Summary
Продемонстрированный в этом видео-методы для флеш-замораживания и секционирования эмбриональной ткани мозга от мыши. Полезные советы по использованию криостат даны, в том числе способы устранения неполадок, которые могут использоваться при резке, чтобы результирующая разделах ткани без трещин и других искажений.
Protocol
- Fix ткани в 4% параформальдегида в ФСБ на необходимое время.
- Сахароза влить ткани (криозащиты)
- Сделать 30% раствор сахарозы в ФБР м / о в 2059 трубке.
- Промойте ткань в 3 раза PBS (~ 5 мин с качалки).
- Место ткани в 30% раствором сахарозы. Ткань не утонет.
- Место ткани в 4 ° С в течение ночи, или пока он не затонул.
- Этикетка соответствующего размера cryomold информацию и ориентацию.
- Заполните cryomold с октября (во избежание пузырей).
- Передача ткани октября ванной и пальто с октября
- Передача ткани октября в cryomold.
- Восток ткани под микроскопом.
- Залить жидким азотом в пластиковые чашки Петри.
- Быстро и осторожно опустите ткань в cryomold в азоте. (Не погружать начало cryomold.)
- При октября твердая белая, место замороженные ткани в -80 ° C морозильника для хранения.
- Равновесие ткани до ~ 20 ° C в течение 30 мин. до секционирования.
Subscription Required. Please recommend JoVE to your librarian.
Materials
Name | Company | Catalog Number | Comments |
Tissue-Tek Cryomold | Ted Pella, Inc. | 27181 | |
O.C.T. | Ted Pella, Inc. | 27050 | |
Sucrose solution | 30% sucrose solution in PBS w/v | ||
paraformaldehyde | 4% paraformaldehyde in PBS |