Fly Klatring Assay: En metode til at teste General Locomotion i Drosophila melanogaster

Overview

Denne video beskriver en simpel metode til at kvantificere flyve bevægelse og viser klatring assay udført.  Flueklatringsanalysen er en generel test af motorisk funktion, som er afhængig af en negativ geotaxis respons.

Protocol

Denne protokol er et uddrag fra Gevedon et al., In Vivo Forward Genetic Screen for at identificere nye neurobeskyttende gener i Drosophila melanogaster, J. Vis. Exp. (2019).

1. Klatring Assay (Tilpasset fra Ali et al., J. Vis. Exp. (2011))

1. Valider klatreanalysen. I denne undersøgelse skal du teste klatringsanalysen baseret på tidligere beskrevet metode af Ali et al., ved hjælp af Elav^C155>UAS-Tau^R406W (udviser lavere klatrepashastigheder) og Elav^C155>UAS-GFP (kontrol) og Elav^C155>UAS-mCherry (kontrol) fluer.
2. Vend fluerne ind i et testkammer, en linje ad gangen (brug ikke CO 2-anæstesi) og lad dem komme sig i 5 minutter. Hvis testen udføres på forskellige dage, skal du udføre analysen på samme tidspunkt af dagen. I denne undersøgelse blev alle klatringsanalyser udført om eftermiddagen for at kontrollere for døgnrytmens virkninger på bevægelse.
   BEMÆRK! Undgå at udsætte fluerne for direkte sollys, når du tester; dette vil forstyrre deres evne til at klatre.
3. Bank med magt kammeret (markeret side ned) på en musemåtte placeret på en solid overflade 3 gange, så alle fluer begynder analysen i bunden. Overhold flyve bevægelse over en periode på 10 s.
4. Registrer antallet af fluer, der når eller passerer 5 cm linjen inden for denne tid, samt det samlede antal testede fluer. Gentag protokollen, venter 1 minut mellem hver retssag, for mindst 3 forsøg replikerer per linje.
   BEMÆRK! I denne undersøgelse, indeholdt hvert hætteglas mellem 2 og 19 fluer for den indledende screening (mandlige fluer) og mellem 6 og 21 fluer for mutant mangel analyse af krydsede kvindelige linjer.

Materials

Name	Company	Catalog Number	Comments
VWR® Drosophila Vial; Narrow	VWR	75813-160
VWR® General-Purpose Laboratory Labeling Tape	VWR	89097-912
Standard mouse pad
Stereoscope	Motic		Model SMZ-168
Drosophila Incubator	VWR	89510-750
R software package