Summary
Protocol
- Corte los pedazos de cola (3 mm) y las orejas marca.
- Añadir 720 m l STE y 30 m l de proteinasa K (10 mg / ml).
- Se incuba a 55 ° C en el bloque de calentamiento y agitar cada hora durante 3 horas a la máxima velocidad durante 10 segundos.
- Inactivar la proteinasa K a 70 ° C durante 5 minutos.
- Apagar en hielo durante 5 minutos.
- Centrífuga ADN cola durante 10 minutos a toda velocidad.
- Decantar en el tubo nuevo que contiene 720 m l de isopropanol.
- ADN precipitado invirtiendo el tubo o agitación.
- Girar el ADN durante 5 minutos a toda velocidad. Eliminar el sobrenadante.
- Lavar precipitado con etanol al 70%.
- Girar el ADN genómico 5 minutos a máxima velocidad. Eliminar el sobrenadante.
- Permitir que el ADN que se seque durante 1-2 minutos.
- Resuspender el ADN en 100 a 200 l m dependiendo del tamaño del pellet.
- Colocar el tubo a 55 º C durante 1 hora para facilitar la disolución de ADN.
Subscription Required. Please recommend JoVE to your librarian.
Materials
Name | Type | Company | Catalog Number | Comments |
STE | Buffer | 100 mm Tris; pH 8.5 /5 mM EDTA /0.2% SDS /200 mM NaCl / in H2O | ||
TE | Buffer | 100 mM Tris; pH 5.0 /1 mM EDTA /10 mM NaCl |