Overview
果蝇胚胎被保护性外膜包围着。为了获得胚胎，通常去除膜最外层的胆汁。此视频描述了一种常用的使用次氯酸钠的分化方法。示例协议演示了该程序，同时采用了斧头或侏罗育动物饲养所需的无菌技术。
Protocol
本协议摘自Koyle等人的摘录，在阿克塞尼奇和侏罗育生物条件下饲养果蝇德罗索菲拉梅拉诺加斯特，J.Vis.Exp.（2016年）。
1. 准备产蛋笼
- 通过微挥100毫升水、10克啤酒酵母、10克葡萄糖和1克醋来制作葡萄汁糖盘。在第1.1步煮3次，加入10克冷冻葡萄汁浓缩物，以提高鸡蛋在蛋盘上的可见度。
- 当 agar 冷却到 55 °C 时，将 20 毫升倒入 100 毫米培养皿中，并允许凝固。
- 将 1 克啤酒酵母与 15 克水混合，用酵母糊覆盖 agar 板的表面。将酵母糊倒入 agar 板上，确保表面覆盖，然后倒掉多余的酵母残留物。如果使用多个板，粘贴可以按顺序倒入多个板。
- 将阿加板转移到笼子底部。
注： 32 盎司熟食容器是丙烯酸飞笼的良好替代品。- 通过在顶部切割一个孔，用无毒胶水在孔上粘合透气网，为 32 盎司熟食容器盖上盖子。如果胶水是水溶性，防止水暴露在盖子上。
- 将 200-300 只苍蝇转移到容器中，盖上盖子。用空的培养皿盖盖住网状保护孔，以防止从 agar 表面蒸发，并在盖子内添加湿纸（如果需要）。孵化飞行在25°C过夜16-20小时。
2. 收集鸡蛋
- 将尼龙网放入塑料衬套中，为鸡蛋收集准备筛子。
- 要取回装有鸡蛋的盘子，通过转移到空容器中将苍蝇从笼子里移走。如果第二天使用同样的苍蝇，立即转移到一个新的笼子里，里面装着新鲜酵母葡萄汁的醋片。苍蝇可以连续使用3-5天
- 用干净的画笔从阿加中取出死苍蝇， 小心不要打破阿加。
- 用蒸馏水冲洗蛋盘，轻轻地从阿加表面刷鸡蛋，将泥浆倒在网状物上，收集鸡蛋。重复3-4次，直到所有或大部分的鸡蛋都从阿加板中取出。
3. 降质卵和转移到无菌饮食
- 通过向内部（包括侧面）喷洒 70% 乙醇来准备生物安全柜。用实验室组织擦拭底部，用紫外线对发动机罩进行消毒约 15 分钟。通过喷洒乙醇并立即放入生物安全柜，对所有非生物用品（标本杯、画笔、钳子、废容器、400毫升消毒水和100毫升0.6%次氯酸钠）进行消毒。用紫外线消毒15分钟。
- 开始第一次2次次次氯酸钠洗涤，将与鸡蛋的灌木放入120毫升标本杯或其他无菌容器。慢慢地将 ~90 毫升 0.6% 的次氯酸钠溶液倒入灌木丛中，直到边缘以下。
- 冲洗鸡蛋2.5分钟。定期使用钳子在次氯酸盐溶液中上下移动衬套来重新悬浮卵子。
- 将灌木直接转移到生物安全柜内的第二个标本杯中，预装满 90 毫升漂白剂。
- 在生物安全柜内重复步骤 3.3。在第二次漂白处理结束时，鸡蛋应开始粘附在灌木的两侧。
- 在生物安全柜中执行步骤 3.7-3.8。
- 丢弃漂白剂，用无菌水清洗灌木3次。每次洗涤时，通过用钳子移动衬套，将鸡蛋重新悬浮数次。到第三次清洗结束时，大多数鸡蛋应该附着在灌木丛的一侧。
- 使用在乙醇中消毒的画笔，将鸡蛋从灌木丛的一侧转移到无菌饮食中。单独或分批转移鸡蛋。目标是每瓶30-50个鸡蛋。让帽子松动，让氧气进入管子。
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