Isolamento del DNA genomico da Tails mouse

Summary

Protocol

1. Tagliare i pezzi di coda (3 mm) e le orecchie marchio.
2. Aggiungere 720 m l STE e 30 m l proteinasi K (10 mg / ml di brodo).
3. Incubare a 55 ° C sul blocco di riscaldamento e vortice ogni ora per 3 ore alla massima velocità per 10 secondi.
4. Inattivare proteinasi K a 70 ° C per 5 minuti.
5. Quench in ghiaccio per 5 minuti.
6. Centrifuga DNA coda per 10 minuti a piena velocità.
7. Decantare in nuovo tubo contenente 720 m l Isopropanolo.  
8. DNA precipitato, invertendo il tubo o vortex.
9. Spin down del DNA per 5 minuti alla massima velocità. Rimuovere il surnatante.
10. Lavare pellet con etanolo al 70%.
11. Spin down DNA genomico 5 minuti a piena velocità. Rimuovere il surnatante.
12. Lasciare DNA asciugare per 1-2 minuti.
13. Risospendere DNA in 100-200 l m a seconda delle dimensioni del pellet.
14. Tubo posto a 55 ° C per 1 ora per facilitare la dissoluzione del DNA.  

Materials

Name	Type	Company	Catalog Number	Comments
STE	Buffer			100 mm Tris; pH 8.5 /5 mM EDTA /0.2% SDS /200 mM NaCl / in H2O
TE	Buffer			100 mM Tris; pH 5.0 /1 mM EDTA /10 mM NaCl