e normalizza la vascolarizzazione tumorale. Inibizione farmacologica di NF-kappaB completamente abolita attività mAb 806, dimostrando che l'attivazione di NF-kappaB è necessaria per la sua funzione antitumorale nei xenotrapianti. Dato l'aumento VEGF, abbiamo combinato mAb 806 con bevacizumab in vivo, con conseguente attività additiva.

Fyn E SRC Sono Effettori Di Oncogenica Epidermal Growth Factor Receptor Signaling in Pazienti Di Glioblastoma

Cancer Research. Sep, 2009  |  Pubmed ID: 19690143

Attivando il recettore del fattore di crescita epidermico (EGFR) le mutazioni sono comuni in molti tumori, compresi glioblastoma. Tuttavia, le risposte cliniche di inibitori EGFR sono poco frequenti e di breve durata. Mostriamo che la Src famiglie chinasi Fyn (SFK) e Src sono effettori di oncogenico EGFR signaling, migliorando l'invasione tumorale e la sopravvivenza delle cellule in vivo. Espressione di un mutante costitutivamente attivo di EGFR, EGFRvIII, ha portato nell'attivazione di fosforilazione e associazione fisica con Src e Fyn, promuovere la motilità e la crescita tumorale. Gene silenziamento di Fyn e Src limitata motilità di cellula tumore EGFR - ed EGFRvIII-dipendente. Il dasatinib inibitore SFK inibito invasione, promosso regressione tumorale e induce apoptosi in vivo, prolungare significativamente la sopravvivenza di un modello di glioblastoma ortotopico esprimendo EGFRvIII endogeno. Dasatinib migliorata l'efficacia di un anticorpo monoclonale anti-EGFR (mAb 806) in vivo, ulteriormente limitare la crescita del tumore ed estendendo la sopravvivenza. Esame di una grande coorte di campioni clinici ha mostrato frequenti coactivation di EGFR e SFKs nei pazienti di glioblastoma. Questi risultati stabiliscono un meccanismo che collega EGFR signaling con attivazione Fyn e Src per promuovere la progressione del tumore e l'invasione in vivo e fornire motivazioni per combinato anti-EGFR e terapie anti-SFK mirati.

Immuno-PET Quantificazione Del Fattore Di Crescita Epidermico De2-7 Dell'espressione Dei Recettori Nel Glioma Utilizzando 124I IMP-R4-anticorpo Marcato Con Ch806

Journal of Nuclear Medicine : Official Publication, Society of Nuclear Medicine. Jun, 2010  |  Pubmed ID: 20484439

Sovraespressione, attivazione e mutazioni del recettore dell'epidermal growth factor (EGFR) si trovano comunemente nei tumori solidi. Lo scopo di questo studio era quello di sviluppare un metodo basato su PET per rilevare il mutante costitutivamente attivo EGFR de2-7, che è associato con la progressione della malattia e resistenza alla chemioterapia e radioterapia in glioma.

MAb 806 Migliora L'efficacia Delle Radiazioni Ionizzanti in Xenotrapianti Di Glioma Che Esprimono Il Recettore Del Fattore Di Crescita Epidermico De2-7

International Journal of Radiation Oncology, Biology, Physics. Oct, 2010  |  Pubmed ID: 20638193

Mutazioni del recettore dell'epidermal growth factor (EGFR) sono comuni in glioma. La mutazione più frequente, de2-7 EGFR/EGFRvIII, si verifica in circa il 40% dei gliomi di alto grado e conferisce resistenza alle radiazioni ionizzanti (IR). Abbiamo precedentemente dimostrato che mAb 806, un romanzo anticorpo specifico EGFR, è in grado di inibire la crescita di U87MG.Δ2-7 xenotrapianti di glioma che esprimono l'EGFR de2-7 e può avere potenziale come un terapeutico.

Eterogeneità Del Tumore è Un Processo Attivo, Gestito Da Un Circuito Di Citochine Indotta Da EGFR in Glioblastoma Mutante

Genes & Development. Aug, 2010  |  Pubmed ID: 20713517

I tumori solidi umani frequentemente hanno pronunciato eterogeneità delle cellule normali e neoplastiche su esami istologici, genetici e livelli di espressione genica. Mentre gli sforzi attuali sono concentrati sulla comprensione heterotypic interazioni tra cellule tumorali e cellule normali circostanti, tanto meno è noto circa le interazioni tra e tra le cellule tumorali eterogenee all'interno di una neoplasia. Nel glioblastoma multiforme (GBM), gene del ricevitore di fattore di crescita epidermico (EGFR) amplificazione e mutazione (EGFRvIII/DeltaEGFR) sono eventi patogenetici firma che invariabilmente sono espressi in modo eterogeneo. Sorprendentemente, nonostante la sua maggiore attività biologica di EGFR wild-type (wtEGFR), tumori GBM individuali che esprimono entrambi i recettori amplificati express in genere wtEGFR in abbondanza di gran lunga maggiore rispetto alla lesione DeltaEGFR. Abbiamo ipotizzato che la sottopopolazione minore DeltaEGFR-esprimendo migliora tumorigenicity della popolazione cellulare tumorale intero e quindi mantiene eterogeneità di espressione delle due forme del recettore in cellule differenti. Uso di miscele di cellule di glioma, così come gli astrociti murini immortalati, dimostriamo che un meccanismo paracrina guidato da DeltaEGFR è il mezzo principale per il reclutamento di cellule che esprimono wtEGFR nella proliferazione accelerata in vivo. Abbiamo determinato che tessuti di glioma umano, linee di cellule di glioma, Glioma delle cellule staminali e astrociti Ink4a/Arf(-/-) immortalata mouse che esprimono DeltaEGFR ogni anche esprimono IL-6 e/o leucemia citochine fattore inibitorio (LIF). Queste citochine attivano gp130, che a sua volta attiva wtEGFR nelle vicine cellule, portando a maggiore tassi di crescita del tumore. Ablazione di IL-6, LIF o gp130 separa questo cellulare cross-talk e potentemente attenua la valorizzazione di crescita del tumore. Questi risultati sostengono l'idea che una popolazione cellulare tumorale minore può guidare potentemente accelerazione della crescita della massa tumorale intero e quindi attivamente mantenere eterogeneità delle cellule tumorali all'interno di un tumore massa. Tali interazioni tra cellule tumorali geneticamente dissimili potrebbero fornire nuovi punti di intervento terapeutico.

Attivazione Di Src Induce La Localizzazione Mitocondriale Di De2-7EGFR (EGFRvIII) Nelle Cellule Di Glioma: Implicazioni Per Il Metabolismo Del Glucosio

Journal of Cell Science. Sep, 2011  |  Pubmed ID: 21878501

Una comune mutazione del recettore del fattore di crescita epidermico nel glioma è de2-7EGFR (o EGFRvIII). Le cellule di glioma che esprimono de2-7EGFR contengono un pool intracellulare del recettore con alti livelli di glicosilazione di mannosio, che è coerente con l'elaborazione differita. Mostriamo ora che questo ritardo si verifica nel complesso di Golgi. Bassi livelli di de2-7EGFR sono stati visti anche all'interno dei mitocondri. Src attivazione aumentato drammaticamente la quantità di mitocondriale de2-7EGFR, considerando che la sua inibizione farmacologica ha causato una significativa riduzione. Perché de2-7EGFR è fosforilata da Src a Y845, abbiamo generato cellule di glioma che esprimono una modifica Y845F de2-7EGFR. Il mutante di de2-7EGFR(845F) non è riuscito a mostrare la localizzazione mitocondriale, anche quando co-expressed con livelli di Src. Low active costitutivi di glucosio migliorata localizzazione mitocondriale di de2-7EGFR, e le cellule di glioma che esprimono il recettore ha mostrato maggiore sopravvivenza e proliferazione in queste condizioni. Coerentemente con questo, de2-7EGFR ridotta dipendenza glucosio stimolando metabolismo ossidativo mitocondriale. Così, la localizzazione mitocondriale di de2-7EGFR contribuisce alla sua tumorigenicity e potrebbe aiutare a spiegare la sua resistenza ad alcune terapie mirate di EGFR.

La Fosforilazione Del Dedicante Di Citocinesi in 1 (Dock180) a Y722 Di Residui Di Tirosina Da Famiglie Chinasi Src Media EGFRvIII-driven Glioblastoma Tumorigenesi

Proceedings of the National Academy of Sciences of the United States of America. Feb, 2012  |  Pubmed ID: 22323579

Glioblastoma, il più comune tumore maligno primario del cervello, è caratterizzata dalla crescita tumorale rapida e infiltrazione di cellule tumorali in tutto il cervello. Questi tratti causano glioblastomi altamente resistente alle terapie attuali con una conseguente prognosi infausta. Anche se oncogenica di segnalazione aberrante guidato da alterazioni genetiche firma, come EGF amplificazione del gene del recettore (EGFR) e mutazione, gioca un ruolo importante nella patogenesi di glioblastoma, i meccanismi responsabili a valle rimangono meno chiaro. Qui, segnaliamo che EGFRvIII (noto anche come ΔEGFR e de2-7EGFR), un mutante costitutivamente attivo di EGFR che è frequentemente co-overexpressed con EGFR in glioblastoma umano, promuove la tumorigenesi mediante chinasi della famiglia di Src (SFK)-dipendente della fosforilazione della Dock180, un fattore di scambio di nucleotide della guanina per Rac1. EGFRvIII induce la fosforilazione di Dock180 a residui di tirosina 722 (Dock180(Y722)) e stimola la segnalazione di Rac1, la sopravvivenza delle cellule di glioblastoma e migrazione. Coerenti con questo essere causale, siRNA atterramento di Dock180 o espressione di un mutante Dock180(Y722F) inibisce ognuna di queste attività ha stimolato EGFRvIII. Il SFKs, Src, Fyn e Lyn, inducono la fosforilazione della Dock180(Y722) e l'inibizione di questi SFKs da inibitori farmacologici o shRNA deplezione attenua marcatamente fosforilazione indotta da EGFRvIII di Dock180(Y722), attività di Rac1 e migrazione delle cellule di glioblastoma. Infine, Dock180(Y722) fosforilato è Rsc8p con EGFRvIII e Src(Y418) fosforilati in campioni clinici, e tale coexpression correla con un'estremamente scarsa sopravvivenza nei pazienti di glioblastoma. Questi risultati suggeriscono che targeting SFK-p-Dock180 (Y722)-Rac1 signaling pathway può offrire una romanzo strategia terapeutica per i glioblastomi con sovraespressione EGFRvIII.