Summary
Denne kirurgiske teknik illustrerer injektion af genterapivektorer og stamceller i det subretinale rum af muse øjet.
Abstract
Tabet af synet påvirker omkring 3,4 millioner mennesker i USA og forventes at stige i de kommende år. 1 Senest har genterapi og stamceller transplantationer blevet centrale terapeutiske redskaber til behandling af blindhed som følge af retinal degenerative sygdomme. Adskillige former for autolog transplantation for aldersrelateret makulær degeneration (AMD), såsom iris pigment epithelial celletransplantation, har skabt opmuntrende resultater, og humane kliniske forsøg er begyndt for andre former for gen-og stamceller. 2 Disse omfatter RPE65 generstatning behandling af patienter med Lebers medfødt amaurosis og en RPE cell transplantation anvendes humane embryonale stamceller (ES)-celler i Stargardt sygdom. 3-4 nu, at der er genterapivektorer og stamceller til rådighed til behandling af patienter med retinale sygdomme, er det vigtigt at verificere disse potentielle behandlinger i dyremodeller før anvendelseING dem i humane studier. Musen er blevet en vigtig videnskabelig model til test af terapeutiske effektivitet af genterapivektorer og stamcelletransplantation i øjet. 8/5 I denne video artikel præsenterer vi en teknik til at injicere genterapivektorer eller stamceller i det subretinale rum af muse øjet samtidig minimere skader på det omgivende væv.
Protocol
1. Saml Hjælpemidler til subretinal Injection
- Købe eller lave en 100 um diameter nål fra et glaskapillarrør. Dette kan gøres manuelt ved hjælp af en Sutter P-97 pipette puller eller anden lignende anordning. Enden af kapillærrøret skal opvarmes og trækkes indtil det når den ønskede diameter (100 um). En mindre diameter nål kan anvendes til genterapivektorer, men dette er den anbefalede diameter for celleinjektion uden skade på cellerne eller øjet. Sammenlignet med stål nåle, har glaskapillar nål et meget fint, men stump spids, for at tillade visualisering af injektionsfluid og adgang til det subretinale rum uden at forårsage retinal brud. Rengør disse trækkes nåle hvis det er nødvendigt ved hjælp af 70% ethanol, og opbevares i en steril beholder. En 15 cm steril vævskulturskål med tape til at holde nålene på plads er en måde, hvorpå at holde injektionsnålene dækket og i et sterilt miljø. På dette tidspunkt, kplETE opsætningen inden for det kirurgiske rum, hvor proceduren vil finde sted. Det er lettest at holde alt udstyr i den kirurgiske værelse på alle tidspunkter, for at det fortsat skal være steril, især hvis denne procedure sker inden for en barriere facilitet.
- Aspirer silikone ind i kanylen og skubbe silicone at efterlade et overtræk langs de indre vægge af nålen. Siliconeovertrækket maksimerer passage af celler og virus gennem nålen boring, som ellers hænger fast i indvendige glas kapillarvæggene.
- Opnå en omtrent 8 cm længde af sterile plastrør ved et 25 ¾-gauge blodtapning sæt med luer-lock ved punktet direkte efter nålen (fjerner nålen fra røret).
- Fyld en 1 ml Sub-Q 26 5/8-gauge slip-spids sprøjte med sterilt saltvand og fjern nålen fra sprøjten.
- Fastgøre kanylen til den afskårne ende af plastslangen og fastgøre sprøjten til luer-lock ved den andenende.
- Aspireres sterilt saltvand at fylde det døde rum i røret og kapillær nål, skubbe nogle saltvand gennem nålen for at sikre, at det er korrekt monteret uden lækage. Derefter opsuges en lille, cirka 1 pi mængde luft, ind i spidsen af kanylen. Dette vil adskille saltvand fra injektionsvæske og tilvejebringe et visuelt signal, der angiver afslutningen af injektionen fluidum under den kirurgiske procedure. Injektionsapparatet bør holdes på en ren overflade tørres af med 70% ethanol under den kirurgiske procedure. Desuden bør alt udstyr, der anvendes under det kirurgiske indgreb renses både før og efter med 70% ethanol, for undtagelse af injektionsnålene der allerede skulle holdes sterile og klar til brug. Disse nåle skal bortskaffes efter operationen, og ikke bruges igen.
- Endelig aspireres injektionsopløsning indeholdende det ønskede emballerede genterapi virusvektor eller stamceller. Dette kan gøres vedoptage injektionsopløsningen ind i en steril pipettespids, derefter pipettering af opløsningen på overfladen af en steril cellekultur skålen. Opløsningen kan nu let opsuget i kanylen ved brug af sprøjten. Den nødvendige mængde vil variere afhængigt af alderen af musen. Til vores formål anvender vi postnatale dag 5 mus, som kan injiceres med 0,5 til 0,8 pi injektionsfluid. Mindre mængder, 0,5 gl eller derunder, kan anvendes til yngre mus og større mængder, såsom 1 pi, kan anvendes til voksne mus. Den virale titer eller antallet af celler skal bestemmes baseret på virus / cellerne er injiceret, og deres ønskede målvæv, kan så for mange virale partikler eller celler i et lille volumen føre til toksicitet for de retinale celler. I videoen, for visualiseringsformål har vi anvendt 1,5 pi, en større mængde farvestof end nødvendigt at injicere ind i øjet.
2. Adgang til subretinarummet
- I sterile kirurgisk værelse,stabilisere eller bedøve mus i henhold til den lokalt godkendt håndtering af dyr protokol, som vil variere efter alder af musen. Fælles anæstesi for voksne mus indbefatter anvendelse af isofluran gas eller en intraperitoneal injektion af 0,1 ml/10g legemsvægt af ketamin (100 mg / ml) og xylazin (20 mg / ml) i sterilt saltvand. For perinatale mus, omfatter fælles anæstesi teknikker brugen af isofluran gas eller cryoanesthesia (hypotermi). Alle anæstesi teknikker skal godkendes af dit lokale IACUC udvalg før brug. Vi anvender typisk postnatal dag (P) 5 mus, selvom lignende teknikker kan anvendes til mus helt ned til P0 eller voksne mus. Den kirurgiske procedure kan ikke begynde, før musen er ophørt at flytte benene og ikke længere reagerer på tå trykker. For perinatale mus, vil de blive mærkbart lysere i farven, da blodgennemstrømningen vil bremse, en anden nøgle til at vide, at de er helt under anæstesi.
- I perinatale mus, bruge Vannas lige saks til make en omtrentlig 1,5 mm indsnit langs den lukkede låg revne. Vær omhyggelig med at skære på indrykning, hvor øjet naturligt vil åbne i fremtiden. Dette sikrer, at lågene vil helbrede og åbner ordentligt under udviklingen af musen. En kirurgisk kniv kan anvendes til dette formål, skønt vi foretrækker Vannas sakse, eftersom de reducerer risikoen for punktering øjet under denne procedure. I videoen blev saks bruges til direkte punktering og snit langs øjenlåget margen. Når man lærer denne teknik bør pincet anvendes til at løfte øjenlåget før skæring og reducere risikoen for at beskadige øjet.
- Træk fra hinanden øjenlågene med buede dressing pincet til proptose øjet og knibe øjenlågene lidt under øjet for at holde det proptosed til injektion. Hvis låget snit i trin to er for stor, vil øjet falder tilbage i lågene og forhindre tilstrækkelig optagelse under injektionsproceduren. For voksne mus, med et let tryk omkring øjet med drEssing pincet kan holde øje proptosed til injektion.
- Lave en lille scleral incision ved eller posteriort for kloden ækvator ved at skrabe overfladen med en 15-graders mikrokirurgi klinge. Dette indsnit kun bør være stor nok til at passere spidsen af kanylen, men ikke større end denne. Hvis det foretrækkes, kan en lille, spids nål, såsom en akupunkturnål anvendes til fremstilling af denne incision i det subretinale rum i stedet for mikrokirurgi bladet. I mørkere dyr, vil en mørkebrun-pigmenteret væv (årehinden-retinale pigmentepitel) bliver synlige på det sted indsnit. I lysere pigmenterede eller albinomus, kan en kirurgisk markeringspen påføres på spidsen af mikrokirurgi bladet at efterlade en blæk stedet angiver incisionsstedet. Hvis klare (glaslegemet) væske tilbagesvaler fra incisionssted, blev bladet placeret for dybt og gik ind i corpus vitreum-hulen og den terapeutiske virus eller celler kan komme ind i intravitreale rum under injektion. For visualizatiom formål, har vi gjort indsnit til dette punkt i videoen. Det er stadig muligt at gennemføre en subretinal injektion i dette tilfælde imidlertid nethindeløsning skyldes tilstedeværelsen af injektionsfluid måske ikke fuldt ud at helbrede i denne mus. Derfor skal der drages omsorg for at skære kun den ydre overflade af øjet og ikke gennem nethinden før injektion.
- Sæt forsigtigt kanylen ind i incisionssted og fremføre det parallelt med den ydre øje væg at indtaste subretinarummet. Fremføring for tæt på den ydre væg eller for dybt inde i øjet vil dirigere injektion i den forkerte placering. Den bedste metode til at forstå, om nålen er i den korrekte placering er at øve teknikken. Øve på let pigmenteret eller albino mus kan være med til at lave præcise og præcise injektioner i den subretinarummet. Dette skyldes, at nålen og injektionen fluid er synlig i disse øjne.
- Påfør let tryk til sprøjtestemplet og væregin injektion af det ønskede fluid. Hvis nålen er korrekt placeret i det subretinale rum, vil moderat modtryk kunne mærkes. Hvis nålen er i glaslegemet, vil der være betydeligt mindre modtryk og potentielt vis mængde fluid tilbagesvaling under injektionen. Hvis der er betydelig modtryk, holde nålen på plads i mindst yderligere 15 sekunder, før nålen fjernes langsomt. Dette vil gøre det muligt for højt intraokulært tryk for at udligne stedet for tilbagesvaling af injiceret virus eller celler ud igen incisionssted. Noget af luften og saltvand, injiceres i det subretinale rum på grund af det øgede tryk, som kræves under injektionsproceduren. Der skal udvises omhu for ikke at over-sprøjte luft eller saltvand, da den kan skylle den injicerede virus eller celler fra øjet. Det er også muligt at forårsage permanent nethindeløsning fra tilstedeværelsen af for meget væske injiceres i det subretinale rum. Til visualisering formål, blev overskydende farve og luft injiceres into subretinarummet i videoen. Det kan tydeligt ses, hvordan nogle af farvestoffet vil blive skyllet tilbage ud af det subretinale rum, hvis for meget injiceres, men også hvordan luftboblen forbliver i det subretinale rum og ikke forsvinder i glaslegemet. Det blev brugt til at understrege, at disse injektioner var alle inden for den korrekte placering i øjet, så man kan visualisere, hvordan nålen skal indtaste incisionssted. Alle injektioner i det subretinale rum forårsage en midlertidig nethindeløsning på grund af tilstedeværelsen af injektionsfluid. Hvis injektionen er fuldført korrekt, vil denne midlertidige nethindeløsning heler inden for 24 timer og musene kan anvendes til alle yderligere forsøg. Øjet kan forblive blød i cirka én uge som følge af den kirurgiske procedure, så endnu en injektion bør undgås i løbet af denne periode.
- For neonatale mus, bruge de buede dressing pincet til forsigtigt at skubbe øjet tilbage bag låg og ind i kredsløb. Kan det være nyttigtat vente et minut, således at virusset til at slå sig ned i det subretinale rum og ikke få det til at blive skyllet ud af incisionssted ved forsigtigt at skubbe øjet tilbage i sin bane. Efter kirurgi, fortyndes en dråbe 0,5% bupivacain (marcain) til 0,25% i sterilt saltvand fra en 25-gauge kanyle kan placeres på injektionsstedet. Mus ikke viser åbenlyse tegn på angst efter subretinal kirurgi og brug af bupivacain som et langtidsvirkende lokal smertestillende har været rigelig for de foregående tre år. Mus skal altid overvåges efter den kirurgiske procedure for at lede efter eventuelle tegn på angst, såsom infektion, hævelse, eller et fald i de sædvanlige daglige aktiviteter i musen. Hvis det forekommer, bør dyrlægen skal anmeldes og yderligere smertestillende medicin såsom buprenorphin (0,05 mg / kg) kan gives som en intraperitoneal injektion.
- Vågn musen fra anæstesi i henhold til lokalt godkendt håndtering af dyr protokol. Musen bør holdes på et varme pannonce for at opretholde normal kropstemperatur, da det vågner fra bedøvelsen. Den kirurgiske procedure bør tage mindre end fem minutter at udfylde, ikke tælle tiden for musen til at gennemgå anæstesi. Derfor er en varmepude er ikke nødvendigt under selve proceduren, men kan være nødvendig, mens man lære den teknik som den procedure kan tage længere varighed af tid. Musen bør ikke placeres tilbage i et rent bur, indtil det er begyndt at bevæge sig rundt på egen hånd. For nyfødte, vil blide tå klemmer hjælp for dem at komme sig helt fra anæstesi, og de bør genvinde deres lyserøde farve og bevægelse inden det blev bragt tilbage med moderen. Mus bør overvåges over tid for tegn på angst som anført tidligere.
Subscription Required. Please recommend JoVE to your librarian.
Representative Results
En tegning af musen øjet er vist med store strukturer mærket til reference, med pile viser de steder for både intravitreale og subretinal injektion kirurgiske procedurer (pilespidser, figur 1). Genterapivektorer, såsom lacZ lentivirusvektoren (fig. 2), kan injiceres ved hjælp af disse placeringer. Derudover kan stamceller, såsom muse embryonale stamceller (figur 3), også transplanteres på disse steder i muse øjet.
1 ml af en lentiviral vektor der bærer lacZ-reportergenet styres af cytomegalovirus (CMV)-promotor (1x10 8 TU / ml, Lentigen Corporation, figur 2A) blev injiceret i det subretinale rum af C57BL/6J-mus. Øjne blev udkernet på seks uger gamle ved stump dissektion og nedsænket i 1 mg / ml X-gal-opløsning (5 mM K3Fe (CN) 6, 2 mM MgCI2, 0,02% NP 40 og 0.1% natriumdeoxycholat) natten over ved 37 ° C. Øjnene blev fikseret i 2% formaldehyde/0.2% glutaraldehyd i 30 minutter og i snit på en mikrotom. LacZ-reportergenet ekspression blev detekteret som X-gal produkt (blå) i cirka 10% af fotoreceptorceller (figur 2B). Den intracellulære tilstedeværelse af lacZ udtryk og de intakte omgivende væv indikerer den vellykkede subretinal injektion i mus øjet.
C57BL/6J muse embryonale stamceller (ES) celler blev mærket med et grønt fluorescerende protein (eGFP, Wellcome Trust Sanger Institute). Disse celler blev derefter opsamlet og suspenderet i sterilt phosphatpufret saltvand og transplanteret ind i subretinarummet i postnatale dag (P) 5 C57BL/6J-mus med ca 1x10 5-celler injiceret per 1 pi. Øjne blev udkernet på to uger ved stump dissektion, fastgjort i en sucrosegradient og nedfrosset i OCT indlejringsmedium (Tissue-Tek). Øjne blev snittet og vis ualized under fluorescensmikroskopi (Zeiss). Tilstedeværelsen af GFP-mærkede ES-celler kan findes i det subretinale rum af den injicerede mus øjet (figur 3A). Derudover blev C57BL/6J-Tyr c-2j / J (C2J) muse embryonale stamceller (ES)-celler elektroporeret med gult fluorescerende protein (YFP) og differentieret i retinale pigment epitel (RPE) celler in vitro. Efter en måneds differentiering blev YFP-mærkede RPE-lignende C2J ES-celler suspenderet i sterilt phosphatpufret saltvand og injiceres i det subretinale rum af P5 C57BL/6J-mus. Ved 15 ugers alderen, var en mus visualiseret under anvendelse af levende-imaging autofluorescens for tilstedeværelsen af YFP i retina (Spectralis Scanning Laser Confocal oftalmoskop, Heidelberg Engineering, figur 3B).
4286fig1highres.jpg "/>
Figur 1. Skematisk af Mouse Eye. En tegneserie tegning forestiller strukturerne i musens øje med steder for både intravitreale og subretinal injektion markeret procedurer (pilespidser).
Figur 2. Subretinal injektion af en Gene Therapy viral vektor. A. lentivirus vector kort over den lacZ-reportergenet styres af cytomegalovirus (CMV)-promotor. B. Ekspression af lacZ reportergenet i nethinden i en seks uger gamle C57BL/6J mus efter subretinal injektion ved postnatal dag fem. RGC, retinale ganglieceller, INL, indre nukleare lag, IS, fotoreceptor indre segmenter (pil), onl, ydre cellekernelag (fotoreceptorer) (pilespids), OS, fotoreceptor ydre segmenter.
Figur 3. Subretinal Injektion af muse embryonale stamceller (ES) celler. A. En to uger gamle C57BL/6J mus efter subretinal injektion af grønt fluorescerende protein (GFP)-mærkede ES-celler på postnatal dag fem. GFP-positive celler er synlige i det subretinale rum af den injicerede øje med fluorescensmikroskopi (Zeiss). Green, GFP-mærkede ES-celler (pile), RGL, retinal ganglion lag, INL, indre kernelag, ONL, ydre cellekernelag (fotoreceptorer), IS / OS, indre og ydre fotoreceptor segmenter, RPE, retinale pigmentepitel. B. En 15 uger gamle C57BL/6J mus retina vist ved hjælp af autofluorescens live-imaging (Spectralis Scanning Laser Confocal oftalmoskop, Heidelberg Engineering) for tilstedeværelsen af gult fluorescerende protein (YFP)-mærkede RPE-lignende C2J muse ES-celler i nethinden.Subretinal injektion af RPE-lignende YFP-ES-celler blev udført ved postnatal dag fem.
Subscription Required. Please recommend JoVE to your librarian.
Discussion
Denne video teknik indeholder en vejledning i at udfylde subretinal injektion kirurgiske procedure med succes, og sikre, at genterapivektoren eller stamceller er placeret på det sted, nødvendigt for effektivt at behandle oftalmiske sygdom. Denne teknik giver mulighed for målretning af retinale celler, såsom RPE eller fotoreceptorer, fordi de bringer de genterapivektorer eller stamcelle afledt væv i nærheden af disse celler. Tidligere metoder involverede intravitreale injektioner, hvor fluidet er anbragt i den glasagtige hulrum og skal migrere gennem nethinden med henblik på at målrette disse specifikke områder. Intravitreal injektion reducerer transduktion af genterapivektorer er målrettet mod fotoreceptorer eller RPE, idet ikke alle virale partikler vil vandre ind i den korrekte placering. Endvidere er stamceller stadig mere populært at erstatte syge RPE eller fotoreceptorer, og disse differentierede celler skal transplanteres i subretinal plads. fem
Det kritiske trin i denne procedure er trådt ind i det subretinale rum, da dette sikrer den korrekte placering af genterapivektorer eller stamcelle-afledte væv for at have terapeutisk virkning sammen med reduktion af risikoen for nethindeløsning eller beskadigelse af det omgivende øjet væv. Må drages omsorg for at foretage fejlfinding på forhånd, for at kunne lokalisere og injicere væsken ind i det subretinale rum. Dette kan ske gennem praksis ved at anvende farvet farvestof og albinomus, som vist i videoen, eftersom injektionskanylen ikke vil være synlige i øjet af pigmenterede mus. Efter praksis vil forskeren lære at mærke forskellen i tryk, når væsken placeres korrekt i en subretinarummet og være fortrolig med den kirurgiske procedure for at fuldføre det i tide.
Der er nogle mulige modifikationer til denne kirurgiske procedure. Disse injektioner kan udføreed på mus med forskellig alder, selv om mængden af genterapivektorer injicerede eller stamcelle-afledte væv kan variere afhængigt af alderen af musen. Der skal udvises omhu for at bestemme, hvor meget fluid vil fremme behandling for ophthalmisk sygdom, men forlænger ikke løsrivelse og beskadigelse af nethinden. Løftes kapillær nål kan modificeres til at have forskellige diametre. Mindre nåle er tilstrækkelige til virale injektioner, men større diametre kan være bedre for cellulær transplantation. Desuden kan kirurgi udføres på voksne mus. Øjenvævet massefylden vil være meget større, er så frisk, skarpe kirurgiske klinger kræves til at trænge ind i subretinarummet. I alle tilfælde kan der foretages ændringer på grundlag af denne protokol til at gennemføre en vellykket subretinal injektion af en genterapivektor eller stamcelle afledt væv.
Alle subretinal injektioner vil forårsage en midlertidig nethindeløsning på grund af tilstedeværelsen af den injicerede væske isubretinale rum, men denne adskillelse bør heler inden for 24 timer efter det kirurgiske indgreb. Mus kan omhyggeligt kontrolleres under et mikroskop for ethvert resterende adskillelse. Det er muligt, at nogle mus ikke kan helbrede naturligt selv efter en velplaceret injektion. Alle mus er i stand til at undergå eksamen og efter dette 24-timers-periode, men øjet kan være bløde som følge af en ændring i trykket af injektionsproceduren i op til en uge. Derfor en begrænsning ved denne teknik er evnen til at udføre sekundære injektioner i den første postoperative uge. En anden injektion måske ikke muligt i den umiddelbare postoperative periode, da hyppigheden af nethindeløsning, der ikke heler efter kirurgi øges. Det tilrådes at vente på en længere varighed af tid, så længe en måned, før re-injektion af musen øjet.
Musen er blevet en vigtig model organisme for at studere oftalmisk sygdom og mulig behandling that vil føre til kliniske forsøg med mennesker. 9-12 En anden begrænsning ved denne procedure er, at ikke alle cellerne transficeret med DNA-vektorer efter subretinal injektion, som de ville være i en transgen musemodel. Denne fremgangsmåde kan tilnærmer sig en klinisk procedure i mennesker, hvor ikke alle celler er transficeret. Således kan denne teknik være med til at etablere muligheden for genterapi virale vektorer eller stamcelle afledt væv transplantation terapi til behandling af aldersbetinget maculadegeneration og andre vitreoretinal sygdomme hos mennesker. Fremtidige anvendelser kan indbefatte anvendelsen af forskellige retinale celler promotorer og differentierede stamceller eller endog flere injektioner under anvendelse af en kombination af behandlinger.
Subscription Required. Please recommend JoVE to your librarian.
Disclosures
Ingen interessekonflikter erklæret.
Acknowledgments
Forskning for at forebygge blindhed, Experimental assistance fra Takayuki Nagasaki; Denne forskning er i overensstemmelse med ARVO erklæring for anvendelse af dyr i Oftalmologiske og Visual Research. KJW understøttes af NIH tilskud 5T32EY013933 og 5T32DK007647-20. VBM understøttes af NIH bevilling K08EY020530.
Materials
| Name | Company | Catalog Number | Comments |
| 0.8-1.10 x 100 mm Capillary Tube (glass) | Kimble Glass, Inc. | 34502 99 | |
| Flaming/Brown Micropipette Puller | Sutter Instrument | P-97 | Narishige microforge can be used instead. Catalog #MF-900 |
| Sigmacote | Sigma Aldrich | SL2-25ML | Silicone |
| Dubecco's Phosphate Buffered Saline with Calcium Chloride and Magnesium Chloride | Gibco-Invitrogen | 14040-133 | |
| Safety-Lok 25 3/4G x 12"; Blood Collection Set | B-D Vacutainer | 367298 | |
| 1 ml Sub-Q 26 5/8G Slip-Tip Syringe | Becton-Dickinson | 309597 | |
| 0.5-10 μl Finnpipette II Adjustable-Volume Pipetter | Fisherbrand | 21-377-815 | |
| 1-200 μl Natural Beveled Tips | USA Scientific, Inc. | 1111-1700 | |
| Discovery.V8 Stereo Microscope | Zeiss | MC1500 | |
| 60 mm x 15 mm Style Treated Polystyrene Cell Culture Dish | Corning Incorporated | 430166 | |
| Vannas Straight Scissors | Storz Ophthalmics | E3383 S | |
| Curved Dressing Forceps with Serrations Delicate | Storz Ophthalmics | E1408 | |
| 15 Degree Microsurgery Knife | Wilson Ophthalmic Corp. | 091204 | |
| Ketamine | Ketaset III | NADA #45-290 | |
| Xylazine | Lloyd Laboratories | NADA #139-236 | |
| Bupivacaine (Marcaine) | AstraZeneca | N/A | |
| Buprenorphine | Sigma Aldrich | B9275 |
References
- Prevalence of Blindness Data Tables [NEI Statistics and Data]. , National Eye Insitute. Available from: http://www.nei.nih.gov/eyedata/pbd_tables.asp (2011).
- Abe, T. Regeneration of the retina using pigment epithelial cell transplantation. Nihon Ganka Gakkai Zasshi. 106, 778-803 (2002).
- Jacobson, S. G., Cideciyan, A. V., Ratnakaram, R., Heon, E., Schwartz, S. B., Roman, A. J., Peden, M. C., Aleman, T. S., Boye, S. L., Sumaroka, A., et al. Gene therapy for Leber congenital amaurosis caused by RPE65 mutations: safety and efficacy in 15 children and adults followed up to 3 years. Arch. Ophthalmol. 130, 9-24 (2011).
- Schwartz, S. D., Hubschman, J. P., Heilwell, G., Franco-Cardenas, V., Pan, C. K., Ostrick, R. M., Mickunas, E., Gay, R., Klimanskaya, I., Lanza, R. Embryonic stem cell trials for macular degeneration: a preliminary report. Lancet. 379, 713-720 (2012).
- Wang, N. K., Tosi, J., Kasanuki, J. M., Chou, C. L., Kong, J., Parmalee, N., Wert, K. J., Allikmets, R. Transplantation of reprogrammed embryonic stem cells improves visual function in a mouse model for retinitis pigmentosa. Transplantation. 89, 911-919 (2010).
- Song, B. J., Tsang, S. H., Lin, C. -S. Genetic models of retinal degeneration and targets for gene therapy. Gene Ther. Mol. Biol. 11, 229-262 (2007).
- Tosi, J., Sancho-Pelluz, J., Davis, R. J., Hsu, C. W., Wolpert, K. V., Sengillo, J. D., Lin, C. S., Tsang, S. H. Lentivirus-mediated expression of cDNA and shRNA slows degeneration in retinitis pigmentosa. Exp. Biol. Med. 236, 1211-1217 (2011).
- Tucker, B. A., Park, I. H., Qi, S. D., Klassen, H. J., Jiang, C., Yao, J., Redenti, S., Daley, G. Q., Young, M. J. Transplantation of adult mouse iPS cell-derived photoreceptor precursors restores retinal structure and function in degenerative mice. PLoS One. 6, e189992 (2011).
- Mahajan, V. B., Mondino, B. J., Tsang, S. H. A high-throughput Mouse Eye Phenomics System. , Cold Spring Harbor Laboratories. (2010).
- Chang, B., Hawes, N. L., Hurd, R. E., Davisson, M. T., Nusinowitz, S., Heckenlively, J. R.
- Hawes, N. L., Smith, R. S., Chang, B., Davisson, M., Heckenlively, J. R., John, S. W. Mouse fundus photography and angiography: a catalogue of normal and mutant phenotypes. Mol. Vis. 5, 22 (1999).
- Won, J., Shi, L. Y., Hicks, W., Wang, J., Hurd, R., Naggert, J. K., Chang, B., Nishina, P. M. Mouse model resources for vision research. J. Ophthalmol. 2011, 391384 (2011).
