Summary
폴리 (글리세롤 도데)라는 이름의 새로운 생분해 성 고분자에서 새로운 디자인의 컬렉터를 통해 더 큰 예금 영역에 걸쳐 전기 방사 장 섬유 (PGD)의 합성 및 제조가보고되었다. 마우스 섬유는 다 능성 줄기 세포로부터 유도 된 세포의 성장을지지 할 수 있었다.
Abstract
조직 공학 응용 프로그램의 경우, 생분해 성 및 생체 적합성 지지체의 제조가 가장 바람직하지만, 어려운 작업입니다. 다양한 제조 방법 중에서, 전기 방사는 단순함과 기능성으로 인해 가장 큰 매력입니다. 또한, 전기 방사 나노 섬유는 세포의 생존 및 성장에 대한 추가적인 지원을 보장 천연 세포 외 매트릭스의 크기를 모방. 이 연구는 전기 방사를위한 새로 디자인 컬렉터를 사용하여 폴리 (글리세롤 도데)라는 이름의 새로운 생분해 성 및 생체 적합성 고분자에 대한보다 큰 예금 영역 (PGD) 1 걸친 긴 섬유의 제조의 가능성을 보여 주었다. PGD는 따라서 신경 조직 공학 응용 프로그램에 적합합니다, 신경 조직과 유사한 기계적 성질을 가진 독특한 탄성 특성을 나타낸다. 섬유상 비계 재료를 만들기위한 합성 및 제조 셋업이 간단하고 재현성이 높은, 저렴이었다. 생체 적합성의테스트, 마우스 배아 줄기 세포에서 파생 된 세포에 부착하고 전기 방사 PGD 섬유에 성장 수 있습니다. 요약하면,이 프로토콜은 마우스 배아 줄기 세포 유래의 신경 계통 세포의 성장을 지원하기 위해 PGD의 전기 방사 섬유를 제조하기위한 다양한 제조 방법을 제공 하였다.
Introduction
전기 방사는 마이크로 - 투 - 나노 사이즈 섬유 지지체를 생산하는 효과적인 가공 방법의 하나이다. 전기 방사의 기본 원리는, 바늘의 팁과 컬렉터 접지 사이의 높은 전압을인가함으로써, 바늘의 구멍에 유지되어 용액의 테일러 콘을 포함한다. 용액의 정전 반발이 표면 장력을 극복 할 때, 충전 된 유체 제트는 니들 팁 밖으로 배출되고, 용매 증발과 공기를 통해 이동하고, 마지막으로 접지 콜렉터 상에 증착된다. 주사기 펌프은 방적 돌기로부터 나오는 용액의 연속적인 흐름을 제공하고, 전기 방사 섬유 이렇게 여러 사본은 단시간 내에 제조 될 수있다. 집 전체에 도착하는 방사 구금을 떠나는 과정에서 청구 제트는 고분자 용액의 점도 및 표면 장력을 포함 파라미터 electrostati의 개수에 따라 스트레칭 및 채찍 겪을 것이다C의 용액에서 시행하고, 외부 전계의 상호 작용 등이.
전기 방사 공정에서, 콜렉터는 마이크로에 나노 섬유가 증착 될 수있는 전도성 기판으로서 역할을한다. 본 연구에서는 섬유 컬렉터의 새로운 유형을 원하는 크기 (길이 x 폭)와 섬유 매트를 얻을 수 있도록 설계되었습니다. 전통적으로, 알루미늄 박을 집 전체로서 사용하지만, 다른 기판에 평면에서 섬유를 전송하는 것은 곤란하다. 전통적인 집에서 그대로 섬유 매트 수확의 어려움으로 인해 전기 방사 섬유가 콜렉터의 표면에 강하게 부착 사실을 주로했다. 따라서 직사각형 스트립으로 알루미늄 호일 조각을 접는 편평한 금속판에 수직하게 연결하여 집 전체를 변경됨. 전기 방사 섬유 스트립의 끝과 쉽게 다른 substrat로 전송할 수 금속판 사이의 영역에 걸쳐 확장된다전자.
열 가교 탄성 중합체에 대한 관심이 급격히 폴리 (글리세롤 세바 케이트) (PGS) 2002 년 3 가황 고무와 유사하다. PGS 유사 폴리 에스테르를 도입 로버트 랭거의 그룹의 선구적인 작업의 성장, 우리가 성공적으로 개발된다 폴리 (글리세롤 도데) (PGD) 글리세롤과 도데 산의 열 축합하고 독특한 형상 기억 특성 1을 보여 주었다. 딱딱한 합성 물질 폴리 (히드 부티레이트) 또는 폴리 (L-락 타이드) (각각 250 MPA는 660 MPA는,의 영률)와 달리, PGD는 온도가 37 ° 이상 1.08 MPa의 영률과, 고무와 같은 탄성 특성을 나타내고 원위치 말초 신경 (0.45 MPA는)에 가까운 일치 C,. 또, PGD는 생분해 성이며, 분해 시간은 글리세롤 및 도데 칸 이산의 비율을 변화시킴으로써 미세하게 조정될 수있다. 도데 칸 이산이 열두 카본 서브입니다두 터미널 카르 복실 그룹, HOOC (CH 2) 10 COOH와 자세. 세바 신산 및 도데 칸 이산 같은 짝수 디카 르 복실 산 아실-CoA는 아세틸 및 트리 카르 복실 산 (TCA) / (구연산)주기를 입력 대사 될 수있다. 디카 르 복실 산의 대사 생성물, 숙시 닐-CoA를는 gluconeogenetic 전구체와 TCA 사이클 (4)의 중간이다. 따라서, 일부 연구들은 특히 병적 상태에서 장내 및 비경 구 영양에 대한 대체 연료 기질로서 이용 될 수 있다고 제안했다. 유리 전이 온도가 31 ° C이므로, PGD, 따라서 실온에서 체온에서 별개의 기계적 특성을 나타낸다, 독특한 형상 기억 성을 나타낸다. 요컨대, PGD는 신경 조직과 유사한 기계적 성질을 가진 독특한 탄성 특성을 나타내는, 생분해 성 생체 적합성; 따라서 신경 조직 공학 응용 프로그램에 적합한 소재입니다. 이 프로토콜에서, 전기 방사큰 예금 영역에 걸친 긴 섬유는 PGD에서 새로 디자인 된 컬렉터를 통해 제작되었다. 섬유 지지체는 마우스 pluripotent 줄기 세포의 성장과 분화를 지원할 수 있습니다.
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Protocol
1. 전기 방사 수집기 설치
- 사각형 조각으로 알루미늄 호일을 잘라.
- 직사각형의 스트립에 사각형 조각을 접어 테이프로 평평한 금속판 (그림 1)에 수직으로 장착. 주 : 섬유 매트의 사이즈는 스트립의 길이 및 폭에 따라 다르다. 필요에 따라서, 스트립의 크기는 조정될 수있다.
2. 고분자 용액의 제조
- PGD 폴리머를 얻기 위해 100 시간 동안 120 ° C에서 비커 1:1 몰비 글리세롤과 도데 산 (DDA)를 섞는다.
- 15 ML 튜브에 1.5:3:95.5의 중량 비율로 65 % 에탄올에 폴리 (에틸렌 옥사이드) (PEO)와 젤라틴을 녹여 뚜껑을 강화하고 교반하면서 1 시간 동안 60 ° C의 오븐에서 혼합물을 가열 그것은 균일 용액 (기초 용액)이 될 때까지.
- 전기 방사를 들어, PGD 중합체 4:6 중량비 기저 용액을 혼합한다. 참고 : PGD 농도는 양이G 섬유 직경에 효과. 30 % -50 %의 퍼센트 PGD는 더 이상 증가 된 섬유 직경 5cm 이상의 섬유를 생산할 좋다.
- 고분자 용액에 0.1 % 리보플라빈을 넣고 잘 섞는다.
3. 전기 방사
- 18 G에 5 ㎖의 표준 주사기로 폴리머 솔루션을 공급 스테인리스 바늘을 무디게.
- 주사기 펌프에 주사기를 삽입합니다.
- 금속판과 바늘 양전하 리드에 고전압 전원의 접지 리드를 부착.
- 15cm에 바늘과 알루미늄 호일 지구 사이의 거리를 조정합니다.
- 스트립의 전면에 섬유의 응집을 방지하기 위해 수평으로 약 15 °의 각도에서 주사기 펌프를 배치.
- 주사기 펌프의 전원을 켜고 0.6 ㎖ / 시간에 펌프의 유량을 조정합니다.
- 높은 전압의 전원을 켜고 14.6 kV의에 동작 전압을 설정합니다.
4.섬유 처리
- 수집이 완료된 후, 가교, 60 분 동안 UV 광에 섬유 매트를 노출.
- 100mm 페트리 접시에 알루미늄 호일 스트립으로부터 섬유 매트를 이동 및 살균을 또 다른 20 분 동안 UV 광에 노출.
- 생물 안전 캐비닛에서 수술 블레이드와 동일한 크기의 원형 조각으로 섬유 매트를 잘라 24 - 웰 플레이트에 조각을 배치합니다.
- 휴대 미리 파종 처리를 위해, 인산염 완충 생리 식염수 (PBS)의 1 ml의 섬유 샘플을 담가 하룻밤 37 ° C에서 알을 품다.
- 다음 날, 대기음 PBS는주의 깊게, 각 웰 (재료 테이블의 레시피 참조) 분화 배지 1 ㎖ (DMEM/F12, N2, 및 FGF2)를 추가하고 3 시간 동안 37 ° C에서 알을 품다.
- 기음 차별화 매체주의 깊게 각 섬유 샘플 리겔 0.2 mL를 넣고 30 분 동안 37 ° C에서 알을 품다. 참고 : 라미닌 또한 섬유 코팅에 사용될 수있다. 20 ㎍ / ml의 라미닌의 0.2 ML을 추가섬유 및 3 시간 동안 실온에서 배양한다.
- 조심스럽게 각 우물에서 초과 리겔를 제거합니다. 한 번 분화 배지 2 ㎖로 씻어. 참고 : 섬유 샘플은 세포 배양을위한 준비가되어 있습니다.
섬유에 5. 셀 시드
- MES 세포 배양 접시에 Accutase 1 mL를 넣고 37 ℃에서 10 분 동안 배양
- 10 분 후, MES 세포는 배양 접시에서 분리됩니다. 플레이트에 차별화 매체의 4 ML을 추가합니다. 식민지 (약 15 배)을 휴식을 위아래로 15 ML 튜브 및 피펫 세포에 떠있는 MES 세포를 수집합니다.
- 분화 배지 4 ㎖에 5 분 후 다시 중단 세포 400 XG에 원심 분리기.
- 혈구를 사용하여 세포를 카운트. 15 ML 튜브에 세포 현탁액 200 μl를 전송하고 차별화 매체와 그것을 10 배 희석. 장소에 커버 슬립과 혈구에 챔버에 희석 세포 현탁액의 15 μl를 전송합니다. 계산1mm의 중앙 광장과 현미경으로 혈구의 네 모서리의 사각형에있는 세포. 참고 : ㎖를 희석 계수 × 10 4 × 평방 당 평균 수를 = 셀 당
- 각 웰에 약 5 × 4 MES 세포를 놓습니다. 천천히 섬유 매트를 물기로부터 용액을 방지하기 위해, 대신에 웰의 측면으로 미끄러 져 건, 섬유 샘플들의 중간에 세포 현탁액을 드롭.
- 물론 각각 차별화 매체의 1 ML을 추가하고, 37 ° C에서 인큐베이터에서 접시를 유지하고 5 % CO 2 세포 부착, 성장 및 분화를 허용 할 수 있습니다.
- 또한 각에서 기존 매체를 대기음 매일 신선한 분화 배지 1 ㎖로 대체합니다.
6. 세포 생존
- 각 우물에서 기존 매체를 대기음.
- 문화 매체와 레사 주린 형광 시약의 1 / 10 번째 볼륨을 혼합하고 각 웰에 1 ㎖를 추가합니다.
- Incub37 ° C와 직사광선으로부터 보호 4 시간, 5 %의 CO 2를 먹었다.
- 4 시간 후, 96 - 웰 플레이트에 각 웰로부터 시약 100 μL 3X를 전송 한 다음 샘플 560EX nm/590EM 필터 설정을 사용하여 형광 분광 광도계로 측정 할 준비가되었다.
7. 리얼 타임 PCR
- 배양 14 일 후, 샘플을 용해 버퍼를 추가하고 섬유 샘플의 세포로부터 전체 RNA를 분리.
- 역전사 20 ㎕의 반응 비늘의 cDNA를 합성하는 총 RNA의 4 μl를 사용합니다.
- 10 ㎕의 마스터 믹스 (2 배), 0.2 ㎕의 염료, 8 μL의 nuclease가없는 물, 1 μL의 cDNA를, 1 μL 프라이머 (본 연구에서 사용 된 프라이머는 표 1에 나열되어 있습니다) : 각각의 광 튜브에 PCR 반응 혼합물을 준비합니다.
- : PCR 프로그램을 설정합니다. 95 ° C의 2시 20분 분, 1주기 나. 95 ° C 3 초 → 60 ° C에서 1 분, 40주기 다. 95 ° C 15 초, 1주기 D. 60 ° C에서 1분, 1 사이클 전자. 95 ° C 15 초, 1주기. 상대적인 유전자 발현 수준을 결정하기 위해 비교 C T 방식을 선택한다.
- PCR이 완료되면, StepOne 소프트웨어로 실시간 PCR 결과를 분석하고 Excel로 결과를 보냅니다.
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Representative Results
전기 방사의 주요 구성 요소는도 1에 나타낸다. 대형 섬유 매트는 일반적으로 수직으로 부착 된 알루미늄 호일 스트립 및 편평한 금속판을 얻었다.도 2는 콜렉터 설계 및 전기 방사 섬유 매트를 나타낸다. 폭과 길이는 서로 다른 애플리케이션에 조정될 수있다. PGD 중합체 및 기저 혼합 용액으로 만든 섬유의 길이는 10cm까지이다. 전기 방사 된 섬유의 형태는도 3에 도시된다. 40 % PGD 농도로 만든 섬유의 직경이 마이크로 미터 범위이다. 섬유에 3, 6 일간 배양 MES 세포에서 파생 된 분화 된 세포의 공 초점 현미경 이미지는 그림 4에 나타내었다. 녹색 형광 신호가 세포에서 녹색 형광 단백질 (GFP)의 과발현에서왔다. 도 5 레사 주린 형광 시약의 결과는 MES 세포가 성장할 것으로 보여N 리겔과 라미닌과 PGD 섬유 코팅에 해당하는 세포 생존 능력이 있고 코팅되지 않은 그룹에 비해 상대적으로 높은 확산을했다. 만능 줄기 세포와 신경 세포 마커의 유전자 발현 (그림 6) 실시간 PCR에 의해 정량 하였다. 세포의 소수 민족이 신경 줄기 세포가 PAX6와 네 스틴을 표시 표현하면서 섬유에서 배양 MES 세포의 대부분은 다 능성 마커 OCT4, Nanog를하고 SOX2를 표명했다. 2 주 동안 배양 한 후 섬유에 성장 MES 증가 등 MAP2 DCX와 같은 신경 세포 마크의 발현 수준뿐만 아니라 희소 돌기 아교 세포 마커 Oligo1 및 성상 세포 마커 GFAP를 보였다.
그림 1. 설정으로 전기. 고분자 용액이 무딘 바늘에서 배출됩니다. 고전압 전원 경내 편평한 금속판ND 알루미늄 호일 스트립은 그 사이에 마이크로 나노 미터 섬유 (블루)에 증착된다.
도 2. 수집기 디자인 및 전기 방사 섬유 매트. 섬유 매트의 너비와 길이는 쉽게 알루미늄 호일 스트립의 크기를 조정함으로써 변경 될 수있다. 이 매트 폭에는 제한이 없으며, 긴 섬유는 최대 10 ㎝ 길이 될 수 있습니다.
PGD의 전기 방사 및 기초 솔루션 4:6 그림 3. SEM 이미지 (W / W). 섬유의 평균 직경은 약 2 μm의 수 있습니다. PGD 농도가 30 %로 감소 할 때, 섬유의 평균 직경이 나노 미터 범위에 빠진다. 흰색스케일 바는 10 μm의를 나타냅니다.
그림 4. 섬유에 대한 차별화 된 MES 세포의 공 초점 현미경 이미지. 자외선 범위에 푸른 빛에 노출되었을 때 GFP는 밝은 녹색의 형광을 전시 운반하는 세포. 6 일에 녹색 형광 세포 수의 증가는 섬유 지지체가 세포 부착 및 증식을 지원할 수 있음을 나타냅니다. 흰색 스케일 바는 100 μm의를 나타냅니다. (주 3 일 6).
도 5. PGD의 1로 마트 리겔과 라미닌으로 코팅 섬유, 3, 및 오일에 MES 세포의 세포 생존율에 레사 주린 fluore 의해 결정된내려와 시약. 셀 제어 (p <0.05)로서 사용 코팅 섬유에 배양 하였다.
그림 6. PGD 섬유에 대한 차별화 된 MES 세포에서 유전자 발현의 QRT-PCR 분석. 이주 후 분명 신경 세포 마커는 발판에 MES 세포가 신경 세포로 분화 한 것을 보여 주었다.
| mGAPDH-L | AACTTTGGCATTGTGGAAGG |
| mGAPDH-R | ACACATTGGGGGTAGGAACA |
| mOct4-L | CACGAGTGGAAAGCAACTCA |
| mOct4-R | AGATGGTGGTCTGGCTGAAC |
| mNanog-L | AAGTACCTCAGCCTCCAGCA |
| mNanog-R | GTGCTGAGCCCTTCTGAATC |
| mSox2-L | CACAGTTCAGCCCTGAGTGA |
| mSox2-R | AGGCCACAACAACAACAACA |
| mPax6-L | AACAACCTGCCTATGCAACC |
| mPax6-R | ACTTGGACGGGAACTGACAC |
| mNestin-L | CCAGAGCTGGACTGGAACTC |
| mNestin-R | ACCTGCCTCTTTTGGTTCCT |
| mMAP2-L | CTTATGGGAATGTGGGATGG |
| mMAP2-R | AAAAAGTGGGCCTTGGAACT |
| mDCX-L | ATGCAGTTGTCCCTCCATTC |
| mDCX-R | ATGCCACCAAGTTGTCATCA |
| mOligo1-L | CTTGCTCTCTCCAGCCAAAC |
| mOligo1-R | GCGAGCCTGAAAAACAGAAC |
| mGFAP-L | CACGAACGAGTCCCTAGAGC |
| mGFAP-R | ATGGTGATGCGGTTTTCTTC |
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Discussion
간단한 수집 또는 현재 일부 응용 프로그램에 대해 원하는 길이와 섬유 매트의 크기를 획득하는 제한을 증가 전기 방사에 사용되는 수집 회전의 복잡성의 제한. 또한, 배양 접시 또는 다른 기판에 접지 집에서 섬유를 전송하는 것은 도전이다 5. 이 보고서에서, 접지 된 집에 알루미늄 호일 스트립을 부착하여 간단하게 만든 새로운 디자인의 집은, 한 번에 20cm에서 10cm로 대형 섬유 매트를 얻을 수 있었다. 1과 2는 설계 회로도 설정을 도시 10cm 제어 매트 폭이 긴 전기 방사 섬유까지의 제조. 니들 팁과 컬렉터 사이의 전계의 영향으로 전기 방사 섬유는 쉽게 다른들로 전송 될 수있는 부드러운 섬유 매트를 형성하고, 알루미늄 호일 스트립 및 접지 콜렉터 사이의 영역을 가로 질러 뻗어 있었다ubstrate. 전기 방사 섬유는 세포가 다리와 진정한 입체 환경에서 여러 섬유에 부착 할 수 있도록 다공성 섬유 구조를 제공합니다. 이 연구에서 생성 된 섬유 매트는 그들 같은 상처 치료 및 신경 재생과 같은 다양한 애플리케이션을위한 이상적인 후보 만들 정도로 크다.
섬유 직경은 전기 방사 과정에서 여러 변수를 제어함으로써 조정될 수있다. 이러한 변수는 중합체 농도,인가 전압의 크기, 폴리머 배달 속도, 집에 바늘으로부터의 거리 등 6-8 (가) 있습니다. 본 연구에서는, 50 % PGD 50 %의 BS, 40 % PGD 및 60 % BS, 30 % PGD 및 70 % BS 및 20 % PGD 각각 80 % BS로 이루어지는 된 시험 용액을,위한 준비되었다 전기 방사 섬유를 만들기. 섬유 지지체는 섬유의 직경 및 모폴로지 (도 3)을 결정하기 위해 SEM을 사용하여 조사 하였다. 예상 한 바와 같이, 높은 PGD 농도의 P전기 방사 섬유의 큰 직경을 roduced. 또한, 다른 PGD 농도에 따른 스트립 길이를 조절하는 것이 중요하다. PGD 낮은 농도는 섬유 형성을 보장하기 위해 더 짧은 스트립 길이를 필요로한다.
많은 노력은 세포 배양 9 ~ 13의 연구를 통해 전기 방사 섬유 지지체의 생체 적합성을 탐구되었습니다. 강한 녹색 형광 신호에 첨부 된 세포가 PGD 섬유의 세포 생존을 표시하는 것이 그림 4는의 공 초점 현미경 이미지. 또, 6 일 3 일에서 증가하는 세포 밀도는 PGD 섬유에 세포 증식을 제안했다. 도 5의 세포 생존율 시험의이 결과를 확인했다. 신경 세포 마크 MAP2와 DCX의 유전자 발현은 MES 세포는 (그림 6) 발판에 신경 세포로 분화 할 수 있었다는 것을 보여 주었다. 결론적으로, PGD 섬유 지지체는 세포 adhesio을 지원할 수n 및 증식, 따라서 신경 조직 공학 응용에 대한 가능성을 나타낸다.
다음은 몇 가지 일반적인 문제 해결 지침은 다음과 같습니다 바늘에서 나오는 섬유가 불연속 인 경우, 다시 고분자 용액을 따뜻하게하고 잘 혼합하거나 섬유가 금속 판에없는 매력을 가진 알루미늄 호일 스트립에 나와있는 경우, 지구를 감소 길이 또는 PGD의 농도를 증가시킨다. 때때로 큰 중합체 글롭가 바늘 끝에 형성하고, 고전압 전원을 끄고 종이 타올로 닦아 펌프의 전달 속도를 감소시킨다. 또한, 알루미늄 호일 스트립의 상부 가장자리에 때때로 섬유 집합체는 주사기 펌프의 각도를 조절하려고.
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Disclosures
관심 없음 충돌 선언하지 않습니다.
Acknowledgments
이 작품은 플로리다 국제 대학의 생명 공학 부서의 기능을 사용하여 실시 하였다.
Materials
| Name | Company | Catalog Number | Comments |
| Glycerol | Sigma-Aldrich | G7757 | |
| Dodecanedioic acid | Sigma-Aldrich | D1009 | |
| Gelatin | Sigma-Aldrich | D1890 | |
| Poly(ethylene oxide) (PEO) | Sigma-Aldrich | 182028 | |
| Riboflavin | Sigma-Aldrich | 132350250 | 0.10% |
| Mouse embryonic stem cells | GlobalStem | GSC-5002 | |
| Matrigel | Becton Dickinson | 356234 | |
| DMEM/F12 | Thermo Scientific | SH30272.02 | |
| N2 supplement | Invitrogen | 17502048 | 1% |
| FGF2 | Stemgent | 03-0002 | 10 ng/ml |
| Accutase | Invitrogen | A11105-01 | |
| Phosphate buffered saline (PBS) | Invitrogen | 10010-031 | |
| Resazurin fluorescence dye | Sigma-Aldrich | 62758-13-8 | |
| SV Total RNA Isolation System | Promega | Z3100 | |
| GoScript Reverse Transcription System | Promega | A5000 | |
| GoTaq qPCR Master Mix | Promega | A6001 | |
| Syringe pump | Fisher scientific | 14-831-200 | |
| High voltage power source | Spellman High Voltage Electronics Corporation | SL30 | |
| UV light | Philips | 308643 | 15W/G15T8 |
| Synergy HT Multi-Mode Microplate Reader | BioTek | ||
| Perkin Elmer GeneAmp PCR System 9600 | Perkin Elmer | 8488 | |
| StepOne Real-time PCR System | Applied Biosystems | 4376357 |
References
- Migneco, F., Huang, Y. -C., Birla, R. K., Hollister, S. J. Poly (glycerol-dodecanoate), a biodegradable polyester for medical devices and tissue engineering scaffolds. Biomaterials. 30, 6479-6484 (2009).
- Reneker, D. H., Yarin, A. L. Electrospinning jets and polymer nanofibers. Polymer. 49, 2387-2425 (2008).
- Wang, Y., Ameer, G. A., Sheppard, B. J., Langer, R.
- Panunzi, S., De Gaetano, A., Mingrone, G. Approximate linear confidence and curvature of a kinetic model of dodecanedioic acid in humans. American Journal of Physiology-Endocrinology And Metabolism. 289, (2005).
- Park, S., et al. Apparatus for preparing electrospun nanofibers: designing an electrospinning process for nanofiber fabrication. Polymer Internationa l. 56, 1361-1366 (2007).
- Barnes, C. P., Sell, S. A., Boland, E. D., Simpson, D. G., Bowlin, G. L. Nanofiber technology: designing the next generation of tissue engineering scaffolds. Advanced drug delivery reviews. 59, 1413-1433 (2007).
- Li, W. -J., Mauck, R. L., Tuan, R. S. Electrospun nanofibrous scaffolds: production, characterization, and applications for tissue engineering and drug delivery. Journal of Biomedical Nanotechnology. 1, 259-275 (2005).
- Pham, Q. P., Sharma, U., Mikos, A. G. Electrospinning of polymeric nanofibers for tissue engineering applications: a review. Tissue engineering. 12, 1197-1211 (2006).
- Lim, S. H., Mao, H. -Q. Electrospun scaffolds for stem cell engineering. Advanced drug delivery reviews. 61, 1084-1096 (2009).
- Lowery, J. L., Datta, N., Rutledge, G. C. Effect of fiber diameter, pore size and seeding method on growth of human dermal fibroblasts in electrospun poly (epsilon-caprolactone) fibrous mats. Biomaterials. 31, 491-504 (2010).
- Tillman, B. W., et al. The in vivo stability of electrospun polycaprolactone-collagen scaffolds in vascular reconstruction. Biomaterials. 30, 583-588 (2009).
- Ju, Y. M., Choi, J. S., Atala, A., Yoo, J. J., Lee, S. J. Bilayered scaffold for engineering cellularized blood vessels. Biomaterials. 31, 4313-4321 (2010).
- McCullen, S. D., et al. In situ collagen polymerization of layered cell-seeded electrospun scaffolds for bone tissue engineering applications. Tissue Engineering Part C: Methods. 16, 1095-1105 (2010).
