זבוב טיפוס Assay: שיטה לבחון תנועה כללית ב Drosophila מלנוגאסטר

Overview

סרטון זה מתאר שיטה פשוטה לכימות תנועה מעופפת ומראה את מבחני הטיפוס שבוצעו.  מבחני הטיפוס על זבובים הם מבחן כללי לתפקוד המוטורי המסתמך על תגובה גיאוטקסית שלילית.

Protocol

פרוטוקול זה הוא קטע מתוך Gevedon et al., במסך הגנטי קדימה ויוו כדי לזהות גנים Neuroprotective הרומן Drosophila melanogaster, J. Vis. Exp. (2019).

1. טיפוס על אסאי (מותאם עלי ואח ', J. Vis. Exp. (2011))

1. אמת את מבחני הטיפוס. במחקר זה, בחן את מבחני הטיפוס המבוססים על מתודולוגיה שתוארה קודם לכן על ידי עלי ואח ', באמצעות Elav^C155>UAS-Tau^R406W (המציג שיעורי מעבר טיפוס נמוכים יותר) ואלאב^C155>UAS-GFP (שליטה) ואלאב^C155>UAS-mCherry (בקרה) זבובים.
2. הפוך את הזבובים לתא בדיקה, שורה אחת בכל פעם (אין להשתמש בהרדמה CO₂₎ ולאפשר להם להתאושש במשך 5 דקות. אם הבדיקה מתבצעת בימים שונים, בצע את הבדיקה באותו זמן של היום. במחקר זה, כל מבחני הטיפוס בוצעו אחר הצהריים כדי לשלוט על השפעות צירקדיות על תנועה.
   שים לב הימנע מחשיפה של הזבובים לאור שמש ישיר בעת הבדיקה; זה יפריע ליכולתם לטפס.
3. הקש בכוח על התא (מסומן בצד למטה) על משטח עכבר שהונח על משטח מוצק 3 פעמים כך שכל הזבובים יתחילו את התחת בתחתית. שים לב לתנועה זבוב על פני תקופה של 10 s.
4. רשום את מספר הזבובים המגיעים או עוברים את קו ה-5 ס"מ בתוך זמן זה, כמו גם את המספר הכולל של הזבובים שנבדקו. חזור על הפרוטוקול, ממתין דקה אחת בין כל גירסת ניסיון, עבור מינימום של 3 שכפולי ניסיון לשורה.
   שים לב במחקר הנוכחי, כל בקבוקון הכיל בין 2 ל -19 זבובים להקרנה הראשונית (זבובים זכריים) ובין 6 ל -21 זבובים לניתוח מחסור במוטנטים של קווים נשיים חצויים.

Materials

Name	Company	Catalog Number	Comments
VWR® Drosophila Vial; Narrow	VWR	75813-160
VWR® General-Purpose Laboratory Labeling Tape	VWR	89097-912
Standard mouse pad
Stereoscope	Motic		Model SMZ-168
Drosophila Incubator	VWR	89510-750
R software package