Overview
ड्रोसोफिला भ्रूण सुरक्षात्मक बाहरी झिल्ली से घिरा हुआ है। भ्रूण तक पहुंच प्राप्त करने के लिए, कोरियोन- झिल्ली का सबसे बाहरी- अक्सर हटा दिया जाता है। यह वीडियो सोडियम हाइपोक्लोराइट का उपयोग करके डिकेरेशन की आमतौर पर उपयोग की जाने वाली विधि का वर्णन करता है। उदाहरण प्रोटोकॉल एक्स्निक या जीनोओबायोटिक पशु पालन के लिए आवश्यक बाँझ तकनीकों को नियोजित करते समय प्रक्रिया को दर्शाता है।
Protocol
यह प्रोटोकॉल कोयले एट अल(2016) से एक अंश है, जो फल फ्लाई ड्रोसोफिला मेलनोगेस्टर अंडर एक्सनिक और ग्नोटोबायोटिक स्थितियां, जे विस एक्सप्रेस (2016) का पालन करता है।
1. अंडे बिछाने पिंजरों तैयार
- 100 मिलीलीटर पानी, 10 ग्राम शराब बनानेवाला खमीर, 10 ग्राम ग्लूकोज, और आगर के 1 ग्राम माइक्रोवेविंग द्वारा अंगूर का रस आगर प्लेटें बनाओ। चरण 1.1 में 3 बार उबाल लें और आगर प्लेट पर अंडे की दृश्यता बढ़ाने के लिए 10 ग्राम जमे हुए अंगूर के रस को ध्यान में रखें।
- जब एगर 55 डिग्री सेल्सियस तक ठंडा हो गया है, तो 100 मिमी पेट्री व्यंजनों में 20 मिलीलीटर डालें और जमना करने दें।
- 1 ग्राम शराब बनानेवाला खमीर को 15 ग्राम पानी के साथ मिलाकर खमीर पेस्ट के साथ आगर प्लेटों की सतह को कवर करें। आगर की थाली पर खमीर पेस्ट डालो यकीन है कि सतह को कवर किया जाता है, तो बंद अतिरिक्त डालना, एक पतली खमीर अवशेषों के पीछे जा रहा है । यदि कई प्लेटों का उपयोग किया जाता है, तो पेस्ट को क्रमिक रूप से कई प्लेटों में डाला जा सकता है।
- आगर प्लेटों को पिंजरे के नीचे स्थानांतरित करें।
नोट: एक 32 ऑउंस डेली कंटेनर ऐक्रेलिक फ्लाई पिंजरों के लिए एक अच्छा विकल्प है।- शीर्ष में एक छेद काटने और गैर विषैले गोंद के साथ छेद पर एक सांस जाल चिपकाने के द्वारा ३२ आस्ट्रेलिया डेली कंटेनरों के लिए lids बनाओ । यदि गोंद पानी में घुलनशील है तो ढक्कन के संपर्क में पानी को रोकें।
- कंटेनर में 200-300 मक्खियों को स्थानांतरित करें और ढक्कन के साथ कवर करें। आगर की सतह से वाष्पीकरण को रोकने के लिए एक खाली पेट्री डिश ढक्कन के साथ जाल से संरक्षित छेद को कवर करें और वांछित होने पर ढक्कन के अंदर एक नम ऊतक कागज जोड़ें। इनक्यूबेट 16-20 घंटे के लिए रात 25 डिग्री सेल्सियस पर उड़ता है।
2. अंडे इकट्ठा करें
- प्लास्टिक झाड़ी में नायलॉन की जाली रखकर अंडे के संग्रह के लिए छलनी तैयार करें।
- उस पर अंडे के साथ थाली को पुनः प्राप्त करने के लिए, एक खाली कंटेनर में स्थानांतरित करके पिंजरे से मक्खियों को हटा दें। यदि अगले दिन एक ही मक्खियों का उपयोग किया जाएगा, तो तुरंत एक नए पिंजरे में स्थानांतरित करें जिसमें एक हौसले से खमीर अंगूर-रस आगर प्लेट होता है। मक्खियों का उपयोग 3-5 अनुक्रमिक दिनों के लिए किया जा सकता है
- एगर से मृत मक्खियों को साफ तूलिका के साथ हटा दें, एगर को तोड़ने के लिए सावधान रहें।
- आसुत पानी के साथ आगर प्लेट को कुल्ला करके अंडे ले लीजिए, धीरे-धीरे आगर की सतह से अंडे ब्रश करते हैं, और जाल पर घोल डालते हैं। 3-4 बार दोहराएं जब तक कि एगर प्लेट से सभी या अधिकांश अंडे हटा नहीं दिए गए हैं।
3. दधोरियोनेट अंडे और बाँझ आहार के लिए स्थानांतरण
- 70% इथेनॉल के साथ अंदर (पक्षों सहित) छिड़ककर जैवसेफ्टी कैबिनेट तैयार करें। एक प्रयोगशाला ऊतक के साथ नीचे पोंछ, और ~ 15 मिनट के लिए यूवी प्रकाश के साथ हुड बंध्याकरण । इथेनॉल के साथ छिड़काव और तुरंत जैवसेफ्टी कैबिनेट में रखकर सभी गैर-जैविक आपूर्ति (नमूना कप, तूलिका, संदंश, अपशिष्ट कंटेनर, 400 मिलीलीटर निष्फल पानी, और 0.6% सोडियम हाइपोक्लोराइट के 100 मिलीलीटर) को स्टरलाइज करें। 15 मिनट के लिए यूवी लाइट के साथ स्टरलाइज करें।
- अंडे के साथ झाड़ी को 120 मिलीलीटर नमूना कप या अन्य बाँझ कंटेनर में रखकर 2 सोडियम हाइपोक्लोराइट धोता के पहले शुरू करें। धीरे-धीरे रिम के ठीक नीचे तक बुशिंग में ~ 90 मिलीलीटर 0.6% सोडियम हाइपोक्लोराइट समाधान डालें।
- अंडे को 2.5 मिनट तक कुल्ला करें। समय-समय पर अंडों को फिर से निलंबित करके अंडों को हाइपोक्लोराइट समाधान में ऊपर और नीचे ले जाने के लिए संदंश का उपयोग करके।
- बायोसेफ्टी कैबिनेट के अंदर 90 मिलीलीटर ब्लीच से पहले से भरे दूसरे नमूने कप में सीधे बुशिंग को स्थानांतरित करें।
- जैवसेफ्टी कैबिनेट के अंदर चरण 3.3 दोहराएं। दूसरे ब्लीच उपचार के अंत में, अंडे को झाड़ी के किनारों का पालन करना शुरू कर देना चाहिए।
- जैव सुरक्षा कैबिनेट में 3.7-3.8 कदम बाहर ले।
- ब्लीच को छोड़ दें और 3 बार बाँझ पानी से झाड़ी को धो लें। प्रत्येक धोने के दौरान अंडों को कई बार संदंश के साथ झाड़ी को स्थानांतरित करके फिर से निलंबित करें। तीसरे धोने के अंत तक अधिकांश अंडे झाड़ी के पक्ष से जुड़े होने चाहिए।
- इथेनॉल में निष्फल पेंटब्रश का उपयोग करके, झाड़ी के किनारे से बाँझ आहार में अंडे स्थानांतरित करें। अंडे को व्यक्तिगत रूप से या छोटे बैचों में स्थानांतरित करें। प्रति शीशी 30-50 अंडे के लिए लक्ष्य। ऑक्सीजन को ट्यूब में प्रवेश करने की अनुमति देने के लिए टोपियां ढीली छोड़ दें।
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