Summary
Мышь гетеротопической модель трансплантации сердца была доказана многими исследователями важным методом изучения механизмов отторжения и иммунного ответа. Тем не менее, методы участвуют все еще сложной. Изменяя стандартные методы, которые мы имели успех с более чем 1000 трансплантатов.
Abstract
Мышь гетеротопической трансплантации сердца широко используется, поскольку она была введена доктором. Корри и Рассел в 1973 году. Это особенно ценно для изучения отторжения и иммунный ответ теперь, что новые трансгенные и мышей гена нокаутом доступны, и большое число иммунологических реагентов были разработаны. Модель пересадке сердца является менее строгим, чем модели пересадке кожи, хотя технически более сложным. Мы разработали модифицированную технику и выполнили более 1000 успешных случаев гетеротопической трансплантации сердца у мышей. При принятии анастомоз восходящей аорты и брюшной аорты, два швов пребывания помещены в проксимальных и дистальных вершины получателя брюшной аорты с восходящей аорты с донорами, то с помощью 11-0 шва для анастомоза по обе стороны от аорты с продолжением швов. Пребывание швов делают анастомоз проще и 11-0 имеет идеальный размер шва, чтобы избежать кровотечения и тромбоз.
При принятии анастомоз легочной артерии и нижней полой вены, два швов пребывания принимаются на вершине проксимальных и дистальных вершине нижней полой вены с получателем с легочной артерии с донорами. Левой стене нижнюю полую вену и легочную артерию донора с закрыта с продолжением швы с внутренней стороны нижней полой вены после того, один узел с проксимальных пребывания вершине шва правой стенки нижней полой вены и легочной артерии с донорами закрыты с продолжением швов снаружи нижней полой пещере с 10-0 швов. Этот метод проще, поскольку для выполнения анастомоза производится только на одной стороне нижней полой вены и 10-0 швов нужного размера, чтобы избежать кровотечения и тромбоз. В этой статье мы представить подробную информацию о технике в дополнение к видео.
Protocol
Подготовка донора и сердце Урожай:
- Мышь анестезией с внутрибрюшинного введения фенобарбитала и помещены на спине на операционном поле.
- Долго средней линии брюшной надрез. Брюшной содержание отказался марлей налево, чтобы разоблачить брюшной аорты и нижней полой вены.
- 1 мл гепарина (10u/ml) вводится в нижней полой вены для гепаринизация.
- Торакотомия производится: ребра делятся по обе стороны позвоночника и передней стенки груди заемными до подвергать сердце.
- Нижней полой вены, верхней полой вены и непарный вены лигировали с 6-0 шелка и разделен выше лигатуры.
- Восходящей аорты и легочной артерии разделяются и разделен насколько дистально насколько это возможно.
- Легочной вены перевязаны и разделить дистальнее связей.
- Сердце озарен 4 С о физиологический раствор.
- Сердце хранится в лед холодный раствор раствором.
Получатель Подготовка и трансплантации
- Мышь анестезией с внутрибрюшинного введения фенобарбитала и помещены на спине на операционном поле.
- Долго средней линии брюшной надрез. Брюшной содержимое убираются вне брюшной полости марлей, чтобы разоблачить брюшной аорты и нижней полой вены.
- Ветвей брюшной аорты и нижней полой вены подвергаются и лигировали с 10-0 швов.
- Проксимальной и дистальной лигатуры расположены вокруг аорты и нижней полой вены, соответственно.
- Венотомия выполнен в нижней полой вены реципиента с 30 иглы. Открытие затем распространяется на длину равную легочной аорты донора с микро-ножниц.
- Aortotomy выполнен в брюшной аорты получателя, 30 иглы.
- Открыл брюшной аорты и нижней полой вены орошаются с физиологическим раствором.
- Сердце донора помещается на левой стороне живота получателя и покрыт марлей.
- Пребывание швы располагаются на проксимальных и дистальных вершины получателя брюшной аорты с восходящей аорты донора.
- Анастомоз в правой части брюшной аорты реципиента и восходящей аорты донора комплектуются продолжает швов.
- Два швов пребывания производится сначала в проксимальных и дистальных вершине вершине нижней полой вены получателя с легочной артерии донора для анастомоза легочной артерии донора и нижней полой вены получателя.
- Левой стене нижнюю полую вену и легочную артерию донора закрыта с продолжением швов во внутренней нижней полой вены.
- После одного узла с проксимальных шва пребывания вершине, правой стенки нижней полой вены и легочной артерии донора закрыты продолжает швов снаружи нижней полой пещере.
- Сердце донора не переходит к правой стороне живота получателя. Правой стенки брюшной аорты реципиента и восходящей аорты анастомоза донора закрыты продолжать швов.
- После анастомоза сделан, дистальной лигатуры удаляется проверить кровотечение из анастомоза.
- Если есть немного ни к какому кровотечение из анастомоза, проксимальных лигатуры удаляется. Сердце донора наполняется кровью немедленно; цвет сердце становится красным и начинает биться снова.
- Кишечник возвращаются в животе, которая закрыта с 6-0 непрерывной нити.
- Получатель мыши помещается на теплое место. Через час получателя восстанавливается.
Subscription Required. Please recommend JoVE to your librarian.
Discussion
Результаты
Мы успешно провели более 1000 случаев гетеротопической трансплантации сердца у мышей и достигла более чем 90% успеха в разных линий мышей, в том числе дикого типа, трансгенные и мышей гена нокаутом.
Обсуждение
С докторами. Корри и Рассел ввел гетеротопической трансплантации сердца у мышей, в 1973 году, эта модель доказала, что особенно ценно для изучения иммунной реакции отторжения и разработки новых иммуносупрессивных стратегий. Эта модель может быть более широко используются сейчас, потому что появление многочисленных трансгенных мышей и гена нокаутом предоставила новые возможности для исследования механизмов отторжения / толерантности. Пересадка сердца васкуляризированной модель может быть более актуальными для клинических твердых трансплантации органов. Хотя кожи трансплантатов или подкожной трансплантации сердца у новорожденных, технически проще, неоваскуляризации, что требуется для получения взяток выживания в этих трансплантаций особенно чувствительны к аллогенного ответа. Таким образом, кожи и подкожной услышать трансплантации может быть полезно для строгого теста толерантности, но не для развития или оптимизации иммуносупрессивной или терпимости протоколов вызывающие.
Мы изменили сосудистой технику пересадки сердца в нескольких направлениях для повышения эффективности и показатели эффективности:
- Сердце донора должны быть орошаемых с физиологическим раствором из восходящей аорты, пока сердце станет светлым цветом после уборки урожая.
- Ветвей брюшной аорты и нижней полой вены реципиента должны быть лигировали с 10-0 швов, предотвращая кровотечение во время операции и тромбоза после операции.
- Просвет брюшной аорты и нижней полой вены реципиента должны быть орошаемых с солевым раствором, пока кровь не осталось. Это может предотвратить тромбоз после операции.
- Пузырьки воздуха внутри сосудов следует избегать при создании анастомозов.
- Артерии анастомозов должны использовать 11-0 швов, чтобы помочь предотвратить кровотечение из анастомоза.
- Разрез брюшной аорты и нижней полой вены реципиента должна быть равна открытие легочной артерии и восходящей аорты сердца донора.
- Важно иметь четкую и экспансивный рабочее поле, поэтому используйте 6-0 шва вместо зажимов временно закрывают аорты и нижней полой вены.
Заключение
Хотя техника гетеротопической трансплантации сердца у мышей является технически сложной задачей, это важный метод для изучения alloresponses. Практика и технические изменения привели к успешному составляет более 90% в нашей лаборатории. Мы считаем, что видео-и сопровождающие рукописи поможет уменьшить обучения для лабораторий, которые хотели бы использовать эту технику.
Subscription Required. Please recommend JoVE to your librarian.
References
- Corry, R. obert J., Winn, H. enry J., Russell, P. aul S. Primarily vascularized allografts of heart in mice. Transplantation. 16, 343-350 (1973).
