Fly Climbing Assay: Eine Methode, um allgemeine Fortbewegung in Drosophila melanogaster zu testen

Overview

Dieses Video beschreibt eine einfache Methode zur Quantifizierung der Flugfortbewegung und zeigt den durchgeführten Klettertest.  Der Fliegenklettertest ist ein allgemeiner Test der motorischen Funktion, der auf einer negativen Geotaxis-Antwort beruht.

Protocol

Dieses Protokoll ist ein Auszug aus Gevedon et al., In Vivo Forward Genetic Screen to Identify Novel Neuroprotective Genes in Drosophila melanogaster, J. Vis. Exp. (2019).

1. Climbing Assay (Adapted from Ali et al., J. Vis. (2011))

1. Bestätigen Sie den Klettertest. Testen Sie in dieser Studie den Klettertest basierend auf der zuvor beschriebenen Methodik von Ali et al., indem Sie Elav^C155>UAS-Tau^R406W (mit niedrigeren Kletterpassraten) und Elav^C155>UAS-GFP (Steuerung) und Elav^C155>UAS-mCherry (Steuerung) fliegen.
2. Drehen Sie die Fliegen in eine Prüfkammer, eine Linie nach der anderen (verwenden Sie keine CO2-Anästhesie) und lassen Sie sie für 5 min erholen. Wenn tests an verschiedenen Tagen durchgeführt wird, führen Sie den Test zur gleichen Zeit des Tages durch. In dieser Studie wurden alle Klettertests am Nachmittag durchgeführt, um die zirkadianen Auswirkungen auf die Fortbewegung zu kontrollieren.
   ANMERKUNG Vermeiden Sie es, die Fliegen beim Testen direkter Sonneneinstrahlung auszusetzen; dies wird ihre Fähigkeit zu klettern stören.
3. Tippen Sie die Kammer (markiert seitlich nach unten) zwangsweise auf ein Mauspad, das 3 mal auf einer festen Oberfläche platziert wird, sodass alle Fliegen den Test unten beginnen. Beobachten Sie die Flugfortbewegung über einen Zeitraum von 10 s.
4. Zeichnen Sie die Anzahl der Fliegen auf, die die 5 cm Linie innerhalb dieser Zeit erreichen oder passieren, sowie die Gesamtzahl der getesteten Fliegen. Wiederholen Sie das Protokoll, warten Sie 1 min zwischen jeder Testversion, für mindestens 3 Testreplikationen pro Zeile.
   ANMERKUNG In der vorliegenden Studie enthielt jede Durchstechflasche zwischen 2 und 19 Fliegen für das erstmalige Screening (männliche Fliegen) und zwischen 6 und 21 Fliegen für die mutierte Mangelanalyse von gekreuzten weiblichen Linien.

Materials

Name	Company	Catalog Number	Comments
VWR® Drosophila Vial; Narrow	VWR	75813-160
VWR® General-Purpose Laboratory Labeling Tape	VWR	89097-912
Standard mouse pad
Stereoscope	Motic		Model SMZ-168
Drosophila Incubator	VWR	89510-750
R software package