Summary
이 프로토콜은 남성의 testes에서 정자를 추출 후 여성 쥐를 inseminating하는 방법을 보여줍니다. 정확한 시간 발달 연구에서뿐만 아니라 유전자 변형 작업 필요한 경우이 절차는 유용합니다.
Abstract
속의 Peromyscus (사슴 마우스)의 설치류는 가장 널리 북미 포유류입니다. Peromyscus 종은 독성학, 역학, 생태, 행동, 그리고 유전자 연구를 포함한 연구의 다양한 사용됩니다. 여기 그들은 인공 수정의 데모에 대한 유용한 모델을 제공합니다.
여기에 표시된 것과 유사한 방법은 이전에 여러 사슴 마우스 연구에 사용되고 있고, 아직 자세한 프로토콜은 공개되지 않았습니다. 우리가 인공 수정의 기본 방법을 보여줍니다. 이 방법은 epididymis와 중이야의 deferens에서 정자를 분리 후, 설치류에서 testes를 추출 알아볼 수 있습니다. 이제 우유 혼합물의 성숙한 정자는, 배란의 시간에 여성의 생식 요로에 배치됩니다. 수정은 배아 개발의 타이밍에 대한 당일 0으로 계산됩니다. 배아는 다음 원하는 시간 지점에서 검색과 조작하실 수 있습니다.
인공 수정은 정확한 배아시기 얻기 위해 중요하거나 어려운 쥐 종 다양한에서 사용할 수 있습니다. 이 기술은 즉시 및 / 또는 어디에 짝짓기가 평가하는 어려운 친구되지 않을 수도 있습니다 종 또는 변종 (대부분의 Peromyscus 포함)에 대한 매우 중요합니다. 또한, 인공 수정은 개발 진행 및 / 또는 유전자 변형 작업을 매핑에 중 배아 개발을위한 정확한 타이밍을 제공합니다. 수정이 보장되어 있기 때문에 동물의 감소 번호를 사용할 수 있습니다. 이 방법은 Peromyscus 시스템을 발전에 필수적인되었으며, 희망뿐만 아니라 다른 사람을 도움이 될 것입니다.
Protocol
인공 수정
인공 수정은 모든 여성이 임신 될 것을 가능성을 증가하는 대신 자연 matings의하는 데 사용됩니다. 이 남성은 매일 한 superovulated 여성 또는 estrous 것으로 알려진 여성 사용되었다. 성숙한 수컷 생쥐에서 caudae epididymides은 9 % 우유 정지에 배치 18 게이지 바늘로 열려 슬라이스되었습니다. 정자는 몇 분 동안 자유롭게 수영을 허용했고 다음 epididymides는 혼합물에서 찍은. 정지는 운동성이있는 정자와 합류에 대한 현미경으로 평가했다. 무딘 22 게이지 1 ½ 인치 긴 바늘은 정자를 관리하기 위해 사용되었습니다. 120 ° 벤드는 바늘 아래 4분의 3 일하는 방법에 대한 배치했다. 0.05mls 주입 - 주사 바늘을 구부와 0.025로 질 속에 삽입되었다. 조수가 적절한 위치에 여성을 보유하는 데 사용되는 경우, anesthetics의 사용은 필요하지 않습니다.
준비
- 6 여성 4 수컷을 사용
- 동식물 사육장에서 수컷를 안락사
- 분유에서 9 %의 우유 약 5 ML 준비
- 작은 페트리 접시에 넣고 1.5 ML
- epididymus 및 중이야의 deferens을 잘라
- 9 % 우유 1.5ml에 넣어
- 이 18 게이지 바늘을 사용하고, 바늘과 긴 절삭 운동을 사용하여 정자를 공개 epididymus 및 중이야의 deferens를 열려 슬라이스
- 조직 남은 꺼내와 현미경으로 정자를 확인
주사
- 120 ° 각도로 무딘 바늘을 사용하여
- 손으로 마우스를 잡고 혼합물을 주입. 보관 및 주입 한 사람이 불편하면, 두 사람이 사용할 수 있습니다. 이 절차에 영향을 미칠 수 방법을 알고 하나로서 더 마취제가 사용되지 않을 것입니다.
- 여성 당 정자 / 우유 믹스 0.05ml를 사용하여
수신자 여성
- 받는 여성에서 질 얼룩 (이 시간에받는 여성은 proestrus / estrus에있을 DO)
- 주 5 estrus에 도달하지 않은 여자는 아마 사용하지 말아야
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Acknowledgments
나는 쥐 복제에 Peromyscus 유전자 증권 그의 귀중한 통찰력 센터, 인내, 그리고 지식의 마이크 듀이 감사하고 싶습니다.
Materials
| Name | Type | Company | Catalog Number | Comments |
| Petri Dish | Tool | Fisher Scientific | 08-772-30 | |
| 18 G needle | Tool | BD Biosciences | 305195 | |
| Powdered milk | Reagent | Any Supplier | ||
| 1 mL syringe | Tool | National Scientific Company | S7510-1 | |
| Forceps | Tool | Roboz Surgical Instruments Co. | RS-5060 | |
| Scissors | Tool | Roboz Surgical Instruments Co. | RS-5882 | |
| Dulbecco’s Phosphate Buffered Saline | Reagent | GIBCO, by Life Technologies | 14200-075 | |
| 22 G blunt needle | Tool | Give to me |
