ذبابة تسلق المقايسة : طريقة لاختبار الحركة العامة في Drosophila melanogaster

Overview

يصف هذا الفيديو طريقة بسيطة لقياس حركة الطيران ويظهر المقايسة التسلقية التي أجريت.  ذبابة تسلق المقايسة هو اختبار عام للوظيفة الحركية التي تعتمد على استجابة geotaxis السلبية.

Protocol

هذا البروتوكول هو مقتطف من جيفدون وآخرون، في Vivo Forward Genetic Screen لتحديد الجينات العصبية الجديدة في Drosophila melanogaster ، J. Vis. Exp. (2019).

1. تسلق المقايسة (مقتبس من علي وآخرون., J. Vis. Exp. (2011))

1. التحقق من صحة المقايسة التسلق. في هذه الدراسة، اختبر مقايسة التسلق استنادا إلى المنهجية الموصوفة سابقا من قبل علي وآخرين، باستخدام Elav^C155> UAS-Tau^R406W (التي تعرض معدلات تمرير تسلق أقل) وElav^C155> UAS-GFP (التحكم) وذباب Elav^C155> UAS-mCherry (التحكم).
2. الوجه الذباب في غرفة الاختبار، سطر واحد في وقت واحد (لا تستخدم CO_{2 التخدير)} والسماح لهم لاسترداد لمدة 5 دقائق. إذا تم إجراء الاختبار في أيام مختلفة، قم بإجراء الفحص في نفس الوقت من اليوم. في هذه الدراسة، تم إجراء جميع المقايسات التسلق في فترة ما بعد الظهر للسيطرة على آثار circadian على الحركة.
   ملاحظة: تجنب تعريض الذباب لأشعة الشمس المباشرة عند الاختبار؛ وهذا سوف تتداخل مع قدرتها على تسلق.
3. اضغط بالقوة الغرفة (الجانب ملحوظ إلى أسفل) على لوحة الماوس وضعت على سطح صلب 3 مرات حتى تبدأ جميع الذباب المقايسة في الجزء السفلي. مراقبة حركة الذباب على مدى فترة 10 s.
4. سجل عدد الذباب الذي يصل إلى خط 5 سم أو يجتازه خلال هذا الوقت، بالإضافة إلى العدد الإجمالي للذباب الذي تم اختباره. كرر البروتوكول، في انتظار دقيقة واحدة بين كل تجربة، لمدة لا تقل عن 3 نسخ تجريبية لكل سطر.
   ملاحظة: في هذه الدراسة، تحتوي كل قارورة على ما بين 2 و 19 ذبابة للفحص الأولي (الذباب الذكوري) وبين 6 و 21 ذبابة لتحليل نقص المتحولة للخطوط الأنثوية المتقاطعة.

Materials

Name	Company	Catalog Number	Comments
VWR® Drosophila Vial; Narrow	VWR	75813-160
VWR® General-Purpose Laboratory Labeling Tape	VWR	89097-912
Standard mouse pad
Stereoscope	Motic		Model SMZ-168
Drosophila Incubator	VWR	89510-750
R software package