Summary
使用美天旎互助委员会套件淋巴细胞分离是一种可靠的方法来净化整个淋巴组织匀浆的细胞。使用美天旎系统纯化的细胞通常是纯≥96％。在这里，我们展示了隔离CD4 + T细胞，由美天旎提供的许多工具包之一所采取的步骤。
Abstract
从主要来源细胞的分离是必要的步骤，在许多更复杂的协议。美天旎提供的工具包，隔离从几个生物体的细胞，包括人类在内的非人类灵长类动物，老鼠，我们在这里描述，老鼠。基于磁珠细胞分离，使无论是正面的选择（或细胞耗竭）以及阴性选择。在这里，我们展示了不变或NA已经CD4 +辅助性T细胞的阴性选择。使用这个标准的协议，我们通常净化细胞≥96％纯的CD4 + / CD3 +。该协议是在与协议夹层和出版发行的朱庇特7，纯化的T细胞和其他类型的细胞过继转移成像目的，小鼠的外周淋巴结的双光子成像一起使用。虽然我们并没有表现出在这个协议的视频的流式细胞仪分析，它是强烈建议使用相应的抗体，通过流式细胞仪分离出的细胞检查的整体纯度。此外，我们证明T细胞隔离的非无菌的方法。如果无菌细胞是为您的特定最终用户的应用需要，一定要做好标准的无菌条件下，在组织培养罩中表现出的程序。感谢您看运气好，并用自己的实验！
Protocol
请阅读并遵守协议http://www.miltenyibiotec.com/包括在美天旎套件或在网上。
Subscription Required. Please recommend JoVE to your librarian.
Discussion
从主要来源细胞的分离是必要的步骤，在许多更复杂的协议。美天旎提供的工具包，隔离从几个生物体的细胞，包括人类在内的非人类灵长类动物，老鼠，我们在这里描述，老鼠。基于磁珠细胞分离，使无论是正面的选择（或细胞耗竭）以及阴性选择。在这里，我们展示了不变或NA已经CD4 +辅助性T细胞的阴性选择。使用这个标准的协议，我们通常净化细胞≥96％纯的CD4 + / CD3 +。虽然我们并没有表现出在这个协议的视频的流式细胞仪分析，它是强烈建议使用相应的抗体，通过流式细胞仪分离出的细胞检查的整体纯度。此外，我们证明T细胞隔离的非无菌的方法。如果无菌细胞是为您的特定最终用户的应用需要，一定要做好标准的无菌条件下，在组织培养罩中表现出的程序。
Subscription Required. Please recommend JoVE to your librarian.
Acknowledgments
我们要感谢编写的Mac缓冲丽贝卡Paquett。
Materials
| Name | Type | Company | Catalog Number | Comments |
| MACS Buffer | Reagent | None | None | Prepare as described by Miltenyi. |
| CD4+ T cell Isolation Kit: Untouched Isolation | Reagent | Miltenyi Biotec | 130-090-860 | For use with the Miltenyi system. |
| Sterile Phosphate-Buffered Saline (PBS) | Reagent | For use in the preparation of MACS buffer. | ||
| Corning 35mm Not TC-Treated Culture Dish | Other | Corning | 430588 | Used in the preparation of a single cell suspension. |
| 70 micron Cell Strainer | Tool | BD Biosciences | 352350 | Used in the preparation of a single cell suspension. |
| 6 mL Syringe | Tool | Tyco Healthcare, Covidien | 8881516051 | Used in the preparation of a single cell suspension. |
| 10x Dulbecco’s Phosphate Buffered Saline (DPBS) | Reagent | Invitrogen | 14200-075 | For use in RBC lysis. |
| Sterile Water | Reagent | Sigma-Aldrich | W4502 | For use in RBC lysis. |
References
- Miller, M. J., Hejazi, A. S., Wei, S. H., Cahalan, M. D., Parker, I. T cell repertoire scanning is promoted by dynamic dendritic cell behavior and random T cell motility in the lymph node. Proc Natl Acad Sci U S A. 101, 998-1003 (2004).
- Matheu, M. P., Deane, J. A., Parker, I., Fruman, D. A., Cahalan, M. D. Class IA phosphoinositide 3-kinase modulates basal lymphocyte motility in the lymph node. J Immunol. 179, 2261-2269 (2007).
