Summary
Neste vídeo, descrevemos um método para imagens de células vivas de células em divisão assimétrica órgão sensorial progenitoras e células epidérmicas em intacta
Abstract
Desde a descoberta da proteína verde fluorescente (GFP), tem havido uma mudança revolucionária no uso de live-imaging celular como uma ferramenta para a compreensão de mecanismos biológicos fundamentais. Progresso notável tem sido particularmente evidente em Drosophila, cuja extensa toolkit de mutantes e linhagens transgênicas fornece um modelo conveniente para estudar evolutivamente conservada de desenvolvimento e de células mecanismos biológicos. Estamos interessados na compreensão dos mecanismos que controlam a especificação de destino das células no sistema nervoso periférico de adultos (PNS) em Drosophila. Cerdas que cobrem a cabeça, tórax, abdômen, pernas e asas da mosca adulta são individuais órgãos mecanosensorial, e têm sido estudados como um sistema modelo para entender os mecanismos de Notch dependentes de decisões destino da célula. Sensoriais órgão precursor (SOP) células do microchaetes (ou pequeno cerdas), estão distribuídos por todo o epitélio do tórax pupal, e são especificados durante as primeiras 12 horas após o início da pupariation. Após a especificação, as células começam a se dividir SOP, segregando o determinante destino celular Numb para uma célula filha durante a mitose. Funções Numb como um inibidor de células-autônoma da via de sinalização Notch.
Aqui, mostramos um método para acompanhar a dinâmica de proteínas na célula SOP e sua progênie dentro do tórax intacto pupal usando uma combinação de tecido-específicos Gal4 motoristas e GFP-tagged fusão 1,2 proteínas. Esta técnica tem a vantagem sobre o tecido fixo ou cultivadas explantes, pois nos permite acompanhar todo o desenvolvimento de um órgão de especificação das precursoras neurais para o crescimento e diferenciação terminal do órgão. Podemos, portanto, correlacionar diretamente as mudanças no comportamento de células de alterações na diferenciação terminal. Além disso, podemos combinar a técnica de imagem ao vivo com a análise de mosaico com um marcador de células repressor (MARCM) do sistema para avaliar a dinâmica de proteínas marcado em SOPs mitótica em condições mutante ou tipo selvagem. Usando esta técnica, nós e outros revelaram percepções romance em regulação da divisão celular assimétrica eo controle da ativação de sinalização Notch em células SOP (exemplos incluem referências 1-6,7, 8).
Protocol
Discussion
Disclosures
Não há conflitos de interesse declarados.
Acknowledgments
Materials
| Name | Company | Catalog Number | Comments |
| Scotch double stick tape | |||
| Glass slide | |||
| 18mmX18mm coverslip | |||
| Forceps | |||
| Whatman paper | |||
| Silicone vacuum grease | Dow Corning | ||
| 5 ml syringe | |||
| Pipetter | |||
| Confocal or epifluorescence microscope |
References
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