Waiting
Login processing...

Trial ends in Request Full Access Tell Your Colleague About Jove
JoVE Journal Medicine
Click here for the English version

Medicine

تلوين المناعى من H1-B7 (PD-L1) على البارافين جزءا لا يتجزأ من النسيج الشرائح غدية البنكرياس

Published: January 3, 2013 doi: 10.3791/4059
Automatic Translation
1,2, 1,2, 1,2,3, 1, 1,2,4, 3,5, 6, 1,2,5,7,8, 1,2,5,8, 1,2,4,5,7
1The Sidney Kimmel Comprehensive Cancer Center, The Johns Hopkins University School of Medicine, 2Department of Oncology, The Johns Hopkins University School of Medicine, 3Department of Dermatology, The Johns Hopkins University School of Medicine, 4Department of Surgery, Johns Hopkins University School of Medicine, 5The Sol Goldman Pancreatic Cancer Center, The Johns Hopkins University School of Medicine, 6Yale Cancer Center, Yale School of Medicine, 7The Skip Viragh Center for Pancreatic Cancer, The Johns Hopkins University School of Medicine, 8Department of Pathology, The Johns Hopkins University School of Medicine

Summary

B7-H1 (PD-L1) وملزمة لPD-1 توفير الرئيسية الورم الناجم عن مناعة في إشارة المكروية الورم. يوصف تلطيخ المناعى تقنية لتوصيف التعبير وتوطين H1-B7 غدية البنكرياس في هنا.

Abstract

B7-H1/PD-L1، وهو عضو في عائلة من البروتينات B7 سطح الخلية المناعية التنظيمية، ويلعب دورا هاما في تنظيم السلبية للخلية بوساطة الاستجابات المناعية من خلال تفاعلها مع مستقبلات لها، برمجة موت-1 (PD -1) 1،2. وقد لوحظ overexpression من H1-B7 من قبل الخلايا السرطانية في عدد من السرطانات البشرية، بما في ذلك سرطان الجلد، ورم أرومي دبقي، وسرطان في الرئة، وسرطان الثدي والمبيض والقولون والكلى والخلايا، وتبين أنها لإضعاف المضادة للورم T- الحصانة الخلية 3-8.

مؤخرا، تم التعرف B7-H1 أنسجة غدية التعبير البنكرياس كعلامة النذير المحتملة 9،10. بالإضافة إلى ذلك، وقد تبين من الحصار H1-B7 في نموذج الفأر من سرطان البنكرياس لإنتاج استجابة المضادة للورم 11. هذه البيانات تشير إلى أهمية H1-B7 كهدف العلاجية المحتملة. ولذلك فإن الأجسام المضادة لمكافحة الحصار B7-H1 التي يجري اختبارها في التجارب السريرية لمولtiple الأورام الصلبة بما في ذلك سرطان الجلد البشري وسرطان والرئة والقولون، والمعدة والكلى والبنكرياس 12.

من أجل أن تكون في نهاية المطاف قادرا على تحديد المرضى الذين سيستفيدون من H1-B7 استهداف العلاجات، فمن الأهمية بمكان للتحقيق في العلاقة بين التعبير وتوطين H1-B7 واستجابة المريض للعلاج الأجسام المضادة مع الحصار B7-H1. ودراسة التعبير عن H1-B7 في الأنسجة البشرية غدية البنكرياس من خلال المناعية إعطاء فهم أفضل لكيفية هذا الجزيء يشير شارك في المثبطة يسهم في قمع الحصانة انتيتومور في المكروية الورم. وقد تبين أن الأجسام المضادة لمكافحة B7-H1 وحيدة النسيلة (استنساخ 5H1) التي وضعها تشن وزملاء العمل لتحقيق نتائج يمكن الاعتماد عليها في تلطيخ cryosections من أنواع متعددة من الأورام الأنسجة البشرية 4،8، ولكن تلطيخ على شرائح-البارافين جزءا لا يتجزأ من كان تحديا حتى مؤخرا 13-18. لدينا ديفهربت بروتوكول B7-H1 تلطيخ للشرائح البارافين، جزءا لا يتجزأ من أنسجة غدية البنكرياس. بروتوكول B7-H1 تلطيخ الموصوفة هنا تنتج متسقة تلطيخ الغشائي وحشوية من H1-B7 مع الخلفية قليلا.

Protocol

B7-H1/PD-L1، وهو عضو في عائلة من البروتينات B7 سطح الخلية المناعية التنظيمية، ويلعب دورا هاما في تنظيم السلبية للخلية بوساطة الاستجابات المناعية من خلال تفاعلها مع مستقبلات لها، برمجة موت-1 (PD -1) 1،2. وقد لوحظ overexpression من H1-B7 من قبل الخلايا السرطانية في عدد من السرطانات البشرية، بما في ذلك سرطان الجلد، ورم أرومي دبقي، وسرطان في الرئة، وسرطان الثدي والمبيض والقولون والكلى والخلايا، وتبين أنها لإضعاف المضادة للورم T- الحصانة الخلية 3-8.

مؤخرا، تم التعرف B7-H1 أنسجة غدية التعبير البنكرياس كعلامة النذير المحتملة 9،10. بالإضافة إلى ذلك، وقد تبين من الحصار H1-B7 في نموذج الفأر من سرطان البنكرياس لإنتاج استجابة المضادة للورم 11. هذه البيانات تشير إلى أهمية H1-B7 كهدف العلاجية المحتملة. ولذلك فإن الأجسام المضادة لمكافحة الحصار B7-H1 التي يجري اختبارها في التجارب السريرية لالإنسان متعددةالأورام الصلبة بما في ذلك سرطان الجلد وسرطان والرئة والقولون، والمعدة والكلى والبنكرياس 12.

من أجل أن تكون في نهاية المطاف قادرا على تحديد المرضى الذين سيستفيدون من H1-B7 استهداف العلاجات، فمن الأهمية بمكان للتحقيق في العلاقة بين التعبير وتوطين H1-B7 واستجابة المريض للعلاج الأجسام المضادة مع الحصار B7-H1. ودراسة التعبير عن H1-B7 في الأنسجة البشرية غدية البنكرياس من خلال المناعية إعطاء فهم أفضل لكيفية هذا الجزيء يشير شارك في المثبطة يسهم في قمع الحصانة انتيتومور في المكروية الورم. وقد تبين أن الأجسام المضادة لمكافحة B7-H1 وحيدة النسيلة (استنساخ 5H1) التي وضعها تشن وزملاء العمل لتحقيق نتائج يمكن الاعتماد عليها في تلطيخ cryosections من أنواع متعددة من الأورام الأنسجة البشرية 4،8، ولكن تلطيخ على شرائح-البارافين جزءا لا يتجزأ من كان تحديا حتى مؤخرا 13-18. لقد قمنا بتطوير staini B7-H1نانوغرام بروتوكول للشرائح البارافين، جزءا لا يتجزأ من أنسجة غدية البنكرياس. بروتوكول B7-H1 تلطيخ الموصوفة هنا تنتج متسقة تلطيخ الغشائي وحشوية من H1-B7 مع الخلفية قليلا.

1. دي parafinization

  1. خبز الشرائح في C ° 55 لمدة 20 دقيقة.
  2. في غطاء محرك السيارة الكيميائية، والشرائح تزج في الزيلين لمدة 10 دقيقة.
  3. الشرائح تزج في الزيلين الطازجة لمدة 10 دقيقة.
  4. تزج الشرائح في الإيثانول بنسبة 100٪ لمدة 5 دقائق.
  5. تزج في الشرائح الطازجة الإيثانول بنسبة 100٪ لمدة 5 دقائق.
  6. تزج الشرائح في الإيثانول 95٪ لمدة 5 دقائق.
  7. تزج الشرائح في الإيثانول 80٪ لمدة 5 دقائق.
  8. تزج في الماء منزوع الأيونات الشرائح لمدة 5 دقائق.

2. مستضد استرجاع

  1. الشرائح تزج في تريس العازلة EDTA (درجة الحموضة 9.0) والحرارة في طنجرة الضغط إلى 125 درجة مئوية لمدة 30 ثانية، ثم 90 درجة مئوية لمدة 10 ثانية.
  2. اسمحوا الشرائح بارد لمدة 60 دقيقة.
  3. تزج الشرائح في TBST لمدة 5 دقائق؛ repeفي مرتين.

3. تلطيخ

  1. تمحو حلول حول النسيج على الشرائح. بمناسبة دائرة حول الأنسجة باستخدام قلم مسعور.
  2. ضع الشرائح في غرفة الرطوبة وتجنب تجفيف النسيج على الشريحة في جميع مراحل عملية تلطيخ بأكمله. مكان قطرة واحدة (حوالي 200 ميكرولتر أو أكثر لتغطية المنطقة بالكامل الأنسجة) من كتلة البيروكسيديز ضمن دائرة مسعور على الشريحة والشرائح في احتضان كتلة البيروكسيديز لمدة 5 دقائق.
  3. شطف مع الشرائح TBST، ثم في مكان TBST لمدة 5 دقائق.
  4. مكان قطرة واحدة من ACE BLOCK حظر العازلة على كل شريحة واحتضان لمدة 15 دقيقة.
  5. شطف مع الشرائح TBST، ثم في مكان TBST لمدة 5 دقائق.
  6. مكان قطرة واحدة من الحل أفيدين على كل شريحة واحتضان لمدة 15 دقيقة.
  7. شطف مع الشرائح TBST، ثم في مكان TBST لمدة 5 دقائق.
  8. مكان قطرة واحدة من الحل البيوتين على كل شريحة واحتضان لمدة 15 دقيقة.
  9. شطف سليقصر مع TBST، ثم ضع في TBST لمدة 5 دقائق.
  10. احتضان الشرائح مع 1:1،000 التخفيف من الأجسام المضادة لمكافحة B7-H1 الماوس وحيدة النسيلة (استنساخ 5H1) أو ماوس IgG1 κ نمط إسوي التحكم في 200 ميكرولتر TBST في 4 درجات مئوية لمدة 22 ساعة خلال الليل + / - الموارد البشرية 1. تركيز الأجسام المضادة في النهائي TBST هو 2،57 ميكروغرام / مل.
  11. شطف مع الشرائح TBST، ثم في مكان TBST لمدة 5 دقائق. كرر مرتين.
  12. احتضان الشرائح مع الأجسام المضادة البيوتين الفئران مترافق المضادة للIgG1 الماوس الثانوي بتركيز 1:500 (في 200 ميكرولتر حل الماعز 2٪ مصل) لمدة 30 دقيقة.
  13. شطف مع الشرائح TBST، ثم في مكان TBST لمدة 5 دقائق. كرر مرتين.
  14. (يجب أن يكون مستعدا على الأقل 30 دقيقة قبل الاستخدام) مكان قطرة واحدة من Streptavidin-البيوتين مجمع على كل شريحة واحتضان لمدة 15 دقيقة.
  15. شطف مع الشرائح TBST، ثم في مكان TBST لمدة 5 دقائق. كرر مرتين.
  16. مكان قطرة واحدة من تضخيم الكاشف (02:01 المخفف مع TBST) على كل شريحة واحتضان لمدة 4 دقائق.
  17. شطف مع الشرائح TBST، ثم ضع في TBST لمدة 5 دقائق. كرر مرتين.
  18. مكان قطرة واحدة من Streptavidin-HRP على كل شريحة واحتضان لمدة 15 دقيقة.
  19. شطف مع الشرائح TBST، ثم في مكان TBST لمدة 5 دقائق. كرر مرتين.
  20. وضع قطرة واحدة من Diaminobenzidine-3،3 (DAB) والركيزة مولد اللون على كل شريحة وتطوير اللون لمدة 2 دقيقة.
  21. مباشرة بعد وضع اللون، وغسل الشرائح مع DDH 2 O لمدة 1-2 دقيقة.
  22. احتضان الشرائح مع قطرة واحدة من الهيماتوكسيلين لمدة 90 ثانية.
  23. يغسل مع DDH 2 O لمدة 1-2 دقيقة.
  24. يغسل بماء الصنبور والصابون لمدة 1-2 دقيقة.
  25. يغسل مع DDH 2 O لمدة 1-2 دقيقة.

4. الجفاف وتصاعد

  1. تزج الشرائح في الإيثانول 80٪ لمدة 3 دقائق.
  2. تزج الشرائح في الإيثانول 95٪ لمدة 3 دقائق.
  3. تزج الشرائح في الإيثانول بنسبة 100٪ لمدة 5 دقائق. تكرار.
  4. تزج الشرائح في الزيلين لمدة 5 دقائق. تكرار.
  5. إضافة قطرة واحدة منCytoseal 60 إلى الشريحة والمكان ساترة.

الجدول 1 يسرد الكواشف المستخدمة في الإجراءات المذكورة أعلاه.

Subscription Required. Please recommend JoVE to your librarian.

Representative Results

وهناك تلطيخ المناعى ناجحة من H1-B7 إظهار التعبير غير متجانسة من H1-B7 (DAB بني لون إشارات التنمية) في غدية البنكرياس. بعض الخلايا غدية البنكرياس يكون التعبير الغشائي في الغالب من H1-B7 (الشكل 1A) في حين البعض الآخر إما حشوية التعبير في الغالب من H1-B7 أو التعبير قليلا من H1-B7 (أرقام 2 و 3). ظهارة القناة الطبيعية البنكرياس عن القليل B7-H1 (الشكل 4). تلطيخ مع الأجسام المضادة IgG1 الماوس κ تحكم نمط إسوي بدلا من الأجسام المضادة لمكافحة B7-H1 يظهر قليلا تلوين الخلفية (1B الشكل).

الشكل 1
الشكل 1. A. تلطيخ المناعى مع المضادة للH1-B7، استنساخ الضد يظهر 5H1 التعبير الغشائي على بعض الخلايا غدية البنكرياس. B. Immunohistocتلطيخ hemical مع سيطرة نمط إسوي IgG1 يظهر قليلا التنمية لون DAB على النسيج الغدي البنكرياس نفسه.

الشكل 2
الشكل 2. B7-H1 التعبير في سيتوبلازم الخلايا غدية البنكرياس.

الشكل 3
3 الشكل. غدية البنكرياس بعض الخلايا تعبير عن القليل B7-H1.

الشكل 4
الشكل 4. B7-H1 التعبير على ظهارة البنكرياس القنوي العادية.

Subscription Required. Please recommend JoVE to your librarian.

Discussion

تم إبلاغ الإدارة عن تلطيخ المناعى من H1-B7 على cryosections في الدراسات السابقة لمجموعة متنوعة من أنواع السرطان 3،4. ومع ذلك، وعينات الورم السريرية عادة ما تكون متاحة فقط في شكل كتل البارافين، جزءا لا يتجزأ من. وقد تم في الآونة الأخيرة على الأجسام المضادة وحيدة النسيلة 5H1 تطبيقها بنجاح في تلطيخ من أنسجة الورم جزءا لا يتجزأ من البارافين بما في ذلك سرطان الخلايا الكلوية، وسرطان عنق الرحم، وسرطان المثانة وسرطان الجلد 13-18. كما تم B7-H1-جزءا لا يتجزأ من تلطيخ على البارافين أو 9،19 ناظم البرد 20 من الأقسام غدية الأنسجة البنكرياس مع الاجسام المضادة الأخرى المبلغ عنها. هنا، لقد أظهرنا الناجح لتلطيخ جزءا لا يتجزأ من البارافين أنسجة غدية البنكرياس مع الأجسام المضادة وحيدة النسيلة في 5H1 لH1-B7. التعبير عن H1-B7 غدية البنكرياس هو في غير المتجانسة، مماثلة لتلك التي في العديد من أنواع أخرى من الأورام الخبيثة مثل سرطان الجلد 4،21. كل الغشائي وحشوية التعبير عن B7-H1 عولاحظ مع خلايا غدية ه (الشكلان 1 و 2). التعبير الغشائي من H1-B7 يتفق مع وظيفتها البيولوجية. دور حشوية B7-H1 في أنسجة الأورام تبقى من يكتشفها. قناة البنكرياس الطبيعي الخلايا الظهارية أو عنيبية لا تعبر عن B7-H1 (الشكل 4).

جميع الخطوات في هذا البروتوكول أن تتم في درجة حرارة الغرفة، فيما عدا الحضانة بين عشية وضحاها في C. ° 4 ولم يتم الإبلاغ عن ظروف استرجاع المستضد المستخدمة في هذا الإجراء تلطيخ B7-H1 في المنشورات المذكورة أعلاه 9،19. وأيضا الخطوة التضخيم لا تستخدمها هذه الدراسات. وجدنا أن الخطوات الحاسمة في هذا البروتوكول تشمل استرجاع مستضد، وبين عشية وضحاها الحضانة مع الأجسام المضادة الأولية، والتضخيم، ووضع لون DAB. قد التخفيف من الأجسام المضادة الأولية تحتاج إلى معاير قليلا عن كل دفعة مختلفة من 5H1. ظلت التضخيم بالضبط في 4 دقائق معكاشف التضخيم المخفف. تعطي هذه التعديلات كافية من التضخيم إشارات إيجابية دون زيادة الخلفية. الساعة التنمية هو عادة 2 دقيقة، ولكن نحن نراقب بشكل روتيني التنمية تحت المجهر للتأكد من تلطيخ الأمثل مع الحد الأدنى من الخلفية. مع كل جولة من تلطيخ، ونحن تشمل شريحة واحدة من الدفعة السابقة وشريحة واحدة من الأنسجة لوزة والضوابط الإيجابية. وقد تم تلطيخ Paracortical من H1-B7 في لوزة موضح سابقا 4. إذا كانت الخلفية هي عالية أو إذا كان يحتاج إلى أكثر من 5 دقائق لتطوير إشارات نموذجية في هذه الشرائح السيطرة، نوصي استبدال الكواشف لفحص الخطوات الحاسمة وجميع الخطوات تلطيخ.

استخدام هذه التقنية تسمح لتلطيخ التحليل النوعي وشبه الكمي-B7-H1 من التعبير والتعريب على الخلايا الورمية غدية البنكرياس. مع تعديل التخفيف من الأجسام المضادة الأولية، وطول التخفيف من amplificatiعلى الخطوة، والوقت للتنمية اللون، يمكن تطبيق هذا البروتوكول إلى أنواع الأنسجة الأخرى. قمنا بتعديل هذا البروتوكول واستخدامه لسرطان الثدي والأنسجة ساركومة. كما H1-B7 وملزمة لPD-1 توفير الرئيسية الورم الناجم عن إشارة مناعة في المكروية الورم، وهذا الأسلوب تلطيخ تسهيل فهمنا لدور المكروية الورم في بدء الورم، تقدم والمضادة للورم الاستجابة المناعية.

Subscription Required. Please recommend JoVE to your librarian.

Disclosures

الإعلان عن أي تضارب في المصالح.

Acknowledgments

EB، KMB، وHX المساهمة على قدم المساواة. وأيد هذه الدراسة من قبل لجنة التحقيق الوطنية SPORE في سرطانات الجهاز الهضمي P50 CA062924، NIH K23 CA148964، ومؤسسة Lustgarten، مؤسسة Viragh، ASCO جائزة الباحث الشاب، NIH-28 5T32 CA0090701 التدريب غرانت، سول سرطان البنكرياس مركز جولدمان، والمؤسسة الوطنية للبنكرياس.

Materials

Name Company Catalog Number Comments
CSA System Dako K1500 Includes the following reagents mentioned in the protocol: peroxidase block, streptavidin-biotin complex, amplification reagent, streptavidin-HRP, and DAB substrate and chromogen
Avidin/Biotin Blocking Kit Vector SP-2001
Block ACE Serotec BUF029
Biotin anti-mouse IgG1 BD 553441
Mouse IgG1 K Isotype Control eBioscience 14-4714-85
TBS(Tris-buffered saline), 10X Cellgro 46-012-CM 10xTBS contains 80 g/L NaCl and 24.2 g/L Tirs;
Diluted to 1X with ddH2O for washes;
Tween 20 Sigma-Aldrich P1379 1 ml added to 1 L of 1X TBS to make TBST
Target Retrieval, 20x Celerus Wave 014-3000-000 Diluted to 1x with ddH2O
190 Proof Ethyl Alcohol Pharmco-Aaper 111000190
200 Proof Ethyl Alcohol Pharmo-Aaper 111000200
Xylene VWR 95057-827
Hematoxylin Richard-Allan Scientific 72804
Cytoseal 60 Richard-Allan Scientific 8310-4
Coverslips Corning 2940-245
Humidity chamber Sigma H6644
Table 1. Reagents and equipment.

DOWNLOAD MATERIALS LIST

References

  1. Flies, D. B., Chen, L. The new B7s: playing a pivotal role in tumor immunity. J. Immunother. 30, 251-260 (2007).
  2. Dong, H., Zhu, G., Tamada, K., Chen, L. B7-H1, a third member of the B7 family, co-stimulates T-cell proliferation and interleukin-10 secretion. Nat. Med. 5, 1365-1369 (1999).
  3. Curiel, T. J., Wei, S., Dong, H., Alvarez, X., Cheng, P., Mottram, P., Krzysiek, R., Knutson, K. L., et al. Blockade of B7-H1 improves myeloid dendritic cell-mediated antitumor immunity. Nat. Med. 9, 562-567 (2003).
  4. Dong, H., Strome, S. E., Salomao, D. R., Tamura, H., Hirano, F., Flies, D. B., Roche, P. C., Lu, J., Zhu, G. Tumor-associated B7-H1 promotes T-cell apoptosis: a potential mechanism of immune evasion. Nat. Med. 8, 793-800 (2002).
  5. Dong, H., Chen, L. B7-H1 pathway and its role in the evasion of tumor immunity. J. Mol. Med. (Berl). 81, 281-287 (2003).
  6. Strome, S. E., Dong, H., Tamura, H., Voss, S. G., Flies, D. B., Tamada, K., Salomao, D., Cheville, J., Hirano, F., Lin, W., Kasperbauer, J. L., Ballman, K. V., Chen, L. B7-H1 blockade augments adoptive T-cell immunotherapy for squamous cell carcinoma. Cancer Res. 63, 6501-6505 (2003).
  7. Hirano, F., Kaneko, K., Tamura, H., Dong, H., Wang, S., Ichikawa, M., Rietz, C., Flies, D. B., Lau, J. S., Zhu, G., Tamada, K., Chen, L. Blockade of B7-H1 and PD-1 by monoclonal antibodies potentiates cancer therapeutic immunity. Cancer Res. 65, 1089-1096 (2005).
  8. Thompson, R. H., Gillett, M. D., Cheville, J. C., Lohse, C. M., Dong, H., Webster, W. S., Krejci, K. G., Lobo, J. R., Sengupta, S., Chen, L., Zincke, H., Blute, M. L., Strome, S. E., Leibovich, B. C., Kwon, E. D. Costimulatory B7-H1 in renal cell carcinoma patients: Indicator of tumor aggressiveness and potential therapeutic target. Proc. Natl. Acad. Sci. U.S.A. 101, 17174-17179 (2004).
  9. Geng, L., Huang, D., Liu, J., Qian, Y., Deng, J., Li, D., Hu, Z., Zhang, J., Jiang, G., Zheng, S. B7-H1 up-regulated expression in human pancreatic carcinoma tissue associates with tumor progression. J. Cancer Res. Clin. Oncol. 134, 1021-1027 (2008).
  10. Loos, M., Giese, N. A., Kleeff, J., Giese, T., Gaida, M. M., Bergmann, F., Laschinger, M., WB, M., Friess, H. Clinical significance and regulation of the costimulatory molecule B7-H1 in pancreatic cancer. Cancer Lett. 268, 98-109 (2008).
  11. Okudaira, K., Hokari, R., Tsuzuki, Y., Okada, Y., Komoto, S., Watanabe, C., Kurihara, C., Kawaguchi, A., Nagao, S., Azuma, M., Yagita, H., Miura, S. Blockade of B7-H1 or B7-DC induces an anti-tumor effect in a mouse pancreatic cancer model. Int. J. Oncol. 35, 741-749 (2009).
  12. Wang, S., Chen, L. Immunobiology of cancer therapies targeting CD137 and B7-H1/PD-1 cosignal pathways. Curr. Top Microbiol. Immunol. 344, 245-267 (2011).
  13. Thompson, R. H., Webster, W. S., Cheville, J. C., Lohse, C. M., Dong, H., Leibovich, B. C., Kuntz, S. M., Sengupta, S., Kwon, E. D., Blute, M. L. B7-H1 glycoprotein blockade: a novel strategy to enhance immunotherapy in patients with renal cell carcinoma. Urology. 66, 10-14 (2005).
  14. Thompson, R. H., Kuntz, S. M., Leibovich, B. C., Dong, H., Lohse, C. M., Webster, W. S., Sengupta, S., Frank, I., Parker, A. S., Zincke, H., Blute, M. L., Sebo, T. J., Cheville, J. C., Kwon, E. D. Tumor B7-H1 is associated with poor prognosis in renal cell carcinoma patients with long-term follow-up. Cancer Res. 66, 3381-3385 (2006).
  15. Thompson, R. H., Dong, H., Kwon, E. D. Implications of B7-H1 expression in clear cell carcinoma of the kidney for prognostication and therapy. Clin. Cancer Res. 13, 709s-715s (2007).
  16. Karim, R., Jordanova, E. S., Piersma, S. J., Kenter, G. G., Chen, L., Boer, J. M., Melief, C. J., vander Burg, S. H. Tumor-expressed B7-H1 and B7-DC in relation to PD-1+ T-cell infiltration and survival of patients with cervical carcinoma. Clin. Cancer Res. 15, 6341-6347 (2009).
  17. Inman, B. A., Sebo, T. J., Frigola, X., Dong, H., Bergstralh, E. J., Frank, I., Fradet, Y., Lacombe, L., Kwon, E. D. PD-L1 (B7-H1) expression by urothelial carcinoma of the bladder and BCG-induced granulomata: associations with localized stage progression. Cancer. 109, 1499-1505 (2007).
  18. Brahmer, J. R., Drake, C. G., Wollner, I., Powderly, J. D., Picus, J., Sharfman, W. H., Stankevich, E., Pons, A., Salay, T. M., McMiller, T. L., Gilson, M. M., Wang, C., Selby, M., Taube, J. M., Anders, R., Chen, L., Korman, A. J., Pardoll, D. M., Lowy, I., Topalian, S. L. Phase I study of single-agent anti-programmed death-1 (MDX-1106) in refractory solid tumors: safety, clinical activity, pharmacodynamics, and immunologic correlates. J. Clin. Oncol. 28, 3167-3175 (2010).
  19. Wang, L., Ma, Q., Chen, X., Guo, K., Li, J., Zhang, M. Clinical significance of B7-H1 and B7-1 expressions in pancreatic carcinoma. World J. Surg. 34, 1059-1065 (2010).
  20. Nomi, T., Sho, M., Akahori, T., Hamada, K., Kubo, A., Kanehiro, H., Nakamura, S., Enomoto, K., Yagita, H., Azuma, M., Nakajima, Y. Clinical significance and therapeutic potential of the programmed death-1 ligand/programmed death-1 pathway in human pancreatic cancer. Clin. Cancer Res. 13, 2151-2157 (2007).
  21. Taube, J. M., Anders, R. A., Young, G. D., Xu, H., Sharma, R., McMiller, T. L., Chen, S., Klein, A. P., Pardoll, D. M., Topalian, S. L., Chen, L. Colocalization of inflammatory response with B7-h1 expression in human melanocytic lesions supports an adaptive resistance mechanism of immune escape. Sci. Transl. Med. 4, 127ra37 (2012).

Tags

بيولوجيا السرطان، العدد 71، الطب، علم المناعة والكيمياء الحيوية والبيولوجيا الجزيئية، علم الأحياء الخلوية، الكيمياء، علم الأورام، المناعية، B7-H1 (PD-L1)، غدية البنكرياس، وسرطان البنكرياس والبنكرياس والأورام والمناعة T-الخلية، وسرطان
تلوين المناعى من H1-B7 (PD-L1) على البارافين جزءا لا يتجزأ من النسيج الشرائح غدية البنكرياس
Play Video
PDF DOI DOWNLOAD MATERIALS LIST

Cite this Article

Bigelow, E., Bever, K. M., Xu, H.,… More

Bigelow, E., Bever, K. M., Xu, H., Yager, A., Wu, A., Taube, J., Chen, L., Jaffee, E. M., Anders, R. A., Zheng, L. Immunohistochemical Staining of B7-H1 (PD-L1) on Paraffin-embedded Slides of Pancreatic Adenocarcinoma Tissue. J. Vis. Exp. (71), e4059, doi:10.3791/4059 (2013).

Less
Copy Citation Download Citation Reprints and Permissions
View Video

Get cutting-edge science videos from JoVE sent straight to your inbox every month.

Waiting X
Simple Hit Counter