Summary
这个视频展示了闪光冻结和从小鼠胚胎脑组织切片技术。使用低温恒温器的有用提示,其中包括排除故障的方法,可以用来切割,以确保由此产生的组织部分无裂缝和其他扭曲。
Protocol
- 修复所需的时间为4%多聚甲醛的PBS组织。
- 蔗糖注入组织(cryoprotection)
- 请在PBS W / V在2059管30%的蔗糖溶液。
- 在PBS冲洗组织的3倍(与摇摆〜5分钟)。
- 将组织30%的蔗糖溶液中。组织不会下沉。
- 组织放置在4℃过夜,或直至它已经沉没。
- 标签适当大小cryomold信息和导向。
- 填写cryomold与华侨城(避免气泡)。
- 转移组织华侨城浴和大衣与华侨城
- 组织转移至十月在cryomold。
- 东方的组织在显微镜下。
- 塑料培养皿中倒入液氮。
- 快速,细致地降低入氮气cryomold组织。 (不淹没cryomold顶部。)
- 当华侨城是白色固体,放入-80℃,储存冷冻的冷冻组织。
- 平衡〜20 ° C的组织至少30分钟。前切片。
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Materials
Name | Company | Catalog Number | Comments |
Tissue-Tek Cryomold | Ted Pella, Inc. | 27181 | |
O.C.T. | Ted Pella, Inc. | 27050 | |
Sucrose solution | 30% sucrose solution in PBS w/v | ||
paraformaldehyde | 4% paraformaldehyde in PBS |