Summary
Bu video, canlı hücre görüntüleme asimetrik sağlam duyu organı progenitör hücreleri ve epidermal hücrelerin bölünmesi için bir metodu tanımlar:
Abstract
Yeşil Floresan Protein (GFP) keşfi bu yana, temel biyolojik mekanizmaları anlamak için bir araç olarak canlı hücre görüntüleme devrimci bir değişiklik olmamıştır. Çarpıcı bir ilerleme olan geniş araç mutantlar ve transgenik hatları evrimsel olarak korunmuş gelişimsel ve hücre biyolojik mekanizmaları incelemek için uygun bir model sunar Drosophila, özellikle belirgin olmuştur. Drosophila yetişkin periferik sinir sistemi (PNS) kontrol hücre kaderinin özellikleri kapak kafa, toraks, karın, bacak ve yetişkin sineğin kanat bireysel mechanosensory organlar olduğunu kıllar ve çalışılmıştır mekanizmalarının anlaşılması ile ilgilenen Notch bağımlı hücre kaderinin kararları mekanizmaları anlamak için bir model sistem olarak. Microchaetes (veya küçük kıllar) duyu organı habercisi (SOP), pupa toraks epitel hücreleri boyunca dağıtılır ve pupariation başlamasından sonra ilk 12 saat içinde belirtilmiştir. Şartname sonra, mitoz sırasında bir yavru hücre Numb hücre kaderini belirleyici ayırma, SOP hücreler bölünmeye başlar. Notch sinyalizasyon yolağı hücre özerk bir inhibitörü olarak Numb fonksiyonları.
Burada, bir arada kullanarak, sağlam pupa toraks içinde SOP hücre ve onun nesillerinde protein dinamikleri takip etmek bir yöntem doku-spesifik Gal4 sürücüleri ve GFP etiketli füzyon proteini 1,2. Bu teknik, sabit bir doku veya kültür üzerinden avantaja sahiptir eksplantlar bu şartname nöral prekürsör büyüme ve organ terminal farklılaşma bir organ bize tüm gelişmeleri takip sağlar çünkü. Bu nedenle doğrudan terminal farklılaşma değişiklikler hücre davranış değişiklikleri ilişkilendirmek. Ayrıca, mutant ve wild tip koşullar altında mitotik SOP etiketli proteinlerin dinamikleri değerlendirmek için bir repressible hücre işaretleyici (MARCM) sistemi ile canlı görüntüleme tekniği mozaik analizi ile birleştirebilirsiniz. Bu tekniği kullanarak, biz ve diğerleri, düzenlenmesi ve asimetrik hücre bölünmesi SOP hücreleri (örnekler referans 1-6,7, 8) Notch sinyal aktivasyon kontrol yeni bakış açıları ortaya çıkmıştır .
Protocol
Discussion
Disclosures
Çıkar çatışması ilan etti.
Acknowledgments
Materials
| Name | Company | Catalog Number | Comments |
| Scotch double stick tape | |||
| Glass slide | |||
| 18mmX18mm coverslip | |||
| Forceps | |||
| Whatman paper | |||
| Silicone vacuum grease | Dow Corning | ||
| 5 ml syringe | |||
| Pipetter | |||
| Confocal or epifluorescence microscope |
References
- Gho, M., Bellaiche, Y., Schweisguth, F. Revisiting the Drosophila microchaete lineage: a novel intrinsically asymmetric cell division generates a glial cell. Development. 126, 3573-3584 (1999).
- Roegiers, F., Younger-Shepherd, S., Jan, L. Y., Jan, Y. N. Two types of asymmetric divisions in the Drosophila sensory organ precursor cell lineage. Nat Cell Biol. 3, 58-67 (2001).
- Bellaiche, Y., Gho, M., Kaltschmidt, J. A., Brand, A. H., Schweisguth, F. Frizzled regulates localization of cell-fate determinants and mitotic spindle rotation during asymmetric cell division. Nat Cell Biol. 3, 50-57 (2001).
- Emery, G., Knoblich, J. A.
- Roegiers, F., Younger-Shepherd, S., Jan, L. Y., Jan, Y. N. Bazooka is required for localization of determinants and controlling proliferation in the sensory organ precursor cell lineage in Drosophila. Proc Natl Acad Sci U S A. 98, 14469-14474 (2001).
- Roegiers, F. Frequent unanticipated alleles of lethal giant larvae in Drosophila second chromosome stocks. Genetics. 182, 407-410 (2009).
- Tong, X. Numb independently antagonizes Sanpodo membrane targeting and Notch signaling in Drosophila sensory organ precursor cells. Mol Biol Cell. 21, 802-810 (2010).
- Jafar-Nejad, H. Sec15, a Component of the Exocyst, Promotes Notch Signaling during the Asymmetric Division of Drosophila Sensory Organ Precursors. Dev Cell. 9, 351-363 (2005).
- Karbowniczek, M. The evolutionarily conserved TSC/Rheb pathway activates Notch in tuberous sclerosis complex and Drosophila external sensory organ development. J Clin Invest. 120, 93-102 (2010).
- Coumailleau, F., Furthauer, M., Knoblich, J. A., Gonzalez-Gaitan, M. Directional Delta and Notch trafficking in Sara endosomes during asymmetric cell division. Nature. 458, 1051-1055 (2009).
- Emery, G. Asymmetric rab11 endosomes regulate delta recycling and specify cell fate in the Drosophila nervous system. Cell. 122, 763-773 (2005).
- Justice, N., Roegiers, F., Jan, L. Y., Jan, Y. N. Lethal giant larvae acts together with numb in notch inhibition and cell fate specification in the Drosophila adult sensory organ precursor lineage. Curr Biol. 13, 778-783 (2003).
