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Articles by Tim D. Aumann in JoVE
JoVE Bioengineering
Aumentar el rendimiento de cDNA a partir de una sola célula cantidades de ARNm en las reacciones de laboratorio estándar de la transcriptasa inversa con microcorrientes acústica
1Florey Neuroscience Institutes and Centre for Neuroscience, University of Melbourne, 2Fluid Dynamics Group, CSIRO Materials Science and Engineering, 3Swinburne University of Technology, Faculty of Engineering and Industrial Sciences
Se describe un nuevo método para aumentar el rendimiento de cDNA a partir de una sola célula cantidades de ARNm en las reacciones de laboratorio estándar de lo contrario la transcripción inversa. La novedad reside en el uso de un micromixer, que utiliza el fenómeno de las microcorrientes acústica, para mezclar líquidos a escalas microlitro con más eficacia que temblores, agitación o trituración.
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La Modulación De La Proteína Morfogénica ósea Números De Señalización De Los Astrocitos Y Altera Oligodendroglia En La Zona Subventricular Durante Cuprizone Inducida Por Desmielinización
La zona subventricular adulta (SVZ) es una fuente potencial de células precursoras para reemplazar las células neuronales se pierden durante la desmielinización. Para entender mejor los eventos moleculares que regulan la respuesta neuronal de células precursoras en este contexto se realizó un microarray y análisis cuantitativo basado en la PCR de los genes expresados en la SVZ en cuprizone inducida por la desmielinización. Se identificaron una regulación de los genes que codifican la proteína morfogenética ósea 4 (BMP4) y sus receptores. La inmunohistoquímica confirmó un aumento en los niveles de proteína BMP4 y también mostró un aumento de la fosforilados Smad 1/5/8, un componente clave de BMP4 señalización, durante la desmielinización. En el análisis in vitro reveló que las células precursoras neuronales aisladas de animales desmielinizadas, así como aquellos tratados con BMP4, producir más astrocitos. Del mismo modo, hubo un aumento del número de astrocitos in vivo dentro de la SVZ durante la desmielinización. La infusión intraventricular de Noggin, un antagonista endógeno de BMP4, durante cuprizone inducida por la desmielinización redujo pSMAD1/5/8, disminución en el número de astrocitos y oligodendrocitos un mayor número en la SVZ. Nuestros resultados sugieren que el compromiso de linaje de células precursoras neurales SVZ se altera durante la desmielinización y que la señalización de BMP juega un papel en este proceso.
La Actividad Neuronal Regula La Expresión De La Tirosina Hidroxilasa En El Ratón Adulto Sustancia Negra Pars Compacta Neuronas
La entrega estriatal de dopamina (DA) por el cerebro medio, la sustancia negra pars compacta (SNc), las neuronas es esencial para el control motor y su agotamiento hace que los síntomas motores de la enfermedad de Parkinson. Si bien los cambios potencial de membrana o de la actividad neuronal regula la tirosina hidroxilasa (TH, la enzima limitante en la síntesis de catecolaminas) expresión en otras células catecolaminérgicas, no se sabe si lo mismo ocurre en los adultos las neuronas SNc. Se administraron fármacos que alteran la actividad neuronal de las neuronas de ratón SNc DAergic en diversas preparaciones experimentales y midió los cambios en su expresión de TH. En las neuronas del cerebro medio cultivo, el bloqueo de los potenciales de acción con tetrodotoxina mM disminuyó un principio TH expresión de alrededor de 20 horas después (medida en tiempo real por la proteína verde fluorescente (GFP) en la expresión expulsados de la actividad promotora TH). Por el contrario, el bloqueo parcial de la pequeña conductividad, Ca (2 +) activa los canales de potasio con 300 Nm apamina aumento de ARNm y proteínas TH entre 12 y 24 horas más tarde, en rodajas de cerebro medio adulto. Dos semanas de infusiones de 300 nM apamina directamente al cerebro medio del ratón adulto in vivo, también aumentó la expresión de TH en las neuronas SNc, medido mediante inmunohistoquímica. Paradójicamente, el número de TH inmunorreactiva (TH +), las neuronas SNc disminuido en estos animales. Similar en infusiones in vivo de fármacos que afectan otros canales de iones y receptores (tipo L voltaje activado por Ca (2 +) canales, GABA (A), los receptores de alta K (+), los receptores de DA) también aumenta o disminuye TH inmunoreactividad celular pero disminución o aumento, respectivamente, el número de células TH + en SNc. Llegamos a la conclusión de que en los adultos las neuronas SNC: (i) la expresión TH es dependiente de la actividad y comienza a cambiar ~ 20 horas después de los cambios sostenidos en la actividad neuronal, (ii) los canales iónicos y receptores que median la actividad de células autónomas o la entrada sináptica son igual de potentes en la alteración de la expresión de TH, y (iii) dependientes de la actividad cambios en la expresión de TH se equilibran por oponerse a los cambios en el número de células TH + SNc.
La Remielinización Se Ve Alterada Por La Proteína Morfogenética ósea De Señalización En Las Lesiones Desmielinizados
La remielinización del sistema nervioso central consiste en la regeneración de los oligodendrocitos maduros por las células progenitoras de oligodendrocitos endógenos (OPC). Estudios previos han demostrado que las proteínas morfogénicas del hueso (BMP) inhiben la producción de los oligodendrocitos en el SNC sanos. Sin embargo, actualmente no hay información sobre la influencia de la señalización de BMP en vivo dentro de las lesiones de mielina en el cerebro o en la remielinización posterior. En este sentido, determinar el papel de la señalización de BMP en oligodendrogliogenesis modulación y la remielinización en el cerebro después de cuprizone inducida por la desmielinización. Se identificó que la señalización de BMP está activo en oligodendroglia y los astrocitos en el cuerpo calloso desmielinizado. La infusión intraventricular de BMP4 en los cerebros de los ratones durante la desmielinización aumento de la proliferación de las OPC y, en menor medida, la microglía y los astrocitos en el cuerpo calloso. En contraste, la infusión de Noggin, un antagonista extracelular de BMP4, el aumento de la densidad de oligodendrocitos maduros en el cuerpo calloso remyelinating. La evidencia adicional de las manchas de mielina y la microscopía electrónica indica que hay un aumento en los axones remyelinated en el cuerpo calloso de los ratones infundidos Noggin. Por lo tanto, la inhibición de la señalización BMP endógena durante la desmielinización promueve la regeneración de los oligodendrocitos maduros y remielinización.
