लोकतंत्र एकाग्रता gradients में बैक्टीरियल chemotaxis बढ़ाता के लिए एक microfluidic युक्ति

Summary

इस प्रोटोकॉल chemoeffectors के स्थिर एकाग्रता gradients में बैक्टीरिया chemotaxis की जांच के लिए एक microfluidic डिवाइस के विकास का वर्णन करता है.

Abstract

Chemotaxis बैक्टीरिया attractant रसायनों के सूत्रों के दृष्टिकोण करने के लिए या बचाने वाली क्रीम रसायनों के स्रोतों से बचने के लिए अनुमति देता है. जीवाणु लगातार एकाग्रता वर्तमान एकाग्रता तुलना द्वारा विशिष्ट chemoeffectors की एकाग्रता की निगरानी कुछ ही सेकंड पहले पता लगाया. इस आंदोलन की तुलना शुद्ध दिशा निर्धारित करता है. हालांकि कई, प्रतिस्पर्धा gradients अक्सर प्रकृति में रह, बैक्टीरियल chemotaxis की जांच करने के लिए परंपरागत दृष्टिकोण attractants और repellents के एकाग्रता gradients के जवाब में प्रवास बढ़ाता के लिए suboptimal कर रहे हैं. यहाँ, हम बैक्टीरिया के लिए सटीक और स्थिर chemoeffectors की एकाग्रता gradients को पेश करने और मात्रात्मक उनके लागू ढाल के जवाब की जांच के लिए एक microfluidic chemotaxis मॉडल के विकास का वर्णन. युक्ति किसी भी वांछित पूर्ण एकाग्रता और ढाल ताकत की है कि एकाग्रता gradients में बहुमुखी है आसानी से मिश्रण वाचाल द्वारा उत्पन्न कर सकते हैं. डिवाइस की प्रतिक्रिया का उपयोग करने के लिए प्रदर्शन किया है

Protocol

1. सिलिकॉन मानक SU 8 ¹ photolithography (इस वीडियो में दिखाया गया है) का उपयोग कर स्वामी का निर्माण.

1. मानक SU-8 photolithography तरीकों का उपयोग PDMS साँचे में ढालना है कि microfluidic नेटवर्क और chemotaxis कक्ष होता है fabricating के लिए SU-8 "मास्टर" (एसयू 8 2025, MicroChem, न्यूटन, एमए) बनाने के लिए. इस तरह के मास्टर molds किसी भी microfabrication सुविधा (, जैसे, स्टैनफोर्ड Microfluidics फाउंड्री में गढ़े जा सकता है http://thebigone.stanford.edu/foundry/ ).
2. PDMS प्रतिकृति से पहले, एक वैक्यूम स्रोत के लिए संलग्न करने के लिए मास्टर से PDMS की आसान रिहाई की सुविधा desiccator में fluorosilane वाष्प SU-8 मास्टर एक कागज तौलिया fluorosilane की एक बूंद जोड़ें और एक मिनट के लिए वैक्यूम लागू बेनकाब. . वैक्यूम निकालें और fluorosilane के बयान के लिए 30 मिनट की अनुमति है. SU-8 मास्टर को भविष्य में प्रयोग के लिए एक बंद कंटेनर में रखें.

2. SU-8 मास्टर से PDMS की प्रतिकृति ढलाई: fluidic परत और परत नियंत्रण SU-8 मास्टर से PDMS की प्रतिकृति मोल्डिंग द्वारा बनाई गई हैं.

1. एक 10:1 wt में पूर्व बहुलक PDMS और पार linker मिक्स. अनुपात और 1 घंटे (या जब तक हवा बुलबुले PDMS मिश्रण से हटा रहे हैं) के लिए एक dessicator में Degas.
2. एक पेट्री डिश में SU-8 मास्टर प्लेस और ध्यान से SU-8 मास्टर के शीर्ष पर इच्छित मोटाई PDMS मिश्रण डालना.
3. पेट्री पकवान युक्त PDMS और SU-8 में 80 मास्टर मोल्ड ° सी दो घंटे के लिए PDMS इलाज करने के लिए गर्मी.
4. निकालें ठीक PDMS कवर hotplate से SU-8 मास्टर और SU-8 मास्टर से PDMS मोल्ड छील. वांछित संरचना PDMS मोल्ड में एम्बेडेड हो जाएगा.
5. PDMS सांचे में ढाल जनरेटर और सेल इनलेट एक 20 गेज सुई कुंद अंत का उपयोग करने के लिए टयूबिंग के लिए छेद पंच.

3. PDMS उपकरणों के संबंध:

1. साफ isopropanol और सूखी नाइट्रोजन या एक हवाई धारा के साथ के साथ एक गिलास खुर्दबीन स्लाइड.
2. PDMS और कांच स्लाइड एक प्लाज्मा आशेर में ऑक्सीजन प्लाज्मा बेनकाब.
3. PDMS मोल्ड गिलास स्लाइड के साथ संपर्क में ले आओ. 65 के लिए संपर्क स्लाइड और PDMS मोल्ड गर्मी डिग्री सेल्सियस 15 मिनट के लिए.

4. कोडांतरण PDMS डिवाइस

1. एक धार का प्रयोग, एक 45 में कटौती टयूबिंग ° सही उपकरण के लिए आवश्यक लंबाई के लिए कोण.
2. डिवाइस संदंश का उपयोग (जैसे, आउटलेट) में छिद्रित छेद में टयूबिंग की एक छोर डालें.
3. संदंश का प्रयोग, टयूबिंग के अन्य अंत में एक कुंद 30 गेज सुई डालने.
4. शेष सभी छेद के लिए 4.2 चरण को दोहराएँ.
5. एक 3ml सिरिंज में chemotaxis बफर (सीबी) के 1ml ले लीजिए, ध्यान लेने के लिए सिरिंज से हवाई बुलबुले को दूर.
6. एक सुई केंद्र आउटलेट टयूबिंग की एक अंत तय करो.
7. सुई हब सीबी जोड़ें, और सुई हब नल के लिए किसी भी हवाई बुलबुले को दूर.
8. सिरिंज के टिप का एक छोटा सीबी बाहर पुश और 3ml सिरिंज सुई हब हवा फँसाने के बिना कनेक्ट.
9. डिवाइस के माध्यम से सीबी पुश जब तक सभी शेष सुई केन्द्र सीबी के साथ से भर रहे हैं. यह हवा के बुलबुले के बहुमत को दूर करना चाहिए.
10. सीबी के साथ दो 500μL सीरिंज chemoeffector परीक्षण किया जा रहा उचित सांद्रता वाले भरें. सिरिंज सामग्री की एक छोटी सी बूंद धक्का और सुई हब में तरल के लिए ड्रॉप छू और संलग्न द्वारा हवा बुलबुला गठन हटा दें.
11. इसी तरह, एक बैक्टीरिया इनलेट सीबी युक्त सिरिंज कनेक्ट. जब बैक्टीरिया डिवाइस में पेश कर रहे हैं हटा दिया जाएगा.

5. अत्यधिक गतिशील ई. की वृद्धि कोलाई

1. ई. के रातोंरात संस्कृतियों आगे बढ़ें RP437 एक GFP 32 ° C 20 tryptone शोरबा (टीबी) के झटकों के साथ एमएल में प्लाज्मिड अभिव्यक्ति के साथ कोलाई . एंटीबायोटिक का उपयुक्त सांद्रता जोड़ें प्लाज्मिड बनाए रखने के लिए. हमारे प्रोटोकॉल में, हम डिवाइस में प्रतिदीप्ति के आधार पर बैक्टीरिया का पता लगाने के लिए एक कम प्रतिलिपि प्लाज्मिड pCM182 का उपयोग करें. ई. के लिए कोलाई, 32 में बढ़ रही संस्कृतियों डिग्री सेल्सियस उच्च गतिशीलता के लिए सिफारिश की है, के रूप में उच्च तापमान पर गतिशीलता कम है .
2. रातोंरात संस्कृति का प्रयोग करने के लिए एक 250 एमएल Erlenmeyer फ्लास्क में 0.05 ~ 600nm में ऑप्टिकल घनत्व के टीबी के 20 एमएल की संस्कृति को टीका लगाना. 32 में मिलाते साथ आगे बढ़ें संस्कृति ° सी.
3. 5 मिनट के लिए 400 XG पर कम गति centrifugation द्वारा 0.35 ~ 0.45 की एक ₆₀₀ आयुध डिपो में कोशिकाओं हार्वेस्ट.
4. 0.35 ~ ₆₀₀ सीबी चैनल के बीच में उम्मीद की एकाग्रता में chemoeffector युक्त आयुध डिपो कोशिकाओं Resuspend .
5. 0.35 ~ ₆₀₀ आयुध डिपो में आरएफपी लेबल मृत कोशिकाओं GFP-व्यक्त जीवित कोशिकाओं के लिए जोड़ें . मृत कोशिकाओं (लाल) एक आंतरिक नियंत्रण करने के लिए सुनिश्चित करें कि किसी भी प्रवास प्रवाह प्रभाव के कारण नहीं है के रूप में उपयोग किया जाता है.

6. निगरानी chemotaxis

1. सीबी की सेल इनलेट सुई से कुछ निकालेंहब. सेल निलंबन के साथ फिर से भरना.
2. धीरे resuspended कोशिकाओं के साथ 50μL सिरिंज भरें. यह कदम धीरे धीरे किया जा रूप flagella sheared किया जा सकता है है की जरूरत है और गतिशीलता कम हो जाएगा.
3. इनलेट सुई के रूप में चरणों 4.10 कदम में वर्णित हब 50μL सिरिंज संलग्न.
4. एक प्रतिदीप्ति छवि अधिग्रहण के लिए एक उच्च गति कैमरा के साथ सुसज्जित खुर्दबीन के मंच पर डिवाइस स्थिति. सिरिंज पंप में प्रवेश सीरिंज (दोनों 500 μL ढाल सीरिंज और 50 μL सेल सिरिंज) प्लेस और ऐसी है कि ढाल का गठन और कोशिकाओं टयूबिंग के माध्यम से बह रही हैं प्रवाह आरंभ.
5. एक बार कोशिकाओं chemotaxis कक्ष में प्रवेश करते हैं, सिस्टम के लिए ~ 20 मिनट इंतजार इमेजिंग से पहले स्थिर.
6. चेम्बर की लंबाई के साथ विभिन्न स्थानों (अलग जोखिम बार के लिए इसी) (जी) हरे और लाल (मृत) प्रतिदीप्ति छवियों लीजिए. आमतौर पर, हम 3 सेकंड अंतराल पर प्रत्येक स्थान पर 100 छवियाँ एकत्र.

7. डेटा विश्लेषण: निम्नलिखित चरणों का किसी भी व्यावसायिक रूप से उपलब्ध छवि विश्लेषण कार्यक्रम (जैसे, ImageJ, Metamorph) का उपयोग कर या सरल Matlab में लिखा कोड का उपयोग किया जा सकता है है.

1. पृष्ठभूमि छवि (यानी, सेट दहलीज पिक्सेल तीव्रता और हटाने के सभी पिक्सल है कि तीव्रता सीमा से कम है) में पिक्सल निकालें. विश्लेषण में यह कम से कम शोर.
2. मृत कोशिकाओं (लाल प्रतिदीप्ति) की स्थिति का उपयोग करने के लिए छवि के केन्द्र निर्धारित है. के बाद से मृत कोशिकाओं नहीं chemotaxis दिखाने के लिए, इस स्थान है जहाँ कोशिकाओं chemotaxis कक्ष में प्रवेश किया और किसी भी प्रवास के अभाव में पाया होगा का प्रतिनिधित्व करता है.
3. छवि में रहते कोशिकाओं (हरी प्रतिदीप्ति) का पता लगाएँ.
4. चैनलों में छवि फूट डालो और प्रत्येक चैनल में जीवित कोशिकाओं की संख्या का निर्धारण. हमारे पूर्व काम में ^3, 1050 सुक्ष्ममापी विस्तृत chemotaxis चैम्बर 64 चैनलों कि प्रत्येक ~ 16 सुक्ष्ममापी चौड़ा कर रहे हैं में विभाजित किया गया था.
5. कदम सभी छवियों के लिए 7.3 7.1 दोहराएँ और सभी छवियों भर में प्रत्येक चैनल के लिए कुल सेल मायने रखता है योग. यह कुल सेल प्रयोग की अवधि पर प्रत्येक चैनल पर पाया गिनती देता है.
6. प्रत्येक उच्च एकाग्रता (दाएं) और कम (बाएं) एकाग्रता मृत कोशिकाओं के पक्ष में स्थित सेल सौंपा है 1 और -1 के एक गुणक: chemotaxis विभाजन (सीपीसी) गुणांक, जो प्रवास की दिशा का प्रतिनिधित्व करता है, के रूप में इस प्रकार की गणना , क्रमशः. यही कारण है, एक सेल है कि ऊपर उत्प्रवासित एक ढाल एक से गुणा किया जाता है, जबकि नीचे ढाल चलती कोशिकाओं -1 से गुणा कर रहे हैं. सभी गुणा मूल्यों जोड़ रहे हैं और पता लगाया कोशिकाओं की कुल संख्या के लिए सामान्यीकृत है. उदाहरण के लिए, .40 की एक CPC मान इंगित करता है कि 40 कुल जीवाणुओं की अधिक% कम एकाग्रता पक्ष (यानी, chemoeffector एक attractant है के रूप में और अधिक बैक्टीरिया पाया गया ढाल चलती) की तुलना में उच्च एकाग्रता की ओर ले जाया गया.
7. प्रत्येक चैनल में एक कारक है कि दूरी है कि कोशिकाओं को विस्थापित करने के लिए आनुपातिक है द्वारा कोशिका गिनती वजन: chemotaxis प्रवास (सीएमसी) गुणांक है, जो वजन दूरी के द्वारा कोशिकाओं के प्रवास कूच के रूप में इस प्रकार की गणना. एक सेल है कि दूर उच्च एकाग्रता की स्थिति (64 चैनल) करने के लिए कदम 1 के एक भार कारक दिया जाता है, जबकि एक है कि उच्च एकाग्रता के पक्ष में आधे रास्ते चाल 0.5 के एक भार कारक दिया जाता है, और एक सेल दूर करने के लिए आगे बढ़ कम एकाग्रता की स्थिति -1 से भारित है. भारित सभी कोशिकाओं की गिनती योग और कोशिकाओं की संख्या सामान्य सीएमसी उत्पन्न करने के लिए.

प्रतिनिधि परिणाम ^3,4:

हम इस्तेमाल किया है microfluidic युक्ति (चित्रा 1 ए) यहाँ वर्णित करने के लिए ई. के chemotaxis की जांच (एसपारटिक एसिड, autoinducer -2) attractants और repellents ₍₄ NiSO, इण्डोल) ^3,4 के gradients में कोलाई. आद्य chemotaxis ⁵ तनाव ई. कोलाई RP437 व्यक्त GFP, kanamycin को मार डाला ई. के साथ साथ इस्तेमाल किया गया था कोलाई TG1 प्रवाह के प्रभाव की निगरानी के लिए लाल फ्लोरोसेंट प्रोटीन व्यक्त कोशिकाओं. एकाग्रता μFlow डिवाइस में गठन ढाल चित्रा 1B में दिखाया गया है. सेल इनलेट छाया हुआ था ताकि वहाँ के माध्यम से इसे कोई प्रवाह और 0 100 के एक स्थिर ढाल fluoresscein के / एमएल एनजी डिवाइस में स्थापित किया गया था था. डिवाइस भर पिक्सेल तीव्रता fluorescein की एकाग्रता प्रोफ़ाइल निर्धारित करने के लिए इस्तेमाल किया गया था. आंकड़े बताते हैं कि जीवाणु एक रैखिक ढाल मुठभेड़ जब वे chemotaxis कक्ष में प्रवेश चित्रा 2A और बी ई. के प्रतिदीप्ति छवियों से पता चलता है. कोलाई एसपारटिक एसिड (0 100 सुक्ष्ममापी) और ₄ NiSO (0 225 सुक्ष्ममापी) gradients के जवाब में पलायन RP437. इन विहित attractant के लिए मनाया प्रतिक्रियाओं और विकर्षक के रूप में भविष्यवाणी कर रहे हैं. चित्रा 3A ई. की मात्रा निर्धारित वितरण से पता चलता है RP437 कोलाई जबकि एक एकाग्रता ढाल के अभाव में (यानी, एसपारटिक एसिड के अशक्त ढाल),आंकड़े 3B और सी एसपारटिक एसिड और NiSO ₄ के gradients में वितरण दिखा. इन प्रतिक्रियाओं की विशिष्टता (यानी, प्रवास में पूर्वाग्रह) एक ई. के रूप में स्पष्ट है कोलाई RP437 Δ टार तनाव (यानी, राल chemoreceptor कि ई. कोलाई में प्रयोग किया जाता है एसपारटिक एसिड और निकल भावना की कमी तनाव) एसपारटिक एसिड या _NiSO 4 के एक एकाग्रता ढाल की उपस्थिति में प्रवास में पूर्वाग्रह प्रदर्शित नहीं करता है . स्थानिक वितरण प्रोफाइल में स्पष्ट रुझान भी गणना CPC और सीएमसी मूल्यों के साथ संगत कर रहे हैं. ई. के प्रवास के लिए सीपीसी मान एसपारटिक एसिड या NiSO ₄ के gradients में RP437 कोलाई 0.33 और -0.33, क्रमशः रहे हैं. इसी सीएमसी मूल्यों 0.13 और -0.14, क्रमशः रहे हैं. इसके विपरीत, ई. के साथ CPC और सीएमसी मूल्यों कोलाई RP437 Δ टार एसपारटिक एसिड या NiSO ₄ के gradients में तनाव नगण्य हैं. इसके अलावा, सीपीसी और एसपारटिक एसिड एक अशक्त ढाल में सीएमसी 0.03 और 0.02, क्रमशः रहे हैं, और पूर्वाग्रह के प्रवास में एक ढाल के अभाव में कमी से संकेत मिलता है.

चित्रा 1. डिवाइस योजनाबद्ध और एकाग्रता ढाल.
(ए) microfluidic chemotaxis डिवाइस के योजनाबद्ध प्रतिनिधित्व. डिवाइस एक ढाल मिश्रण (20 x 100 x +१८७५० सुक्ष्ममापी) मॉड्यूल और एक chemotaxis अवलोकन मॉड्यूल (20 1050 एक्स x 11,500 सुक्ष्ममापी) के होते हैं. दो ढाल डिवाइस में प्रवेश चैनलों की चौड़ाई 500 सुक्ष्ममापी और बैक्टीरिया इनलेट की चौड़ाई 50 सुक्ष्ममापी है. इनसेट संकेत अणु (ग्रे) और बैक्टीरिया के जवाब में पलायन की एक ढाल दर्शाया गया है. लाइव बैक्टीरिया ठोस ovals के रूप में चित्रित कर रहे हैं, जबकि मृत बैक्टीरिया खुले ovals के रूप में दिखाए जाते हैं. (बी) 0 और 100 एनजी / एमएल fluorescein के बीच एक एकाग्रता ढाल डिवाइस में उत्पन्न किया गया था और प्रतिदीप्ति माइक्रोस्कोपी का उपयोग imaged. प्रतिदीप्ति छवियों को 30 मिनट के बाद हासिल किया गया और छवि विश्लेषण के द्वारा मात्रा.

चित्रा 2. ई. के chemotaxis RP437 कोलाई microfluidic डिवाइस में.
ई. कोलाई RP437 की एक ढाल के लिए खुल गया (ए) 000-100 एल aspartate सुक्ष्ममापी या (बी) में युक्ति 0-225 सुक्ष्ममापी ₄ NiSO और जीवित बैक्टीरिया के प्रवास (हरा) एल aspartate की ओर या निकल से दूर 30 मिनट के लिए हर 2.5 सेकंड imaged. मृत बैक्टीरिया (लाल) डिवाइस में प्रवाह के प्रभाव के लिए नियंत्रण के रूप में सेवा की. छवियाँ program3 विश्लेषण विकसित घर का उपयोग मात्रा निर्धारित थे. दिखाया गया डेटा तीन स्वतंत्र प्रयोगों से प्रतिनिधि छद्म रंग छवियों हैं.

चित्रा 3: मात्रा प्रवास प्रोफाइल के एक विहित attractant और विकर्षक.
Microfluidic डिवाइस में RP437 के स्थानिक वितरण के जवाब में (एक) वर्दी 100 एल aspartate (यानी, कोई ढाल) सुक्ष्ममापी, (बी) 0 100 aspartate के सुक्ष्ममापी ढाल, और (सी) 0 225 ₄ NiSO के सुक्ष्ममापी ढाल . मृत कोशिकाओं का वितरण एक ठोस लाइन के रूप में दिखाया गया है, RP437 कोशिकाओं के वितरण एक डैश्ड लाइन के रूप में दिखाया गया है, और ^RP437 eda + Δ टार कोशिकाओं के वितरण एक बिंदीदार रेखा के रूप में दिखाया गया है. दिखाया गया डेटा तीन स्वतंत्र प्रयोगों के लिए औसत रहे हैं.

Discussion

chemotaxis विभाजन (सीपीसी) गुणांक और chemotaxis प्रवास गुणांक (सीएमसी) माओ एट अल ⁵ में वर्णित के रूप में गणना की जा सकती है. यदि एक सेल उच्च एकाग्रता की ओर पर पाया जाता है, यह एक का एक मूल्य दिया जाता है, जबकि एक कम एकाग्रता की ओर पर पता चला सेल -1 के मूल्य दिया जाता है. मूल्यों को अभिव्यक्त कर रहे हैं और कोशिकाओं की कुल संख्या से विभाजित करने के लिए सीपीसी उत्पन्न. सीपीसी (सकारात्मक या नकारात्मक) के हस्ताक्षर के प्रवास की दिशा (दिशा में या दूर एक संकेत से) देता है. हालांकि सीपीसी इंगित करता है एक attractant या विकर्षक, यह chemotaxis की हद तक नहीं यों करता है कि क्या कोशिकाओं के रूप में एक रासायनिक प्रतिक्रिया है. इस के लिए, हम डिवाइस की चौड़ाई भर में 64 वर्गों (सेल इनलेट के प्रत्येक पक्ष पर 32) में बैक्टीरिया के स्थानिक वितरण प्रोफ़ाइल विभाजित और की दूरी के आधार पर प्रत्येक अनुभाग में कोशिकाओं को एक भार कारक बताए द्वारा सीएमसी की गणना प्रवास. केंद्र (1 वर्गों और 64) से दूर वर्गों से गुणा +1 (31.5/31.5 =) या -1 के बाद से वे कोशिकाओं है कि अधिकतम दूरी चले गए होते हैं. अगले दो वर्गों (2 और 63) 0.968 (30.5/31.5 =) या -0.968 से गुणा कर रहे हैं. पिछले दो वर्गों (यानी, 32 और 33 है कि सेल इनलेट के लिए निकटतम हैं) + (= 0.5/31.5) .015 या -0.015 से गुणा कर रहे हैं. भारित मूल्यों को अभिव्यक्त किया और कक्षों की कुल संख्या सामान्यीकृत सीएमसी उत्पन्न कर रहे हैं. एक के एक सीएमसी इंगित करता है कि सभी बैक्टीरिया ढाल के ऊपर पूरी तरह से प्रवाह कक्ष की दीवार के लिए ले जाया गया. एक हल्के आकर्षक प्रतिक्रिया के मामले में, सीएमसी अभी भी एक सकारात्मक होगा, लेकिन एक छोटे मूल्य है, जबकि अभी भी CPC मूल्य एक होगा. इस प्रकार सीएमसी उत्तरदायी कोशिकाओं प्रवास की हद तक के आधार पर भेदभाव है.

कुछ मापदंडों को ध्यान से जबकि chemotaxis प्रयोगों प्रदर्शन नियंत्रित किया जा जरूरत है. तापमान पर जो बैक्टीरिया खेती कर रहे हैं महत्वपूर्ण है. ई. के लिए कोलाई, हम देखा है कि सबसे अच्छा विकास तापमान 32 डिग्री सेल्सियस और उच्च तापमान गतिशीलता कम है. के लिए निश्चित रिसेप्टर्स बैक्टीरिया में उपस्थित होने के लिए, यह एक chemoeffector उत्प्रेरण (यानी, chemotaxis के लिए कोशिकाओं प्रधानमंत्री) की उपस्थिति में बैक्टीरिया बढ़ने के लिए आवश्यक हो सकता है. उदाहरण के लिए, जब बैक्टीरिया की maltose के जवाब की जांच, कोशिकाओं को चीनी का 0.1% (w / v) के साथ बड़े हो रहे हैं. जब centrifugation के बाद बैक्टीरिया resuspending, यह महत्वपूर्ण है कि कोमल मिलाते / ट्यूब के रोलिंग प्रदर्शन किया है और कोशिकाओं नहीं vortexed कर रहे हैं. जोरदार झटकों के परीक्षण किया जा रहा कोशिकाओं की गतिशीलता को कम flagella कतरनी कर सकते हैं और. प्रवाह डिवाइस में इस्तेमाल दरों के लिए परीक्षण किया जा रहा जीवाणु की गतिशीलता के आधार पर निर्धारित किया जा आवश्यकता होगी. धीमी प्रवाह दरों में बैक्टीरिया है कि कम गतिशील होते हैं के लिए आवश्यक हो सकता है, और इष्टतम प्रवाह दर empirically निर्धारित किया जाना चाहिए.

हम आशा करते हैं कि μFlow डिवाइस जीवाणु (जैसे, chemoeffectors के बीच एक ही रिसेप्टर के लिए प्रतिस्पर्धा) chemotaxis के रूप में पर्यावरणीय नमूनों कि attractants या repellents के रूप में विशेष रसायनों के जवाब में बैक्टीरिया की पहचान करने में पर मौलिक जांच के लिए इस्तेमाल किया जा सकता है.