Summary
हम प्रचार और अन्तर्जनस्तर और डोपामिनर्जिक न्यूरॉन्स (डीए) को भ्रूण स्टेम कोशिकाओं की भिन्नता के लिए एक प्रभावी 3D मंच के रूप में एक microencapsulation तकनीक अनुकूलित किया. यह भी प्रतिरक्षा कोशिकाओं के प्रत्यारोपण के दौरान मेजबान से अलगाव के लिए एक अवसर प्रदान करता है. इस मंच के अन्य प्रकार की कोशिकाओं के लिए अनुकूलित किया जा सकता है.
Protocol
नीचे सभी प्रक्रियाओं की एक द्वितीय श्रेणी जैवसुरक्षा मंत्रिमंडल के अंदर बाहर किया जाता है सड़न रोकनेवाला तकनीक का उपयोग कर. अभिकर्मकों और उपकरणों का इस्तेमाल किया नीचे दी गई तालिका में सूचीबद्ध हैं.
1. (W / वी) 1.1% Alginate की तैयारी
- सोडियम alginate शुद्ध .275 छ जोड़ें (उच्च glucuronic एसिड ≥ 60% सामग्री, दलदलापन> 200 MPa है, और अन्तर्जीवविष ≤ 100 यूरोपीय संघ / छ) और एक बाँझ 50 मिलीलीटर ट्यूब में 25 मिलीलीटर बाँझ 0.1% जेलाटीन पहले तैयार समाधान (0.5g जोड़ें gelatin/500 मिलीलीटर milli क्यू एच 2 हे और द्वारा भंग वाष्पदावी विसंक्रण).
- लगभग 30 सेकंड के लिए आंशिक रूप से alginate पाउडर भंग करने के लिए ट्यूब भंवर तो एक कक्षीय मिक्सर पर रात भर के लिए 10 XG में ट्यूब (कमरे के तापमान) जगह है.
- 9% बाँझ NaCl (4.5 NaCl/50 मिलीलीटर milli क्यू एच 2 हे छ) की 2.778 मिलीग्राम से alginate समाधान की 25 मिलीलीटर जोड़ें. लगभग 30 सेकंड के लिए 5 मिनट के लिए 95 XG पर centrifugation ट्यूब भंवर.
- 4 में alginate समाधान स्टोर °अल्पकालिक भंडारण (1-2 महीने) के लिए या -20 डिग्री सेल्सियस पर लंबी अवधि के भंडारण (एक वर्ष के बारे में) के लिए सी.
2. CaCl 2 वर्षा स्नान की तैयारी
- Milli क्यू एच 2 ओ 1 लीटर में 2 CaCl की 14.7 छ 2H 2 हे. और HEPES की 2.38 ग्राम भंग
- 7.4 के पीएच स्तर को समायोजित करें.
- एक .22 माइक्रोन फिल्टर का उपयोग कर समाधान जीवाणुरहित.
- तेज़ी स्नान कमरे के तापमान (6-12 महीने) में संग्रहीत किया जा सकता है.
3. समाधान Decapsulating की तैयारी
- 500 मिलीलीटर में Dulbecco फास्फेट के बफर Saline (डी पीबीएस), 0.5m EDTA के 50 मिलीलीटर और 1M HEPES की 5 मिलीलीटर जोड़ें.
- 20 मिनट के लिए एक .22 माइक्रोन फिल्टर या 121 पर आटोक्लेव डिग्री सेल्सियस का उपयोग जीवाणुरहित.
- कमरे के तापमान (6-12 महीने) में decapsulating समाधान स्टोर.
4. सीरम रिप्लेसमेंट मध्यम (आर) की तैयारी
- पहले encapsulation के अग्रिम में डी के रूप में एसआर मध्यम तैयारविशिष्ट अभिकर्मकों और उपकरणों की तालिका में मानते है.
5. रॉक एफडीए की तैयारी (वाई 27,632)
- 0.1% डी पीबीएस में मानव albumin सीरम (HSA) एक 5 मिमी समाधान करने के लिए वाई - 27,632 पाउडर पतला.
6. HESC की इनकैप्सुलेशन के लिए तैयार
- पूर्व संवर्धन मीडिया के साथ दो घंटे में 37 डिग्री सेल्सियस (प्रकाश से बचाने के) लिए रॉक अवरोध करनेवाला (आरआई) के 10 माइक्रोन के साथ पूरक कोशिकाओं का इलाज.
- आरआई उपचार के बाद, डी पीबीएस के साथ कोशिकाओं को दो बार धोने और संस्कृति प्लेटों से कोशिकाओं को जगह देना enzymatically 37 डिग्री सेल्सियस पर 10 मिनट के लिए accutase साथ
- धीरे विंदुक या सेल खुरचनी के साथ कोशिकाओं के परिमार्जन और एक 15 मिलीलीटर ट्यूब में इकट्ठा. 1:1 के अनुपात में एसआर मध्यम के साथ accutase बेअसर.
- एक एकल कोशिका निलंबन तैयार, निष्प्रभावी कोशिकाओं को एक 40 माइक्रोन फिल्टर का उपयोग कर फ़िल्टर और एक ताजा 50 मिलीलीटर अपकेंद्रित्र ट्यूब में इकट्ठा.
- Hemacytometer का उपयोग कर समाधान में कोशिकाओं की कुल संख्या की गणना. सेल निलंबन 5 मिनट के लिए 95 XG अपकेंद्रित्र और ध्यान से सतह पर तैरनेवाला त्यागने के बाद. पूर्व गर्म NaCl 0.9% के साथ कोशिकाओं को धो लें. 5 मिनट के लिए 95 XG अपकेंद्रित्र और सतह पर तैरनेवाला त्यागने.
7. कोशिकाओं के encapsulation
- एक 1 मिलीलीटर सिरिंज 14G x 2 "चतुर्थ कैथेटर के एक नरम प्लास्टिक टयूबिंग से जुड़ी तैयार इस सेल पर सिरिंज पंप करने के लिए लोड किया जा के रूप में चित्र 1 में दिखाया गया निलंबन महाप्राण (व्यंजन) के लिए प्रयोग किया जाता है.
- 1,25 मिलियन कोशिकाओं / मिलीलीटर alginate की एक घनत्व पर पूर्व गर्म alginate समाधान के साथ कोशिकाओं Resuspend. धीरे से सिरिंज साथ मिश्रण और बुलबुले बनाने से बचें.
- मनका जनरेटर, सिरिंज पंप और हवा का प्रवाह मीटर सेट के रूप में चित्र 1 में दिखाया गया है. इन उपकरणों का अधिक जानकारी के विशिष्ट अभिकर्मकों और उपकरणों की टेबल में सूचीबद्ध हैं.
- सिरिंज में से aspirated कोशिकाओं के साथ, चतुर्थ कैथेटर प्लास्टिक टयूबिंग त्यागें और encapsulation के मशीन के लिए सिरिंज देते हैं. सुनिश्चित करें कि वहाँ एक 10 सेमी अंतर हो जाता है के बीच encapsulation के मशीन के अंत और संग्रह बिंदु के रूप में चित्र 1 में दिखाया.
- 8 एल / मिनट में 20 मिलीग्राम / घंटा, हवा का प्रवाह दर और 100 kPa (कैप्सूल के आकार हवा प्रवाह की दर बदलने के द्वारा बदला जा सकता है) के दबाव में सिरिंज पंप की स्थापना द्वारा कोशिकाओं encapsulate करने के लिए.
- एक पेट्री डिश (100 x 15 मिमी) पूर्व गर्म कैप्सूल को स्थिर करने के लिए 7 मिनट के लिए वर्षा स्नान के 20 मिलीग्राम के साथ भर में समझाया कोशिकाओं को ले लीजिए.
- कोमल आकांक्षा द्वारा 50 मिलीलीटर 0.9% NaCl के 20 मिलीग्राम के साथ भरे अपकेंद्रित्र ट्यूबों में समझाया कोशिकाओं स्थानांतरण.
- कैप्सूल ट्यूब के तल में व्यवस्थित करने के लिए अनुमति दें तो धीरे सतह पर तैरनेवाला त्यागने. 0.9% NaCl के साथ कपड़े धोने की प्रक्रिया को दोहराएँ.
- पूर्व गर्म संवर्धन (10 माइक्रोन) आरआई, हस्तांतरण के साथ एक संस्कृति फ्लास्क में पूरक और 37 ° / सी 5% सीओ 2 में incubated रहे मध्यम में समझाया कोशिकाओं Resuspend.
8. डीए न्यूरॉन्स की एनकेप्सुलेटेड hESC भेदभाव
> ve_content समझाया hESC भेदभाव करने के लिए पहले 3 दिनों के लिए आरआई के साथ व्यवहार कर रहे हैं.- बीज माउस stromal सेल लाइन, 1.0 x 4 10 2 सेमी प्रति 0.1% में जिलेटिन में लिपटे T75 कुप्पी और डीए भेदभाव से पहले 24 घंटे तंत्रिका भेदभाव मध्यम (सामग्री तालिका) में PA6 कोशिकाओं हालत. के घनत्व में PA6 कोशिकाओं
- एक 50 मिलीलीटर अपकेंद्रित्र ट्यूब कैप्सूल स्थानांतरण और उन्हें ट्यूब के तल में व्यवस्थित करने के लिए अनुमति देते हैं.
- सतह पर तैरनेवाला त्यागें और PA6 सेल वातानुकूलित डीए तंत्रिका भेदभाव मध्यम में कैप्सूल resuspend.
- उसके बाद PA6 4 दिन एक मीडिया परिवर्तन और हर दूसरे दिन के साथ 28 दिनों के लिए सेल monolayer (9 एक्स 10 प्रति 7.5 x 10 5 PA6 कोशिकाओं 6 hESCs) के साथ समझाया hESC संस्कृति (मध्यम प्रत्येक समय का केवल आधा बदल).
- में PA6 कोशिकाओं के साथ संस्कृति में 3 सप्ताह के बाद, 100 एनजी / एमएल श और 100 एनजी / शेष सप्ताह मिलीलीटर FGF8a के साथ डीए तंत्रिका भेदभाव मध्यम पूरक.
9. एनकेप्सुलेटेड hESC की decapsulation
- एक 15 मिलीलीटर अपकेंद्रित्र ट्यूब में कैप्सूल महाप्राण (व्यंजन) और उन्हें ट्यूब के तल पर व्यवस्थित करने के लिए अनुमति देते हैं. तो ध्यान से सतह पर तैरनेवाला त्यागने.
- डी पीबीएस के साथ कैप्सूल दो बार से धो लें. फिर सतह पर तैरनेवाला हटाने के कैप्सूल ट्यूब के नीचे बसा है.
- 5 मिलीलीटर decapsulating कैप्सूल का हल जोड़ें. निलंबन आकांक्षा के माध्यम से अच्छी तरह से मिश्रण को 4-5 मिनट के लिए कमरे के तापमान पर ऊष्मायन के लिए पहले.
- 3 मिनट के लिए 95 XG पर Decapsulated कोशिकाओं अपकेंद्रित्र और सतह पर तैरनेवाला त्यागने.
- डी पीबीएस के साथ सेल गोली 3 मिनट के लिए 95 XG पर centrifugation द्वारा पीछा धो लें. दोहराएँ.
- Decapsulated कोशिकाओं आगे एक monolayer के रूप में सुसंस्कृत या बहाव के विश्लेषण के लिए इस्तेमाल किया जा सकता है.
10. प्रतिनिधि परिणाम
alginate microcapsules का व्यास 400-500 माइक्रोन है. कैप्सूल के भीतर कोशिकाओं की संख्या estimat थारन प्रति कैप्सूल की कुल संख्या से विभाजित कोशिकाओं की कुल संख्या की गणना के द्वारा एड. इसलिए, 5.0 लगभग एक्स 10 प्रति कैप्सूल 4 कोशिकाओं का अनुमान लगाया गया था. इस से, हम अनुमान है कि कोशिकाओं कैप्सूल शामिल कर सकते हैं की अधिकतम संख्या 1.0 लगभग x 10 5 है. समझाया hESC की व्यवहार्यता> 80% (चित्रा 2) के रूप में carboxyfluorescein diacetate succinimidly (CFDA) एस्टर / propidium के आयोडाइड PI () परख का उपयोग कर का उपयोग करके निर्धारित है. हम alginate एकाग्रता कम 2.2% से 1.1% नीचे से और तेज़ी से बेरियम क्लोराइड कैल्शियम क्लोराइड स्नान बदलकर hESC encapsulation के की शर्तों को अनुकूलित किया है. इन स्थितियों से, हम पता चला है कि केवल कोशिकाओं जो 1.1% कैल्शियम alginate के साथ समझाया गया बच सकता है पैदा करना, और इन विट्रो में 1 ईबीएस के रूप में. आगे हालत अनुकूलन, संवर्धन मीडिया और आरआई के प्रभाव, वाई 27,632 जांच की गई. चित्रा 2 और 3 में प्रस्तुत डेटा के रूप में प्रदर्शित कि आरआई prevente केघ apoptosis के पृथक्करण प्रेरित और सेल व्यवहार्यता और में पदोन्नत क्लस्टर 1,6 गठन बनाए रखा. इसके अलावा, समझाया HFF मुख्यमंत्री + आरआई में सभ्य hESC की व्यवहार्यता आरआई अनुपूरण के बिना अन्य समूहों की तुलना में काफी अधिक थी, लेकिन यह काफी समझाया एसआर + आरआई में सभ्य hESC के लिए अलग नहीं था. इसी तरह, सेल प्रसार BrdU परख का उपयोग एकल समूहों (चित्रा 3) के रूप में विकसित कोशिकाओं के रूप में 25% से 75% की वृद्धि हुई है. TUNEL द्वारा apoptosis परख से पता चला है कि एसआर मध्यम में सभ्य microcapsules में एकल कक्षों apoptotic (नहीं दिखाया डेटा) जबकि HFF मुख्यमंत्री से पुनः प्राप्त समूहों TUNEL के लिए ज्यादातर नकारात्मक थे. एक निश्चित सीमा तक, bFGF साथ पूरक HFF - मुख्यमंत्री भी अस्तित्व और वाई 27,632 के अभाव में समझाया hESCs के प्रसार को बढ़ावा दिया. (2 घंटे) पहले वाई 27,632 के साथ इलाज और encapsulation के बाद हालांकि, एक अतिरिक्त 4 दिनों के लिए स्पष्ट रूप से बढ़ाया व्यवहार्यता का प्रसार, और समझाया hESC के क्लस्टर गठनमें 1.1% कैल्शियम alginate microcapsules.
पहले हम दिखा दिया है कि समझाया hESC सफलतापूर्वक निश्चित एक अन्तर्जनस्तर करने के लिए भेदभाव किया जा सकता है. यहाँ, हम एक 3 डी डीए न्यूरॉन्स में समझाया hESC अंतर मंच के रूप में सेल encapsulation के आवेदन की जांच की. hESC, कि कैप्सूल में embryoid निकायों (EB) का गठन विभेदित प्रत्यक्ष थे और वर्णित शर्तों के तहत decapsulation पर एक प्रगतिशील neuronal आकारिकी से पता चला है (चित्रा 4) 90% से अधिक व्यवहार्यता के साथ संस्कृति के 2-3 दिनों के बाद. जीन अभिव्यक्ति विश्लेषण एक pluripotent मार्कर के नीचे विनियमन, Oct4 से पता चला है जबकि neuroprogenitor मार्कर, PAX6 की और डीए neuronal मार्कर, वें भेदभाव के 7 दिनों के बाद (चित्रा 5A) विनियमित थे. Immunofluorescent धुंधला से पता चला है कि विभेदित hESC 7 दिन में (> 80%) PAX6 सकारात्मक लेकिन Oct4 नकारात्मक थे. इसके अलावा विभेदित hESC वें पॉजिटिव (> 90%) के 21 दिनों के बाद न्यूरॉन्स (चित्रा 5 ब) से पता चला. पश्चिमी धब्बा विश्लेषण में यह भी पता चला हैएक दिन से 14 वें अभिव्यक्ति के विनियमन (चित्रा 5C) जबकि PAX6 अभिव्यक्ति 21 दिन के बाद नीचे विनियमित. इसकी तुलना में, कोशिकाओं को इसी तरह की शर्तों के तहत दो - आयामी (2 डी) पर्यावरण के तहत संवर्धित (उदाहरण के लिए 3 दिनों के लिए 2 घंटे और आरआई के बाद इलाज के लिए पूर्व उपचार भेदभाव करने के लिए पहले आरआई) PAX6 पॉजिटिव कोशिकाओं के एक उच्च प्रतिशत बनाए रखा (> 80 % भेदभाव अवधि के दौरान) और के रूप में के रूप में 3 डी वातावरण में encapsulation के (चित्रा 5 ए और सी) द्वारा प्रदान वें पॉजिटिव कोशिकाओं (<60%) के लिए फर्क करने में कुशल नहीं थे.
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Discussion
कई माउस भ्रूणीय स्टेम कोशिकाओं और hESC का उपयोग अध्ययन biomaterials और ऊतक इंजीनियरिंग 2,3 में 3 डी संस्कृति प्रणाली के लाभ का प्रदर्शन किया है. हम एक उपयुक्त 3 डी मंच के रूप में बेरियम alginate की तुलना में hESC प्रचार और भेदभाव का अध्ययन के बाद hESC महत्वपूर्ण उच्च व्यवहार्यता का पता चला जब बेरियम alginate से कैल्शियम alginate में समझाया कैल्शियम alginate microcapsules का इस्तेमाल किया. इस संस्कृति प्रणाली भी उच्च घनत्व एक सेल संस्कृति और 7 झिल्ली भर में पोषक तत्वों और ऑक्सीजन का आदान - प्रदान की अनुमति देता है. कैप्सूल के भीतर सहज भेदभाव पहले देखा गया है और यह माना जाता है कि के रूप में undifferentiated hESC कैप्सूल के भीतर पैदा जारी, कोशिकाओं अंततः कैप्सूल और प्रपत्र 1 teratoma breakout होगा. Encapsulation के एक और नैदानिक आवेदन करने के लिए मेजबान प्राप्तकर्ता से प्रतिरोपित कोशिकाओं की प्रतिरक्षा सुरक्षा प्रदान करना है. यह अनुमान है कि hESC और वें के प्रत्यारोपणeir डेरिवेटिव को प्रतिरक्षाविज्ञानी अस्वीकृति के लिए नेतृत्व MHC वर्ग की अभिव्यक्ति के निम्न स्तर के बाद से मैं undifferentiated hESC की प्रतिजनों 8 भेदभाव के बाद बढ़ जाती है हो सकता है. यह भी प्रलेखित किया गया है कि आम तौर पर प्रत्यारोपण alginate की उच्च सांद्रता का इस्तेमाल करने में प्रतिरक्षा अस्वीकृति प्रक्रिया को 2,9 दरकिनार. हमारे अध्ययन से alginate की एक कम एकाग्रता (1.1%) जो इन विट्रो संस्कृति और hESC की भेदभाव में और अधिक के लिए उपयुक्त है का उपयोग करता है. यह अभी तक निर्धारित किया है कि क्या alginate के निचले एकाग्रता हम इस्तेमाल किया है अवैध पहले के रूप में अच्छी तरह से रिपोर्ट सेल व्यवहार्यता बनाए रखने के इन समझाया hESC एक असुरक्षित मेजबान में प्रत्यारोपित किया जाना चाहिए है के रूप में एक समान प्रतिरक्षा प्रतिक्रिया.
हमारे hESC encapsulating के लिए अनुकूलित encapsulation के प्रोटोकॉल 400-500 माइक्रोन व्यास के कैप्सूल आकार पैदा करता है. कैप्सूल जो 400 माइक्रोन से छोटे होते हैं कम कोशिकाओं करते हैं, जबकि बड़ा (> 500 माइक्रोन) कैप्सूल resul केकक्षों की जनसंख्या में टी. hESC encapsulation के एक एकल कोशिका निर्माण है, जो भी 6 सेल के apoptosis को बढ़ावा देता है की आवश्यकता है. हम यहाँ दिखाया है कि समझाया hESC जीवित करने के लिए जारी कर सकते हैं पैदा करना, और EB के रूप में. यह hESC पूर्व आरआई के साथ पूर्व के इलाज के encapsulation के,> 80% hESC व्यवहार्य होने में जिसके परिणामस्वरूप द्वारा बढ़ाया है. इस प्रकार, हम 3 डी संस्कृति की स्थिति में संस्कृति hESC एक मॉडल की स्थापना की है और को डीए न्यूरॉन्स में भेदभाव के लिए इन अध्ययनों बढ़ा. हालांकि सेल encapsulation के तकनीक को व्यापक रूप से किया गया है सेल और इन शर्तों के तहत अन्त: जनस्तर सम्बन्धी भेदभाव, तंत्रिका भेदभाव के संवर्धन के लिए अच्छी तरह से जाना जाता है 10,11 अच्छी तरह से अध्ययन नहीं किया गया. हम यहाँ से पता चला है कि वहाँ PAX6 की एक वृद्धि की अभिव्यक्ति और वें 2D भेदभाव प्रणाली की तुलना में 7 दिनों के बाद जीन और प्रोटीन की अभिव्यक्ति विश्लेषण का उपयोग, सुझाव है कि 3 डी वातावरण pluripotent राज्य से बेहतर डीए neuronal वंश को बढ़ावा देता है. हालांकि, आगे का विश्लेषण करती है सफलताdopamine के स्राव परीक्षण और प्रत्यारोपण परख के रूप में घंटे के लिए पूरी तरह से विभेदित कोशिकाओं विशेषताएँ करने के लिए आवश्यक हैं. मजबूत कार्यात्मक डीए न्यूरॉन्स उत्पन्न कुशलतापूर्वक एक अनिवार्य आवश्यकता है अगर पार्किंसंस रोग के लिए सेल थेरेपी के लिए एक वास्तविकता बन गई है. हमारे 3D मंच के रूप में को डीए तंत्रिका कोशिकाओं उत्प्रेरण, PA6 कोशिकाओं और डीए encapsulation के माध्यम से neuronal विभेदित hESC की उच्च घनत्व सेल संस्कृति प्रणाली के साथ सह - संवर्धन के बारे में प्रस्तावित उस दिशा की ओर एक प्रयास है.
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Disclosures
हम खुलासा करने के लिए कुछ भी नहीं है.
Acknowledgments
यह काम NHMRC कार्यक्रम अनुदान +५६८९६९ # (PSS) से और संकाय मेडिसिन के न्यू साउथ वेल्स विश्वविद्यालय, स्टेम सेल पहल (KSS) के द्वारा समर्थित है.
Materials
| Name | Company | Catalog Number | Comments |
| Alginate (Pronova UP MVG) | NovaMatrix | 4200101 | high glucuronic acid content ≥60%, viscosity >200 mPa s, and endotoxin <100 EU/g |
| Gelatin | Sigma-Aldrich | G1890-100G | |
| 0.9% NaCl | Baxter Internationl Inc. | AHF7123 | |
| Type J1 bead generator | Nisco engineering Inc | SPA-0447 | |
| Multi-Phaser syringe pump | New Era | Model NE-1000 | |
| Ezi-Flow Medical Flowmeter | Gascon Systems | G0149 | |
| Y-27632 | Merck & Co., Inc. | 688000 | |
| Human Serum Albumin | Sigma-Aldrich | A4327-1G | |
| Accutase | EMD Millipore | SCR005 | |
| 14G x 2” I.V. catheter | Terumo Medical Corp. | SR-OX1451C | |
| Knockout-DMEM | Invitrogen | 10829-018 | For SR medium (basal) |
| GlutaMAX -I | Invitrogen | 35050-061 | For SR medium (2 mM) |
| Knockout Serum Replacement | Invitrogen | 10828-028 | For SR medium (20%) |
| Penicillin-Streptomycin | Invitrogen | 15070063 | For SR medium (2.5 U/ml) |
| Insulin-Transferrin-Selenium (ITS) | Invitrogen | 41400045 | For SR medium (1x) |
| β-Mercapt–thanol | Invitrogen | 21985-023 | For SR medium (0.1 mM) |
| MEM NEAA Solution | Invitrogen | 11140-050 | For SR medium (5 mM) |
| Glasgow Minimum Essential Medium | Invitrogen | 11710035 | For DA neural differentiation medium (basal) |
| Knockout Serum Replacement | Invitrogen | 10828-028 | For DA neural differentiation medium (10%) |
| Sodium pyruvate | Invitrogen | 11360070 | For DA neural differentiation medium (1 mM) |
| MEM NEAA Solution | Invitrogen | 11140-050 | For DA neural differentiation medium (0.1 mM) |
| β-Mercapt–thanol | Invitrogen | 21985-023 | For DA neural differentiation medium (0.1 mM) |
| Sonic hedgehog (SHH) | R&D Systems | 1314-SH-025/CF | For DA neural differentiation (100 ng/ml) |
| Fibroblast growth factor 8a (FGF8a) | R&D Systems | 4745-F8-050 | For DA neural differentiation (100 ng/ml) |
References
- Chayosumrit, M., Tuch, B., Sidhu, K. Alginate microcapsule for propagation and directed differentiation of hESCs to definitive endoderm. Biomaterials. 31, 505-514 (2010).
- Dean, S. K., Yulyana, Y., Williams, G., Sidhu, K. S., Tuch, B. E. Differentiation of encapsulated embryonic stem cells after transplantation. Transplantation. 82, 1175-1184 (2006).
- Siti-Ismail, N., Bishop, A. E., Polak, J. M., Mantalaris, A. The benefit of human embryonic stem cell encapsulation for prolonged feeder-free maintenance. Biomaterials. 29, 3946-3952 (2008).
- Dawson, E., Mapili, G., Erickson, K., Taqvi, S., Roy, K. Biomaterials for stem cell differentiation. Adv. Drug Deliv. Rev. 60, 215-228 (2008).
- Cell encapsulation: promise and progress. Nat. Med. Orive, G. 9, 104-107 (2003).
- Watanabe, K. A ROCK inhibitor permits survival of dissociated human embryonic stem cells. Nat. Biotechnol. 25, 681-686 (2007).
- Dang, S. M., Gerecht-Nir, S., Chen, J., Itskovitz-Eldor, J., Zandstra, P. W. Controlled, scalable embryonic stem cell differentiation culture. Stem Cells. 22, 275-282 (2004).
- Drukker, M. Characterization of the expression of MHC proteins in human embryonic stem cells. Proc. Natl. Acad. Sci. U S A. 99, 9864-9869 (2002).
- Calafiore, R. Standard Technical Procedures for Microencapsulation of Human Islets for Graft into Nonimmunosuppressed Patients With Type 1 Diabetes Mellitus. Transplantation Proceedings. 38, 1156-1157 (2006).
- Cho, M. S. Highly efficient and large-scale generation of functional dopamine neurons from human embryonic stem cells. Proc. Natl. Acad. Sci. U.S.A. 105, 3392-3397 (2008).
- Vazin, T., Chen, J., Lee, C. T., Amable, R., Freed, W. J. Assessment of stromal-derived inducing activity in the generation of dopaminergic neurons from human embryonic stem cells. Stem Cells. 26, 1517-1525 (2008).
