Summary
このビデオの記事では、我々は大人のフルーツキイロショウジョウバエを飛んでの嗅覚に依存する食品の検索行動に空腹や満腹の効果を測定するための自動化されたアッセイを説明します。
Abstract
多くの動物の場合は、飢餓は、適切な食料源の検索を容易にする方法で、嗅覚系の変化を促進する。このビデオの記事では、我々は大人のフルーツキイロショウジョウバエを飛んでの嗅覚に依存する食品の検索行動に空腹や満腹の効果を測定するための自動化されたアッセイを説明します。ショウジョウバエには見えない赤い光で照明光を通さない箱では、カスタムデータ収集ソフトウェアにリンクされたカメラは、同時に6ハエの位置を監視します。各ハエを中心に食品の匂いを含む個々の競技場の中を歩くに限定されている。臭いの蓄積を防ぐために機能し、多孔性床に残りアレナステスト。臭気源、異なる生理学的状態の下で嗅覚感度を反映したメトリックを検索するレイテンシは、ソフトウェア分析により決定される。ここでは、この行動パラダイムを実行する重要な仕組みを議論し、フライLOADIに関する具体的な問題をカバーngの、臭気汚染、アッセイ温度、データ品質、および統計分析。
Introduction
食品の検索と食料消費1：飢餓の状態は欲求行動の2種類を推進しています。この単純な行動アッセイは、2,3採餌に関連する走化性行動の研究のために有用である。具体的には、食品の匂いターゲットを見つけるに飛ぶ位置、歩行速度と遅延を追跡します。食品所見のレイテンシは、その内部欲求状態の変化の下流フライ臭気検出システムの感度の変化を測定するための測定基準として機能する。このアッセイの説明書のバージョンは、以前はGABA-B受容体シグナル伝達が3ハエ成虫における臭気定位挙動にとって重要であることを示すために使用した。アッセイの現在の自動化されたバージョンはどのように短い神経ペプチド-F（sNPF）のシグナル伝達の研究に尽力したショウジョウバエの嗅覚マップの形状を変更し、影響が行動2を食欲。
試験は暗い、温度及び湿度制御された部屋で行われる。デジタル透明アクリルのテストプレートの上に設定されたビデオカメラは、660 nmのLED照明によりバックライトハエを追跡。カメラからの情報は、次の検査エリアに駐留するコンピュータによりリアルタイムで処理される。我々は、試験期間中にフライ位置の座標を記録して保存するデータ取得ソフトウェアを使用する。
このパラダイムでは、被写体が中央に食べ物の匂いが含まれているアリーナ中に放出され、臭気オブジェクトは、フライ食品の検索動作を誘導アリーナ内の食品のにおいのグラデーションを作成します。同じような匂い検索プロトコルは、単一のショウジョウバエの幼虫7における化学感覚の研究に向かって適用されている。このような4フィールドオルファクトメーター4,5またはT-迷路6など他の行動アッセイは、臭気嫌悪やアトラクションの行動を評価しながら、このパラダイムは、嗅覚感度および走化性行動を評価することが最も適しています。
いくつかの重要な利点は、このASSAに同行Y。データ収集と分析は主に自動化されているので、第一に、それは、大規模なデータセットの迅速な取得を可能にする。第二に、このアッセイは、単離するので、それらの挙動に影響を与え得る社会的嗅覚の手がかりを排除する、単一のハエの行動を測定する。第三に、プロトコルとシンプルな実験デザインのシンプルさは、アッセイが、効率的で他の人を教えることが簡単になります。
さらに、このアッセイは、さらに、 キイロショウジョウバエ 8で使用可能な大規模な遺伝的ツールキットと組み合わせることにより、食物探索行動の基礎となる神経回路をプローブするために使用することができる。無音またはするニューロンを興奮させることを目標と導入遺伝子の発現は、GAL4-UASシステムだけでなく、UAS-shibireのTS1、UAS-破傷風毒素、およびUAS-TRPA1（B）の導入遺伝子9月12日などのツールを用いて達成することができる。
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Protocol
1。ハエ収集と飢餓
- 12時間の明/暗サイクルで制御された温度および湿度条件下で、実験後方ハエ（ 例えば、21°C、相対湿度50〜60％）。
- 女性は羽化の日に飛ぶ収集し（最大30バイアル当たり）新しい食品バイアルに、4〜5人の男性と一緒に、それらを配置する。年齢は2〜5日飛ぶ。
- フライ飢餓のための室を準備します。
- 空のプラスチックバイアルの底に、単一の組織（4.8×8.4インチ）を押します。完全に蒸留水を用いて組織を浸す。組織を押し下げ、ゆっくりと余分な水分を絞り出すようにオブジェクトを使用します。
- 余分な水を廃棄するように、バイアルを反転します。湿った、しかし、ハエを紛らすのに十分ではないで水和ハエや飢餓室を維持するのに十分な水があるはずです。
- 飢餓室に食品のバイアルからハエを転送し、実験を開始する前に、バイアルを約18〜24時間後に接続します。保存する一晩、制御された温度と湿度の条件の下でバイアル実験は次の日に開始されるまで。
2。食品臭気の調製
- アガロースガラスフラスコ内の10mlの蒸留水に低い溶融温度を0.1gを添加して1％アガロース溶液を調製する。それが沸騰し始めるちょうどまで電子レンジでアガロース溶液を加熱しますが、それは上に沸騰するかなり前。
- 電子レンジを止めて、一度、フラスコを旋回。アガロースが完全に溶解するまでさらに2回、この手順を繰り返します。 50℃に設定したホットプレート上で、フラスコを暖かく保つことにより液体状態でアガロース溶液を保つ
- 1％のリンゴ酢液を作るために1.5ミリリットルエッペンドルフチューブに1％アガロース溶液を990μLとリンゴ酢の10μlを加える。ボルテックス混合するまで溶液を50℃に設定し、ドライ風呂インキュベーター内の場所
3。テストルームと行動室のセットアップ
- LEDパネル（660 nm）をオンにします。
- お湯で篩および試験プレートをすすぎ、水分が全て蒸発するまで乾燥オーブンでそれらを加熱する。実験を開始する前に、試験室温にモレキュラーシーブ、プレートを冷却する。
- 拡散板の上に浅い皿を置き、現地の湿度を高めるために、アガロース液滴の水をマスクするために水でそれを埋める。
- 水皿の上でモレキュラーシーブを配置します。
4。テストプレートにロードして飛ぶ
テスト版の仕様との図は、補足ファイル]セクションにあります。テストプレートは、透明なアクリル製で、6テストアリーナで構成されている。シンプルなスライダーがで、それぞれの室にハエのロード、一時的な封じ込め、および6ハエの同時放出を可能に保持チャンバーが含まれています実験開始。プレート中の各競技場の中央でエッチング十字線は、匂い物質をピペットでされるべき場所を示す。
- アクリルテストプレートにスライダーを挿入します。
- 優しく綿栓過去バイアルに吸引器をスライドさせて約6ハエがaspirator.itに歩くことを許可することは、それらを取り扱う際にはできるだけ優しくすることが重要です。一つは、薄暗い光源に向けて、バイアルの開口部を指すことによって吸引器に向かってクロールするハエを誘導することが走光性フライの動作を利用することができる。必要であれば、人はまた、約6メスのハエを吸引する穏やかな吸引を適用してもよい。
- テストプレートの第1穴に吸引器の先端を挿入します。シングルフライ、保持セル内に通過させ、ゆっくりと次のホールにフライをロードするために前進スライダを進めることができます。ハエは、プレートの全6保持セルを占有するまで継続する。
- CRの中心に直接1％リンゴ酢アガロース溶液をピペット5μLテスト板の内側面におけるOSS-毛。
5。テストプレートを配置
- テストプレートを中央に、「位置決めTool.vi.」という名前のファイルを開きます位置決めツールの「LabVIEWのVI。 viは補足ファイル]セクションにあります。画面の左上隅にある白い矢印をクリックして、ファイルを実行します。
- アリーナの開口部がふるい床に面しており、臭気ターゲットはプレートの天井になるように、ふるいの上にテストプレートを置きます。モニター画面上の十字線を使用したテストプレートの背面にエッチングされた十字線の位置を合わせます。
- アライメントが完了すると、ディスプレイの左上隅に位置する赤い点をクリックすることで実行を中断する。
6。実験中にフライ位置を記録
- 各食品の検索試験中にハエの座標を追跡し、記録するために、収集ソフトウェアファイルを開き「FLYトラッキング - シックスZones.vi「LabVIEWのVIは「フライ追跡 - シックスZones.viは「補足ファイルのセクションを参照してモニターの左上隅にある白い矢印をクリックして、ファイルを実行します。 。
- ファイルに名前を割り当てて、上で「OK」をクリックします。
- テストアリーナにハエを解放するために、試験室でスライダを進める。これは解析ソフト座標との不適切なアライメントにつながるように、試験室を移動させないように注意してください。
- "スタート"（録音が始まる）をクリックして、検査室での光の唯一の供給源は、660nmのLEDパネルであることを確認してください。
- 試験が終了すると、ふるいや行動チャンバーを取り外します。ふるいからテストプレートを持ち上げ、氷の中にプレートを浸漬することでハエを削除します。そっとお湯でプレートをきれいにし、任意のアガロース片を除去。水分を除去するために乾燥炉での試験プレートを配置します。
- Smalのをオンにすることで、テスト場所を換気約2分間のLファン。ファンの電源をオフにして、次のテストプレートにハエの次のグループをロードします。
7。カスタムソフトウェアを使用したデータ分析
「フライトラッキング6つのゾーンを持つデータ分析「補足ファイル]セクションにあります。データ取得中に、取得ソフトウェア·レコードの個々のハエ位置は、テキストファイル内の各時点の座標。試験プレートの上方に配置された単一のデジタルカメラは、0.5ヘルツのフレームレートで画像を取得する。 「フライ·トラッキング·6つのゾーンをデータ解析」は、そのテキストファイルから情報を抽出し分析ソフトウェアプログラム）が平均速度を計算し、b）正常臭気源を配置し、フライc）は、グラフィカルウィンドウを構築する時点を決定するそれは見ることができるように、場所、時間をかけて、時間と平均フライオーバースピード臭気源からのハエの距離を飛ぶ。また、SPREに簡単にエクスポート用のデータをフォーマットadsheetプログラム。このマクロでは、食品検索遅延はアリーナの中央の半径5mm以内に少なくとも5秒を費やすハエた時点として定義される。
- " - 6つのゾーンフライ追跡のためのデータ解析「解析ソフトウェアファイルを開きます。の「Windows」タブで、「新しいテーブルを作成します。」をクリックしてください6テーブルが作成されるまで、この手順を繰り返します。
- 「マクロ」タブで、をクリックして「Foodfinding。 "メインパネルには、以下のオプションを使用して表示されます：オープン生データは、レイアウト用のファイル、オープンRAWデータは、データ·ファイルのファイル、フライ場所、距離、スピード、レイアウト、FormatDataFile。
- 、テキストファイルに値を追加することなく、生のデータを表示するにはをクリックして「レイアウトのためのオープンRAWデータファイル。 "表示されるブラウザウィンドウでの実験データファイルを探し、選択します。をクリックして「開く」
- 6アリーナ（各フライを描いた6 XYプロット」のそれぞれで各ハエの場所を表示するには、 "フライの場所」をクリックします時間をかけてs位置）は画面に表示されるはずです。
- （時間の経過に臭気源からハエの距離を描いた6プロットが画面に表示されます）臭気源からの各ハエの距離を表示するには、「距離」をクリックします。 yは5ミリメートルでの水平線は、フライ食品源に位置していると考えられるしきい値を示す。
- （時間をかけてハエのスピードを描いた6プロットが画面に表示されます）試験期間中に、各ハエの平均速度を表示するには、「スピード」をクリックします。
- （最初の50秒の間）の平均速度に加えて、各ハエ（図1）のための臭気源を見つけるの待ち時間、すべてのハエの位置、距離、速度グラフでレイアウトを表示するには、「レイアウト」をクリックします。適切にレイアウトを表示するためには、マージンを調整する必要があり得る。これを行うには、最初のレイアウトウィンドウをクリックしてください。 「ファイル」タブで、「レイアウトのページ設定。」をクリックしてくださいに余白をリセット0.2インチとで「OK」をクリックします。すぐにそれぞれの場所プロットの左の見出し「速度」とした小さなテーブルで「レイテンシ」各見出しの下に入力した値は、秒単位の平均速度100mm /秒と食品の検索の待ち時間を示す。レイテンシの下の空白のエントリは、ハエが臭気発生源を突き止めることができなかったを示している。食品検索遅延はハエは、チャンバの中心から半径5mm以内に少なくとも5秒を過ごした時点として定義される。
- レイアウトを印刷するには、レイアウト領域（現在のファイルへの更新·レイアウト）をクリックしてください。 「ファイル」をクリックし、をクリックして「印刷レイアウト。 "
- 次のファイルを表示するには、単にクリックして「レイアウトのためのオープンRAWデータファイル。 "あなたが上で表示し、クリックしたい次の生データファイルをクリックして「OK」新しいデータファイルを使用してウィンドウを更新するために、レイアウトウィンドウをクリックします。
- 設定は、後で使用するために、実験ファイルに保存することができる。
8。からのデータのエクスポート表計算プログラムへのデータ解析ソフトウェア
- それぞれのファイルに対して、速度とレイテンシのデータをエクスポートするには、をクリックして「開く生データがデータ·ファイルのファイル。 "実験データファイルを選択し、をクリックして「開く。」新しいブラウザウィンドウが表示されます。
- 新しいブラウザウィンドウで、「新規作成」を右クリックしてをクリックして「テキストドキュメント。 "新しいテキストドキュメントに名前を付けます。新しい名前のテキストファイルを選択し、をクリックして「開く。」これはテキストファイルに生データファイルからのデータを格納します。
- 別のファイルからデータをエクスポートするには、「オープン生データがデータ·ファイルのファイル。」をクリックしてください別のファイルをクリックし、をクリックして「開く。」 ）ステップ8.2からテキストファイルを選択します。エクスポートする残りのデータファイルに対してこの処理を続行します。
- すべての必要なデータファイルがテキストファイルに追加されたら、をクリックして「形式のデータファイル。 "ドキュメントは、前のステップからのデータを保存し、「開く」をクリックするために使用されるテキスト（新しいWINDOを選択wは自動的に）開きます。
- ウィンドウ内に新しいテキストファイルを作成し、ファイル名を割り当てて、をクリックして「保存」。これは、各フライのテキストファイル名を含むファイル、平均速度、および待ち時間を作成し、表計算プログラムにインポートすることができます。
- 累積的なプロットは、時間の関数（図3）などの食品臭ターゲットに到達するハエの総数のデータから構築される。
- 実験データセットは、比率のZ検定を用いて統計的有意性について分析する。
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Representative Results
データ解析ソフトウェア及びレイアウトは、 図1に見られるその一例は、分析基準のセットに従って、その10分間の試験中に、各ハエの性能を評価するために使用される。以下の基準は、各ハエからのデータがデータ分析のために使用され、負傷、疾病、ストレス、または意欲の欠如のために、食品検索タスクが実行できないそれらのハエを排除するように設計されているかどうかを決定するために使用される。
300以上の秒アクティブではハエが「非アクティブ」であると考えられ、これらはA）がすでに食料源を見つけることに成功しているか、b）少なくとも100秒の平均速度> 10ミリメートル/秒を発揮しない限り、データセットから拒否されます非アクティブ期間（図2a、図2b、図2c）は、以下の。
健康的なハエは、その保持室から解放されると、すぐに強力な検索行動を示す。このように、そののみハエを選択するには唯一の試験の最初の50秒間の速度の一定の範囲内でその動きを飛ぶ、アクティブな臭気検索の初期段階で健康的な速度を発揮するには、データ分析のために受け入れている。この基準は、a）の臭気源の近くにハエのように、その速度が減少し、b）は、いくつかのハエがアッセイの最初の50秒以内に臭気目標を達成私たちの観察に基づいている。速度基準は、所定の実験温度で少なくとも100対照ハエの平均速度を評価することによって決定される。標準偏差は、それぞれ - 上限/下限制限速度は平均速度+ /によって設定されます。例えば、21℃でのみ試験の最初の50秒で3.5〜10.5ミリメートル/秒との間の動きをハエは、データ分析のために使用される。この規則の例外は正常に最初の50秒以内に臭気源に位置し、低速限界よりもこのように遅くなりますハエのために作られています。
アリーナ内のすべての4象限を移動すると、ヘッドはありませんハエストレートトライアル開始後の食料源のため（図2d）拒否されます。
近づいたり離れたり50秒の最低10ミリメートルの半径内の食物源からの織りハエが正常に食料源を発見したと考えられている。経時的に臭気源からフライの距離を示すプロットは、このまれなケースを評価するために使用することができる。これは自動的に現在のデータ分析マクロによって検出されず、手動で検出されなければならない成功した検索（図2e）の唯一のインスタンスである
フライ位置トレースに見える成果物とアリーナは拒否されます。アーチファクトは、データ収集ソフトウェアは、フライ以外の物体を検出する任意のイベントによって作成することができる。彼らは頻繁にアリーナにまたがるか、その中心（図2f）から放射状に限り、直線で表示されます。
図3では、成人のハエは、18〜24時間後の展示に高いOを飢えその供給されたカウンターパート1よりも食品関連匂いに対する感度lfactory。首尾よく食料臭気源を見つけハエの累積割合をグラフプロットは、すべての飢えたハエの30％が10分ウィンドウ内で成功を示し、対照的に、全ての給餌ハエのわずか7％（ 図3）そう。これは、嗅覚行動応答が以前に無傷のアンテナ1を必要とすることが示されている高まる。このアッセイで供給し、飢え対照ハエとの間に明確な差を守らない場合は、環境飼育を調べ、条件をテストすることによって解決することができます。
試験条件をトラブルシューティングするための一つの有用な戦略は、ハエをアガロース、臭気車両に魅力を飛んで測定することにより、臭気のターゲット以外の追加の手がかりに魅了されているかどうかを調べることです。飢えたハエは、一人でアガロース車両（ 図4b）よりもお酢に有意に大きな魅力を示すべきである。 図4a展示物は、野生型のハエを用いて35％の環境湿度で32℃で実施した食物探索実験から得られる。このデータセットにおいて、フライ酢に誘引し、アガロース制御の間に有意な差は検出されなかった。これは、暖かいの試験温度下でアガロース滴で見つかった水の増加の魅力に起因する可能性が高い。百分の50から60までのテスト湿度を上げることにより、我々はこの行動の変化を補正し、酢の魅力とアガロース車両との間に有意な差は復元することができました（ 図4bを 、* p値<0.05を示す）。
図1。典型的な解析ソフトウェア·データ·レイアウトは、経時的に位置を飛行時間をかけて臭気源からの距離を飛行し、経時的に速度をフライ示す 。左上の2列の表各アリーナの隅には、最初の50秒（列1）及びsecにおける食品の発見（列2）のレイテンシの間、平均速度（100mm /秒）が表示されます。また、開いたテキストファイルの名前は、（「OZ120807_ORCODTKRi_1％_S4」として示されている）、左下隅に追加されます。 大きな画像を見るにはここをクリックしてください 。
図2。首尾よく食べ物を見つけると活動していたトレースの異なるタイプの例は、分析基準で対処。A。）300 +秒間アクティブでないフライが拒否された。B）フライが受け入れられている。C）のために活動していフライ非アクティブ期間は、D受理された後、300 +秒が、少なくとも100秒のための強力な活性を示す。）番目のフライストレートリリース後の食料源のためのヘッドで拒否されており、E。）に向かって離れて50秒の最低10ミリメートルの半径内の食物源からの織りに成功食料源を発見したとみなされ、受け入れられることを飛行する。Fレイアウト内の目に見えるアーチファクトを持つ。）アレナスは拒否されます。 大きな画像を見るにはここをクリックしてください 。
図3。食品の発見の待ち時間を使って時間をかけて匂い源を見つける供給され、飢えたハエの累積割合を示すグラフプロット 。た（n = 88-96ハエ、*はp値<0.05を示し、** p値<0.01を表す）。
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図4。時間をかけて1％酢またはアガロース車両を見つけるハエの累積割合を示すトラブルシューティングの試験条件A）のグラフプロット。テスト条件は32℃であった35％湿度（N = 62から94ハエ）ときに有意差は臭気ターゲットのいずれかにフライの魅力は検出されなかった。B）を1％酢またはアガロース車両を見つけるハエの累積割合を示すグラフプロット時間をかけて。試験条件は、32℃、50〜60％の湿度であった。これらの条件下で、ハエは有意にアガロース車両よりも1％の酢に引き付けていた（n = 55-71、ハエ、* p値<0.05表す）。
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Discussion
このプロトコルでは、食品の検索行動の分析のためのステップバイステップの手順を説明します。食品関連臭気に加えて、それはまた、他の臭気のオブジェクトを検索するハエの能力の研究のために適合させることができる。例えば、それは男性のハエ3におけるメイトローカリゼーション行動の研究に向かって適用してもよい、いくつかの追加の考慮事項は、我々は、この手順についてここで言及します。このプロトコルのためにあります。：
まず、飼育温度が実験ハエが試験前に熟成させなければならない期間が決まります。それは、年齢の範囲は、実験のために最も適切な年齢を決定するために検査することをお勧めします。 21℃で飼育するとき、彼らは4〜5日齢された後に、たとえば、我々の経験では、給餌や飢えフライ応答の間の違いは、最も堅牢である。
第二に、LEDは、目の下に一定作成するのに役立つ、ガラス拡散板、均一な照明を照らす電子アクリルチャンバ。も十分、定数、明るい照明がハエの動きを自動的に追跡するために重要である。不均一な照明や光源をちらつきがハエの位置を検出したり、ハエのような光のアーティファクトを勘違いするソフトウェアを原因とする、断続できなくなるのどちらかハエの自動追跡中にエラーが発生することがあります。我々は、市販のLEDバックライトやカスタム構築されたLEDのアレイ作業も同様に、このアッセイのための照明のニーズを満たす上で、両方のを見つけた。
ソフトウェアが誤って照明の小さな変化またはアガロースなどの追加の目的、「フライ·トラッキング·6つのゾーンを「取得ソフトウェアの物体検出の設定を検出した場合、第三の閾値ならびにオブジェクトのサイズに合わせて調整することができる。検出設定を調整すると、1つのオブジェクトだけを各競技場で検出されることが保証されます。各分野で追跡されているオブジェクトの数を表示するには、「フライトラッキング六ゾンの「しきい値」タブをクリックしますES "収集ソフトウェア。複数のオブジェクトが追跡されている場合は、検出アーティファクトが消えるまで、1が最小サイズ、最大サイズ、最小しきい値、または最大しきい値を調整することができる。
第四に、これらの実験で使用した株はisogenizedする必要があります飛ぶ。このパラダイムにおける行動公演は遺伝的背景の違いに非常に敏感である。交配した雌を交配状態や性別に関連する潜在的な行動の変動性を減少させるために使用される。このアッセイは、男性や処女雌の行動を研究する上で同等に有効ではないと考えている理由はない。
第五に、ふるいは、臭気濃度勾配（サスペンションが私たちの商業的に購入したモデルでは約2cmである）の臭気飽和を防ぐために、わずかに光拡散板の上に懸架されるべきである。我々は、テストプレートの下に多孔質の床を作成するために、市販のモレキュラーシーブを使用しています。
最後に、信頼性のあるデータを生成するためセットは、一貫性を実験飼育し、試験条件が要求される。対照ハエでの給餌と飢えの応答との間に有意な違いを確認するために何らかの障害が1）ハエが安定した温度と湿度の条件の下で飼育されていることを確認するためにチェックすることで解決することができる、2）ハエは、生鮮食品を供給しているし、混雑した条件で飼育されていません3）新たに孵化CO 2への暴露を飛ぶが最小化されている、4）経験を飢餓の同じ長さのハエ、5）ハエが安定した温度および湿度の条件下で試験し、6）テスト環境およびチャンバは、以前の試験からの臭気で汚染されていないまたは実験。異なる遺伝的背景は、このアッセイにおいてフライ性能に影響を与えることができるように、前述のパラメータに加えて、フライ株のisogenizationが重要である。酢は、臭気源として使用される場合さらに、ケアは、それがしっかりと4℃で密閉し、記憶され、それを維持してその効力を失わないように注意しなければならない
4,5 T-迷路6または4フィールドとして臭気選択肢がフライを提示行動アッセイによって測定される。
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Disclosures
著者らは、競合する経済的利害関係を宣言していません。
Acknowledgments
この作品は、国立衛生研究所（R01DK092640）、国立科学財団（0920668）からJWWに研究助成金によって支えられている。
Materials
| Name | Company | Catalog Number | Comments |
| Apple Cider Vinegar | Spectrum | commercially available | |
| Agarose, Type VII | Sigma-Aldrich | A0701 | low gelling temperature agarose |
| Acrylic Testing Plate | custom | Plate contains 6 arenas. Each arena is 60 mm in diameter 6 mm in height. See testing plate diagrams for specific measurements. | |
| LabVIEW V.8.5 | National Instruments | 776670-09 | platform for programs: PositioningTool.vi, FlyTracking--Six Zones.vi NOTE: "elapsed time.vi", "time into file.vi", and "two object detect.vi" are included subroutines that must be available in order for the main data acquisition program "FlyTracking--Six zones.vi" to run. |
| LabVIEW Vision 8.5 | |||
| LabVIEW Vision Acquisition Software 8.5 | |||
| LabVIEW Vision Builder AI 3.5 | |||
| Igor Pro V.6 | Wavemetric, Inc. | platform for macro: Data Analysis for Fly Tracking--Six Zones | |
| Basler scA1390-17fm | National Instruments | 779980-01 | Digital Camera NOTE: driver for camera available at Baslerweb.com |
| 8 mm lens | National Instruments | 780024-01 | Lens for Basler Digital Camera |
| Ground Glass Diffuser Plate | Edmund Optics | custom | Diffuses light, 25 cm x 30 cm |
| US Std. No. 100 | Fischer Scientific | 04-881X | Sieve with nominal opening of 150 μm |
| Lighting Option 1 | |||
| LED backlight 660 nm (20 cm x 20 cm) | Spectra West | BL47192 | a simpler but more expensive lighting option. |
| Power Supply for LED Backlight | Spectra West | ||
| Lighting Option 2 | |||
| 660 nm LEDs | Superbrightleds | RL5R1330 | Wavelength 660 nm (approximately 7 x 7 LED array for a 14.7 inch x 9.75 inch panel) |
| Linear DC Power Supply | GW Instek | GPS-1830D | Power supply for LED Panel |
| Solderless Breadboard | Digikey | 922354-ND | Breadboard for LEDs |
References
- Dethier, V. G. The hungry fly : a physiological study of the behavior associated with feeding. , Harvard University Press. (1976).
- Root, C. M., Ko, K. I., Jafari, A., Wang, J. W. Presynaptic facilitation by neuropeptide signaling mediates odor-driven food search. Cell. 145, 133-144 (2011).
- Root, C. M., et al. A presynaptic gain control mechanism fine-tunes olfactory behavior. Neuron. 59, 311-321 (2008).
- Semmelhack, J. L., Wang, J. W. Select Drosophila glomeruli mediate innate olfactory attraction and aversion. Nature. 459, 218-223 (2009).
- Faucher, C., Forstreuter, M., Hilker, M., de Bruyne, M. Behavioral responses of Drosophila to biogenic levels of carbon dioxide depend on life-stage, sex and olfactory context. J. Exp. Biol. 209, 2739-2748 (2006).
- Quinn, W. G., Harris, W. A., Benzer, S.
- Fishilevich, E., Domingos, A. I., Asahina, K., Naef, F., Vosshall, L. B., Louis, M. Chemotaxis behavior mediated by single larval olfactory neurons in Drosophila. Curr. Biol. 15, 2086-2096 (2005).
- Venken, K. J., Simpson, J. H., Bellen, H. J. Genetic manipulation of genes and cells in the nervous system of the fruit fly. Neuron. 72, 202-230 (2011).
- Hamada, F. N., et al. An internal thermal sensor controlling temperature preference in Drosophila. Nature. 454, 217-220 (2008).
- Kitamoto, T. Conditional modification of behavior in Drosophila by targeted expression of a temperature-sensitive shibire allele in defined neurons. J. Neurobiol. 47, 81-92 (2001).
- Sweeney, S. T., Broadie, K., Keane, J., Niemann, H., O'Kane, C. J. Targeted expression of tetanus toxin light chain in Drosophila specifically eliminates synaptic transmission and causes behavioral defects. Neuron. 14, 341-351 (1995).
- Brand, A. H., Perrimon, N. Targeted gene expression as a means of altering cell fates and generating dominant phenotypes. Development. 118, 401-415 (1993).
