Coût global de surveillance et de laboratoire efficace du VIH / sida: un modèle en Afrique

Summary

La thérapie antirétrovirale pour traiter le VIH / SIDA est surveillé en Afrique du Sud sur une grande échelle. La cytométrie en flux est combiné pour l'hématologie (CD45), de l'immunologie (CD4) et la charge virale liée CD38 dosage. Enregistré à NHLS-SA laboratoires, à Johannesburg, ces méthodes modernes sont rentables avec contrôle de la qualité accrue locaux internes, servant de modèles de rôle pour les ressources limitées de diagnostic.

Abstract

Nous vous présentons la vidéo sur l'assistance thérapie anti-rétrovirale (ART) par un service de laboratoire apt - qui représente un modèle sud-africain pour essais à l'échelle économique important de diagnostic. Dans les pays à faible revenu peu coûteuse ART a transformé les perspectives pour la survie des patients séropositifs au VIH, mais il ya des doutes il ya un besoin pour la surveillance en laboratoire de l'ART et à quel prix - dans des situations où la qualité globale des services de pathologie peuvent encore être très faible. La réponse appropriée consiste à établir des services économiquement saine avec une meilleure coordination et une évaluation plus stricte de la qualité interne que vu dans les pays occidentaux. Cette vidéo, photographiés à l'emplacement dans le National Health Laboratory Services (NHLS-SA) à l'Université de Witwatersrand, à Johannesburg, Afrique du Sud, offre un tel programme coordonné l'expansion de l'original 2-couleurs CD4-CD45 stratégie PanLeucoGating (PLG). Ainsi, les six modules de la présentation vidéo révèle la simplicité d'un test de débit à 4 couleurs par cytométrie de combiner des tests hématologiques, immunologiques et virologiques liés dans un seul tube. Ces modules vidéo sont: (i) la mise en place d'instruments, (ii) la préparation des échantillons, (iii) les tests numération absolue et la qualité de surveillance pour chaque échantillon en perles taux de comptage, (iv) la heamatological CD45 test pour globules blancs comptages et les différentiels, (v) le taux de CD4, et (vi) l'activation des cellules T CD8 + CD38 mesurée par l'affichage, un paramètre de la charge virale liée. Le potentiel d'économies sont remarquables. Cet arrangement est un excellent exemple de la possibilité d'effectuer> 800-1000 tests par jour avec un contrôle plus strict de la qualité que celle appliquée dans les laboratoires de l'ouest, et aussi avec un transfert de technologie à d'autres laboratoires au sein d'un réseau NHLS-SA. Conseillers experts, directeurs de laboratoire et les décideurs politiques qui portent le devoir de prendre des décisions concernant l'introduction de la technologie médicale moderne ne sont souvent pas en mesure de voir les derniers détails techniques réalisées dans les grands laboratoires régionaux avec des fardeaux énormes de la charge de travail. Ainsi cette vidéo montre des détails de ces nouveaux développements.

Protocol

Présentation

Les efforts scientifiques modernes dans le domaine de la biomédecine conduire à des avantages pratiques, notamment l'introduction de diagnostic efficaces pour les maladies infectieuses. De haute qualité et un diagnostic rapide est nécessaire en raison du danger de propagation des maladies dues aux voyages internationaux et l'impact dévastateur des cours des infections virales et bactériennes dans les zones touchées par la pauvreté du globe ^1.

Dans les pays pauvres de ressources de traitement des patients VIH positifs avec thérapie anti-rétrovirale (ART) a été introduit avec succès ^2,3. Les protocoles de TAR sont actuellement basées sur (i) les tests sérologiques pour les individus VIH +, (ii) les combinaisons de fois par jour des schémas de médicaments génétiques utilisées comme ART 'première ligne' et (iii) les CD4 et / ou tests de charge virale de décider quand commencer à ART. Les protocoles sont, cependant, changer la portée de l'ART peut maintenant être encore creusé avec les lignes directrices plus détendu pour initier ART plus tôt à un nombre de CD4 supérieur ^2. Surtout, l'augmentation du nombre de patients VIH + qui reçoivent l'ART à plus de cellules CD4 + / l de sang peut même ralentir la propagation du VIH, malgré le manque actuel de vaccin contre le VIH ^{4, 5.}

Ainsi l'infection au VIH est en passe de devenir une maladie chronique dans un nombre croissant de survivants, nécessitant la médecine organisée, plus que jamais, mais le mauvais état ​​de la médecine de laboratoire en Afrique peut rester une barrière de soins de santé efficaces ^6. Il ya des voix pour souligner que la fourniture de subventions à court terme ne fournit pas de solutions durables ^7-9, et les subventions liées au VIH fournis par les pays occidentaux à l'échelle actuelle ne peut pas continuer éternellement ^8,9. En 2008, 15,6 milliards USD ont été dépensés pour des programmes SIDA dans les pays à revenu faible et moyen, et environ 50% d'entre eux étaient des externes, y compris en Amérique du Nord, les sources. Les tendances calculées montrent que cette dépense est d'augmenter jusqu'au niveau 2-3 fois plus élevé, et que l'épidémie sera toujours avec nous en 2031 sauf s'il ya un changement dans l'approche globale actuelle ^9.

Ainsi, les pays africains doivent apporter leur contribution en prévention du VIH meilleurs et plus sages économies ^9. Ici, nous suggérons que les «modèles» de l'inventivité la plus récente pour le travail de routine sera établie et introduite dans les pays pauvres (par exemple en Afrique ou en Inde). Ce sont les régions du globe où les scientifiques vont apprendre à profiter pleinement de l'appui international actuel et ensuite d'utiliser leurs compétences afin d'améliorer chaque jour la technologie, en contribuant à un développement mondial.

En médecine occidentale les activités de diagnostic dans les grands centres universitaires et les hôpitaux sont fréquemment "aux rayons", c'est à dire des «zones d'intérêt" peut exister pour les différentes disciplines conduisant à une fragmentation en hémato-, viro-, retroviro-, bactério-, la séro- , l'immuno-, et les laboratoires de cytologie au lieu de mener une démarche unificatrice en utilisant un ensemble minimal de tests diagnostiques pluridisciplinaire dans un laboratoire des maladies infectieuses. En outre, les tests de diagnostic peuvent également être beaucoup trop compliqué et coûteux. De toute évidence, de tels services doivent être mieux coordonnés, mais ces efforts sont peu susceptibles d'unifier proviennent entièrement de directions occidentales. En conséquence, les grands laboratoires et instituts, tels que le National Health Laboratory Service (NHLS-SA) en coopération avec l'Université de Witwatersrand à Johannesburg, Afrique du Sud, sont confrontés à une tâche supplémentaire pour le développer davantage, de modification, de recentrer et d'améliorer leur rentable de diagnostic basé sur la technologie moderne.

Dans la vidéo en cours nous décrivons cytométrie en flux des méthodes pour surveiller la thérapie anti-rétrovirale (ART) dans les patients séropositifs. Cette technologie est présentée par étapes en six modules pour une combinaison de pertinentes hémato-immuno-et dosages virologiques dans un seul tube, combiné avec le contrôle de qualité internes indispensables (QC) pour garantir la reproductibilité des tests ^10. Les utilisations d'anticorps monoclonaux utilisés ici sont tous pleinement établie scientifiquement. Le réactif CD45 est pour nombre de globules blancs ^11-13, combinée avec des CD4 à énumérer les «helper» les lymphocytes T qui sont les principales cibles du VIH ^12-14. C'est un "truc constructif» que dans le même tube le marqueur CD38 activation est détectée sur les cellules CD8 + T comme une charge virale VIH (VL) de dosage liées ^15-17. Afin de souligner la contribution sud-africaine, nous soulignons que ces concepts et leur rapport coût-efficacité des combinaisons pratiques ont toutes été élaborées en NHLS-Wits collaborations basées sur des technologies de l'ouest ^{10,12,13,16,17.}

Ces tests, réalisés en association, vont être nécessaires pour le bon suivi des patients qui subissent à long terme ART. Lorsque le rapport coût-véhicunce est examinée, cette coordonnée cytométrie en flux de technologie s'avère rentable ^16,18,19. Ces tests représentent un seul tube de réduction des coûts sur leurs variantes occidentales et sur les essais similaires effectués par les instruments distincts et / ou réalisé que différents tests de substitution à l'aide d'autres méthodes. Ces économies sont détaillés dans la discussion.

Pour l'acceptation de cette technologie essentiellement simple, qui utilise la cytométrie en flux quatre couleurs dans un seul tube, il est essentiel de montrer les étapes techniques dans un format vidéo. Conseillers experts, directeurs de laboratoire et les décideurs politiques qui portent le devoir de prendre des décisions concernant l'introduction de la technologie médicale moderne ne sont souvent pas en mesure de voir les derniers détails techniques réalisées dans les grands laboratoires régionaux avec des fardeaux énormes de la charge de travail. C'est pourquoi cette vidéo montre des détails sur les nouveaux développements qui ont introduit en Afrique du Sud afin d'optimiser le workflow pour les tests> 1000 échantillons cliniques chaque journée de travail ^10,13,16,17.

Protocole

La cytométrie en flux

Les tests ont été effectués par quatre couleurs cytométrie en flux, mais les tests peuvent également être effectuées à l'aide de 2 couleurs dans deux tubes parallèles (voir ci-dessous). Le Beckman-Coulter XL-MCL, un cytomètre de stabilité fluidique ^21, est utilisée, mais la même technologie peut aussi être applicables à d'autres cytomètres. La technologie décrite grandes poignées charges de travail quotidien de ~ 800-1100 échantillons / jour ^10,13.

Module 1: Mettre en place des instruments

Daily en interne la maintenance est le nettoyage de réaliser deux fois par jour: le démarrage et l'achèvement de l'échantillon du dernier patient. Ceci inclut le rinçage des conduites de vide et d'acquérir Clenz (hypochlorite de sodium à 5%; Colombie-Britannique, Miami, FL). Aussi, à la fin de chaque Clenz 30 tubes carrousel et de l'eau distillée est géré par le système afin de minimiser l'accumulation de protéines.

Au démarrage quotidien des lectures de vide et pression sont vérifiées. Il est confirmé que les chiffres de fond restent acceptables (<100 événements dans 100 sec). Après avoir exécuté le premier échantillon de sang, il est établi que dans une aliquote de liquide de gaine le report est <1%. Puis l'alignement au laser et la sensibilité de fluorescence sont surveillées quotidiennement en utilisant un échantillon de FlowCheck ^21. On observe que les numéros de canaux sont conformes moyenne (500 ± 50) avec une faible variation (la moitié des valeurs de crête CV <2%). La compensation est vérifié chaque semaine; perles FlowSet sont tracées pour voir si les valeurs moyennes sont de canal à moins de 1% des valeurs cibles prédéfinies ^22. Pour confirmer visuellement la précision sur Levey-Jennings parcelles, les numéros des chaînes moyenne et le coefficient de pointe de la moitié de la variation (HPCV) des valeurs pour les quatre canaux de fluorescence (FL1-FL4) sont quotidiennement affichée. Suivant la précision de la numération des CD4 est confirmée au niveau de CD4 deux. Lors d'un test de CD4 PLG-stabilisé contrôles de processus de sang (IMMUNOTROL) sont utilisés de la normale basse (450 à 700 cellules CD4 / pl) et les faibles niveaux (100-200 CD4 / ul, selon le lot; ref 23). Ces valeurs Immunotrol sont tenus d'être à 0,5 SD de la moyenne avec un CV% <5% tel que demandé par la communauté internationale en Colombie-Britannique IQAP programme ^{24, 25} et au Royaume-Uni NEQAS AFREQAS ^26. Il est important que ces mesures organisées simple comme montré dans la vidéo de la cytométrie en flux robuste peut maintenir la stabilité nécessaire à la fois pour le comptage absolu des cellules telles que les tests de CD4 et des mesures d'intensité de fluorescence utilisé pour le marqueur CD38 activation. Cette stabilité a été récemment documentés dans le détail ¹⁷ confirmant les études antérieures utilisant d'autres cytomètres ^15,27.

Durant la maintenance hebdomadaire des données en mode liste (LMD) les fichiers sont archivés pour référence future et ce matériel archivé est alors supprimé du disque dur cytomètre.

Entretien mensuel comprend le nettoyage des conteneurs de réactif, la gaine, CLENZ et les réservoirs de déchets. Le chef de l'échantillon carrousel mode est nettoyée alors que tous les filtres sont également retiré et lavé. Ce nettoyage est également étendue à la préparation et de stations de TQPrep PrepPlus2 (Colombie-Britannique, FL). Les pipettes utilisées pour la préparation manuelle sont validés en interne au moins tous les trois mois, mais si l'inexactitude de pipetage est soupçonné de la pipette est immédiatement mis hors service d'une action corrective. Six entretien mensuel est prévue par le Beckman Coulter, SA.

Module 2: Préparation des échantillons

Pour la CD45/CD4 deux couleurs PanLeucogated protocole ⁵ de la société Beckman Coulter FlowCARE kit ²⁸ est utilisé dans une procédure Lyse-no-lavage (IMMUNOPREP, Beckman Coulter, FL). Ce kit contient CD45-fluorescéine isothiocyanate (FITC, vert) et CD4-phycoérythrine (PE; orange). Flow-Count ²⁹ perles sont achetés en vrac et sont ajoutés à jouer un spécial d'opérateur-amicale rôle Numbe connusrs de perles dans un volume connu sont pipetés sur le champ dans l'échantillon ^30. Ceci est fait avec le pipetage même que celui utilisé pour livrer le volume de sang. Ainsi le taux de comptage talon (BCR) dans la gamme attendue montre que le pipetage dans l'échantillon donné est précisément fait, comme décrit dans le Module 3 ci-dessous. Surtout, voici la méthode de pipetage simple, dénommée «l'avant pipetage ', qui fonctionne le mieux, à condition que la perle et le sang-volumes sont livrés avec la même pipette et de pointe et à la manutention identiques de 30. Nous avons constaté que l'avant de pipetage optimale donné uniformité globale entre les laboratoires, tant à l'égard de la réalisation des objectifs des opérateurs de pipetage dans les limites de tolérance acceptables et la reproductibilité de distribution répétée telle que mesurée par le coefficient de variation de (CV%) ^10,31,32. Cette méthode, présentée au congrès locaux ^32, est approuvé pour une utilisation sous la South African National Accreditation Scheme (SANAS, www.SANAS.co.za) des lignes directrices. Cette utilisation des perles de la BCR est différent de l'autre des méthodes de comptage volumétrique, où le plus fréquemment le produit lyophilisé perles telles que les préparations Trucount BDS sont utilisés qui contiennent un nombre connu de perles. Ces préparations sont excellentes pour documenter la stabilité de la fluidique des instruments débit par le taux de comptage de flux (RCF) Méthode ^20,31. Néanmoins, l'utilisation des prêts faits de perles contenant des tubes rend la technologie plus compliquée, car ici il est indispensable de livrer le volume de sang dans ces tubes avec une précision absolue la plus grande. Il est généralement admis que dans ce but que le "reverse-pipetage« La technologie est acceptable après la formation applicables. Notre méthode BCR est donc, moins coûteux, plus informative, plus simple et plus facile à apprendre, comme le montre la vidéo -. Comparativement aux autres méthodes similaires ^10,31,32 Nous constatons également que les opérateurs utilisant l'avant de pipetage sont moins susceptibles de aspirer l'échantillon dans la pipette qui, avec pipetage inverse peut conduire à la fois les dommages au mécanisme interne et le besoin de re-calibrage qui est difficile dans des endroits éloignés. Notre méthode BCR évite également la nécessité pour les systèmes automatisés de pipetage dans les laboratoires de petite à moyenne taille (liste 1).

Les échantillons de sang sont toujours traités dans les armoires de classe Biohazard II. Afin d'éviter le bruit vaste pendant le tournage, la vidéo présentée est une reconstitution avec des matériaux sûrs en dehors de ces armoires. Le protocole d'acquisition de PLG-CD4 sur les cytomètres permet un temps de s'arrêter à un délai donné ou de continuer à acquérir de 5000 événements lymphocytes pour améliorer la précision sur des échantillons avec des taux de CD4 bas.

Module 3: le taux de comptage talon (BCR)

Surveillance des taux de comptage perles (BCR) dans notre système ou chaque échantillon de contrôle est calculé selon la formule perles événements / seconde ^{10,13,30,32,33.} La moyenne, SD et% des valeurs de CV sont utilisés sur un tableur pour générer une parcelle de séquence pour identifier ³⁰ aberrantes BCR. Elles confirment le fonctionnement optimal des trois systèmes de pipetage, de traitement et d'analyse visées à la vérification de préparation d'échantillon (SPV), appliqués à la fois les échantillons pipetés manuellement ou en utilisant l'instrument automatisé de pipetage PrepPlus2 ^10.

Pendant l'acquisition des résultats BCR sont directement visualisées en temps réel sur des moniteurs. Sur le cytomètres BC la valeur de BCR moyenne est de 80 ± 5 évènements / sec. Nous montrons que l'aberrante du gène BCR-s sont identifiés et ré-exécuter avant que les résultats des patients sont libérés. L'algorithme de l'arbre de décision est illustrée dans la Figure 1 (voir aussi ref.10).

Instrument dysfonctionnements sont indiqués par des fluctuations dans la RCO lors des contrôles lors de la vérification de précision longitudinale (LPV) pour détecter les tendances de pipetage, les habitudes et les changements soudains ^10. Vérification de la précision Fluidique (FPV) est une option en interne la procédure, où une seule dilution de perles est répartie dans 10 tubes pour l'acquisition de série afin de confirmer les signes d'instabilité fluidique sur un instrument potentiellement mauvaise conduite ^10.

Module 4: CD45

Pour la routine valeurs absolues dans nos études d'un analyseur de sang comptage complet LH-750 (Beckman Coulter), calibré par mois, est utilisée quotidiennement comme une référence pour le comptage des globules blancs (COE), contre laquelle les cytomètres en flux sont comparés. Le CD45-générés COE-s sur les cytomètres en flux sont également validés quotidiennement par comparaison avec les trois niveaux de Beckman Coulter 5C stabilisé l'ensemble des contrôles de cellules sanguines. Les limites acceptables d'un accord entre le COE CD45 flux de comptages et complète des analyseurs de numération formule sanguine est <5% ^10. Cela indique que lorsque les restrictions de ressources sont plus sévères alors dans notre service d'un seul instrument, comme un cytomètre en flux, semble être suffisante pour fournir l'état clinique du COE, y compris la numération des CD4.

Blanc CEcompte différentielle LL sont effectuées sur différents analyseurs hématologiques qui diffèrent, en particulier dans l'évaluation de nombre de monocytes. Le schéma du différentiel CD45 expression est une utilisation classique de la technologie de flux pour différentielle COE ^{11,12, 34.} Comme le cytomètre en flux-CD45 dérivée du COE et les différentes se sont révélés être exacte, précise et robuste, ils peuvent être systématiquement intégrées dans la méthode d'essai PLG-CD4 et également mis à la disposition des cliniciens, sans frais supplémentaires.

Anomalies CD45 modèles sont notés sur des diagrammes de dispersion CD45/side du protocole de PLG-CD4 et un suivi sur un film teinté de sang pour inciter une enquête plus poussée clinique. Cette méthode permet de détecter l'infection (bactérienne et virale), la leucémie et le lymphome fois sur le VIH-négatives et les patients VIH + ^{34, 35.} Lors d'un laboratoire de suivi de routine dans les patients VIH + de la numération formule sanguine n'est souvent pas demandé au laboratoire d'hématologie. Par conséquent, le CD45 anormale modèles sont de diagnostic lorsque candidement observé dans les échantillons envoyés pour la numération des CD4. Un avantage supplémentaire est que le nombre absolu de CD4 précises peuvent encore être réalisés, même chez les patients avec les résultats d'un lymphome leucémie ou dans le sang ^35.

Débit CD45 est bien adapté à normaliser l'hématologie. Les instruments hématologiques diffèrent sensiblement les uns des autres. Nous suggérons l'introduction du contrôle de flux basé sur CD45 par cytométrie de qualité pour les différentiels de WBC de comparer et de normaliser les analyseurs hématologiques ^10,36.

Module 5: CD4

Le Protocole de PLG-CD4 a introduit sur le logiciel Beckman Coulter XL se compose de huit points-parcelles. Parmi ces 4 sont utilisées pour déterminer le taux de CD4 et 4 sont pour ^12,13 surveillance de la qualité. Parmi ces derniers, les deux point-parcelles montre la figure 2 sont importants. Tous les globules blancs sont identifiés en utilisant CD45 et diffusion latérale (région A 2 dot-plot) tandis que les débris, les globules rouges / les fantômes et les plaquettes sont ignorés. Les événements CD45 + sont ensuite transférés vers dot-plot 3, où les lymphocytes CD4 + sont identifiés par leur brillante expression de CD4 et de diffusion latérale faible (région C). CD4 + numération lymphocytaire absolue sont calculées à partir du nombre d'événements dans la région C et le COE (dans le flux F Comte région de calibration). Les valeurs de CD4% de lymphocytes sont obtenus à partir de la région B dot-plot 2. Les CD4 + vivement lymphocytes T CD4 et les monocytes sont faiblement + CD4 discriminées par fluorescence d'intensité et des caractéristiques de dispersion sans nécessité d'utiliser un supplément CD3 de cellules T spécifiques dans le cocktail de réactifs (revu dans ref.13).

Module 6: CD8/CD38

CD8-CD38 coloration est une partie de la coloration à 4 couleurs en utilisant CD45-FITC/CD4-PE/CD8-ECD/CD38-PC5. Le CD4/CD45 est le même que ci-dessus (flux de soins PLG-CD4), et les deux réactifs sont ajoutés supplémentaires CD8-ECD/CD38-PC5 ^17. Si un cytomètre ne fonctionne que deux couleurs, un tube supplémentaire est ajoutée pour effectuer CD8-FITC/CD38-PE deux couleurs coloration, en utilisant à nouveau la procédure Lyse-no-lavage (IMMUNOPREP, Beckman Coulter, FL). Une stratégie similaire à gating CD4 est utilisé pour identifier les cellules CD8 + T avec CD8-DPE diffusion latérale vs (figure 3). CD38 expression sur les lymphocytes CD8 + est tracé en histogramme seul paramètre de CD38-PC5 intensité moyenne de fluorescence (MFI) vs le nombre de cellules ^16,17. Le CD38 MFI sont tracées de façon séquentielle pour chaque visite d'un même patient. La première visite (avant traitement) est la «base» valeur de MFI à laquelle toutes les autres visites du CD38 de la même personne de l'IMF est comparée ^16.

Contrôles et la stabilité instrument comme décrit dans le module 1 est basé sur l'acquisition quotidienne des flux de Check pour contrôler l'alignement au laser et la stabilité de tension. Régler le débit fixe la rémunération des couleurs pour tous les quatre canaux fluorescents (voir ci-dessus). Immunotrol est le «négatif» de l'échantillon de contrôle de processus. La «positive» de contrôle sont les monocytes dans le sang normal exprimer 9 x 10 ³ CD38 molécules par cellule, et un échantillon connu VIH + ¹⁷ non traités.

Le réseau de la South African National Health Laboratory Service (SA-NHLS) a adopté les laboratoires

méthodes de contrôle qualité normalisés dans 70 laboratoires ^{13, 33} avec une base de données centralisée contenant des procédures d'exploitation standard et le matériel de formation. Les laboratoires du réseau sont aidés par des discussions, la formation continue et de l'audition régulière, y compris l'examen de la technologie de pipetage ^32,33. Le programme d'évaluation de la qualité est surveillée mensuellement. De cette façon, la gestion de la qualité est dévolue régional, mais des normes élevées sont maintenues grâce à la contribution du Département de SA-NHLS QA ^{13, 26.}

Liste 1 Coût potentiel d'économie à la cytométrie coordonnée dans la maladie du VIH.:

1. L'utilisation d'un seul instrument avec familiarité et contrat de service, au lieu d'apsillonnent plusieurs instruments hématologiques, immunologiques et virologiques
2. Les performances des tests dans un seul tube, sans coûts supplémentaires et sans l'envoi d'échantillons en provenance et à différents endroits, y compris à la fois du COE, formule leucocytaire compte la numération des CD4 et la surveillance CD38MFI pour prédire la réponse au traitement antirétroviral
3. Le signalement immédiat de la réaction à l'art avec CD38 IFM déclarante, améliorant de manière significative les délais d'exécution par rapport aux traditionnels rapports VIH VL (temps réel)
4. L'utilisation clinique de la clarté et l'évaluation combinée des résultats sur les formulaires de déclaration même
5. Le besoin d'instruments de pipetage automatique peut être nié que la simple méthode de «l'avant-pipetage» est utilisé et que les échantillons sont contrôlés par la BCR,
6. Pendant le fonctionnement, la manipulation des échantillons inexactes est identifié et les résultats du test problématiques sont corrigées avant les résultats sont autorisés
7. Gestion proactive de prévention pour dysfonctionnement de l'instrument menant à la réservation du service avant début d'un grave accident
8. Diagnostiquer cas insoupçonnés de la leucémie / lymphome pendant l'activité de service de routine
9. Extension de la technologie de flux similaires pour le phénotypage de leucémie et de surveillance
10. Coordination de l'épreuve CD38 avec le stockage des taches de sang séché (DBS) pour le VIH VL tests chez tous les patients et les coûts de sauver en envoyant DBS pour l'évaluation que s'il ya des indications cliniques ou CD38 pour le faire
11. Technologie de flux similaires pour remplacer l'interféron γ-méthode ELISPOT dans les tests de tuberculose
12. Le contrôle de qualité pour les laboratoires périphériques qui exécutent le «point-of-care» CD4 essais
13. Économiser les coûts de «indésirables» des réactifs tels que des anticorps contre CD3 et marqueurs sous-ensemble (mais l'achat de CD38 à la place)
14. Achat en vrac des perles peu coûteuses pour le test BCR (au lieu d'acheter cher pré-pipette compter les tubes)
15. Dans un réseau, des négociations conjointes à des prix avantageux avec en vrac les sociétés commerciales

Figure 1. Un arbre décisionnel / algorithme utilisé quand un échantillon testé montre un résultat éloignées du taux de comptage perles (BCR). La tâche principale est d'exclure les erreurs de pipetage par rapport volumétrique panne intermittente. Le diagramme montre les causes probables des erreurs. Il est également indiqué que le protocole dont les histogrammes et les statistiques sont affectés ^10.

Figure 2 Un exemple de protocole de PLG CD4 qui incorpore CD45-FITC (vert; axe des x). Diffusion latérale vs (complexité; axe des y) et CD4-PE; (orange; axe X) vs diffusion latérale ( complexité; axe des y). «A» La porte est la population totale des cellules blanches avec le porte sélectionnée sur «B» des lymphocytes. «A» La porte est transféré à la deuxième schéma sur la droite afin d'identifier les lymphocytes CD4 + dans le «C» porte.

Figure 3 La combinaison de CD45/CD4 test panleucogating. (Dans les diagrammes '2 'et '3', voir aussi figure 2) avec le test CD8/CD38 (dans les diagrammes '4 'et '6). Lorsque les leucocytes totaux ('A' de porte) sont transférés au schéma de '4 ', voici les lymphocytes CD8 + sont déclenchées sur la base de CD8-ECD (' x'-axe) et diffusion latérale ('y'-axe; comme le montre «D» de porte). Puis les cellules CD8 + sont transférés au schéma de '6 'pour visualiser l'intensité CD38-PC5 coloration dans un schéma à un seul paramètre. Ceci est montré comme 'G' le paramètre dans le diagramme '6 '. La moyenne de fluorescence CD38-PC5 intensité (IMF) est enregistrée. Sur ART cette valeur diminue progressivement ^16,17.

Discussion

Ces dernières années, les programmes axés sur la charité et l'octroi de subventions allouées ont contribué à l'établissement de certaines pratiques dans des domaines cliniques excellentes ressources limitées de la planète avec le VIH charge élevée. Les programmes d'antirétroviraux ont réussi à réduire la mortalité et sont maintenant lancé à plus CD4 ^2,3. Il ya déjà des indications que ces nouvelles mesures va diminuer la propagation de l'infection par le VIH ^4,5, malgré l'absence d'un vaccin contre le VIH-spécifiques. Dans notre vidéo, nous documentons que lorsque le suivi des patients sous ARV, ces techniques peuvent être mieux ciblées et à devenir plus rentable que celle observée dans la pratique de routine effectués dans l'ouest de laboratoires (liste 1).

Une telle approche menée par l'Afrique pourrait bien être essentiel pour appuyer la modernisation des services de laboratoire à un moment où l'infection au VIH, traités par l'ART, est devenue une maladie chronique. Une telle surveillance des CD4 art exige précisément le comptage et la charge virale des technologies connexes, une tâche plus exigeante que de simplement effectuer un taux de CD4 pour placer les patients en groupes arbitraires en vue d'aider une décision sur le démarrage d'ART ^16. Avec l'aide de ces diagnostics, c'est à dire en utilisant le test CD8/CD38, il est possible de réduire les coûts de surveillance VL-connexes dans> 60% des patients sous ARV ^16,19. Il est également important de souligner que c'est le test CD8/CD38 ^16,17, et non pas le taux de CD4 ^37, qui est susceptible de capter les premiers signes de rebonds VL et / ou le manque d'observance des patients dans la prise du médicament.

Un élément essentiel d'une approche coordonnée rentable service central est la disponibilité d'un réseau de grande envergure nationale ou régionale appuyés par des experts et conseillers scolaires qui sont familiers avec les aspects techniques et médicaux de l'opération. Cela est démontré par les activités du réseau sud-africain NHLS et les formations CD4 PLG.net ^{33, 36} qui fournissent des encouragements, de l'éducation et l'évaluation de la qualité pour les centres plus petits et ceux-ci peuvent aussi inclure «point-of-care» des services.

Surtout, les opérations de laboratoires centraux et les points de soins sont complémentaires. Alors que le premier a le double rôle de fournir une opération de service rentable à grande échelle ainsi que la formation de base / avancé pour le périphérique laboratoires ^33,38, ce dernier contribue à enrayer la propagation de l'ART par le recrutement de patients VIH + qui sont admissibles à ART à partir d'un socle plus grand, y compris les cliniques rurales. Voici quelques précautions sont nécessaires parce que le point-of-care diagnostic peut être beaucoup plus coûteux et ne garantissent pas automatiquement l'exactitude ^38. Il est donc judicieux de conserver le système à deux vitesses et à faciliter la coordination entre les deux niveaux sans permettre soit de diminuer le bras.

En conclusion, dans le domaine de la surveillance de diagnostic de la gestion clinique des maladies infectieuses une nécessaire réduction des coûts peut être réalisée par les services de apt qui utilisent moins cher et mieux coordonnée des technologies modernes avec une qualité nettement améliorée ^13,39. Bien organisé national (et régional) des dispositions service de diagnostic devraient être mieux soutenus ^6-8 par éviter un scénario où la quasi-totalité des subventions est gaspillé sur des méthodes coûteuses et / ou prévenus dès que ceux-ci sont importés de pays riches sans attention de pré- préventive examen constructif. De même, une conception plus souple des essais cliniques thérapeutiques avec la pleine participation des médecins locaux et du personnel de santé devrait conduire à la réduction des inutilement fréquentes et / ou trop ambitieux tests de laboratoire ^3. Cette politique serait donner plus de chance à une meilleure utilisation de la disposition des résultats précis de diagnostic dans une évaluation coordonnée clinique / laboratoire des patients sous ARV. Ces diagnostics intelligents pourraient aussi être un pionnier pour les pays pauvres en ressources ⁸ dans les domaines de la tuberculose et les leucémies en utilisant une plate-forme de cytométrie de flux existants familiers ^40.