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Immunology and Infection

HIV / AIDS의 종합 및 비용 효과적인 실험실 감시 : 아프리카 역할 모델

Published: October 31, 2010 doi: 10.3791/2312
Automatic Translation
1,2, 2, 3, 1,2
1National Health Laboratory Services (NHLS-SA), 2Department of Molecular Medicine and Haematology, University of Witwatersrand, 3Lightcurve Films

Summary

HIV / 에이즈 치료에 방지 retroviral 요법은 대규모 남아 프리카에서 모니터합니다. 유동세포계측법는 혈액학 (CD45), 면역학 (CD4) 및 바이러스 부하 링크 CD38 분석을위한 결합입니다. NHLS - SA 실험실, 요하네스 버그에 기록이 현대적인 방법은 자원 제한 진단을위한 역할 모델 역할을, 강한 지역 내부 품질 관리와 비용 효율적인 수 있습니다.

Abstract

경제 대규모 진단 테스트 사우스 - 아프리카 역할 모델을 대표하는 - 우리는 APT 실험실 서비스에 의해 방지 retroviral 치료 (ART)을 지원에 대한 비디오를 제시한다. 저소득 국가에서 저렴 예술 HIV seropositive 환자의 생존을 위해 전망을 변화했지만 예술의 실험실 감시 및 어떤 비용이 필요가 있는지 의심 없습​​니다 - 상황에 때 병리 서비스의 전반적인 품질이 아직도 매우 낮은 수 있습니다. 적절한 대답은 더 나은 조정과 서양 국가에서 볼 수보다 엄격한 내부 품질 평가와 함께 경제적으로 소리가 서비스를 구축하는 것입니다. Witwatersrand 대학교, 요하네스 버그, 남아 프리카 공화국에서 국민 건강 연구소 서비스 (NHLS - SA)의 위치에 사진이 비디오는, 원래의 2 색 CD4 - CD45 PanLeucoGating 전략 (PLG)를 확장 이러한 조정 계획을 제공합니다. 따라서 비디오 프레 젠 테이션의 여섯 모듈은 하나의 튜브에 haematological 면역 및 바이러스학 관련 테스트를 결합하는 4 색 흐름 cytometric 분석의 단순를 공개. 이 비디오 모듈은 다음과 같습니다 (I) 설정 악기, (ii) 본 샘플 준비가, (3) 절대 계산하고 구슬 카운트 속도하여 각 샘플에 대한 모니터링의 품질을 테스트, 백혈구에 대한 (IV) heamatological CD45 테스트 계산하고 차이, (V) CD4 카운트 및 CD8의 (VI) 활성화 + CD38 표시에 의해 측정된 T 세포, 바이러스 부하와 관련된 매개 변수입니다. 잠재적인 비용 절감 뛰어난 있습니다. 이 협정 NHLS - SA 네트워크 내의 다른 실험실로 기술의 전달도 서양 실험실에 적용되는보다 엄격한 품질 관리와 함께 하루> 800-1000 테스트를 수행 가능성에 대한 주요 예입니다합니다. 전문 어드바이저 실험실 관리자와 현대 의료 기술을 도입에 대한 결정의 의무를 수행 정책 입안자 자주 위치에 워크로드의 큰 부담으로 큰 지역 연구소에서 수행과 같은 최신 기술 세부 정보를 볼 수 없습니다. 따라서이 동영상이 새로운 발전의 세부 사항을 보여줍니다.

Protocol

소개

biomedicine의 영역에서 현대의 과학적인 노력은 감염증에 대한 효율적인 진단의 도입을 포함한 실질적인 혜택을 리드. 세계 여행 세계 1의 빈곤에 시달리는 지역에 바이러스성 및 세균성 감염의 현재 파괴적 영향에 의한 전파 질병의 위험 때문에 고품질의 빠른 진단이 필요합니다.

안티 retroviral 치료와 HIV 양성 환자의 자원 가난한 국가의 치료 (ART) 성공적으로 2,3을 도입했습니다. 예술의 프로토콜이 현재 HIV + 개인 serological 검사 (I)를 기반으로하고, (ii) 유전자 약물 regimens의 한때 매일 조합은 첫 번째 라인 'ART로 사용 (3) CD4 및 / 또는 바이러스 부하 assays ART를 시작하면 결정 수 있습니다. 프로토콜은 예술의 범위로 변화하지만, 아르 이제 더 높은 CD4에서 이전에 미술을 시작하는 더 편안 지침을 넓히고 수있는 것은 2로 계산됩니다. 중요한 것은 높은 CD4 + 세포 / 혈액 μl도 HIV 백신 4, 5의 현재 부족에도 불구하고 HIV의 확산을 늦출 수에서 미술을받을 수 HIV + 환자의 수가 증가합니다.

따라서 HIV 감염은 그 어느 때보 다도 조직 의약품을 필요로하는, 생존자의 증가에 만성 질환이 될 태세이지만 아프리카 5 월 실험실 의학의 가난한 상태는 여전히 효과적인 건강 관리 6 장벽 남아 있습니다. 이 단기 보조금의 제공은 지속 가능한 해결책에게 7-9를 제공하지 않는 것을 강조하는 목소리가 있으며, 현재 규모 서양 국가가 제공하는 HIV 관련 보조금은 영원히 8,9 계속할 수 없습니다. 2008 년 USD은 15,600,000,000는 낮은 중간 소득 국가에서 에이즈 프로그램에 대한 지출되었고,이 중 약 50 %가 북미, 소스를 포함하여, 외부되었습니다. 계산된 경향이 지출이 현재의 전반적인 접근 9에서 변화가 없다면 유행병이 아직 2031에 우리와 함께있을 것입니다 2-3 배 높은 수준까지 증가하고하는 것을 보여줍니다.

따라서 아프리카 국가보다 HIV 예방과 현명한 비용 절감 9 기여해야합니다. 우리가 일상적인 작업에 대한 가장 최근의 발명 '역할 모델'설립 및 자원 가난한 국가 (아프리카, 인도 등)에 소개합니다하는 것이 좋습니다. 이것은 과학자가 완전히 현재의 국제적인 지원의 혜택을 배우게됩니다 그리고 더욱 글로벌 발전에 기여함으로써, 모든 일 기술을 향상시키기 위해 자신들의 능력을 활용하는 지구의 영역입니다.

서양 의학에서는 대규모 학술 센터와 병원에서 진단 활동이 자주 "departmentalized"입니다 즉, 별도의 "관심의 지역은"에 haemato -, viro -, retroviro -, bacterio -, sero - 조각으로 이어지는 다른 분야에 대한있을 수 있습니다 , 단백질, 대신 감염 - 질병 연구실에 종합 진단 assays의 최소 집합을 사용하여 통합적인 접근 방식을 수행 cytological 실험실. 또한, 진단 테스트도 너무 복잡하고 비용이 많이 드는 수 있습니다. 분명, 이러한 서비스가 더 나은 조정하지만, 이러한 통합 노력이 서쪽 방향에서 전적으로 올 가능성이있을 필요가있을 것입니다. 따라서, 이러한 요하네스 버그, 남아 프리카 공화국에서 Witwatersrand 대학교와 공동으로 국민 건강 연구소 서비스 (NHLS - SA)으로 선도적인 실험실과 기관은 추가 개발, 수정, 다시 집중하고 자신을 개선하기 위해 추가 작업을 직면하고있다 현대 기술을 기반으로 비용 효과적인 진단.

현재 비디오에 우리는 HIV에 감염된 환자의 안티 retroviral 치료 (ART)을 모니터링하는 흐름 cytometric 방법을 설명합니다. 이 기술은 조합 6 모듈 단계 현명한 제시 관련 haemato -, 단백질, 10 테스트의 재현성을 보장하기 위해 필수적인 내부 품질 관리 (QC)와 함께 하나의 튜브에 virological assays. 여기에 고용 단클론 항체의 사용은 과학적으로 완전히 설치됩니다. CD45 시약은 HIV 12-14의 기본 목표하는 "도우미"T - lymphocytes를 열거하는 CD4과 함께 11-13 백혈구 건의입니다. 그것은 같은 튜브에서 CD38 활성화 마커가 HIV 바이러스 부하 (VL) 관련 분석 15-17로 CD8 + T 세포에서 발견되는 "건설 트릭"입니다. 사우스 - 아프리카 공헌을 강조하기 위해, 우리는 이러한 개념 및 비용 효율적인 실용적인 조합은 모든 주요 서양 기술을 10,12,13,16,17에 따라 NHLS - 위츠 협력에서 일을했을 사실을 가리 킵니다.

이러한 assays는 조합에서 실시, 장기 ART를 겪고 아르 환자의 적절한 모니터링에 필요한 될 수 있습니다. 언제 비용 efficiency가 시시콜콜,이 조정 흐름 cytometry 기술은 16,18,19 경제적으로 증명됩니다. 이러한 단일 튜브 assays들은 서양 변종 이상 별도의 악기 및 / 또는 기타에 의해 수행 방법을 사용하여 다른 대리 시험으로 수행 유사한 테스트를 통해 비용 절감을 나타냅니다. 이 저축은 토론에 세분화되어 있습니다.

하나의 튜브에서 4 색 유동세포계측법을 활용이 기본적으로 단순히 기술의 수용을 위해, 그것은 비디오 형식으로 기술 단계를 표시하는 것이 필수적입니다. 전문 어드바이저 실험실 관리자와 현대 의료 기술을 도입에 대한 결정의 의무를 수행 정책 입안자 자주 위치에 작업 부하의 큰 부담으로 큰 지역 연구소에서 수행과 같은 최신 기술 세부 정보를 볼 수 없습니다. 그래서이 비디오는 각 근무일 10,13,16,17> 1000 임상 샘플 테스트를위한 작업 흐름을 최적화하기 위해 남아 프리카 공화국에 도입된이 새로운 개발의 세부 사항을 보여줍니다.

프로토콜

유동세포계측법

시험은 4 색 유동세포계측법에 의해 수행되었지만 assays은 두 병렬 튜브 (아래 참조) 2 색상을 사용하여 수행할 수 있습니다. 베크맨 - 쿨터 XL - MCL, 안정 fluidics 21 cytometer는 사용하지만, 동일한 기술은 또한 다른 cytometers 적용할 수 있습니다. 설명이 기술은 ~ 800-1100 샘플 / 일 10,13 많은 일상 작업을 처리합니다.

모듈 1 : 계기의 설정

매일 내부 관리를 두 번 매일 수행하는 청소입니다 : 시작과 마지막 환자 샘플의 완성에. 이것은 진공 라인 플러싱 및 Clenz (; BC, 마이애미, FL 5 % 나트륨 차아 염소 산염)을 취득을 포함합니다. 또한, 각 30 튜브 회전 목마 Clenz 및 증류수 물의 끝에 단백질을 구축 접속 최소화하기 위해 시스템을 통해 실행됩니다.

매일 시작 진공 및 압력 판독이 선택되어 있는지 확인하십시오. 이것은 배경 카운트가 (100 초에서 <100 이벤트) 허용 남아있는 것을 확인합니다. 최초의 혈액 샘플을 실행하면 그것은 칼집 유체의 나누어지는에 carryover는 <1 %입니다 설립. 그런 다음 레이저 정렬 및 형광 감도는 매일 FlowCheck 21 샘플을 사용하여 모니터링할 수 있습니다. 이것은 평균 채널 번호가 낮은 유사 (하프 최고 CV 값 <2 %)과 (500 ± 50) 일관성이 관찰됩니다. 보수는 매주 체크, FlowSet 구슬은 의미 채널 값이 미리 설정된 목표 값을 22 1 % 이내인지 확인 꾸몄다 있습니다. 시각 레비 - 제닝스 플롯, 의미 채널 번호와 네 개의 형광 채널 (FL1 - FL4) 매일 표시에 대한 편차 (HPCV) 값의 절반 피크 계수의 정밀도를 확인합니다. 다음 CD4 카운트의 정확도는 두 CD4 수준에서 확인됩니다. PLG - CD4 동안 테스트 안정화 혈액 공정 제어 (IMMUNOTROL)이 낮은 일반 사용 (450-700 CD4 세포 / μl)와 낮은 수준 (배치에 따라 100-200 CD4 세포 / μl; 심판 23)입니다. 이러한 Immunotrol 값은 국제 BC - IQAP 프로그램을 24 일 영국 NEQAS 25 AFREQAS 26이 요청으로 <5 %의 %의 CV와 의미 0.5 SD 내에해야합니다. 으로 동영상과 같이 다음의 간단한 정리 조치와 강력한 흐름 cytometers 이러한 CD4 검사로서 그리고 활성화 마커 CD38에 사용되는 형광 강도 측정 카운트 모두 절대 셀에 필요한 안정성을 유지할 수있는 것이 중요합니다. 이 안정성은 최근 다른 cytometers에게 15,27를 사용하여 이전 연구를 확인하는 세부 사항 17 문서화되었습니다.

매주 유지 보수하는 동안 목록 모드 데이터 (LMD) 파일은 나중에 참조할 수 있도록 보관이 보관된 자료는 다음 cytometer 하드 드라이브에서 삭제됩니다.

월간 유지 보수 시약 용기, 외장, clenz 및 폐기물 탱크의 청소가 포함되어 있습니다. 모든 필터도 제거하고 세탁하는 동안 회전 목마 모드 샘플 머리를 청소합니다. 이 청소도 준비 역 TQPrep 및 PrepPlus2 (BC, FL)으로 연장됩니다. 수동 준비에 사용 pipettes은 최소한 3 개월 - 집안에 확인 있지만 pipetting 부정확이 의심되는 경우 피펫은 즉시 시정 조치에 대한 서비스를 제거합니다. 여섯 월간 유지 보수는 베크맨 쿨터, SA에 의해 예정입니다.

모듈 2 : 준비 샘플

CD45/CD4 두 색상 PanLeucogated 프로토콜 5 베크맨 쿨터 FlowCARE 키트 28 lyse 노 세척 절차 (IMMUNOPREP, 베크맨 쿨터, FL)에 사용됩니다. 그리고 CD4 - phycoerythrin (PE, 오렌지)이 키트는 CD45 - 플루오레신 - isothiocyanate를 (녹색 FITC)가 포함되어 있습니다. 흐름 - 카운트 비즈 29 대량으로 구입하고 알려진 numbe 같은 특별한 연산자 친화적인 역할을에 추가됩니다알려진 볼륨에 구슬의 RS는 예제 30에 그 자리에서 pipetted 있습니다. 이것은 혈액의 볼륨을 전달하는 데 사용되는 것과 같은 pipetting하여 이루어집니다. 따라서 예상 범위의 비드 카운트 속도 (BCR)은 주어진 샘플의 pipetting가 정확 아래 모듈 3에서 설명 한는 것을 보여줍니다. 중요한 것은 여기에 '앞으로 pipetting'로 불리는 간단한 pipetting 방식, 제공하는 최고의 작동 비드 및 혈액 볼륨이 동일한 피펫 및 팁과 동일한 처리를 30로 전달됩니다. 우리는 앞으로 pipetting과 같이 공동 효율적인 편차 (% CV) 10,31,32로 측정 분배 반복의 허용 오차 한계 및 재현성 이내 pipetting 목표를 달성 운영과 관련하여 실험실, 둘 사이의 최적의 전반적인 균일 굴복 것으로 나타났습니다. 32 지방 의회에서 발표가이 방법은, 남아 프리카 국가 인증 제도 (SANAS, www.SANAS.co.za) 지침에 따라 사용 승인. 구슬이 BCR 사용은 자주 등 BDS Trucount 준비로 동결 건조된 비드 제품 구슬 알려진 숫자를 포함하는 데 사용되는 방법을 세고 다른 체적 다릅니다. 이러한 준비는 흐름 카운트 속도 (FCR) 메소드 20,31으로 흐름 악기 fluidics의 안정성을 문서에 우수합니다. 여기는 최고의 절대 정밀도로이 튜브에 혈액 볼륨을 전달하기 위해 필수적이기 때문에 그럼에도 불구하고, 준비가 만든 비드 함유 튜브의 사용은 기술이 더 복잡 렌더링. 그것은 일반적으로 그 목적에 대해서만 '리버스 pipetting "기술이 적용 훈련 다음 허용 것을 동의합니다. 우리 BCR 방법은, 그러므로, 저렴 더 많은 정보를, 간단하고 배울 -로 비디오에 표시된 쉽습니다 -. 대체 유사한 방법 10,31,32 비교했을 때 저희는 또한 찾을 앞으로 pipetting을 사용하여 운영자가 덜 가능성이있다 반대로 pipetting과 내부 메커니즘에 대한 손상 및 원격 위치에 어렵습니다 다시 교정이 필요 모두를 초래할 수 피펫에 샘플을 대기음. 우리 BCR 방법도 작은 - 투 - 중소 실험실 (목록 1) 자동 pipetting 시스템에 대한 필요성을 obviates.

혈액 샘플은 항상 클래스 II 생물 학적 캐비닛에 처리됩니다. 촬영하는 동안 광범위한 소음을 방지하기 위해 표시되는 동영상이 캐비닛 밖에서는 안전한 재료로 다시 제정입니다. cytometers에 PLG - CD4 수집 프로토콜은 시간이 주어진 제한 시간에 중지하거나 낮은 CD4 카운트와 샘플에 대한 정확성을 개선하기 위해 5000 림프구 이벤트를 얻기위한 계속하실 수 있습니다.

모듈 3 : 비드 카운트 속도 (BCR)

우리의 시스템이나 각 컨트롤 샘플의 모니터링 비드 카운트 요금 (BCR)은 행사 / 초 10,13,30,32,33 비드 공식을 사용하여 계산됩니다. 평균은 SD 및 % CV 값은 BCR의 outliers 30 식별을위한 순서 계획을 생성하는 스프레드 시트에 사용됩니다. 이것은 샘플 수동 또는 자동 PrepPlus2 pipetting 악기 10을 사용하여 pipetted 모두 적용 샘플 준비 확인 (SPV)로 불리는 pipetting, 처리 및 분석의 세 시스템의 최적의 작동을 확인합니다.

인수 동안 BCR 결과는 직접 모니터에 실시간으로 볼 수 있습니다. BC의 cytometers에 의미 BCR의 값은 80 ± 5 이벤트 / 초입니다. 우리는 환자의 결과가 발표되기 전에 탈선 BCR - S를 확인하고 다시 실행하는 것으로 나타났습니다. 의사 결정 트리 알고리즘 (또한 ref.10 참조) 그림 1 그림입니다.

pipetting 동향, 패턴 및 갑자기 교대 10 감지하는 길이 정밀 검증 (LPV) 중 모니터링하면 악기 고장은 BCR 변동으로 표시됩니다. Fluidics 정밀 검증 (FPV)은 구슬의 단일 희석이 잠재적으로 오작동 악기 10 유체 불안정의 징후를 확인하는 일련 인수를위한 10 가지 튜브로 aliquoted는 자체 절차는 선택 사항입니다.

모듈 4 : CD45

우리의 연구에 절대적인 계산에 대한 월별 보정 전체 혈액 카운트 분석기 LH - 750 (베크맨 쿨터)는, 흐름 cytometers를 비교하는 상대로 화이트 셀 카운팅에 대한 참조 (WCC)로 매일 사용됩니다. 흐름 cytometers에서 CD45 생성 WCC - S는 안정화 베크맨 쿨터 5C 전체 혈액 세포 컨트롤의 세 가지 수준과 비교하여 매일 확인하고 있습니다. 흐름 CD45 카운트 및 전체 혈액 카운트 분석기 사이 WCC 계약의 허용 한계 <5 % 10 수 있습니다. 리소스 제한이 같은 흐름 cytometer와 같은 하나의 악기보다 우리의 서비스에 나서 더 심한 경우이 것을 나타냅니다, 임상 해당 WCC를 포함하여 CD4 카운트를 제공하기 위해 충분한 것으로 보인다.

화이트 CE주지 미분 계산은 특히 단핵구 카운트를 평가에 차이가 다양한 haematological 분석기에서 수행됩니다. 차동 CD45 표현의 패턴은 차동 WCC 11,12, 34에 대한 흐름 기술의 고전적인 사용이다. 흐름 cytometer 파생 CD45 WCC와 미분 계산은 정확 정확하고 안정적​​일 수 있으므로, 이러한 정기적으로 PLG - CD4 시험 방법에 통합뿐만 아니라 추가 비용없이 임상 이용할 수 있습니다.

비정상 CD45 패턴은 PLG - CD4 프로토콜의 CD45/side 스캐터 플롯에 주목하고 따라야 업 자세한 임상 조사를 프롬프트로 얼룩진 피 필름에 있습니다. 이 방법은 감염 (세균 및 바이러스), HIV - 음성 및 HIV + 환자 34, 35 모두에 백혈병과 림프종을 감지합니다. 일상적인 실험실 동안 후속 HIV + 환자의 전체 혈액 카운트가 자주 혈액 연구소에서 요청하지 않습니다. 솔직하게 CD4 카운트를 위해 보낸 샘플에서 관찰하면 따라서 비정상 CD45 패턴 진단하고 있습니다. 추가 장점은 정확한 절대 CD4 개수가 여전히도 피로 35 백혈병이나 림프종의 결과 환자에서 만들 수있다는 것입니다.

흐름 CD45 잘 혈액을 표준화하기 위해 적합합니다. haematological 악기 상당히 서로 다릅니다. 우리는 haematological 분석기 10,36을 비교하고 표준화 WBC의 차이에 대한 CD45 기반 흐름 cytometric 품질 관리를 도입하는 것이 좋습니다.

모듈 5 : CD4

베크맨 쿨터 XL 소프트웨어에 도입 PLG - CD4 프로토콜 여덟 도트 플롯으로 구성되어 있습니다. 이러한 4의 CD4 카운트 4 품질 모니터링 12,13를위한을 결정하는 데 사용됩니다. 이러한 가운데, Fig.2에 나타난 두 점 - 플롯이 중요합니다. 모든 백색 세포 파편, 적혈구 / 유령과 혈소판은 무시하는 동안 CD45 및 사이드 산란을 (지역 도트 플롯 2) 사용 식별됩니다. CD45 + 이벤트는 다음 도트 음모 3 전송 어디 CD4 + lymphocytes 그들의 밝은 CD4 표현과 낮은 사이드 분산형 (지역 C)에 의해 식별됩니다. 절대 CD4 + 림프구 수가이 지역 C와 WCC에 이벤트의 번호 (흐름 카운트 교정 지역 F)에서 계산됩니다. lymphocytes의 CD4의 %에 대한 값은 지역의 B 도트 줄거리 2를 얻을 수있다. 강력 CD4 + T lymphocytes와 약하게 CD4가 + monocytes는 시약 칵테일 (ref.13에서 검토)에 추가 인 경우에는 3 번 CD에 들어 T 세포 특정 항체를 사용하기위한 필요없이 CD4 - 형광 강도와 분산 기능에 의해 차별하고 있습니다.

모듈 6 : CD8/CD38

CD8 - CD38 얼룩이 CD45-FITC/CD4-PE/CD8-ECD/CD38-PC5를 사용하여 4 색 얼룩의 일부입니다. CD4/CD45은 (흐름 케어 PLG - CD4) 상기와 동일하고, 두 개의 여분의 시약은 CD8-ECD/CD38-PC5 17아르 추가됩니다. cytometer은 두 색을를 실행하는 경우, 별도의 튜브는 다시 lyse 노 세척 절차를 (IMMUNOPREP, 베크맨 쿨터, FL)를 사용하여, CD8-FITC/CD38-PE 두 색상의 얼룩을 수행하기 위해 추가됩니다. CD4와 비슷한 게이팅 전략 CD8 - ECD 대 사이드 분산형 (그림 3)와 CD8 + T 세포를 식별하는 데 사용됩니다. CD8 +의 lymphocytes에서 CD38 표현은 형광 강도 (MFI) 대 셀 개수 16,17 의미 CD38 - PC5의 단일 매개 변수 히스토그램으로 꾸몄다 있습니다. CD38 MFI 값은 동일한 환자의 각 방문에 대해 순차적으로 꾸몄다 있습니다. 첫 방문 (사전 치료) 같은 사람의 CD38 MFI의 다른 모든 참조가 16 비교의 '기준'MFI 값입니다.

모듈 1에서 설명한대로 컨트롤 및 장비의 안정성은 레이저 정렬 및 전압의 안정성을 모니터를 확인 흐름의 일상 인수에 따라 달라집니다. 흐름 설정은 네 개의 형광 채널 (위 참조)의 색상 보정을 설정합니다. Immunotrol는 '부정적'프로세스 제어 예제입니다. '긍정적인'컨트롤은 셀 당 9 X 10 3 CD38 분자를 표현 정상 혈액의 monocytes 있으며, 알려진 HIV + 샘플 치료 17.

남아 프리카 국립 보건 연구소 서비스 (SA - NHLS)의 네트워크 실험실을 채택했다

표준 운영 절차 및 교육 자료를 포함하는 중앙 데이터베이스와 70 실험실 13, 33에 걸쳐 표준화된 품질 관리 방법. 네트워크 연구소는 기술 32,33을 pipetting의 감시를 포함하여 토론, 추가 교육 및 정기 오디션으로 도움이됩니다. 품질 평가 프로그램은 월별 모니터입니다. 이러한 방법으로, 품질 관리는 지역 약해진다하지만 높은 수준은 SA - NHLS QA 부서 13 26 기여와 함께 유지됩니다.

품목 1 HIV 질환의 조정 cytometry와 비용 절약 가능성. :

  1. 대신에 AP의 친숙 및 서비스 계약 단일 악기의 사용,여러 haematological, 면역과 virological 악기 plying
  2. 예술 응답을 예측하기 위해 추가 비용없이하고 모두 WCC, WBC 차동 카운트의 CD4 테스트 및 CD38MFI 모니터링을 포함하여 다른 위치에서 샘플을 보내하지 않고 하나의 튜브에 assays의 성능
  3. CD38 MFI보고와 예술에 대한 응답의 즉각적인보고는 상당히 전통적인 HIV VL보고에 비해 처리 시간 (실시간)을 향상
  4. 같은보고 양식 결과의 결합 평가의 선명도와 임상 사용
  5. 자동 pipetting 장비의 필요성은 "미래 pipetting"BCR에서 사용되고 예제가 감시의 간단한 방법으로 negated 수 있습니다
  6. 작업하는 동안, 샘플 부정 확한 처리가 식별되고 결과가 허가되기 전에 문제가 검사 결과는 정류 아르
  7. 심각한 충돌하기 전에 초기 서비스 예약 이어지는 계기 오작동에 대한 사전 예방 관리
  8. 일상적인 봉사 활동 중에 백혈병 / lymphomas의 의심받지 않은 사례를 진단
  9. 백혈병 phenotyping 및 모니터링을위한 유사한 흐름 기술의 확장
  10. HIV VL의 모든 환자에서 테스트 및 평가에 대한 DBS를 전송하여 저장 비용을 마른 핏자국 (DBS)의 저장 용량과 CD38 시험의 조정은이 임상되거나 CD38 표시가 그렇게하는 경우에만
  11. 결핵 assays의 교체와 마찬가지로 흐름 기술 인터페론을 γ ELISpot 방법
  12. "시점 케어"CD4 검사를 수행하는 주변 실험실에 대한 품질 관리
  13. 인 경우에는 3 번 CD에 들어 이러한 항체로 "원치 않는"시약의 비용을 절약하고 하위 집합 표시 (대신 CD38 구입)
  14. BCR 테스트 저렴한 구슬의 대량 구매 (대신 고가의 사전 pipetted 계산 - 튜브를 구입하는)
  15. 상업 회사와 유리한 대량 가격 네트워크, 합작 협상

그림 1
그림 1. 결정 샘플 테스트를 할 때 나무 / 알고리즘 사용은 비드 카운트 비율 (BCR)의 외곽 결과를 보여줍니다. 주요 작업은 간헐적으로 실패 체적 대 pipetting 오류를 제외하는 것입니다. 그림은 오류의 가능성 원인을 보여줍니다. 또한 프로토콜 histograms 및 통계가 10에 영향을하는 것이 표시됩니다.

그림 2
그림 2 CD45 - FITC (녹색, X - 축) 통합 PLG CD4 프로토콜의 예. 대 사이드 분산형 (복잡, Y 축)과 CD4 - PE를, (오렌지, X - 축) 대 사이드 산란 ( 복잡, Y 축). 게이트 'A'는 lymphocytes 'B'의 선택된 게이트와 총 백혈구 인구입니다. 게이트 'A'는 CD4 + lymphocytes 게이트 'C'에서를 식별하기 위해 오른쪽에서 두 번째 다이어그램로 전송됩니다.

그림 3
그림 3 CD45/CD4 panleucogating 분석의 결합.; CD8/CD38 분석 (다이어그램 '4 '와 '6)와 (다이어그램 '2'와 '3 '에서 또한 Fig.2 참조). 전체 leucocytes (게이트 '가') 다이어그램 '4에게 양도하는 경우 '(x' 축)와 사이드 분산형, 여기 CD8 +의 lymphocytes는 CD8 - ECD에 근거하여 문이 아르'( 'y' 축;로 표시 게이트 'D'에서). 다음 CD8 + 세포는 단일 매개 변수 다이어그램에서 CD38 - PC5 얼룩 강도를 시각화하는 다이어그램을 '6 '으로 전송됩니다. 이 그림 '6의 매개 변수 'G'로 표시됩니다. 평균 형광 CD38 - PC5 강도 (MFI)가 기록됩니다. 예술이 가치는 점차 16,17을 감소시킵니다.

Discussion

최근에는 자선 중심과 보조금 - 할당된 프로그램은 높은 HIV 부담으로 지구의 자원을 제한된 영역에서 일부 우수한 임상 관행의 설립을 도왔있다. ART 프로그램은 사망률을 감소에 성공하고 지금은 높은 CD4에서 시작되고있는 것은 2,3로 계산됩니다. 이러한 새로운 조치 HIV 감염 4,5의 확산을 감소 것이라는 징후는 HIV - 특정 백신의 부족에도 불구하고, 이미있다. 우리의 영상 우리는 문서에서 예술에 환자를 모니터링 할 때, 이러한 기술은 더 초점을보다 비용 효율적인 서부 연구소 (목록 1) 수행 루틴 연습에서 관찰보다 될 수 있습니다.

이러한 아프리카 주도의 접근 방식은 잘 ART 취급 HIV 감염, 만성 질병을지고있을 때 한 번에 실험실 서비스의 업그레이 드를 지원하기 위해 필수적인 수 있습니다. 예술의 이러한 모니터링 카운팅 정확한 CD4 및 바이러스 부하 관련 기술보다 더 까다로운 작업이 단순히 ART 16 시작에 대한 결정을 지원하기 위해 임의의 그룹으로 환자를 삽입하기위한 CD4 카운트를 수행할 수 있어야합니다. 이러한 진단의 도움으로, 즉 CD8/CD38 테스트를 사용하면, 그것은 예술 16,19에있는 환자의> 60 %의 VL 관련 모니터링 비용을 줄일 수 있습니다. 이 약을 복용에 VL 리바운드 및 / 또는 환자 준수의 부족의 조기 징후를 데리러 가능성이 높습니다 CD4 개수 37, CD8/CD38 시험 16,17이고, 아니라는 것을 강조하는 것도 중요하다.

조정 비용 효율적인 중앙 서비스의 필수 요소는 작업의 기술 및 의료 측면을 잘 알고있는 전문가 및 학술 고문으로 지원하는 대규모 국가 또는 지역 네트워크의 가용성이다. 이것은 작은 센터에 대한 격려, 교육 및 품질 평가를 제공하고 이들도 '포인트 오브 케어'서비스를 포함할 수 있습니다 남아 프리카 NHLS 네트워크의 활동과 CD4 - PLG.net 교육 제도 33, 36에 의해 증명됩니다.

중요한 것은, 중앙 및 포인트의 케어 연구소의 작업 보완하고 있습니다. 이전에 비용 효율적인 대규모 서비스의 운영뿐만 아니라 말초 연구소 33,38위한 기본 / 고급 교육을 제공의 이중 역할을 가지고 있지만, 후자를받을 수 있습니다 HIV + 환자를 모집하여 예술의 확산을 확인하는 기여 시골 진료소를 포함하여 큰 기지에서 ART. 포인트 - 오브 - 간호 진단 훨씬 더 비쌀 수 있습니다 자동으로 정확하게 38를 보장하지 않기 때문에 몇 가지주의가 필요합니다. 이것은 두 계층 시스템을 유지하고 두 팔을 줄어들 수 있도록하지 않고 두 계층 간의 협력을 촉진하는 것이 현명한 것입니다.

결론적으로, 전염성 질병의 임상 관리의 진단 모니터링 분야에 필요한 비용 절감이 크게 향상된 품질 13,39과 함께 저렴하고 더 나은 조정 현대 기술을 사용하여 APT 서비스를 통해 얻을 수 있습니다. 잘 조직된 국가 (및 지역) 진단 서비스 조항이 더 신중 사전없이는 다양한 국가에서 수입한 그대로 거의 모든 보조금 지원이 즉시 비용 및 / 또는 해보지 않은 방법에 낭비 때 시나리오를 피함으로써 6-8를 지원해야합니다 emptive 건설 감시. 마찬가지로, 지역 의사와 의료 인력의 전체 참여와 임상 치료 실험의 더 유연한 설계는 불필요하게 잦은 및 / 또는 실험실 테스트 3 야심찬 이상의 감소로 연결되어야합니다. 이 정책은 예술에 대한 환자의 조정 임상 / 실험실 평가에 사용할 수있는 정확한 진단 결과를 풀러 활용에 더 많은 기회를 줄 것입니다. 이러한 스마트 진단은 기존의 익숙한 흐름 cytometric 플랫폼 40를 사용하여 결핵의 영역과 leukaemias의 자원 빈곤 국가 8 개척 수 있습니다.

Disclosures

CD4 방법에 대한 국제 특허 권리는 여기에 설명된 남아 프리카 NHLS에 의해 현재 BCI, 마이애미, FL, 미국 라이센스하에 실시하고 있습니다.

Acknowledgments

\ \ www.nhls.ac.za 및 http://www.plgcd4 : 특별 감사는 HIV 관련 흐름을 진단 서비스의 국가 조직에 남아 프리카 공화국의 국민 건강 연구소 서비스 (NHLS) (HTTP에 의한 아르 . NET). 기능 연구 Haematology과 분자 의약, Witwatersrand 대학의학과에서 실시되었습니다 (요하네스 버그, 남아 프리카, 부서 책임자, 교수 웬디 스티븐스 지원). 저자는 상업 회사 또는 자금 지원 기관이 발행물에 대한 교부금 지원을받은이 없습니다. 표현 의견은 반드시 Witwatersrand 또는 남아 프리카 NHLS 대학의 기관의 의견을 반영하지 않고 저자의 사람입니다.

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면역학 제 44 인체 면역 결핍 바이러스 (HIV) CD4 림프구의 수를 백혈구 개수 CD45 panleucogating 림프구 활성화 CD38 HIV 바이러스 부하 antiretroviral 치료 (ART) 내부 품질 관리
HIV / AIDS의 종합 및 비용 효과적인 실험실 감시 : 아프리카 역할 모델
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Lawrie, D., Janossy, G., Roos, M., Glencross, D. K. Comprehensive & Cost Effective Laboratory Monitoring of HIV/AIDS: an African Role Model. J. Vis. Exp. (44), e2312, doi:10.3791/2312 (2010).

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