Summary
Discutiamo la costruzione e gestione di un complesso sistema ottico non lineare che utilizza ultraveloci tutto-ottici di commutazione per isolare Raman da segnali di fluorescenza. Utilizzando questo sistema siamo in grado di separare con successo segnali Raman e di fluorescenza utilizzando le energie del polso e medie potenze che rimangono biologicamente sicuri.
Abstract
Spettroscopia Raman è spesso afflitto da un forte background fluorescente, in particolare per i campioni biologici. Se un campione viene eccitato con un treno di impulsi ultraveloci, un sistema che può separare spettralmente temporalmente sovrapposti segnali su una scala temporale picosecondo possibile isolare tempestivamente arriva Raman luce diffusa dal tardo arrivo luce di fluorescenza. Qui si discute la costruzione e gestione di un complesso sistema ottico non lineare che utilizza tutte le ottiche di commutazione nella forma di una bassa potenza ottica Kerr porta per isolare i segnali Raman e di fluorescenza. Un singolo laser 808 nm con 2,4 W di potenza media e 80 MHz, frequenza di ripetizione è diviso, con circa 200 mW di luce 808 nm di essere convertito in <5 mW luce di 404 nm inviato il campione di eccitare scattering Raman. I restanti non convertito luce 808 nm viene poi inviato ad un mezzo non lineare, dove funge da pompa per il tutto-ottica dell'otturatore. L'otturatore si apre e si chiude in 800 fs con un'efficienza di picco di circa il 5%. Utilizzando questo sistema siamo in grado di separare con successo segnali Raman e di fluorescenza ad un tasso di ripetizione 80 MHz utilizzando energie del polso e medie potenze che rimangono biologicamente sicuri. Poiché il sistema non ha alcuna capacità di ricambio in termini di potenza ottica, abbiamo dettaglio diverse considerazioni di progettazione e di allineamento che aiutano nella massimizzare il throughput del sistema. Discutiamo anche nostro protocollo per ottenere la sovrapposizione spaziale e temporale del segnale e travi pompa all'interno del mezzo Kerr, nonché un protocollo dettagliato per l'acquisizione dello spettro. Infine, si segnala un paio di risultati rappresentativi degli spettri Raman ottenuti in presenza di una forte fluorescenza utilizzando il nostro tempo-gating sistema.
Protocol
1. Alcuni bisogna fare attenzione nella preparazione e l'immissione di un campione Raman all'interno di questo sistema.
- Poiché il sistema fa uso di solito molto alti obiettivi apertura numerica con distanze di lavoro molto brevi, i campioni sono posti su un vetrino. I campioni biologici sono generalmente posto su un vetrino n ° 1 spessore montato in una camera cellula Attofluor (Invitrogen, Carlsbad, CA).
- Campioni liquidi, in particolare quelli tossici per l'uomo, vengono inseriti in una piccola bottiglia di vetro con un coprioggetto cementato l'apertura per mezzo di una resina di silicone. La bottiglia viene poi invertito per la misurazione.
- Perché il nostro sistema dipende dalla tempistica precisa della pompa e gli impulsi del segnale, siamo costretti a non usare la regolazione convenzionale centro del nostro microscopio, che traduce l'obiettivo su e giù. Questa somma e sottrae percorso ottico dal nostro sistema. Invece, abbiamo posto i nostri campioni su un palco secondario montato sulla parte superiore del palco microscopio che ha un proprio controllo messa a fuoco indipendente.
2. Al fine di prendere tempo-dipendenti spettri Raman, il fascio di eccitazione deve essere adeguatamente preparato.
- Si comincia con la luce che emerge da una W 2,4 sintonizzabile pulsata Ti: Sapph laser (Chameleon, sistemi coerenti, Santa Clara, CA). Ogni impulso del treno di impulsi 80 MHz ha 30 nj di energia, ha una larghezza temporale di 140 fs, ed ha uno spettro centrata a 808 nm con una larghezza di banda spettrale di ~ 6 nm.
- Per evitare di back-riflessioni di rientrare nella cavità laser, la luce passa attraverso un isolatore Faraday. Un semionda piatto posto davanti l'isolatore di Faraday permette la sintonizzazione continua della potenza totale inviato nel sistema.
- Perché 6 nm è troppo ampia larghezza di banda per risolvere i modi di trasporto più Raman, il fascio viene inviato attraverso un molto stretto (0,8 nm FWHM, Andover Corporation, Salem, NH), filtro passa-banda centrata a 808 nm.
- La luce è poi focalizzata da un doppietto acromatico (f = 100 mm) su un 5 millimetri β-borato di bario (BBO) cristallo (CASIX, Fuzhou, Fujian, Cina) di dimezzare la lunghezza d'onda da 808-404 nm nm. Il cristallo BBO è posto in un monte con controlli punta e inclinazione, ed anche montato su un palcoscenico di traduzione. Per massimizzare l'efficienza della conversione lunghezza d'onda, il cristallo deve essere posta esattamente simmetriche rispetto al centro del doppietto, e con il suo asse di cristallo allineato alla polarizzazione del fascio in entrata.
- Perché l'efficienza della conversione lunghezza d'onda è la polarizzazione-dipendente, il controllo della quantità di luce inviata al campione può essere ottenuta con piazzando una seconda semionda piatto dopo l'isolatore di Faraday. Ruotando questo waveplate, l'intensità della luce inviata al campione può essere regolata in modo indipendente l'intensità del fascio trasmesso pompa (di cui parleremo più avanti).
- La lunghezza d'onda-luce è convertita recollimated da un doppietto acromatico secondo (f = 500 mm) scelto in modo che il fascio di uscita è abbastanza grande da riempire l'apertura posteriore dell'obiettivo microscopio, e diretto in un microscopio invertito (IX-71, Olympus, Center Valley, PA) per mezzo di due specchi di sterzo.
- L'obiettivo microscopio, essendo l'elemento ottico ospitato all'interno del componente più monolitica del sistema, definisce l'asse ottico. Per allineare il fascio di eccitazione a questo asse, uno specchio è inserito nel piano campione del microscopio. I due specchi di sterzo sono poi iterativamente sintonizzati osservando il back-riflesso fascio laser su un CCD cam-era (μEye, IDS, Obersulm, Germania) collegato alla porta di imaging del microscopio. Supponendo che l'immagine sulla fotocamera è incentrata sul microscopio campo di vista, il raggio è in asse, quando il punto focale è centrato sul chip microscopio e la traduzione degli obiettivi lungo l'asse z non cambia il punto centrale del fascio sfocata.
- Quando un campione è posto nel piano di campionamento e irradiati con luce laser scattering Raman si verifica. Un filtro dicroico posto sotto l'obiettivo microscopio separa la lunghezza d'onda in differita luce Raman sparsi (e fluorescenza) dal fascio di eccitazione, dirigendo la luce Raman sparsi per l'attacco laterale del microscopio. Il microscopio è stato modificato per rimuovere le lenti all'interno di questo percorso, in modo che la luce del segnale emerge dal microscopio collimato.
- Poiché il raggio del segnale che emerge dal microscopio è più grande l'apertura chiara del Glan-Thompson polarizzatori, un telescopio 0.47x composto da due doppietti acromatici (= 75 mm f1, f2 = 35 mm) viene utilizzato per ridurre il raggio.
- La luce del segnale viene poi polarizzato da un polarizzatore Glan-Thompson orientati a 0 ° rispetto alla verticale, nella cornice di laboratorio, e diretto a uno specchio dicroico dove viene ricombinato con il fascio di pompa.
3. Affinché il cancello ottico per operare al massimo dell'efficienza, è necessario prestare attenzione nella preparazione del fascio di pompa (Kerr fascio) pure.
4. Con i due fasci combinati, il cancello Kerr e il sistema di raccolta sono impostati per massimizzare il tempo-dipendenti raccolti segnale.
- Le travi pompa e segnale vengono prima passare attraverso un filtro dicroico che ha un diametro di 6 a 404 nm per evitare qualsiasi luce residua eccitazione da emozionanti scattering Raman all'interno del mezzo non lineare.
- La pompa e le travi del segnale sono poi entrambe focalizzate da un doppietto acromatico (f = 35 mm) in una cuvetta di 1 centimetro cammino ottico di quarzo contenente il materiale non lineare. Qualsiasi materiale non lineare con un alto indice opportunamente non lineare (superiore CS 2), opportunamente breve risposta temporale (<2 ps), possono essere utilizzati qui. Per questi esperimenti, usiamo disolfuro di carbonio, CS 2, che ha un indice non lineare n 2 = 3.1 x 10 -18 m 2 / W. La luce viene poi recollimated da un doppietto secondo con una lunghezza focale identico al primo.
- Le travi sono poi passati e Glan-Thompson analizzatore su un supporto rotante, e poi attraverso una serie di filtri di assorbimento e le interferenze che combinati hanno un diametro esterno di 10 a 808 nm.
- Infine, la luce del segnale è focalizzata da un doppietto acromatico (f = 35 mm) in un micron 50 fibra ottica multimodale, in cui è montato la fibra in una fase che permette la traduzione in x, y, z. La fibra viene poi accoppiato ad uno spettrografo di imaging commerciale con annesso CCD (SP2300i e Pixis 100B, rispettivamente, sia prodotto da Princeton Instruments, Trenton, NJ).
- Per allineare il sistema di raccolta per massimizzare il segnale raccolto, l'analizzatore è impostato a 0 ° e un campione di toluene viene inserito nel piano di campionamento. Regolando la x, y, z e controlli del monte fibra, il segnale raccolto Raman è ottimizzato.
- Per assicurare una corretta sovrapposizione spaziale e temporale della pompa e travi di segnale, uno specchio è inserito nel piano campione del microscopio. Il filtro di 404 nm viene rimosso dal sistema. Con l'analizzatore ruotato di 90 ° il fascio retroriflessa nm 404 è inviato nel spettrografo con l'intensità regolato in modo da non saturare la fotocamera. Con il fascio pompa spenta, l'analizzatore viene ruotato per ridurre al minimo la trasmissione del segnale nm 404. Con il fascio di pompa riaccesa, la fase di ritardo è sintonizzato lentamente fino a quando la trasmissione della luce 404 nm comincia ad aumentare. Allora, per iterativamente messa a punto la fase di ritardo, il piezoelettrico specchio, e la x, y, z e controlli della fibra, si massimizza il segnale.
- Poiché il retro-riflessa 404 nm e il fascio di luce Raman sparsi possono prendere strade leggermente diverse attraverso il sistema, le regolazioni finali sono realizzati mettendo una forte Raman diffusore (come il toluene) sul palco del campione e la messa a punto leggermente l'allineamento cambiando il fase di ritardo, piezeo elettrici specchio e controlli x, y, z della fibra di ottimizzare il segnale Raman.
5. Raccolta di un singolo time-gated spettro Raman richiede l'acquisizione di spettri diversi per correggere gli artefatti del sistema.
- Con l'analizzatore a 0 °, il fascio di eccitazione e la trave sulla pompa off, uno spettro "ungated" è tratto, che rappresenta lo spettro che sarebbero stati acquisiti senza il beneficio del tempo-gating sistema.
- Con l'analizzatore impostato a 90 °, il fascio di eccitazione e il fascio di pompa ancora fuori, un back-ground spettro è presa, che rappresenta la quantità di luce parassita che cola attraverso la polarizzatori e gli altri elementi del sistema.
- Con l'analizzatore rimanenti a 90 °e tutte le travi in poi, lo spettro di "gated" è tratto, che rappresenta la luce Raman sparsi consentito attraverso i polarizzatori attraversato dalla presenza del fascio di pompa.
- Infine, con l'analizzatore ancora a 90 °, il fascio di eccitazione fuori e il fascio di pompa, uno spettro di fondo secondo è preso, che rappresenta il contributo allo spettro di "gated" di somme residue di luce 808 nm entrare nel spettrografo.
- Inoltre, uno spettro è presa con tutti i laser spento, che caratterizzano il livello di base "oscura" il segnale della telecamera ed elettronica.
- Poiché gli spettri spesso richiedono lunghi tempi di integrazione, è indispensabile rompere questo tempo di integrazione in vari pezzi (fotogrammi) per consentire la correzione adeguata dei raggi cosmici - un problema comune quando l'acquisizione di dati su campate di diversi minuti.
6. Una volta acquisito, fasi di lavorazione diverse sono utili per migliorare la qualità e l'aspetto dei dati.
- In primo luogo, tutti gli spettri sono scure corretti sottraendo al largo spettro "dark".
- Per correggere i raggi cosmici, i diversi frame che costituisce una acquisizione sono confrontate tra di loro su un pixel-by-pixel. Per ogni pixel di ogni fotogramma che cade al di fuori di 2 deviazioni mediana dal valore medio per quel pixel su tutti i fotogrammi, valore pixel è sostituito dal valore medio su tutti i fotogrammi.
- Le cornici dei raggi cosmici vengono poi corretti media e levigate da un Savitzky-Golay filtro 1.
- Per estrarre lo spettro di "vero" gated, sottraiamo il "eccitazione-only" e "pompa-only" spettri dallo spettro misurato gated.
- Infine, gli spettri gated e ungated sono poi di fondo corretta sottraendo una 5 ° ordine polinomiale, determinato con il metodo di Lieber e Mahadevan-Jansen 2.
7. Rappresentante dei risultati:
Figura 1. Schema del sistema di gating Kerr. Il percorso del fascio pompa è mostrato in rosso, mentre il percorso SHG è mostrata in blu. Il percorso in cui si sovrappongono Raman e di fluorescenza viene evidenziato in verde, mentre il percorso in cui la fluorescenza è stata temporalmente filtrati è evidenziata in giallo. Abbreviazioni come segue: BPF, filtro passa banda, CCD, Charge-Coupled Device, DCM, specchio dicroico, FI, Faraday isolatore; λ / 2, onda piastra metà, LPF, filtro passa-tempo; NLM, non lineare media; P, polarizzatore ; SHG, cristallo generazione di seconda armonica.
Figura 2 Top:. Spettri gregge di cumarina disciolto in olio di immersione. Curva rossa mostra lo spettro prese con la porta tenuta aperta (analizzatore impostato per la massima trasmissione). Curva nera mostra lo spettro preso con l'analizzatore in linea per la trasmissione minima ed una pompa applicata fascio (lo spettro gated). Curva blu mostra l'spectum prese con l'analizzatore in linea per la trasmissione minimo e nessuna pompa fascio applicato (porta tenuta chiusa). Curva verde mostra lo spettro presa solo con il fascio di pompa applicata. Linee tratteggiate indicano magenta regione spettrale mostrata nel pannello in basso. Tutti gli spettri sono stati smussati con una punto 11, 3 ° ordine Savitzky-Golay filtro. In basso: spettri di cumarina disciolto in olio di immersione dopo fluorescenza di fondo sottrazione. Curva rossa è lo spettro con la porta tenuta aperta, e la curva blu è lo spettro gated. Lo spettro gated mostra chiaramente il contorto alto numero d'onda caratteristica di punta di oli.
Subscription Required. Please recommend JoVE to your librarian.
Discussion
Il campo della ricerca biomedica spettroscopia Raman ha visto un crescente interesse negli ultimi anni come risultato del suo potenziale dimostrata per risolvere diverse sfide difficili nella diagnostica biologica. Per esempio, spettri Raman hanno dimostrato di avere valore diagnostico nel cancro della rilevazione 3, 4, 5, 6. Spettroscopia Raman è stata utilizzata anche nella quantificazione batterica 7, 8 e risposta ai farmaci dei batteri 9. Inoltre ha trovato applicazione in una vasta gamma di altre applicazioni biomediche che vanno dalla salute delle ossa 10 a biofluid analisi 11, 12.
Nonostante un grande potenziale, tuttavia, la spettroscopia Raman è una barriera troppo grande per entrare nella maggior parte dei sistemi biologici: la sua estrema debolezza sezione trasversale. Pertanto, i segnali Raman può essere facilmente sopraffatti da sfondo anche abbastanza modesto fluorescenti. Esistono molte tecniche per la rimozione della fluorescenza LineShape 2, 13, 14. Tuttavia, nessuna di queste tecniche veramente affrontare il problema principale con forte background fluorescente, il tiro-rumore contribuito allo spettro per la presenza del travolge sfondo fluorescente il segnale Raman e non può essere sottratto distanza. Diverse tecniche, come ad esempio coerente anti-Stokes spettroscopia Raman (CARS) e scattering Raman stimolato (o inverso scattering Raman), sono stati sviluppati per cercare di amplificare la potenza del segnale Raman 15, 16, 17. Tuttavia, tutte queste tecniche sono principalmente applicabile a campioni trasparenti ed hanno i loro sfondi personali e problemi di sensibilità chimica 18.
Schermatura il rilevatore dal segnale di fluorescenza è l'unico modo per rifiutare veramente il rumore shot associato alla fluorescenza di fondo in spontaneo scattering Raman. Oltre un decennio fa, Matousek et al. dimostrato rifiuto fluorescenza utilizzando un otturatore ultraveloci Kerr per isolare temporaneamente segnali Raman e di fluorescenza 19, 20. Tuttavia, ad oggi, questo sistema non ha trovato ampio utilizzo in campo biologico a causa della necessità per le energie impulsi eccessivamente elevati. Il sistema presentato in questa comunicazione, al contrario, utilizza 1000 volte energie impulso più debole di alcuni rapporti precedenti ed è compatibile con i sistemi biologici.
Il nostro sistema, mostrato nella Figura 1 utilizza una geometria collineari Kerr cancello per risparmiare energia e fornire, come si sovrappongono molto tra la pompa e le travi del segnale all'interno del mezzo non lineare possibile. Inoltre, ci prendiamo cura per ridurre le perdite ottiche il più possibile per assicurare che abbiamo la massima potenza disponibile ad operare i nostri otturatore Kerr. Utilizzando questo sistema abbiamo ottenuto spettri Raman di campioni biologici altamente fluorescenti, vale a dire un staminali vegetali Jasmine, senza l'osservazione di qualsiasi fotodanneggiamento 21. In questo rapporto ci mostrano alcuni dati rappresentativi su un sistema modello di un fluoroforo a base vegetale (cumarina, τF ≈ 5 ns) disciolto in olio microscopio a immersione. Questo è mostrato nella Figura 2. Nel pannello in alto, vediamo la forte spettro "ungated" (impostato analizzatore a 0 °) in rosso, scalata a 0,04% del suo valore massimo per fini di visualizzazione. Si noti che non vi siano picchi distinguibili Raman visibile. Sotto, in nero, è lo spettro grezzo gated (cioè lo spettro sia con pompa e eccitazione laser via). Sotto, in blu, è lo spettro con il solo laser di eccitazione in poi, in rappresentanza fluorescenza residua perdita attraverso i polarizzatori incrociati. Infine, nel verde, si vede lo sfondo per il laser della pompa che perde attraverso la combinazione di Filtri assorbimento e l'interferenza posto nel sistema. Nel pannello inferiore della figura 2 vediamo una sub-regione dello spettro ungated e gated (regione indicata da linee tratteggiate magenta nel pannello superiore) dopo la sottrazione di un polinomio 5 ° ordine. Lo spettro gated mostra chiaramente il picco alto numero d'onda associata a lipidi, mentre lo spettro ungated non ha caratteristiche chiare Raman.
Anche se il nostro sistema non funziona con effciency grande momento (la trasmissione maxiumum misurato è stato intorno al 5%), ampiezza del segnale è di solito meno importante segnale-rumore. Ci sono diversi ampie classi di campioni biologici per i quali la misurazione convenzionali spettri Raman può essere difficile o impossibile a causa della schiacciante sfondi fluorescenza. Per questi campioni, il nostro sistema in grado di fornire un preciso segnale-rumore di miglioramento, come si vede chiaramente nella Figura 2.
Subscription Required. Please recommend JoVE to your librarian.
Disclosures
Nessun conflitto di interessi dichiarati.
Acknowledgments
Questo lavoro è stato finanziato dalla NSF premio DBI 0852891. Parte di questo lavoro è stato anche finanziato dal Centro per Biofotonica Scienza e della Tecnologia, un designato NSF Science and Technology Center gestito dalla University of California, Davis, ai sensi del Contratto Cooperative n. PHY0120999.
Materials
| Name | Company | Catalog Number | Comments |
| Lenses | Thorlabs Inc. | Various | All lenses coated to have maximum transmission losses of 1% each |
| Tunable Ti:Sapph laser | Coherent Inc. | Chameleon | 30 nJ, 200 fs, 80 MHz |
| 40X oil immersion objective | Olympus Corporation | UApo/340 | NA = 1.35 |
| Inverted microscope | Olympus Corporation | IX-71 | Modified to remove all lenses in side port |
| Half wave plate | Thorlabs Inc. | AHWP05M-600 | |
| Glan-Thompson polarizer | Thorlabs Inc. | GTH10M | ∼10% transmission loss |
| Spectrometer | Princeton Instruments/Acton | SP2300i | |
| CCD | Princeton Instruments/Acton | Pixis 100B | |
| Mathmatical software | Mathworks | MATLAB | version 2008a |
| Faraday isolator | EOT | BB8-5I | |
| Piezo-electric mirror | Newport Corp. | AG-M100 | |
| BBO crystal | CASIX | custom | 1 mm thickness |
| Bandpass filter 1 | Andover | 008FC14 | 808 ± 0.4 nm |
| Dichroic mirror | Semrock | FF662-FDI01 | band edge at 662 nm |
| Long-pass filter | Semrock | BLP01-405R | band edge at 417 nm |
| Bandpass filter 2 | Semrock | FF02-447/60 | 417-447 nm |
| CS2 | Sigma-Aldrich | 335266 | 99% purity |
| Coumarin 30 | Sigma-Aldrich | 546127 | 99% purity |
| Immersion oil | Cargill Labs | 16242 | Type DF |
References
- Savitzky, A., Golay, M. J. E. Smoothing and differentiation of data by simplified least squares procedures. Analytical Chemistry. 36, 1627-1639 (1964).
- Lieber, C. A., Mahadevan-Jansen, A. Automated method for subtraction of fluorescence from biological Raman spectra. Applied Spectroscopy. 57, 1363-1367 (2003).
- Gniadecka, M. Melanoma diagnosis by Raman spectroscopy and neural networks: Structure alterations in proteins and lipids in intact cancer tissue. Journal of Investiga-tive Dermatology. 122, 443-449 (2004).
- Lieber, C. A., Majumder, S. K., Billheimer, D., Ellis, D. L., Mahadevan-Jansen, A. Raman microspectroscopy for skin cancer detection in vitro. Journal of Biomedical Optics. 13, 024013-024013 (2008).
- Chen, K., Qin, Y., Zheng, F., Sun, M., Shi, D. Diagnosis of colorectal cancer using Raman spectroscopy of laser-trapped single living epithelial cells. Optics Letters. 31, 2015-2017 (2006).
- Chan, J. W. Nondestructive identification of individual leukemia cells by laser trapping Raman spectroscopy. Analytical Chemistry. 80, 2180-2187 (2008).
- Zhu, Q. Y., Quivey, R. G., Berger, A. J. Measurement of bacterial concentration fractions in polymicrobial mixtures by Raman microspectroscopy. Journal of Biomedical Optics. 9, 1182-1186 (2004).
- Rösch, P. Chemotaxonomic identification of single bacteria by micro-Raman spectroscopy: Application to clean-room-relevant biological contaminations. Applied and Environmental Microbiology. 71, 1626-1637 (2005).
- Moritz, T. J. Raman spectroscopic signatures of the metabolic states of escherichia coli cells and their dependence on antibiotics treatment. Biophysical Journal. 98, 742a-742a (2010).
- Dehring, K. A. Identifying chemical changes in subchondral bone taken from murine knee joints using Raman spectroscopy. Applied Spectroscopy. 60, 1134-1141 (2006).
- Berger, A. J., Koo, T. W., Itzkan, I., Horowitz, G., Feld, M. S. Multicomponent blood analysis by near-infrared Raman spectroscopy. Applied Optics. 38, 2916-2926 (1999).
- Qi, D., Berger, A. J. Chemical concentration measurement in blood serum and urine samples using liquid-core optical fiber Raman spectroscopy. Applied Spectroscopy. 46, 1726-1734 (2007).
- Beier, B. D., Berger, A. J. Method for automated background subtraction from Raman spectra containing known contaminants. The Analyst. 134, 1198-1202 (2009).
- De Luca, A. C., Mazilu, M., Riches, A., Herrington, C. S., Dholakia, K. Online fluorescence suppression in modulated Raman spectroscopy. Analytical Chemistry. 82, 738-745 (2010).
- Evans, C. L. Chemical imaging of tissue in vivo with video-rate coherent anti-Stokes Raman scattering microscopy. Proceedings of the National Academy of Sciences of the United States of America. 102, 16807-16812 (2005).
- Jones, W. J., Stoiche, Inverse raman spectra: Induced absorption at optical frequencies. Physical Review Letters. 13, 657-659 (1964).
- Freudiger, Label-Free et Imaging with High Sensitivity by Stimulated Raman Scattering Microscopy. Science. 322, 1857-1861 (2008).
- Cui, M., Bachler, B. R., Ogilvie, J. P. Comparing coherent and spontaneous Raman scattering under biological imaging conditions. Optics Letters. 34, 773-775 (2009).
- Matousek, P., Towrie, M., Stanley, A., Parker, A. W. Efficient rejection of fluorescence from Raman spectra using picosecond Kerr gating. Applied Spectroscopy. 53, 1485-1489 (1999).
- Matousek, P. Fluorescence suppression in resonance Raman spectroscopy using a high-performance picosecond Kerr gate. Journal of Raman Spectroscopy. 32, 983-988 (2001).
- Knorr, F., Smith, Z. J., Wachsmann-Hogiu, S. Development of a time-gated system for Raman spectroscopy of biological samples. Optics Express. 18, 20049-20058 (2010).
